ADA 酶比色法

腺苷脱氨酶（ADA）测定及意义
腺苷脱氨酶（ADA）是嘌呤核苷代谢中重要的酶类，属于巯基酶，每分子至少含2个活性巯基，其活性能对氯汞甲酸完全抑制。

ADA广泛分布于人体各组织中，以胸腺、脾和其他淋巴组织中含量最高，肝、肺、肾和骨胳肌等处含量较低。

血液中ADA主要存在于红细胞、粒细胞和淋巴细胞，其活性约为血清的40～70倍，T淋巴细胞比B淋巴细胞该酶活性更高。

1．正常参考值：
速率法：健康成年人：0-19.6 U/L。

比色法：按ADA的习用单位计算，健康成年人为：0-25 U/L。

按国际单位计算，健康成年人为：≤30 U/L。

2．临床意义
血清ADA活性增高见于：
①肝脏疾病：急性黄疸性肝炎，肝细胞出现损伤，在黄疸尚未出现前，可见增高。

因
ADA分子量较ALT小，当肝细胞轻度受损时ADA比ALT先释入血内。

慢性肝炎活动期，慢性迁延性肝炎升高明显；肝硬化、原发性肝癌时，ADA活性也升高。

②肿瘤引起的阻塞性黄疸、前列腺癌和膀胱癌、网状细胞瘤、淋巴瘤、溶血性贫血、
风湿热、伤寒、痛风、重症地中海贫血、骨髓性白血病、结核、自身免疫性疾病、传染性单核细胞增多症和心力衰竭等均可引起此酶升高。

③结核性胸腹水ADA活性显著增高，癌性胸腹水不增高，而血清中ADA活性二者无
明显差别，故测定胸腹水中ADA活性有助于将两者鉴别。

④结核性脑膜炎ADA显著增高，而病毒性脑膜炎则不增高，颅内肿瘤及中枢神经系统
白血病稍增高。

所以脑脊液ADA检测可以作为中枢神经系统疾病诊断和鉴别诊断的重要指标。

拼音
xiàngāntuōānméi
英文参考
adenosinedeaminase
腺苷脱氨酶 adenosine deaminase 催化腺苷的氨基水解脱氨生成次黄核苷和氨反应的酶。

EC 3．5．4．4。

主要存在于肝脏和肌肉，而其他动物器官也广泛存在。

另外，也存在于曲霉中。

来自前者的酶特异性强，对腺苷和脱氧腺苷以外的核酸及其分解物不起作用，但来自后者的酶（高峰淀粉酶）是非特异性的，可对5′－AMP、ADP、ATP、嘧啶二核苷酸等起脱氨作用。

化验
英文名
adenosinedeaminase
别名
血清腺苷脱氨酶,ADA
正常值
(1)酶速率法(37℃)：0～30U/L
(2)分光光度法：＜25U
(3)比色法：5～25U/ml
化验结果意义
升高：急、慢性病毒性肝炎、肝硬化、药物性肝损害、酒精性肝纤维化症(中度以上)、原发性肝癌、自身免疫性肝疾病、各种白血病、传染性单核细胞增多症、类肉瘤病等。

化验取材
血液
化验方法
酶类测定
化验类别
血液生化检查、酶类测定
参考资料
《新编临床检验与检查手册》、《新编化验员工作手册》相关疾病
肝硬化。

腺苷脱氨酶（ADA ）测定试剂盒（酶比色法） 使用说明书【产品用途】本试剂用于测定血清、胸腹水、脑脊液中的腺苷脱氨酶活性。

【临床意义】肝脏疾病时，本酶活性往往升高，有助于黄疸的鉴别诊断。

在阻塞性黄疸时，此酶活性升高很少，而在肝实质性损伤时，此酶和转氨酶往往同时升高，特别在慢性活动性肝炎和肝硬变时，转氨酶阳性率较低，增高幅度也不明显，而ADA 活性的阳性率可达90%左右，增高程度也较明显。

同时ADA 检测对白血病、伤寒、出血热也有辅助诊断作用。

测定胸腹水及脑脊液标本中的ADA 活性，有鉴别诊断价值。

结核性胸腹水中ADA 活力显著高于癌症及炎症胸腹水中ADA 活力，对早期诊断结核性胸、腹膜炎有较高的敏感性和一定的特异性。

此外，脑脊液ADA 检测可作为中枢神经系统疾病诊断和鉴别诊断的重要指标，结核性脑膜炎ADA 活性升高，病毒性脑膜炎不升高。

【适用范围】液体双试剂，即开即用，自动化分析仪用。

【产品规格】R 1 50ml ×2 R 2 50ml ×1【试剂成份】R 1Tris-HCl pH8.0 50mM4-AA 2mM PNP 0.1kU/mLXOD 0.2kU/mL POD 0.6kU/mL 稳定剂 R 2 Tris-HCl ph4.0 50mM 腺苷 10mMEHSPT 2mM【检测原理】腺苷在腺苷脱氨酶作用下脱氨基形成次黄苷，次黄苷在PNP 作用下生成次黄嘌呤，次黄嘌呤在黄嘌呤氧化酶（XOD ）作用下转化为尿酸和过氧化氢（H 2O 2），H 2O 2与EHSPT 和4-氨基安替比林（4-AA ）反应生成醌色物，显色强度与ADA 活性成正比。

腺苷−−−→−ADA次黄苷 + NH 3 次黄苷 + Pi −−→−PNP次黄嘌呤 + 核酸-1-磷酸 次黄嘌呤 + 2H 2O + 2O 2−−−→−XOD 尿酸+ 2H 2O 22H 2O 2 + 4-AA + EHSPT −−→−POD醌亚氨染料+ H 20【样本采集】新鲜非溶血血清或血浆，ADA 在4℃时可稳定1周。

腺苷脱氨酶（ADA）参考值：0-15U/L 海丰参考区间4~24U/L介绍：腺苷脱氨酶(ADA)为一种与机体细胞免疫活性有重要关系的核酸代谢酶，其作用是催化水解腺苷生成肌苷和氨。

ADA广泛存在于各组织中，以盲肠、小肠黏膜、脾脏、胸腺中含量最高，肝脏、肺、肾、心脏、骨骼肌、神经组织等处含量较低，肝脏含量约为小肠的7%~10％。

肝内ADA90％存在与细胞浆水溶性部分，其余在细胞核内。

此外，血细胞(红细胞、粒细胞、淋巴细胞)内ADA活性约为血液中40倍~70倍，因此测定ADA时应避免溶血。

血清中的ADA主要来自肝脏，所以肝细胞损伤或膜通透性增强，均可使血中酶活性增高，故可依据该酶活性增高或降低反映肝细胞损伤和恢复程度。

血清腺苷脱氨酶（ADA）正常值：(1)酶速率法(37℃)：健康成年人：7.7-19.3 U/L(2)分光光度法：<25 U/L(3)比色法：健康成年人为：5～25 U/L诊断参考：肝脏疾病：ADA活性是反映肝损伤的敏感指标，可作为肝功能常规检查项目之一，与ALT或GGT等组成肝酶谱能较全面地反映肝脏病的酶学改变。

一．ADA活性是反映肝损伤的敏感指标，可作为肝功能常规检查项目之一，与AIT或GGT等组成肝酶谱。

（1）用于判断急性肝损伤及残留病变急性肝炎时ALT明显升高。

ADA仅低度，中度升高。

但重症肝炎发生酶胆分离时，尽管ALT不高，而ADA常明显升高。

而ALT恢复正常，ADA持续升高者，常易复发或易迁延为慢性肝炎。

（2）协助诊断慢性肝病在反映慢性肝损伤时ADA较ALT为优。

慢性肝炎、肝硬化和肝细胞癌患者血清ADA活性显著升高，因而可判断慢性肝病的程度。

另外，慢性活动性肝炎活性明显高于慢性迁延性肝炎。

故可用于二者的鉴别诊断。

（3）有助于肝纤维化的诊断ADA活性差异与肝细胞损害关系不大，与肝纤维化程度相关。

肝纤维化程度增加，ADA活性增加。

（4）有助于黄疸的鉴别据文献报道，阻塞性黄疸血清ADA活性明显低于肝细胞性黄疸及肝硬化伴黄疸。

酶活性的检测方法
酶活性的检测方法通常包括以下几种常见的技术：
1. 吸收光谱法：利用酶底物与产物在不同波长下的吸光度差异，通过光谱仪测量反应过程中的吸光度变化来检测酶的活性。

2. 色谱法：利用色谱仪对酶底物和产物进行定量分析，可测定酶催化反应中底物和产物的浓度变化，从而确定酶的活性。

3. 比色法：利用对比试剂和酶底物反应后产生的色素溶液颜色深浅的变化来测定酶的活性。

比色法一般适用于检测酶对底物的催化活性。

4. 酶标测定法：利用酶对底物的特异性催化作用来标记或测定其他物质的方法，包括酶联免疫吸附分析（ELISA）和酶标记免疫测定法等。

以上是一些常见的酶活性检测方法，具体的选择取决于酶的特性和所需测定的参数。

值得注意的是，不同酶可能需要不同的检测方法，并且在进行实验时应根据实际情况选择合适的检测方法。

体外诊断试剂：N-乙酰-β-D-氨基葡糖糖苷酶测定试剂盒（比色法）最大稀释倍数及基质影响的性能研究资料
依据国家食品药品监督管理局《体外诊断试剂注册管理办法》，参考《体外诊断试剂分析性能评估指导原则（征求意见稿）》和CLSI有关标准，对本品的最大稀释倍数及基质影响作如下实验研究，结果如下：
1. 仪器：
日立7060全自动生化仪
2. 试剂：
本公司生产的N-乙酰-β-D-氨基葡糖糖苷酶测定试剂盒（比色法），批号为：20140115、20140117、20140119
3. 最大稀释倍数及基质影响实验研究
3.1 实验方法
选取接近于线性范围上1/3区域内的3个高浓度样本，分别使用生理盐水对高浓度样本进行稀释，并记录稀释倍数，各浓度样本的制备方法见表1；在一次运行中将高浓度样本及各稀释样本重复测定3次，记录测试结果见表2-4。

表1 7个浓度水平的样本制备方法
3.2 实验数据及分析结果
表2 多倍稀释实验数据记录和结果（批号：20140115）
表3 多倍稀释实验数据记录和结果（批号：20140117）
表4 多倍稀释实验数据记录和结果（批号：201400119）
3.3 实验结论
从上述实验数据及统计分析结果中选取还原浓度与理论浓度的相对偏差（%）等于或小于本试剂盒性能指标中准确度相对偏差的最大稀释倍数为本试剂盒推荐的最大稀释倍数。

通过以上实验结果表明，当稀释倍数≤32倍时，相对偏差＜15%，故本试剂盒能做的最大样本稀释倍数为32倍。

在该最大稀释倍数下，样本使用生理盐水进行稀释对基质的影响在规定范围之内。

血清腺苷脱氨酶ADA测定1.实验原理应用ADA偶联嘌呤核苷磷酸化酶(PNP)，黄嘌呤氧化酶(XOD)和过氧化物酶(POD)反应连续监测法。

ADA酶解腺苷(Adenosine)脱氨产生次黄苷(Inosine)；再通过偶联PNP的作用，生成次黄嘌呤(Hypoxanthine);后者在XOD氧化作用下生成尿酸和过氧化氢；最后在POD的作用下H2O2再与N-乙基-N-(2-羟基-3-硫丙基)-3-甲基苯胺(EHSPT)、4-氨基安替比林(4-AAP)反应(Trinder氏反应)，生成紫红色的有色醌。

通过测量有色醌550nm处吸光度上升的速度来测算ADA的活性。

ADAAdenosine + H2O Inosine + NH3PNPInosine + Pi Hypoxanthine + Ribose 1-phosphateXODHypoxanthine + 2H2O + 2O2 Uric acid + 2H2O2POD2H2O2 + 4-AA P+ EHSPT 4H2O + Quinone dy e2. 标本：2.1 病人准备：新鲜血清，采血后应及时分离，避免溶血。

2.2 类型：血清、肝素或EDTA血浆，应避光保存。

3. 标本存放：血清，采血后应及时分离避免溶血，ADA在4℃稳定一个星期。

4. 标本运输：冰冻条件下保存运输。

5. 标本拒收标准：标本溶血、细菌污染、脂血等存运输的标本。

6. 实验材料6.1 试剂：亚太ADA试剂盒（H013 090920 试剂1＋试剂2）6.1.1 试剂组成6.1.3 试剂稳定性与贮存试剂避光保存于2～8℃，若无污染，可稳定至失效期。

试剂有效期为12个月。

试剂必需避光保存。

试剂不可冰冻。

6.1.4 变质指示：试剂出现颗粒或浑浊，被视作变质，应停止使用。

6.1.5 注意事项：试剂请勿直接接触皮肤、眼睛，如有接触，请用大量清水清洗。

请勿吞服。

6.2 校准品：使用亚太提供的专用校准品对自动分析仪进行校准，参见生化检验校准品和质控品.SOP文件6.3 质控品：参见生化检验校准品和质控品.SOP文件7. 仪器：奥林巴斯AU640生化分析仪8. 操作步骤8.1 项目基本参数：参见生化检验奥林巴斯AU640生化分析仪项目测定参数.SOP文件。

α-淀粉酶（α-AL）活性检测试剂盒（碘-淀粉比色法）说明书可见分光光度法UPLC-MS-600350T/24S试剂名称规格保存条件试剂一粉剂×1瓶2-8℃保存试剂二液体10mL×1支2-8℃保存试剂三液体30mL×1瓶2-8℃保存标准品粉剂×1瓶2-8℃保存溶液的配制：1、试剂一：临用前加入12.5mL试剂三，置于常温水中并加热至煮沸，期间不断搅拌粉剂至溶解，用不完的试剂2-8℃保存8周；2、标准品：10mg淀粉标准品。

临用前加10mL试剂三，置沸水浴中振荡溶解，配成1mg/mL淀粉标准液，2-8℃保存四周。

淀粉酶负责水解淀粉，包括α-淀粉酶和β-淀粉酶。

α-淀粉酶(EC3.2.1.1)可随机地作用于淀粉中的α-1,4-糖苷键，生成葡萄糖、麦芽糖、麦芽三糖、糊精等还原糖，同时使淀粉的粘度降低，因此又称为液化酶。

α-淀粉酶催化淀粉分子中的α-1,4糖苷键水解，产生葡萄糖、麦芽糖以及糊精等，碘可以与未被水解的淀粉结合，生成在570nm下有特征吸收峰的复合物，其深浅可计算出淀粉酶的活力单位。

α-AL耐热，但是β-淀粉酶可在70℃钝化15min。

因此粗酶液经过70℃钝化15min，就只有α-AL能够催化淀粉水解。

Unhydrolyzed Starch+Iodine Blue Complex（570nm）注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。

如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

可见分光光度计、恒温水浴锅、台式离心机、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、研钵/匀浆器、蒸馏水。

一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）1、组织：称取约0.1g样本，加1mL蒸馏水匀浆；匀浆后在室温下放置提取15min，每隔5min振荡1次，使其充分提取；6000g，室温离心10min，吸取上清液即为淀粉酶原液。

2、液体：直接检测。

（若有浑浊则离心后进行测定）二、测定步骤1、分光光度计预热30min以上，调节波长至570nm，蒸馏水调零。

腺苷脱氨酶（ADA）检测试剂盒（波氏比色法）腺苷脱氨酶(ADA)检测试剂盒(波氏比色法)简介：腺苷脱氨酶(Adenosine Deaminase ，ADA)是嘌呤核苷代谢中重要的酶类，属于一种巯基酶，每分子至少含2个活性巯基。

ADA 能催化腺嘌呤核苷转变为次黄嘌呤核苷，再经核苷磷酸化酶作用生成次黄嘌呤，其代谢缓和终产物为尿酸。

ADA 广泛分布于人体各组织中，以胸腺、脾和其他淋巴组织中含量最高，而肝、肺、肾和骨胳肌等含量低。

Leagene 腺苷脱氨酶(ADA)检测试剂盒(波氏比色法)其检测原理是待测样品中的ADA 催化腺嘌呤核苷水解脱氨，产生次黄嘌呤核苷和铵离子，利用波氏显色法，测定氨离子生成量。

其反应公式为：腺苷+H 2O →次黄嘌呤+NH 3。

通过分光光度计检测处吸光度，根据计算公式可得ADA 活力，100T 试剂盒可测50个样本。

该试剂盒仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。

组成：自备材料：1、离心管或小试管2、水浴锅3、比色杯4、分光光度计操作步骤(仅供参考)：1、准备样品：①血浆、血清样品：血浆、血清按照常规方法制备，可以直接用于本试剂盒的测定，冻存，用于ADA 的检测。

②细胞或组织样品：取恰当细胞或组织进行匀浆，低速离心取上清，冻存，用于ADA 的检测。

编号名称TE0233 100T Storage试剂(A):氨氮标准(1mg/ml) 1ml 4℃ 试剂(B): 底物缓冲液30ml 4℃ 试剂(C): 波氏ADA 显色液250ml 4℃ 避光试剂(D): ADA Assay b uffer 250ml 4℃ 避光使用说明书高活性样品：如果样品中含有较高活性的ADA，可以使用ddH2O稀释。

④(选做)样品准备完毕后可以用BCA蛋白浓度测定试剂盒测定蛋白浓度，以便于后续计算单位蛋白重量组织或细胞内的ADA含量。

2、稀释标准品：用ddH2O准确稀释氨氮标准(1mg/ml)至25μg/ml，即为氨氮标准工作液，4℃保存，备用。