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第八章 液相色谱法概论例题例一：柱长25cm ，固定相为10μm 的全多孔型颗粒。
流动相线速为0.1cm/s,组分的扩散系数为10-5cm 2/s 。
求理论塔板数。
解：1010001.01.05=⨯==-m pD ud ν 34.3101.0102101.0233.033.0=⨯++=⨯++=νννh cm hd H p 00334.0001.034.3=⨯==748500334.025===H L n 例2 在反相色谱中，流动相从30％(V ／V)甲醇—术改变为40%(V ／V)甲醇—水。
问组分的调整保留时间将改变多少？解 在30％配比时，混合溶剂的极性为：67.82.107.01.53.0,1=⨯+⨯=p40％配比时，混台溶剂的极性为：16.82.106.01.54.0,2=⨯+⨯=p 51.067.816.8,-=-=∆p8.11,1,2,1,2==R R t t K K 即组分的调整保留时间减少到原来的1／1．8。
思考题与习题1．试比较HPIC 与GC 分离原理．仪器构造及应用方法的异同点。
2． 高放液相色谱法是如何实现高效和高速分离的(与经典的柱色谱比较)?3． 在高效液相色谱中，为什么一般采用短而粗的色谱注？4． 在正确答案的字母上画圈。
、(1) 要使峰宽减小，可以：1）降低柱温；2)采用高选择性固定相；3)采用细颗粒载体；4)采用最佳线速；5)减小相比；6)增大流动相对组分的亲和力；7）减小柱外效应。
(2) 要使相对保留值增加，可以：1)采用最佳线速2）减小流动相对组分的亲和力；3）增加柱长；4)增大相比；5)采用高选择性固定相；6）增加理论塔板数；7)采用细颗粒载体；8)减小柱外效应。
5． 简述HPLC 的色谱峰展宽的主要影响因素及改善方法。
6． 高效液相色谱方法分为哪几类？其本质是什么?7． HPLC 的常用检测器有哪几种?试述其测量原理及应用。
8．说明下面几种情况对组分的分离和检测有何影响？(1)使用紫外吸收检测器时，流动相为含有杂质(芳烃)的己烷；(2)在液固色谱中，用含有少量极性杂质(例如水)的己烷作流动相；(3)在梯度洗脱中，使用含有微量极性杂质的非极性流动相后，更换极性较大的流动相。
说课稿尊敬的各位评委老师，你们好！今天我要进行说课的内容是：高效液相色谱法的应用——饮料中苯甲酸钠含量的测定一、教材分析高效液相色谱法的应用是选自高等教育出版社《仪器分析》教材第八章第一节。
在此之前，学生们已经学习了色谱法及其基本概念，这为过渡到本节内容的学习起到了铺垫的作用。
由于高效液相色谱法的分析速度快、效率高、灵敏度高以及操作自动化等特点，此方法已经广泛用于化工、农药、医药、环境监测、动植物检验检疫等行业和领域。
因此学好本节内容对于以后的工作有着至关重要的作用。
二、教学目标根据本教材的结构和内容分析，结合着高职学生的认知结构及其心理特征，我制定了以下的教学目标：1、激发学生对学习过程的兴趣及未来工作的期待；2、熟悉高效液相色谱仪的基本构造及工作过程；3、学会使用高效液相色谱仪测量简单有机物的含量；三、教学重点教学重点：高效液相色谱仪的基本构造重点的依据：只有掌握了高效液相色谱仪的基本构造，才能理解其工作原理、学会使用高效液相色谱法测量简单的化合物。
四、教学难点教学难点：1、对高效液相色谱仪工作过程的理解2、应用高效液相色谱法测定有机化合物的含量难点的依据：高效液相色谱仪工作过程较抽象，内部结构复杂、仪器昂贵，不能随意拆卸，很难想象其工作过程；另外实际的样品测量过程中影响因素较多，容易出错，很难独立完成。
为了讲清教材的重、难点，使学生能够达到本节内容设定的教学目标，我再从教法和学法上谈谈：五、教学方法1、直观演示法：利用图片、动画等手段进行直观演示，激发学生的学习兴趣，活跃课堂气氛，促进学生对知识的掌握。
2、观察法让学生独立观察实验仪器设备，将教材中的知识形象化、具体化，让学生切实的感受到高效液相色谱仪的每一个零部件。
3、集体讨论法针对课程的重点难点，组织学生进行集体和分组讨论，培养学生在学习中分析问题解决问题的能力。
使学生始终处于主动的学习状态中，充分体现了“教为主导，学为主体”的原则。
六、学法指导高职学生年龄段分布在18-21岁之间，此阶段学生自我意识逐步增强，抽象思维迅速发展，意志水平明显提高。
第八章高效液相色谱法(High Performance Liquid Chromatograph)第一节概述（Generalization）以高压液体为流动相的液相色谱分析法称高效液相色谱法（HPLC）。
HPLC是20世纪70年代初发展起来的一种新的色谱分离分析技术。
具有分离效能高、选择性好、灵敏度高、分析速度快、适用范围广（样品不需气化，只需制成溶液即可）的特点，适用于高沸点、热不稳定有机及生化试样的分离分析。
HPLC基本方法是用高压泵将具有一定极性的单一溶剂或不同比例的混合溶剂泵入装有填充剂的色谱柱，经进样阀注入的样品被流动相带入色谱柱内进行分离后依次进入检测器，由记录仪、或数据处理系统记录色谱信号再进行数据处理而得到分析结果。
高效液相色谱法按固定相不同可分为液－液色谱法和液－固色谱法；按色谱原理不同可分为分配色谱法（液－液色谱）和吸附色谱法（液－固色谱）等。
目前，化学键合相色谱应用最为广泛，它是在液－液色谱法的基础上发展起来的。
将固定液的官能团键合在载体上，形成的固定相称为化学键合相，具有固定液不易流失的特点，一般认为有分配与吸附两种功能，常以分配作用为主。
C18（ODS）是最常使用的化学键合相。
根据固定相与流动相极性的不同，液-液色谱法又可分为正相色谱法和反相色谱法，当流动相的极性小于固定相的极性时称正相色谱法，主要用于极性物质的分离分析；当流动相的极性大于固定相的极性时称反相色谱法，主要用于非极性物质或中等极性物质的分离分析。
《中国药典》中有50种中成药的定量分析采用HPLC法，在中药制剂分析中，大多采用反相键合相色谱法。
一、高效液相色谱法的特点目前经典LC主要用于制备，若用于分析则采用脱机或非连续检测。
经典LC填料缺陷，通常是填料粒度大、范围宽、不规则，不易填充均匀，扩散和传质阻力大，谱带展宽加大。
它存在致命弱点：速度慢、效率低和灵敏度低。
HPLC填料（高效固定相）颗粒细、直径范围窄、能承受高压。
高效液相色谱使用方法高效液相色谱（HPLC）是一种分离和检测化合物的重要技术，广泛应用于化学、生物、药学等领域。
它的高效性和精密度使其成为许多实验室中不可或缺的工具。
下面将介绍高效液相色谱的使用方法，希望能为您的实验工作提供帮助。
首先，准备好实验所需的仪器和试剂。
检查色谱柱、流动相、样品溶液等是否符合要求，确保实验的顺利进行。
接下来，进行仪器的预处理和平衡。
打开色谱仪，设置好检测波长和流速等参数，进行系统的平衡和稳定。
然后，进行样品的处理和制备。
将待测样品溶解于适当的溶剂中，过滤去除杂质，使其达到适合进样的状态。
注意样品处理的过程中要保持样品的纯度和稳定性，避免对实验结果产生影响。
接着，进行进样和分离。
将处理好的样品通过自动进样器引入色谱柱中，流动相将样品分离并通过检测器进行检测。
在此过程中，需要注意流速、温度、压力等参数的控制，以保证色谱分离的准确性和重复性。
最后，进行数据的处理和分析。
根据检测器输出的信号，得到样品的色谱图谱，通过峰面积、保留时间等参数进行定量和定性分析。
同时，对实验结果进行统计学处理，评估实验的准确性和可靠性。
在实验操作的过程中，需要注意以下几点，一是要严格控制实验条件，确保实验结果的准确性和可重复性；二是要及时记录实验过程中的关键步骤和参数，以备后续分析和总结；三是要及时清洗和维护色谱仪器，延长仪器的使用寿命和保证实验结果的准确性。
总之，高效液相色谱是一种重要的分析技术，掌握其使用方法对于化学、生物、药学等领域的科研工作者来说至关重要。
希望以上介绍的使用方法能够为您的实验工作提供一些帮助，祝您实验顺利取得理想的结果！。
高效液相色谱法定义
高效液相色谱法是一种分离和分析混合物的方法。
它基于混合物在流动相和固定相之间的分配差异来实现分离。
高效液相色谱法使用高压输液系统将流动相泵入色谱柱中，待分析的混合物通过进样器注入流动相中，然后在色谱柱中进行分离。
色谱柱通常填充有特殊的固体吸附剂或化学键合相，混合物中的成分在流动相和固定相之间分配，根据其分配系数的差异而分离。
分离后的成分依次通过检测器进行检测，常见的检测器包括紫外-可见检测器、荧光检测器、电化学检测器等。
检测到的信号被记录下来，通过对信号的分析和比较，可以确定混合物中各成分的含量和性质。
高效液相色谱法具有分离效率高、分析速度快、灵敏度高、适用范围广等优点，广泛应用于药物分析、环境监测、食品分析、生物化学等领域。
