2010版沙门氏菌检验资料
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食品微生物学检验 沙门氏菌检验GB GB 4789.44789.44789.4-20-20-201010北京陆桥技术有限责任北京陆桥技术有限责任公司公司技术服务电话:010-******** 销售服务电话:010-********技术部邮箱:luqiaotech@www. beijinglandbridge .com北京陆桥技术有限责任公司目 录�沙门氏菌简介�2010版国标主要修订内容�沙门氏菌的检验步骤及注意事项�沙门氏菌检验过程中的常见问题www. beijinglandbridge .com 北京陆桥技术有限责任公司沙门氏菌简介�沙门氏菌属沙门氏菌属:肠杆菌科:肠杆菌科�沙门氏菌能引起胃肠炎、伤寒、败血症等人类疾病,严重时能导致死亡。
�种类繁多,抗原结构复杂,种类繁多,抗原结构复杂,在在《ANTIGENIC FORMULAE OF THE SALMONELLA SEROVARS FORMULAE OF THE SALMONELLA SEROVARS》》(2007 9th edition)(2007 9th edition)中已公布了中已公布了2579个血清型个血清型。
�食物是人类感染沙门氏菌的主要途径。
www. beijinglandbridge .com 北京陆桥技术有限责任公司�形态特征:形态特征:革兰氏阴性革兰氏阴性革兰氏阴性、、两端钝圆短杆菌两端钝圆短杆菌,,无芽孢无芽孢,,一般无荚膜,除鸡沙门氏菌一般无荚膜,除鸡沙门氏菌和和雏沙门氏菌外,都有周身鞭毛,运动力强�培养特性:需氧或兼性厌氧,10℃~42℃都可生长,最适生长温度为37℃,最适pH 为6.8~7.8�革兰氏阴性、需氧或兼性厌氧无芽孢杆菌沙门氏菌简介:生物学特征www. beijinglandbridge .com 北京陆桥技术有限责任公司�修改了标准的中英文名称�修改了标准的范围�修改了培养基和试剂;�修改了设备和材料;�修改了附录修改了附录A A (规范性附录)培养基和试剂2010版国标主要修订内容www. beijinglandbridge .com 北京陆桥技术有限责任公司——关于培养基和试剂的修订说明�修改了修改了HE HE HE琼脂和三糖铁琼脂的配方。
实验六食品中沙门氏菌的检验一、概述:1.沙门氏菌的形态特征:革兰氏阴性,两端钝圆的短杆菌,无芽孢,一般无荚膜,周身鞭毛,运动力强,具菌毛。
2.沙门氏菌需氧或兼性,10-42℃都可生长,最适生长温度为37℃,最适pH 为6.8-7.8。
3.沙门氏菌食物中毒的食品主要为动物性食品,特别是畜肉类及其制品,污染肉类食物的几率很高。
冷冻对沙门氏菌无杀灭作用,即使在-25℃低温仍可存活10个月左右。
意义:沙门氏菌是引起食物中毒的重要病原菌。
在世界各国各类细菌性的食物中毒中,沙门氏菌常居前列。
因此,沙门氏菌的检测是各国检验机构对多种进出口食品的必检项目之一。
二、操作步骤:1.前增菌——第一步使食物样品在含有营养的非选择性培养基中增菌,使受损伤的沙门氏菌细胞恢复到稳定的生理状态。
2.选择性增菌——在含选择性抑制剂的促生长培养基中间,样品进一步增菌的一个步骤。
此培养基允许沙门氏菌持续增殖,同时阻止大多数其他细菌的增殖。
3.选择性平板分离——这一步采用固体选择性培养基,抑制非沙门氏菌的生长,提供肉眼可见的疑似沙门氏菌纯菌落的识别。
4.生化鉴定——排除大多数非沙门氏菌,提供了沙门氏菌培养物菌属的生理生化鉴定结果。
5.血清学技术——对沙门氏菌属培养物进行血清学分型鉴定,确定菌型。
主要沙门氏菌有2000多个血清型,可先用多价血清鉴定,再用单因子血清鉴定,先有常见菌型的血清鉴定,再用不常见菌型的血清鉴定。
三、实验过程:1.前增菌将样品鸡蛋壳用灭菌棉签查拭蛋壳后,将棉签上部剪掉,下部放入前增菌培养基BPW中,5个棉签放入150mL前增液中,将制备好的预增菌液于37℃培养8-18h。
(样品液变浑浊即可)2.选择性增菌轻轻摇动培养过的样品混合物,移取4mL前增菌液转种于40mL TTB选择性增菌液内,于42 ℃±1 ℃培养18h-24h。
如果菌株生长过慢(TTB 培养基需现配现用,每组制备40ml增菌液,需加入816uL的碘液后再加入前增液)。
________疾病预防控制中心沙门氏菌检验原始记录共 页 第 页检验者: 审核者: 年 月 日样品编号样品名称检验依据 GB 4789.4-2010检验环境温度 ℃ 湿度 %RH检验日期仪器设备名称、规格型号、精度、编号电子天平: YP-1002 0.01g 105 有计量合格标识,并在检定有效期内. 恒温培养箱: DH6000 0.1℃ 88 有计量合格标识,并在检定有效期内.样品复苏 __月__日_____ 无菌操作,将待检样品磁珠置于10mL 无菌营养肉汤中37℃温育24h 复苏。
前增菌 __月__日_____按无菌操作取待检肉汤1mL ,加入到10 mL BPW 增菌液中,充分混匀,于36±1℃培养4h 。
增菌__月__日_____取1mLBPW 增菌液,转种于10mLSC 增菌液中,于36±1℃培养18~24h 。
检验项目现象结果 分离 培养BS 琼脂平板要求 36±1℃,40h-48h培养 ___日____时至__日____时。
HE 琼脂 平板 要求 36±1℃,18h-24h 培养 ___日____时至__日____时。
____显色平板 要求 36±1℃,18h-24h培养___日____ 时至__日___时。
生化 试验三糖铁琼脂要求 36±1℃,18h-24h 培养 ___日____时至__日____时。
普通琼脂平板 要求 36±1℃,18h-24h 培养 ___日____时至___日____时。
赖氨酸脱羧酶试验 API20E 生化试剂盒 要求 36±1℃,18h-24h 编码 结果 培养___日___时至___日___时。
血清学鉴定实验结果 样品中 沙门氏菌备注。
微生物检验之沙门氏菌的检验人沙门氏菌病有四类综合症:沙门氏菌病;伤寒;非伤寒型沙门氏菌败血症和无症状带菌者。
沙门氏菌胃肠炎是由除伤寒沙门氏菌外任何一型沙门氏菌而所致,通常表现为轻度,持久性腹泻。
伤寒实际上是由伤寒沙门氏菌所致。
未接受过治疗的病人致死率可超过10%,而对经过适当医疗的病人其致死率低于1%,幸存者可变成慢性无症状沙门氏菌携带者。
这些无症状携带者不显示发病症状仍能将微生物传染给其他人(传统的例子就是玛丽伤寒)。
非伤寒型沙门氏菌败血症可由各型沙门氏菌感染所致,能影响所有器官,有时还引起死亡。
幸存者可变成慢性无症状沙门氏菌携带者。
一、致病性沙门氏菌胃肠炎,潜伏期一般6-72小时,主要症状为恶心、呕吐、腹绞痛、腹泻、发热寒颤头痛。
病程一般1-2天或更长。
感染剂量为15-20个菌,死亡率达1-4%。
最易感群体是年幼儿童、虚弱者、年长老人、免疫缺陷者等。
污染源主要是人和家畜的粪便,沙门氏菌常存在于动物中,特别是禽类和猪。
在许多环境中也有存在。
从水,土壤,昆虫中,从工厂和厨房设施的表面和动物粪便中已发现该类细菌。
它们可以存在于多类食品中,包括生肉,禽,奶制品和蛋,鱼,虾和田鸡腿,酵母,椰子,酱油和沙拉调料,蛋糕粉,奶油夹心甜点,顶端配料,干明胶,花生露,橙汁,可可和巧克力。
沙门氏菌属也是嗜温性细菌,在中等温度,中性pH,低盐和高水活度条件下生长最佳。
生长最低水活度为0.94。
兼性厌氧,对中等加热敏感。
同样,该菌属能适应酸性环境。
通过卫生以防止二次污染;蒸煮;巴氏消毒等控制。
正常家庭烹调,个人卫生可以防止煮熟食品的二次污染,以及控制时间和温度一般都能充分防止沙门氏菌病的发生。
二、检验因沙门氏菌是最常见的食源性细菌病原体,因此在本节中重点介绍沙门氏菌的检验。
沙门氏菌是食物传播病原菌中研究最活跃的细菌。
从食品中分离和鉴定沙门氏菌,当前通用的方法学分5个步骤:1.前增菌-第一步使食物样品在含有营养的非选择性培养基中增菌,使受损伤的沙门氏菌细胞恢复到稳定的生理状态。
沙门氏菌的检验1. 目的规范沙门氏菌检测方法,使产品检验有据可依。
2. 消毒灭菌要求微生物检测用的玻璃仪器、金属用具及培养基、被污染与接种的培养物等必须经灭菌后方能使用。
注:本实验采用湿热灭菌法,吸管、培养皿、培养基等盖好塞子并包好瓶口在高压灭菌锅中按要求的温度与压力灭菌,一般就是121C (1、5MPa下灭菌20min。
3. 原理沙门氏菌的检验分四个连续阶段:4. 操作步骤4、1准备工作配制实验所需的缓冲蛋白胨水、亚硒酸盐胱氨酸培养基(无需灭菌)、HE培养基、三糖铁培养基等,并将准备好的均质杯、吸管、培养皿、大试管等一起灭菌。
4、2前增菌在无菌环境下,称取25g待检样品放入盛有225ml灭菌好的缓冲蛋白胨水中, 然后放到36±「C的恒温培养箱内进行前增菌4-6h;4、3增菌在无菌环境下,用灭菌好的吸管吸取10ml 前增菌液接种与100ml 亚硒酸盐胱 氨酸培养基中进行二次增菌,恒温培养箱36± 1C ,培养18-24h; 4、4分离培养将增菌培养液摇匀,以无菌操作,用直径3mm 的接种环挑取一环,划线于表面 无凝结水的BS 与SS 琼脂平板各一个,于36± 1C 培养18-24h 。
观察各个平板上 有无典型或可疑沙门氏菌属的菌落。
如无典型或可疑菌落 ,应再继续培养24 ± 2h 。
然后观察培养的平板(黄色的菌落就是大肠杆菌;蓝绿色或蓝色,产硫化氢, 菌落中心黑色或几乎全黑色为可疑沙门氏菌)。
沙门氏菌属各亚属在其她选择性琼脂平板的菌落特征4、5生化实验用灭菌好的接种针在培养平板上挑取可疑的沙门氏菌单菌落,接种到三糖铁 培养基上,恒温培养箱36 ± 1C ,培养18-24h;典型沙门氏菌培养物斜面显红色(碱性),底端显黄色(酸性),有气体产生,形成硫化氢(琼脂变黑) 三糖铁培养基变化表肠杆菌科各属在三糖铁琼脂内的反应结果斜面底层产气硫化氢可能的菌属和种/沙门氏葡属.弗劳地氏柠檬酸杆菌、变形+ + +杆嚙属、缓慢爱徳华氏苗沙门氏菌皿、弗劳地氐拧樣酸杆菌、普通+ + +变形杆菌_ 沙门氏菌属、大肠埃希氏菌*蜂窝哈夫尼+ +■亚曲、摩根氏曲、普罗菲登斯菌属伤寒沙门氏菌、鸡沙门氏莆、志贺氏葡属S + - - 大肠埃希氏曲、蜂窝哈夫尼亚菌•摩很氏菌"普罗菲登斯菌属大肠埃希氏菌、肠杆菌属、克雷伯氏菌+ +■属.沙雷氏菌属•弟劳地氏拧檬酸杆菌注:+表示阳性;-表示阴件;+/ -表示多数阳性.少数阴性。
资料范本本资料为word版本,可以直接编辑和打印,感谢您的下载沙门氏菌的检验地点:__________________时间:__________________说明:本资料适用于约定双方经过谈判,协商而共同承认,共同遵守的责任与义务,仅供参考,文档可直接下载或修改,不需要的部分可直接删除,使用时请详细阅读内容沙门氏菌的检验食品学院 14食品质量与安全1班刘文敏柳基炜卫杰恒温紫君201430520115 201430520116 201430520121 201430520122摘要:本实验采用GB/T4789.4-2010的检测方法测定鸡场中的沙门氏菌。
通过本实验学习沙门氏菌的检测方法和技术,了解沙门氏菌的一些生化特性;本实验先用显色培养基找出可疑菌落,再做生化试验找出可疑的典型性的沙门氏菌,再通过血清学试验最终确定是否为沙门氏菌属。
关键词:沙门氏菌接种生化试验血清学鉴定前言沙门氏菌病是公共卫生学中具有重要意义的人畜共患病种之一,其病原沙门氏菌属于肠道细菌科。
沙门氏菌是一个统称,泛指 2000 多种有紧密连系的细菌,包括引起食物中毒,导致胃肠炎、伤寒和副伤寒的细菌。
虽然只有少数人因沙门氏菌而患病,但是,在世界范围内的细菌性食物中毒事件中,由沙门氏菌引起的占大多数。
因此,采用科学、合理的方法检验食品中沙门氏菌,已经成为了人们最关心的问题之一[1]。
国标法(GB4789.4-2010)是目前中国规定的食品中沙门氏菌的标准检测方法,也是基层实验室普遍采用的检测方法,它根据沙门氏菌的生长特点和生化特性,采取前增菌、增菌、分离、生化试验和血清学鉴定5个步骤进行[2]。
材料与方法1.1实验材料1.1.1仪器设备均质器、三角烧瓶、平皿、玻璃棒、接种棒恒温培养箱:36℃±1℃,42℃±1℃吸管:1 mL(具 0.01 mL刻度)、10mL(具0.1mL刻度或微量移液器及吸头电子天平PL602-S,梅特勒-托利多仪器(上海)有限公司;手提式不锈钢压力蒸汽灭菌锅SYQ-DSX-280B,上海申安医疗器械厂1.1.2试剂药品鸡肠、靛基质试剂、沙门氏菌O和H诊断血清、API20E生化试剂盒或VITEKGNI生化鉴定卡1.1.3培养基蛋白胨水(BPW)、四硫磺酸钠煌绿(TTB)、亚硒酸盐胱氨酸(SC)增菌液、亚硫酸铋(BS)琼脂、HE琼脂、三糖铁琼脂、蛋白胨水、尿素琼脂、氰化钾、氰化钾对照、赖氨酸脱羧酶、赖氨酸脱羧酶对照、甘露醇、山梨醇、β-D 半乳糖苷(ONPG)培养基1.2 实验方法1.2.1培养基的制备1.2.1.1培养基的配制步骤蛋白胨水(BPW):称取蛋白胨10g、氯化钠5g、磷酸氢二钠9g、磷酸二氢钠1.5g、蒸馏水1000ml,将各成分加入蒸馏水中,搅混均匀,静置约 10 min,煮沸溶解,调节 pH,高压灭菌121 ℃,15 min。