微生物限度检测环境要求

【2020版中国药典】通则-非无菌微生物限度检查1105非无菌产品微生物限度检查：微生物计数法微生物计数法系用于能在有氧条件下生长的嗜温细菌和真菌的计数。

当本法用于检查非无菌制剂及其原、辅料等是否符合规定的微生物限度标准时，应按下述规定进行检验，包括样品的取样量和结果的判断等。

除另有规定外，本法不适用于活菌制剂的检查。

研究：将旧版的“相应”更换为“规定”，更便于按照1107进行判定执行。

微生物计数试验环境应符合微生物限度检查的要求。

检验全过程必须严格遵守无菌操作，防止再污染，防止污染的措施不得影响供试品中微生物的检出。

洁净空气区域、工作台面及环境应定期进行监测。

研究：将旧版的“单向流空气区域”更换为“洁净空气区域”。

计数方法……供试品检查时，应根据供试品理化特性和微生物限度标准等因素选择计数方法，检测的样品量应能保证所获得的试验结果能够判断供试品是否符合规定。

所选方法的适用性须经确认。

……提醒：后文增加了关于“贵重药品、微量包装药品”的检验量的更全面的表述，因留意结合此处的请求。

计数培养基适用性检查和供试品计数方法适用性试验……菌液制备……取黑曲霉的新鲜培养物加人适量含0.05%(ml/ml)聚山梨酯80的pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液或……研究：此处改动同无菌检查法，将“3~5ml”的具体量调整为“适量”，便于根据孢子的量灵活掌握菌液制备方法。

培养基适用性检查微生物计数用的商品化的预制培养基、由脱水培养基或按处方配制的培养基均应进行培养基适用性检查。

研究：类似于无菌检查法，此处将“成品培养基”修改为“商品化的预制培养基”，表述更准确，下文还有，不再赘述。

……计数方法适用性试验1.供试液制备根据供试品的理化特性与生物学特性，采取适宜的方法制备供试液。

供试液制备若需加温时，应均匀加热，且温度不应超过45°C。

供试液从制备至加人检验用培养基，不得超过1小时。

……研究：此处应注意同时进行数个品种计数方法适用性试验时的时效问题。

1 目的: 规范微生物限度检查室管理规程。

2 范围: 微生物限度检查室。

3 责任: 检验员。

4 内容
4.1 微生物限度检查室要求
4.1.1化验室设立微生物限度检查室，室内应整洁干净，设有温湿度计，并应有空调净化系统，应符合药品微生物限度检测条件要求。

4.1.2 每次检验时记录操作间内的湿度及温度。

4.1.3 应具备空气洁净条件，具有防止强光照射、防水、防火、防虫、防鼠等条件。

4.1.4 环境清洁按洁净区清洁操作程序进行定期的消毒。

4.1.5 由检验操作员负责对微生物限度检查室进行直接管理。

4.1.6 非工作人员不得入内，室内工作不得同时超过二人，不可大幅度操作，应轻拿轻放，以免搅动空气。

4.2 微生物限度检查室工作要求
4.2.1 人员进入微生物限度检查室要按要求进行换鞋、更洁净衣程序进行，
并进行手表面消毒。

4.2.2 物料或检品进入微生物限度检查室要从物流通道传递窗进入，传递窗采用互锁装置。

4.2.3 如在实验中需做阳性菌对照实验的，在做完实验后，实验环境应立即进行消毒，人员退出实验间后的衣服用塑料袋包好（或塑料桶盖好，拿出洗涤，在洗涤前应用消毒液进行浸泡十分钟后，进行清洗、干燥，最后包装好进行湿热灭菌处理。

4.2.4 若有菌液撒在桌上或地上，应立即用0.2%新洁尔灭溶液倒在被污染处至少30分钟以上，再作处理。

4.2.5 微生物检验室有各自的清洁用具，不得混用。

卫生用具定置管理。

更改历史微生物限度检查操作规程1.0 目的建立微生物限度检查标准操作规程，规范检验操作，确保检验结果准确2.0 范围适用于本公司采用微生物限度检查法测定的供试品。

3.0 职责质量部负责按本规程的要求执行微生物限度检查操作。

4.0 工作程序4.1 洁净区间的确认微生物计数检查应在环境洁净度10000级下的局部洁净度100级的单向流空气区域内或隔离系统中进行，其全部过程必须严格遵守无菌操作，防止微生物污染，防止污染的措施不得影响供试品（即待检样品、产品）中微生物的检出。

4.2 培养基4.2.1 应使用按中国药典处方及规定的方法制备的培养基。

4.2.2 所用培养基可按中国药典规定的处方及制备方法自行配制，也可使用按中国药典规定的处方生产的脱水培养基进行配制；或购买商品化的预制培养基。

4.2.3 配制后应采用验证合格的灭菌程序灭菌。

制备好的培养基若不即时使用，应置于无菌密闭容器中，在2~25℃、避光的环境下保存。

4.2.4 胰酪大豆胨琼脂培养基或胰酪大豆胨液体培养基用于测定需氧菌总数；沙氏葡萄糖琼脂培养基用于测定霉菌和酵母菌总数。

4.2.5 供试品微生物计数、控制菌检查中所使用的培养基应进行适用性检查。

4.2.6 供试品的微生物计数方法、控制菌检查方法应进行方法适用性试验，以确认所采用的方法适合于该产品的微生物计数或控制菌检查。

4.3 菌种及菌液制备检查所用的菌种及菌液制备见附件 1 微生物计数培养基的适用性检查和附件3 控制菌检查培养基的适用性检查。

稀释剂、冲洗液及其制备的要求见附件1 微生物计数培养基的适用性检查。

4.4 培养基的适用性检查供试品微生物计数、控制菌检查中所使用的培养基应进行适用性检查。

微生物限度检查所用的培养基每批均应进行适用性检查，检查可在供试品检查前或与供试品检查同时进行。

具体要求见附件1 微生物计数培养基的适用性检查和附件3 控制菌检查培养基的适用性检查。

4.5 方法适用性试验供试品的微生物计数方法应进行方法适用性试验，以确认所采用的方法适合于该产品的微生物计数。

微生物限度检测环境要求微生物限度测试是指在一定条件下对产品（如食品、药品等）中的微生物进行检测，以确定其微生物数量是否达到规定的限度。

微生物限度检测是确保产品安全和质量的重要环节，涉及到多个方面的环境要求。

下面是微生物限度检测环境要求的详细介绍。

1.实验室条件要求：微生物限度检测需要在专门的实验室条件下进行。

实验室应具备良好的设计和装修，确保实验室内部环境的洁净、无尘、无菌，并且具备良好的通风条件。

实验室应该定期进行消毒和清洁，以防止交叉污染。

此外，实验室需要配备齐全的实验设备和仪器，以确保检测的准确性和可靠性。

2.实验人员要求：实验人员需要接受严格的培训，并且具备相关的技术知识和操作技能。

他们应该了解微生物限度检测的原理和方法，能够正确地进行样品的采集、处理和分析。

实验人员应严格遵守操作规程和实验室安全规定，并保持良好的实验室行为习惯，如佩戴实验服、手套、口罩等，以防止交叉污染和个人伤害。

3.试剂和培养基要求：4.样品采集和处理要求：样品采集环境要求的主要目的是防止样品受到外界的污染。

在采集样品时，应确保工作区域清洁无菌，并使用干净的工具和容器。

样品应尽快送至实验室进行处理，以避免微生物的生长和繁殖。

5.设备、器皿和试剂的清洁与消毒：设备、器皿和试剂的清洁与消毒是确保微生物检测准确性的重要环节。

设备和器皿应进行适当的清洁和消毒，并且在使用前进行质量控制。

试剂的清洁和消毒要遵循相应的规定和程序，以避免试剂的污染和误差。

微生物限度检测环境要求的核心是保证实验室、设备和试剂的清洁和无菌状态，以确保检测结果的准确性和可靠性。

同时，实验人员也是保证微生物限度检测质量的关键因素，他们需要具备相关的知识和技能，并严格遵守操作规程和实验室安全规定。

通过合理的实验室环境和严格的操作要求，微生物限度检测可以保证产品的安全和质量。

1.使用微生物室前应用紫外照射30min以上，包括超净台，微生物实验室，缓冲间。

2.所有物品应该从传递窗转移进入微生物室，放入传递窗之前，所有的物品都应消毒。

3.放入超净台的物品也应该先用75%的酒精消毒。

4.每次手离开超净台都应该用75%的酒精消毒后再进行操作。

5.所有的玻璃器皿操作前后都应该用酒精灯火焰烧灼。

6.使用涂布棒或接种环前后都应该烧透，否则会造成交叉污染。

7.使用无菌枪头时，手套不能接触枪头，否则弃之。

8.灭菌时，枪头的朝向应该一致，避免造成浪费。

9.灭菌时，玻璃仪器等的包扎一定要包扎过瓶口或者不能有仪器瓶口等部位露出。

10.微生物室使用结束后，应遵循“先物后地，先内后外，先上后下，先拆后洗，先零后整，”
的清洁秩序。

11.用0.1%-0.2%的新洁尔灭或者的消毒水交替用作消毒液，避免实验室产生耐药菌株。

12.清场借宿后，实验室，超净台和缓冲间同样要紫外照射30min以上。

注意：无菌服要提前灭菌后烘干。

穿着时，要先用75%的酒精消毒手后，戴上头套，先穿上衣，再穿裤子，上衣塞进裤子里，最后戴上口罩和手套。

微生物限度检测环境要求(一)微生物限度检测环境要求简介微生物限度检测是一种常见的质量控制手段，用于确定制品中微生物的数量及种类。

在进行微生物限度检测时，需要满足一系列的环境要求，以确保测试结果的准确性和可靠性。

环境要求1.无尘环境: 检测环境必须保持干净，无尘且经过适当消毒处理，以防止异物对检测结果的干扰。

–例子: 在进行微生物限度检测时，工作台面、试验器皿和仪器设备应经过清洁，并进行适当的消毒。

2.温度控制: 检测环境的温度应符合相应的标准，以保证微生物的正常生长和检测结果的准确性。

–例子: 在进行细菌培养和菌落计数时，常规温度要求为37℃，确保微生物可以在适宜的温度下生长和繁殖。

3.湿度控制: 检测环境的湿度要适中，以防止微生物的异常生长和污染。

–例子: 在进行真菌和霉菌检测时，通常要求湿度保持在50%~70%之间，以创造适合微生物生长的环境。

4.空气洁净度控制: 检测环境的空气质量应达到一定的洁净度要求，以减少微生物的污染。

–例子: 在进行空气微生物检测时，需要使用高效过滤器对空气中的微粒进行过滤，确保检测结果的准确性。

5.员工培训: 进行微生物限度检测的工作人员应接受专业的培训，了解操作规程和标准操作程序，以确保测试的准确性和可靠性。

–例子: 微生物限度检测实验室的工作人员需要掌握无菌技术、培养技术以及微生物鉴定技术等知识，以便正确地进行微生物限度检测。

结论微生物限度检测是保证产品质量和安全性的重要手段，而满足相应的环境要求是确保检测结果准确可靠的关键。

只有在符合无尘环境、温度控制、湿度控制、空气洁净度控制以及员工培训等要求的前提下，才能有效地进行微生物限度检测，为产品的质量提供保障。

微生物限度（薄膜过滤法）
1、用到的设备和仪器：
微生物限度仪，一次性过滤杯，无菌滤膜（0.45um，Φ50mm）酒精灯，电子打火消毒喷枪，不锈钢镊子、无菌均质袋(无菌锥形瓶）、不锈钢剪刀、电子天平
2、环境要求：C+A检验前先开紫外灯和空调净化系统半小时。

3、样品外包装在准备室用75%乙醇或0.1%的新洁尔灭溶液浸泡10秒钟，然后通过传递窗传到检测室超净工作台内
4、供试液制备:在超净工作台内，用无菌剪刀打开外包装，根据样品稀释要求，称取适量供试品，加入稀释液。

（一般称取10g样品，加入90ml胰酪大豆胨液体培养基中）
5、过滤：先用消毒枪对过滤头消毒，然后用无菌镊子把无菌滤膜贴这绿色面朝上贴在过滤头上，在把一次性滤杯放在上面，先用稀释液20ml润湿滤膜，取样品1ml过滤，用适量冲洗液冲洗滤膜。

取下一次性滤杯，用无菌镊子小心取下滤膜，菌面朝上贴在放有胰酪大豆胨琼脂培养基和沙氏葡萄糖琼脂培养基上。

6、培养：培养皿倒置于培养箱内，胰酪大豆胨琼脂培养基，33℃培养5天。

沙氏葡萄糖琼脂培养基，23℃培养7天。

注：1、操作过程中一定要有无菌意识，防止对样品和环境造成污染。

2、此操作没有具体到品种，如果要具体到品种，冲洗量要在符合药典和法规要求的同时通过方法验证来得到。

3、稀释倍数根据样品污染程度进行，次稀释倍数也要经过验证来得到。

微生物限度检查室管理规程1.目的和适用范围1.1 本管理规程是为了规范微生物限度检查室的管理，确保检测结果的准确性和可靠性。

1.2 本管理规程适用于所有从事微生物限度检查工作的检测实验室。

2.微生物限度检查室的设施要求2.1 微生物限度检查室应设立在干净、整洁、通风良好的室内环境中，禁止吸烟、饮食和储存易污染的物品。

2.2 微生物限度检查室应配备必要的检测设备和仪器，并定期进行校验和维护。

2.3 微生物限度检查室应设有合适的储存空间，以保证试剂和样品的安全存放。

2.4 微生物限度检查室应配备必要的个人防护用品，包括实验服、手套、面罩等。

3.人员培训和操作规范3.1 对从事微生物限度检查工作的人员进行专业培训，包括检测方法、操作流程、质量控制等方面的知识。

3.2 严格遵守操作规范，按照标准程序进行样品的接收、处理、检测和记录。

3.3 检测人员应严格执行个人卫生要求，勤洗手，佩戴合适的个人防护用品。

4.质量管理4.1 进行质量控制，包括使用合适的阳性和阴性对照试剂进行检测，确保检测结果的准确性和可靠性。

4.2 定期开展质量评价，参与相关的质量控制程序和比较试验。

4.3 定期对设备和仪器进行校验和维护，确保其正常运行。

4.4 建立合适的记录和档案，保存检测结果和相关信息，便于追溯和溯源。

5.安全管理5.1 微生物限度检查室应按照相关法规，制定安全操作规程，确保实验人员和环境的安全。

5.2 对危险物品进行妥善储存和管理，确保安全使用。

5.3 加强卫生清洁工作，保持检测室的整洁和在有条件的情况下进行消毒和清洁。

6.纠纷处理和督导6.1 对于检测中发生的纠纷和问题，应及时进行调查和处理，并保证实事求是，公正公平。

6.2 设立督导机构，定期对微生物限度检查室的管理进行检查和督导，确保管理规程的有效执行。

7.法律责任和追究7.1 所有从事微生物限度检查工作的实验室人员应严格遵守相关的法律法规和规章制度。

7.2 安全事故和质量问题发生时，应追究相关人员的责任，依法处理。

微生物限度检查法标准操作规程一、目的：建立一个微生物限度检查标准操作规程，规范质检员的操作，保证实验的安全性、准确性。

二、范围：适用于微生物限度检查的产品。

三、责任：QC部质检员对本规程实施负责。

四、内容1.检验依据：《中国药典》2010年版二部。

2. 简述2.1.微生物限度检查法系检查非规定灭菌制剂及其原料、辅料受微生物污染程度的方法。

检查项目包括细菌数、霉菌数、酵母菌数及控制菌数检查。

2.2.微生物限度检查应在环境洁净度10000级下的局部洁净度100级的单向流空气区域内进行。

检验全过程必须严格遵守无菌操作，防止再污染，防止污染的措施不得影响供试品中微生物的检出。

单向流空气区域、工作台面及环境应定期按《医药工业洁净室（区）悬浮粒子、浮游菌和沉降菌的测试方法》的现行国家标准进行洁净度验证。

2.3.供试品检查时，如果使用了表面活性剂、中和剂或灭活剂，应证明其有效性及对微生物无毒性。

2.4.除另有规定外，本检查法中细菌及控制菌培养温度为30～35℃；霉菌、酵母菌培养温度为23～28℃2.5.检验结果以1g、1ml、10g、10ml或10cm2为单位报告，特殊品种可以最小包装单位报告。

3.设备、仪器3.1.设备：3.1.1.洁净实验室：微生物限度检查应有单独的洁净实验室，每个洁净实验室应有独立的净化空气系统。

结构和要求：洁净室应采光良好，避免潮湿、远离厕所及污染区。

操作间与缓冲间应有样品传递窗，出入操作间和缓冲间的门不应直对。

洁净实验室内应六面光滑平整，能耐受清洗消毒。

墙壁与地面、天花板连接处无缝隙，不留死角。

操作间不应安装下水道。

洁净实验室内的照明灯应嵌装在天花板内，室内光照应分布均匀，光照度不低于300LX。

●温度、湿度：洁净实验室内温度应控制在18～26℃，相对湿度最好在40％～60％。

●操作间：操作间应安装空气除菌过滤层流装置。

洁净度不应低于10000级，局部洁净度为100级（或放置同等级净化工作台）。

微生物限度检测环境要求
微生物限度检测的环境要求包括以下几个方面：
1. 实验室：微生物限度检测需要在洁净的实验室环境中进行，保持实验室的整洁和清洁，避免尘埃、污染物和杂质对检测结果的影响。

2. 设备和工具：确保使用的设备、仪器和工具的清洁和无菌状态，定期进行校准和维护，防止器械交叉感染和误差的发生。

3. 员工操作：检测人员应穿戴适当的实验服、手套、口罩和帽子，保持个人卫生，并且进行必要的培训和反复操作，以确保规范和准确的操作步骤。

4. 检测物品和样本：对待检测物品和样本进行合理的处理和保存，避免污染和交叉感染，确保取样的准确性和可靠性。

5. 温湿度控制：在检测过程中，适宜的温度和湿度控制对于微生物生长和繁殖具有重要影响，确保在适宜的环境条件下进行检测。

综上所述，微生物限度检测的环境要求包括实验室整洁、设备清洁和无菌、员工个人卫生、物品和样本处理、温湿度控制等方面的要求。

这些要求能够确保检测结果的准确性和可靠性。

微生物限度检测（平皿法）
1、用到的设备和仪器：
无菌均质袋(无菌锥形瓶）、电子天平。

2、环境要求：检验前先开紫外灯和空调净化系统半小时。

3、样品外包装在准备室用75%乙醇或0.1%的新洁尔灭溶液浸泡10秒钟，然后通过传递窗传到检测室超净工作台内
4、供试液制备:取样品10g溶于90ml胰酪大豆胨液体培养基（pH7.0无菌氯化钠蛋白胨缓冲液）中，为10-1，限度值高的可以逐步稀释为10-2，10-3
5、接种：各稀释级别分别取1ml加入培养皿，每个稀释级别平行做两皿，然后需氧菌加18ml胰酪大豆胨琼脂培养基，霉菌加18ml沙氏葡萄糖琼脂培养基。

6、培养：待培养基凝固后倒置培养需氧菌33℃，培养5天。

霉菌23℃培养7天。

注：1、操作过程中一定要有无菌意识，防止对样品和环境造成污染。

2、此操作没有具体到品种，如果要具体到品种，取样量要在符合药典和法规要求的同时通过方法验证来得到。

3、稀释倍数根据样品污染程度进行，稀释倍数也要经过验证来得到。