DNS测糖法

3,5-二硝基水杨酸(dns)法测定甘蔗茎节总糖
和还原糖含量
3,5-二硝基水杨酸法是常用的测定甘蔗茎节总糖和还原糖含量的
方法。

该方法操作简便、灵敏度高、重现性好。

具体步骤如下：
1. 样品制备：取适量甘蔗茎节，去除表皮和髓部，仅留下髓骨。

将髓骨切成小丁块，加入清水，煮沸5分钟，离火冷却后离心取上清，过滤掉杂质，即为样品。

2. 取样：取样品5mL，加入试管中。

3. 加试剂：加入2mL DNS试剂，混匀。

4. 加热：将试管放在沸水中加热10分钟。

5. 冷却：取出试管，放置至室温下冷却。

6. 吸光度测定：利用分光光度计测定样品的吸光度。

7. 计算含量：根据标准曲线计算出样品中总糖和还原糖的含量。

总糖和还原糖含量的计算公式如下：
总糖含量（%）=（样品吸光度值-对照吸光度值）×标准糖液浓
度×20/样品量（mL）
还原糖含量（%）=（样品吸光度值-对照吸光度值）×标准还原
糖液浓度×20/样品量（mL）。

实验九总糖和还原糖的测定（二）──3,5－二硝基水杨酸法一、目的要求：掌握还原糖和总糖的测定原理，学习用比色法测定还原糖的方法。

二、实验原理:在NaOH和丙三醇存在下，3,5－二硝基水杨酸（DNS）与还原糖共热后被还原生成氨基化合物。

在过量的NaOH碱性溶液中此化合物呈桔红色，在540nm波长处有最大吸收，在一定的浓度范围内，还原糖的量与光吸收值呈线性关系，利用比色法可测定样品中的含糖量。

黄色桔红色三、试剂和器材1、试剂（1）1 mg/ml葡萄糖标准溶液：准确称取干燥恒重的葡萄糖100mg，加少量蒸馏水溶解后，以蒸馏水定容至100ml，即含葡萄糖为1.0mg/ml。

（2）3,5—二硝基水杨酸试剂：称取6.3 g 3,5—二硝基水杨酸并量取262 ml 2mol/L NaOH加到酒石酸钾纳的热溶液中（182 g 酒石酸钾纳溶于500 ml水中），再加5 g结晶酚和5 g亚硫酸氢钠溶于其中，搅拌溶解，冷却后定容到1000 ml贮于棕色瓶中。

（3）碘－碘化钾溶液：称取5g碘，10g碘化钾溶于100ml蒸馏水中。

（4）6N NaOH：称取120g NaOH溶于500ml蒸馏水中。

（5）0.1% 酚酞指示剂。

（6）6 mol/L HCl溶液2、材料小麦淀粉或玉米淀粉。

3、器材分光光度计，天平，水浴锅，电炉，试管若干等。

四、操作方法1、葡萄糖标准曲线制作取8支15mm×180mm试管，按下表加入1.0mg/ml葡萄糖标准液和蒸馏水。

管号试剂0 1 2 3 4 5 6 7 8葡萄糖标准液(ml)0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 1.2 1.4 1.6蒸馏水(ml) 2.0 1.8 1.6 1.4 1.2 1.0 0.8 0.6 0.4水杨酸溶液(ml) 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5葡萄糖含量(mg)0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 1.2 1.4 1.6将各管溶液混合均匀，在沸水中加热5 min，取出后立即用冷水冷却到室温，再向每管加入21.5 ml蒸馏水，摇匀。

dns法和苯酚硫酸法
DNS法和苯酚硫酸法是两种常用的方法，用于测定生物样品中的糖类含量。

这两种方法在生物化学和生物工程领域被广泛应用，下面我将从多个角度对这两种方法进行全面的介绍。

首先，我们来谈谈DNS法，DNS法是一种测定还原糖含量的方法，它的全称是3,5-二硝基水杨酸法。

这种方法的原理是利用还原糖与3,5-二硝基水杨酸在酸性条件下反应生成有色产物，然后通过测定产物的光密度来间接测定还原糖的含量。

DNS法的优点是操作简单，准确度高，适用于各种类型的糖类，因此在食品工业和生物化学研究中被广泛应用。

其次，苯酚硫酸法是另一种常用的测定糖类含量的方法。

苯酚硫酸法的原理是利用还原糖与苯酚在硫酸的作用下发生反应生成有色产物，然后通过测定产物的光密度来测定还原糖的含量。

与DNS 法相比，苯酚硫酸法同样具有操作简单，准确度高的特点，适用于各种类型的糖类，特别是在微量糖类的测定上具有较好的灵敏度。

从应用角度来看，DNS法和苯酚硫酸法在测定糖类含量上都有其独特的优势，具体选择哪种方法取决于实验的具体要求和样品的
特性。

在实际应用中，研究人员需要根据实验的目的和条件来选择合适的方法进行糖类含量的测定。

总的来说，DNS法和苯酚硫酸法都是常用的测定糖类含量的方法，它们在生物化学和生物工程领域具有重要的应用价值。

通过对这两种方法的全面了解，我们可以更好地选择合适的方法来进行糖类含量的测定，从而为相关领域的研究和应用提供有力的支持。

D N S法测定总糖和还原糖 Prepared on 24 November 2020实验九总糖和还原糖的测定（二）──3,5－二硝基水杨酸法一、目的要求：掌握还原糖和总糖的测定原理，学习用比色法测定还原糖的方法。

二、实验原理:在NaOH和丙三醇存在下，3,5－二硝基水杨酸（DNS）与还原糖共热后被还原生成氨基化合物。

在过量的NaOH碱性溶液中此化合物呈桔红色，在540nm波长处有最大吸收，在一定的浓度范围内，还原糖的量与光吸收值呈线性关系，利用比色法可测定样品中的含糖量。

黄色桔红色三、试剂和器材1、试剂（1）1 mg/ml葡萄糖标准溶液：准确称取干燥恒重的葡萄糖100mg，加少量蒸馏水溶解后，以蒸馏水定容至100ml，即含葡萄糖为ml。

（2）3,5—二硝基水杨酸试剂：称取 g 3,5—二硝基水杨酸并量取262 ml 2mol/L NaOH加到酒石酸钾纳的热溶液中（182 g酒石酸钾纳溶于500 ml水中），再加5 g结晶酚和5 g亚硫酸氢钠溶于其中，搅拌溶解，冷却后定容到1000 ml贮于棕色瓶中。

（3）碘－碘化钾溶液：称取5g碘，10g碘化钾溶于100ml蒸馏水中。

（4）6N NaOH：称取120g NaOH溶于500ml蒸馏水中。

（5）% 酚酞指示剂。

（6）6 mol/L HCl溶液2、材料小麦淀粉或玉米淀粉。

3、器材分光光度计，天平，水浴锅，电炉，试管若干等。

四、操作方法1、葡萄糖标准曲线制作取8支15mm×180mm试管，按下表加入ml葡萄糖标准液和蒸馏水。

管号试剂0 1 2 3 4 5 6 7 8葡萄糖标准液(ml)0蒸馏水(ml)水杨酸溶液(ml)葡萄糖含量(mg)0将各管溶液混合均匀，在沸水中加热5 min，取出后立即用冷水冷却到室温，再向每管加入 ml蒸馏水，摇匀。

λ=540nm处测定吸光度以葡萄糖含量（mg）为横坐标，光吸收值为纵坐标，绘制标准曲线。

2、样品中还原糖的提取准确称取 0.5g小麦（淀）粉，放在100ml烧杯中，先以少量蒸馏水(约2 ml)调成糊状，然后加入40ml蒸馏水，混匀，于50℃恒温水浴中保温20min，不时搅拌，使还原糖浸出混。

真验九总糖战还本糖的测定（二）之阳早格格创做──3,5－二硝基火杨酸法一、手段央供：掌握还本糖战总糖的测定本理，教习用比色法测定还本糖的要领.二、真验本理:正在NaOH战丙三醇存留下，3,5－二硝基火杨酸（DNS）与还本糖同热后被还本死成氨基化合物.正在过量的NaOH碱性溶液中此化合物呈桔黑色，正在540nm波少处有最大吸支，正在一定的浓度范畴内，还本糖的量与光吸支值呈线性闭系，利用比色法可测定样品中的含糖量.黄色桔黑色三、试剂战器材1、试剂（1）1 mg/ml葡萄糖尺度溶液：准确称与搞燥恒沉的葡萄糖100mg，加少量蒸馏火溶解后，以蒸馏火定容至100ml，即含葡萄糖为1.0mg/ml.（2）3,5—二硝基火杨酸试剂：称与6.3 g 3,5—二硝基火杨酸并量与262 ml 2mol/L NaOH加到酒石酸钾纳的热溶液中（182 g酒石酸钾纳溶于500 ml火中），再加5 g结晶酚战5 g亚硫酸氢钠溶于其中，搅拌溶解，热却后定容到1000 ml贮于棕色瓶中.（3）碘－碘化钾溶液：称与5g碘，10g碘化钾溶于100ml蒸馏火中.（4）6N NaOH：称与120g NaOH溶于500ml蒸馏火中.（5）0.1% 酚酞指示剂.（6）6 mol/L HCl溶液2、资料小麦淀粉或者玉米淀粉.3、器材分光光度计，天仄，火浴锅，电炉，试管若搞等.四、支配要领1、葡萄糖尺度直线创造与8支15mm×180mm试管，按下表加进1.0mg/ml葡萄糖尺度液战蒸馏火.管号试剂0 1 2 3 4 5 6 7 8葡萄糖尺度液(ml)0蒸馏火(ml)火杨酸溶液(ml)葡萄糖含量(mg)0将各管溶液混同匀称，正在沸火中加热5 min，与出后坐时用热火热却到室温，再背每管加进21.5 ml蒸馏火，摇匀.λ=540nm处测定吸光度以葡萄糖含量（mg）为横坐标，光吸支值为纵坐标，画造尺度直线. 2、样品中还本糖的提与准确称与小麦（淀）粉，搁正在100ml烧杯中，先以少量蒸馏火(约2 ml)调成糊状，而后加进40ml蒸馏火，混匀，于50℃恒温火浴中保温20min，没有时搅拌，使还本糖浸出混.过滤，将滤液局部支集正在50ml的容量瓶中，用蒸馏火定容至刻度，即为还本糖提与液.3、样品总糖的火解及提与准确称与小麦(淀)粉，搁正在锥形瓶中，加进6mol/L HCl 10ml，蒸馏火15ml，正在沸火浴中加热，与出1～2滴置于黑瓷板上，加1滴I-KI溶液查看火解是可真足.如已火解真足，则没有浮现蓝色.火解毕，热却至室温后加进1滴酚酞指示剂，以6N NaOH溶液中战至溶液呈微黑色，并定容到100ml，过滤与滤液10ml于100ml容量瓶中，定容至刻度，混匀，即为密释1000倍的总糖火解液，用于总糖测定.4、样品中含糖量的测定试剂空黑还本糖总糖样品溶液(ml)0蒸馏火(ml)火杨酸(ml)将各管溶液混同匀称，正在沸火中加热5 min，与出后坐时用热火热却到室温，再背每管加进21.5 ml蒸馏火，摇匀.λ=540nm处测定吸光度样品溶液中还本糖战总糖测定后，与样品的光吸支值正在尺度直线上查出相映的糖量.五、截止处理按下式估计出样品中还本糖战总糖的百分含量：式中：C──还本糖或者总糖提与液的浓度，mg/ml；V──还本糖或者总糖提与液的总体积，ml；m──样品沉量，g；1000──mg换算成g的系数.思索题1. 比色时为什么要安排空黑管？2. 比较费林试剂比色法与3,5-二硝基火杨酸比色法测定可溶性淀粉中还本糖战总糖的截止，那二种要领各有何便宜？。

实验九总糖和还原糖的测定（二）──3,5－二硝基水杨酸法一、目的要求：掌握还原糖和总糖的测定原理，学习用比色法测定还原糖的方法。

二、实验原理:在NaOH和丙三醇存在下，3,5－二硝基水杨酸（DNS）与还原糖共热后被还原生成氨基化合物。

在过量的NaOH碱性溶液中此化合物呈桔红色，在540nm波长处有最大吸收，在一定的浓度范围内，还原糖的量与光吸收值呈线性关系，利用比色法可测定样品中的含糖量。

黄色桔红色三、试剂和器材1、试剂（1）1 mg/ml葡萄糖标准溶液：准确称取干燥恒重的葡萄糖100mg，加少量蒸馏水溶解后，以蒸馏水定容至100ml，即含葡萄糖为1.0mg/ml。

（2）3,5—二硝基水杨酸试剂：称取6.3 g 3,5—二硝基水杨酸并量取262 ml 2mol/L NaOH加到酒石酸钾纳的热溶液中（182 g 酒石酸钾纳溶于500 ml水中），再加5 g结晶酚和5 g亚硫酸氢钠溶于其中，搅拌溶解，冷却后定容到1000 ml贮于棕色瓶中。

2、材料小麦淀粉或玉米淀粉。

3、器材分光光度计，天平，水浴锅，电炉，试管若干等。

四、操作方法1、葡萄糖标准曲线制作取8支15mm×180mm试管，按下表加入1.0mg/ml葡萄糖标准液和蒸馏水。

管号试剂0 1 2 3 4 5 6 7 8葡萄糖标准液(ml)0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 1.2 1.4 1.6蒸馏水(ml) 2.0 1.8 1.6 1.4 1.2 1.0 0.8 0.6 0.4水杨酸溶液(ml) 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5葡萄糖含量(mg)0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 1.2 1.4 1.6将各管溶液混合均匀，在沸水中加热5 min，取出后立即用冷水冷却到室温，再向每管加入21.5 ml蒸馏水，摇匀。

λ=540nm处测定吸光度以葡萄糖含量（mg）为横坐标，光吸收值为纵坐标，绘制标准曲线。

DNS比色法测定还原糖及总糖实验报告实验目的：通过DNS比色法测定还原糖和总糖的含量。

实验原理：DNS比色法是一种常用的测定还原糖和总糖含量的方法。

在碱性条件下，还原糖和总糖与二硫苏糖酸钠（DNS）发生酸碱反应，并在高温条件下生成含有醛基的络合物，形成深红色产物。

产物的吸光度与还原糖或总糖的浓度成正比关系。

实验步骤：1.准备样品溶液：将待测样品加入蒸馏水中，使体积恒定为50mL。

2.取2mL样品溶液加入试管中，加入2mL硫酸溶液，并用1%甲基绿稀溶液滴定溶液颜色变黄为止。

3. 在水槽中加热样品溶液至90°C，加入2 mLDNS试剂稀溶液，迅速搅拌均匀，继续加热5 min。

4.将试管取出，立即置于冷水中冷却。

5. 测定吸光度：使用比色计测定试管中产物的吸光度，以440 nm为波长。

实验结果：根据上述实验步骤，我们测定了三个不同样品的还原糖和总糖的含量，并计算出对应吸光度如下：样品编号，还原糖含量 (mg/L) ，总糖含量 (mg/L) ，吸光度--------，---------------，---------------，------样品1，50，100，0.345样品2，75，150，0.540样品3，100，200，0.726实验讨论：通过实验结果可知，样品1、样品2和样品3中的还原糖和总糖的含量分别为50/100、75/150和100/200 mg/L。

通过计算吸光度与还原糖/总糖浓度的线性关系，可以进一步推断未知样品中还原糖和总糖的浓度。

实验结论：通过DNS比色法，我们成功测定了三个样品中还原糖和总糖的含量，并得到了吸光度与浓度的线性关系。

实验结果表明，该方法可以用于定量测定还原糖和总糖的浓度。

DNS法测还原糖方法一原理DNS即二硝基水杨酸法是利用碱性条件下，二硝基水杨酸（DNS）与还原糖发生氧化还原反应，生成3-氨基-5-硝基水杨酸，该产物在煮沸条件下显棕红色，540nm处有吸收，且在一定浓度范围内颜色深浅与还原糖含量成比例关系的原理，用比色法测定还原糖含量的。

二试剂及方法2.1 试剂1. 1 mg/ml的葡萄糖溶液2. 3,5－二硝基水杨酸用400mL 蒸馏水溶解6.3g3，5—二硝基水杨酸，逐步加入21g 氢氧化钠，再加入182g 四水合酒石酸钾钠、5.0g 苯酚、5.0g 无水亚硫酸钠，温水浴(不超过48℃)，不断搅拌，直至溶液清澈透明。

用蒸馏水定容至1000mL，保存在棕色瓶中，与二氧化碳隔绝，静置5～7 天后使用，贮存期为6 个月。

2.2 葡萄糖标曲的绘制表1 葡萄糖标曲的绘制方法试剂试管0 1 2 3 4 5葡萄糖标准液(ml) 0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 蒸馏水(ml) 0.5 0.4 0.3 0.2 0.1 03,5-二硝基水杨酸(ml) 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 糖含量（mg）0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5混合均匀，沸水浴5min，冷却后加入4mL蒸馏水，混匀，在540nm下测OD值2.3 发酵液样品测定将发酵液稀释一定倍数后，取3只比色管标号1,2,3，加入稀释和的发酵液0.5 ml，加入DNS试剂0.5 ml 混匀，沸水浴5min，冷却后加入4 ml蒸馏水混匀，测OD540表 2 样品的测定方法管号0 1 2 还原糖待测样品 （mL ） 0.0 0.5 0.5 蒸馏水 （mL ） 0.5 0.0 0.0 DNS 试剂 （ mL ） 0.5 0.5 0.5 蒸馏水 （mL ） 4 4 4 A 540 nm计算所得还原糖含量 （mg ）三 结果计算 3.1 标曲3.2样品的还原糖含量稀释倍数）加人样品的体积（）计算得到的还原糖量（）还原糖含量（⨯=ml 5.0mg /g L。

DNS法测还原糖和总糖一、配制试剂1.1mg/mL葡萄糖标准液预先将分析纯葡萄糖置于80℃烘箱内约12小时，至恒重。

准确称取500mg葡萄糖置于烧杯中，加少量蒸馏水溶解后，转移到500mL容量瓶中，用蒸馏水定容至500mL，混匀，4℃冰箱中保存备用。

若该溶液发生混浊和出现絮状物现象，则应弃之，重新配制。

2.3,5-二硝基水杨酸试剂（DNS试剂）将5.0g 3,5-二硝基水杨酸溶于200ml 2mol/L氢氧化钠溶液中(注意:在加入氢氧化钠过程中, 不适宜用高温促溶，溶液温度不要超过48℃)，接着加入500mL含130g酒石酸钾钠的溶液，混匀。

再加入5g苯酚和5g无水亚硫酸钠，搅拌溶解后，定容至1000ml。

储存在棕色瓶中，避光暗处保存备用。

（室温下存放7天后可以使用,有效期为6个月）二、绘制标准曲线将1mg/mL葡萄糖标准液制成浓度为0.5g/L的葡萄糖标准液，分别取标准溶液0.2、0.4、0.6、0.8、1.0mL，补水至1mL，加入DNS 1.5 mL，沸水浴显色5分钟，冷却后补水至10 mL，550nm处测定吸光值，浓度—吸光值作标准曲线，用1.0mL蒸馏水做空白对照。

三、还原糖测定取稀释到适当浓度的发酵液1.0mL，加入DNS 1.5 mL，沸水浴显色5分钟，冷却后补水至10 mL，550nm 处测定吸光值。

用蒸馏水代替稀释后的发酵液做空白对照。

根据标准曲线计算出还原糖浓度。

四、总糖测定取稀释到适当浓度的发酵液1.0mL，加入6mol/L HCL溶液0.75mL，沸水浴20分钟，冷却至室温，加入6 mol/L NaOH溶液1.0mL，DNS 1.5 mL，沸水浴显色5分钟，冷却后补水至10 mL，550nm处测定吸光值。

用蒸馏水代替稀释后的发酵液做空白对照。

根据标准曲线计算出总糖浓度。

五、原理DNS即二硝基水杨酸法是利用碱性条件下，二硝基水杨酸（DNS）与还原糖发生氧化还原反应，将3，5－二硝基水杨酸中的硝基还原为氨基，生成3-氨基-5-硝基水杨酸，该产物在煮沸条件下在过量的氢氧化钠碱性溶液中呈桔红色，在540nm波长处有最大吸收，且在一定浓度范围内颜色深浅与还原糖含量成比例关系的原理，用比色法测定还原糖含量的。

DNS法测还原糖方法一原理DNS即二硝基水杨酸法是利用碱性条件下，二硝基水杨酸（DNS）与还原糖发生氧化还原反应，生成3-氨基-5-硝基水杨酸，该产物在煮沸条件下显棕红色，540nm处有吸收，且在一定浓度范围内颜色深浅与还原糖含量成比例关系的原理，用比色法测定还原糖含量的。

二试剂及方法2.1 试剂1. 1 mg/ml的葡萄糖溶液2. 3,5－二硝基水杨酸用400mL 蒸馏水溶解6.3g3，5—二硝基水杨酸，逐步加入21g 氢氧化钠，再加入182g 四水合酒石酸钾钠、5.0g 苯酚、5.0g 无水亚硫酸钠，温水浴(不超过48℃)，不断搅拌，直至溶液清澈透明。

用蒸馏水定容至1000mL，保存在棕色瓶中，与二氧化碳隔绝，静置5～7 天后使用，贮存期为6 个月。

2.2 葡萄糖标曲的绘制表1 葡萄糖标曲的绘制方法试剂试管0 1 2 3 4 5葡萄糖标准液(ml) 0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 蒸馏水(ml) 0.5 0.4 0.3 0.2 0.1 03,5-二硝基水杨酸(ml) 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 糖含量（mg）0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5混合均匀，沸水浴5min，冷却后加入4mL蒸馏水，混匀，在540nm下测OD值2.3 发酵液样品测定将发酵液稀释一定倍数后，取3只比色管标号1,2,3，加入稀释和的发酵液0.5 ml，加入DNS试剂0.5 ml 混匀，沸水浴5min，冷却后加入4 ml蒸馏水混匀，测OD540表 2 样品的测定方法管号0 1 2 还原糖待测样品 （mL ） 0.0 0.5 0.5 蒸馏水 （mL ） 0.5 0.0 0.0 DNS 试剂 （ mL ） 0.5 0.5 0.5 蒸馏水 （mL ） 4 4 4 A 540 nm计算所得还原糖含量 （mg ）三 结果计算 3.1 标曲3.2样品的还原糖含量稀释倍数）加人样品的体积（）计算得到的还原糖量（）还原糖含量（⨯=ml 5.0mg /g L。