和牛超数排卵影响因素的研究

和牛超数排卵影响因素的研究

郝海生;陈余;郭江鹏;耿少旺;杜卫华;赵学明;宋金辉;朱化彬

【摘 要】为探讨和牛超数排卵的影响因素,试验采用4d8次注射Folltropin-V的超数排卵方法,在不同季节对不同父系和牛供体牛群超数排卵1～10次.结果表明:①春季、夏季、秋季和冬季超数排卵和牛分别获得7.1、7.8、8.3、7.7枚头均胚胎数和5.2、4.7、5.2和5.2枚头均可用胚胎数,差异均不显著(P＞0.05);夏季和秋季超数排卵和牛分别获得3.2和3.1枚头均不可用胚胎数,显著高于春季获得的1.9枚头均不可用胚胎数(P＜0.05);②和牛供体重复超数排卵1～10次,头均胚胎数、头均可用胚胎数和头均不可用胚胎数分别为7.5～9.3、4.6～6.1和2.7～3.4枚,差异均不显著(P＞0.05);③父系为WES-FA0107的供体牛群超数排卵获得11.1枚头均胚胎数,显著高于父系为GOSFZ0302、BYWFA0015、BYWFY0342、BYW-FY0350和TFWFW0 62 90供体牛群超数排卵获得的头均胚胎数(P＜0.05),6.2枚头均可用胚胎数显著高于父系为BYW-FY0350的供体牛群超数排卵获得的3.6枚头均可用胚胎数(P＜0.05),3.3枚头均退化胚胎数显著高于父系为BYW-FA0015、BYWFY0350和TFWFW06290的供体牛群超数排卵获得的1.8、1.1和1.7枚头均退化胚胎数(P＜0.05),1.6枚头均未受精卵数显著高于其他6个父系供体牛群超数排卵获得的头均未受精卵数(P＜0.05);父系为BYWFY0350的供体牛群超数排卵获得的5.3枚头均胚胎数和3.6枚头均可用胚胎数在7个不同父系供体牛群胚胎生产中均为最少.因此,避开夏季高温季节,增加超数排卵次数同时选择超数排卵反应好的同一父系供体能够提高和牛超数排卵效率.

【期刊名称】《中国畜牧兽医》

【年(卷),期】2014(041)012 【总页数】5页(P204-208)

【关键词】和牛;超数排卵;季节;胚胎

【作 者】郝海生;陈余;郭江鹏;耿少旺;杜卫华;赵学明;宋金辉;朱化彬

【作者单位】中国农业科学院北京畜牧兽医研究所,北京100193;北京市畜牧总站,北京100107;北京市畜牧总站,北京100107;和牛生物科技(北京)有限公司,北京

100101;中国农业科学院北京畜牧兽医研究所,北京100193;中国农业科学院北京畜牧兽医研究所,北京100193;中国农业科学院北京畜牧兽医研究所,北京100193;中国农业科学院北京畜牧兽医研究所,北京100193

【正文语种】中 文

【中图分类】S823

和牛（Japanese Black cattle）是由日本本地黄牛与其他肉牛品种（如海福特牛、安格斯牛等）杂交培育的生产高档肉牛的著名肉牛品种之一，其肉质以大理石花纹明显、肉中富含不饱和脂肪酸而闻名。为满足中国高档牛肉市场需求，近年来国内一些企业先后从澳大利亚引进了纯种和牛胚胎和活牛（刘文生等，2007；张效生等，2013），但是引进头数有限，不能满足高档肉牛生产的需要。超数排卵和胚胎移植技 术 （multiple ovulation and embryo transfer，MOET）是快速扩繁优秀家畜后代的有效技术手段，在肉牛快速繁育中起着重要作用（朱化彬等，2014）。因此，利用MOET技术快速扩繁国内引进的纯种和牛，可快速增加中国的纯种和牛数量，增加肉牛养殖企业的生产效益。国内外对牛超数排卵的影响因素研究很多，如激素种类、剂量、供体品种、供体年龄等（王军等，2011；王丙萍等，2014；Massey等，1984），但关于和牛超数排卵的研究较少（刘善斋等，2012；Sugano等，2001）。鉴于此，本试验在和牛超数排卵过程中，研究季节、重复超数排卵次数和父系对其超数排卵效果的影响，为获得稳定高效的和牛超数排卵技术奠定基础。

1 材料与方法

1.1 供体选择与试验地点 供体母牛为230头生殖器官和发情周期正常的14～18月龄纯种和牛。试验地点为和牛生物科技（北京）有限公司聊城市茌平县和牛繁育基地。

1.2 药品及器材 促卵泡素（FSH，Folltropin-V，400mg NIH/瓶）、孕酮阴道栓（CUE-MATE，1.56g孕酮/支）、保存液、冲胚液均购自Bioniche公司；前列腺素（PG，0.322mg/2mL）购自齐鲁动物保健品公司。采卵管（规格：15＃）购自Minitube公司；集卵杯购自FHK公司。

1.3 方法

1.3.1 不同季节对和牛超数排卵效果的影响 根据李又君等（2011）对聊城地区1～12月温度统计，选择在春季（3～5月）、夏季（6～8月）、秋季（9～11月）和冬季（12月～次年2月）对230头和牛超数排卵，比较不同季节对和牛超数排卵效果的影响。

1.3.2 重复超数排卵次数对和牛超数排卵效果的影响 选择已经超数排卵的230头和牛重复超数排卵1～10次，比较重复超数排卵次数对和牛超数排卵效果的影响。

1.3.3 不同父系对和牛超数排卵效果的影响 分别选择10、27、7、5、6、6和5头来源于7个不同父系（分别为 GOSFZ0302、ECHFA3001、BYWFA0015、BYWFY0342、BYWFY0350、TFWFW06290 和WESFA0107）的和牛供体牛群超数排卵，比较不同父系对和牛超数排卵效果的影响。

1.4 超数排卵处理 供体和牛超数排卵处理与胚胎采集于2011年10月至2013年12月进行。超数排卵采用CUE-MATE+Folltropin-V+PG方法进行。Folltropin-V采用4d8次剂量递减注射方法，每头供体牛每次超数排卵注射Folltropin-V总剂量为120.0mg。超数排卵具体方法：在发情周期任一天上午供体牛放置阴道栓，当日为第0天；第5～8天，分别在上午08∶00和下午20∶00每天2次递减注射Folltropin-V（24.0mg×2次，18.0mg×2次，12.0mg×2次，6.0mg×2次），第7天上、下午注射Folltropin-V的同时肌肉注射PG 4.0mL，第8天上午注射Folltropin-V的同时撤拴；第9天观察发情，在发情后12h进行第1次配种，间隔12h后进行第2次配种；第16天采用非手术法对供体牛进行冲胚。

1.5 胚胎采集与质量鉴定 采用非手术方法采集胚胎。供体牛使用保定架保定，麻醉方法采用尾椎硬膜外腔注射5～7mL利多卡因。高锰酸钾水清洗外阴后消毒纸巾擦净，之后75%酒精消毒并用生理盐水冲洗，待尾部松弛后进行冲胚。选择15＃采卵管冲胚，每侧子宫角使用150～200mL冲卵液回收胚胎，胚胎收集后子宫内注射20mL百福他土霉素针剂，肌肉注射前列腺素2支。冲胚结束后，使用体视显微镜进行检胚。根据形态学标准，回收胚胎分为A、B级胚胎 （可用胚胎）、退化胚胎和未受精卵（不可用胚胎）。A、B级胚胎具体鉴定标准如下：A级：胚胎形态完整、轮廓清晰呈球形、结构紧凑，分裂球大小均匀、色调和透明度适中，无附着的细胞和液泡；B级：轮廓清晰、色调和细胞密度良好，可见到少量附着的细胞和液泡。

1.6 统计分析 试验数据采用SAS 8.1软件进行差异显著性分析，结果用平均值±标准差表示，以P＜0.05作为差异显著性判断标准。

2 结果与分析

2.1 和牛超数排卵胚胎生产结果 由表1可知，2011—2013年供体和牛超数排卵868头次，头均胚胎数8.5枚，头均可用胚胎数5.4枚，头均不可用胚胎数3.1枚。2011年和牛超数排卵获得的10.0枚头均胚胎数显著高于2012年获得的7.7枚头均胚胎数（P＜0.05），而与2013年获得的8.6枚头均胚胎数差异不显著（P＞0.05）；2011年和牛超数排卵获得的8.4枚头均可用胚胎数显著高于2012和2013年均获得的5.3枚头均可用胚胎数（P＜0.05）。

表1 2011－2013年和牛超数排卵胚胎生产结果注：同列数据肩标不同字母表示差异显著（P＜0.05）；肩标相同字母表示差异不显著（P＞0.05）。下同。年度（年） 头次（头） 头均胚胎数（枚） 头均可用胚胎数（枚） 头均不可用胚胎数（枚）45b 21ab 2011 26 10.0±0.89a 8.4±0.86a 1.5±0.2012 179 7.7±0.39b

5.3±0.31b 2.4±0.2013 663 8.6±0.21ab 5.3±0.14b 3.3±0.11a合计868 8.5 5.4

3.1

2.2 不同季节对和牛超数排卵效果的影响 由表2可知，春季、夏季、秋季和冬季超数排卵和牛分别获得7.1、7.8、8.3和7.7枚头均胚胎数及5.2、4.7、5.2和5.2枚头均可用胚胎数，差异均不显著（P＞0.05）。夏季超数排卵获得的3.2枚头均不可用胚胎数显著高于春季超数排卵获得的1.9枚头均不可用胚胎数（P＜0.05），与秋季和冬季超数排卵获得的3.1和2.4枚头均不可用胚胎数差异不显著（P＞0.05）。

2.3 重复超数排卵次数对和牛超数排卵效果的影响 由表3可知，供体和牛重复超数排卵1～10次，获得的头均胚胎数为7.5～9.3枚，头均可用胚胎数为4.6～6.1枚，头均不可用胚胎数为2.7～3.4枚，差异均不显著（P＞0.05）。

2.4 不同父系对和牛超数排卵效果的影响 由表4可知，父系为 WESFA0107的供体牛群超数排卵获得的11.1枚头均胚胎数与父系为ECHFA3001的供体牛群超数排卵获得的9.5枚头均胚胎数差异不显著（P＞0.05），但显著高于其他5个父系（GOSFZ0302、BYWFA0015、BYWFY0342、BYWFY0350和TFWFW06290）供体牛群超数排卵获得的头均胚胎数（P＜0.05）；父系为 WESFA0107的供体牛群超数排卵获得的6.2枚头均可用胚胎数显著高于父系为BYWFY0350的供体牛群超数排卵获得的3.6枚头均可用胚胎数（P＜0.05），与其他5个父系（GOSFZ0302、ECHFA3001、BYWFA0015、BYWFY0342和TFWFW06290）供体牛群超数排卵获得的头均可用胚胎数差异不显著（P＞0.05）；父系为WESFA0107的供体牛群超数排卵获得的3.3枚头均退化胚胎数显著高于父系为BYWFA0015、BYWFY0350和TFWFW06290的供体牛群超数排卵获得的1.8、1.1和1.7枚头均退化胚胎数（P＜0.05），与其他3个父系（GOSFZ0302、ECHFA3001和BYWFY0342）供体牛群超数排卵获得的头均退化胚胎数差异不显著（P＞0.05）；父系为 WESFA0107的供体牛群超数排卵获得的1.6枚头均未受精胚胎数显著高于其他6个父系（GOSFZ0302、ECHFA3001、BYWFA0015、BYWFY0342、BYWFY0350和TFWFW06290）供体牛群超数排卵获得的头均未受精卵数（P＜0.05）；在7个不同父系供体牛群胚胎生产中，父系为BYWFY0350的供体牛群超数排卵获得的5.3枚头均胚胎数和3.6枚头均可用胚胎数均为最少。