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猪抗原抗体检测方案PPT课件

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猪场抗原抗体检测报告分析学习

猪场抗原抗体检测报告分析学习


4、检测用试剂盒一般都采用进口IDEXX试剂盒，国产试剂盒目前检测
结果不够准确，但检测价位较低 5、同一份样品，不同的设备、不同的实验室、不同的人员检测，可能
结果有所差异；同一份样品，同一个实验室，同样的人员和设备，检
测出来的结果可能也有稍许的差别。但对检测结果要进行正面分析
猪场检测抗原抗体的报告分析
猪场检测抗原抗体的报告分析
例3：练习—伪狂犬
样品序号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 17 18 19 20 21 22 26 27 31 32 33 34 36 37 38 39 40 41 42 注射器原始编号 4 6 10 3 7 5 18 16 12 34 1 20 27 30 9 15 17 37 44 43 40 41 46 47 49 50 51 52 53 54 55 样品OD值 0.695 0.218 0.477 0.623 0.303 0.296 0.302 0.213 0.205 0.375 0.273 0.266 0.364 0.278 0.541 0.733 0.88 0.766 0.442 0.489 0.61 0.838 0.723 0.888 1.205 0.833 1.701 1.414 1.409 1.624 1.6 S/N值 0.432 0.135 0.296 0.387 0.188 0.184 0.188 0.132 0.127 0.233 0.170 0.165 0.226 0.173 0.336 0.455 0.546 0.476 0.274 0.304 0.379 0.520 0.449 0.551 0.748 0.517 1.056 0.878 0.875 1.008 0.993 结果判断 +++ +++ +++ +++ +++ +++ +++ +++ +++ +++ +++ +++ +++ +++ +++ +++ +++ +++ +++ +++ +++ +++ +++ +++ --+++ ----------备注 怀孕30天，12月3日蓝耳疫苗 怀孕30天，12月3日蓝耳疫苗 怀孕30天，12月3日蓝耳疫苗 怀孕60天，12月3日蓝耳疫苗 怀孕60天，12月3日蓝耳疫苗 怀孕60天，12月3日蓝耳疫苗 怀孕90天，12月3日蓝耳疫苗 怀孕90天，12月3日蓝耳疫苗 怀孕90天，12月3日蓝耳疫苗 分娩7天母猪，12月1日蓝耳疫苗 仔猪，12月1日蓝耳疫苗 仔猪，12月1日蓝耳疫苗 仔猪，12月1日蓝耳疫苗 仔猪，12月1日蓝耳疫苗 仔猪，12月1日蓝耳疫苗 断奶后10天肥猪，12月19日口蹄疫 断奶后10天肥猪，12月19日口蹄疫 断奶后10天肥猪，12月19日口蹄疫 断奶后30天肥猪，12月19日口蹄疫 断奶后30天肥猪，12月19日口蹄疫 断奶后30天肥猪，12月19日口蹄疫 断奶后30天肥猪，12月19日口蹄疫 断奶后30天肥猪，12月19日口蹄疫 断奶后90天肥猪，12月3日蓝耳疫苗 断奶后90天肥猪，12月3日蓝耳疫苗 断奶后90天肥猪，12月3日蓝耳疫苗 断奶后90天肥猪，12月3日蓝耳疫苗 60kg肥猪，12月1日蓝耳疫苗 60kg肥猪，12月1日蓝耳疫苗 60kg肥猪，12月1日蓝耳疫苗 60kg肥猪，12月1日蓝耳疫苗
[医学]猪抗原抗体检测方案

[医学]猪抗原抗体检测方案

毒株
（3）猪群稳定性评估
蓝耳病的检测方法
（1）抗原：RT-PCR （2）抗体：ELISA
蓝耳病的抗体检测结果分析
（1）对于稳定的种猪群，S/P值为0-2左右， 很少大于2.5.
（2）良好免疫群的典型的S/P比值范围为：0.7 to 1.8 ；有些可能>2.0 。
（3）如果每年免疫两次，仍有多于20％的猪 抗体为阴性，需要对疫苗的管理和使用进行检 查。
（2）在阳性率很高的种猪群，保证引入阴 性后备母猪和种公猪，加强免疫。每季度 抽样监控野毒阳性比例防止感染扩大并用 PRV-gB评估免疫抗体水平，三年可见效。
（2）PRVgE（I）：野毒抗体
（3）通过PRV-gB和PRV-gI抗体检测可了解 本场伪狂犬病的流行状况，制定相应的免 疫方案及措施。
伪狂犬清除计划
（1）在阳性率低的种猪群，建议一次性淘 汰所有阳性种猪。每个季度筛选一次，加 强疫苗免疫，同时保证引入阴性后备母猪 和种公猪，一般一年见效。
（3）结果分析：猪瘟抗原ELISA阳性结果 代表野毒阳性，PCR和荧光抗体阳性结果有 可能是疫苗毒的干扰。
猪瘟抗体ELISA检测要点:
A.怎样评估母源抗体和免疫效果 1）当母源抗体的降到阻断率（Block）50% 以下时，才能不干扰疫苗的免疫。（确定首 免日龄） 2）免疫后阻断率（Block）上升到50%以上 才能代表免疫合格。 良好的种猪场要求：阳性率100%（>40）， 合格率90%（>50） cv<25%） CSFV判定标准:若%PC值大于或等于0.4则判 定阳性；若PC%值小于0.4则判定阴性
防止引入不稳定猪只 全部
经产母猪 2个月一次个月一次 了解猪群稳定性
抗猪γ-干扰素单克隆抗体的制备及定量抗原捕获ELISA检测方法的初步建立(共29张PPT)

抗猪γ-干扰素单克隆抗体的制备及定量抗原捕获ELISA检测方法的初步建立(共29张PPT)

0目5前9，只因对而商可品判化定人为IF无N-交γ 叉样反品响进。行了特异性试验。
0阴5性9，对因照而为可相判同定浓为度无的交非叉标反记响卵。黄抗体；
不与哺乳动物血清中的类风湿因子反响，与哺乳动物 抗高原灵特 敏异度性：由IgY于的每纯个化亲和素分子可结合4个生物素分子，其结合常数高达1015mol/L，远远大于抗原抗体的结合常数〔105-11mol/L〕，
0
3.9
7.8 15.6 31.3 62.5 125 250 500 1000 2000 4000
rpIFN-g浓度（ng/mL）
被检抗原浓度在7.8-1000ng/mL范围内能形成一条 近似线性曲线。
x
灵敏度确实定
用稀释液作为空白对照，共设24个重复。那么检 测灵敏度为〔OD450平均值+2SD〕在标准曲线上 所对应的rpIFN- 浓度 。
疏水性比IgG强，因而更容易包被于ELISA板和乳胶微球 A不抗加：与原上P细 特 系 M菌异统A刺或性的激哺高IgYP乳灵的B动敏M纯物性C化；，Fc因受而体使结试合剂，经因得而起不高能倍激稀活释补，体从系而统大大减少了通常免疫反响中出现的非特异性作用。 外表 单本抗实的 验间是接在免哈疫尔荧滨光兽〔医研IFA究〕所分兽析医生物技术国家重点实验室生物二室完成的。
报告内容
❖ 研究背景 ❖ 研究思路与策略 ❖ 试验方法及结果 ❖ 讨论 ❖ 小结与展望 ❖ 研究成果
研究背景
-干扰素概述
-干扰素〔IFN-〕是机体内具有抗病毒、抗肿瘤和 免疫调节功能的重要细胞因子。它主要由激活的T细
胞、激活的NK细胞和巨噬细胞产生。
猪IFN-全基因编码166个氨基酸残基，包括20aa的 信号肽(Dijkmans,1990)。
猪场抗原抗体检测报告分析学习ppt课件

猪场抗原抗体检测报告分析学习ppt课件

猪场抗原抗体检 测法。 1、猪群是否存在某种疾病 2、疾病诊断的一种有效工具 3、疾病感染或免疫程度的掌握 4、免疫程序的最合理制定
猪场检测抗原抗体意义
什么叫抗原？ 指能够刺激机体产生（特异性）免疫应答，并能与免疫 应答产物抗体和致敏淋巴细胞在体内外结合，发生免疫 效应（特异性反应）的物质 完全抗原 半抗原
4、检测用试剂盒一般都采用进口IDEXX试剂盒，国产试剂盒目前检测
结果不够准确，但检测价位较低 5、同一份样品，不同的设备、不同的实验室、不同的人员检测，可能
结果有所差异；同一份样品，同一个实验室，同样的人员和设备，检
测出来的结果可能也有稍许的差别。但对检测结果要进行正面分析
猪场检测抗原抗体的报告分析
猪场检测抗原抗体的报告分析
例3：练习—伪狂犬
样品序号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 17 18 19 20 21 22 26 27 31 32 33 34 36 37 38 39 40 41 42 注射器原始编号 4 6 10 3 7 5 18 16 12 34 1 20 27 30 9 15 17 37 44 43 40 41 46 47 49 50 51 52 53 54 55 样品OD值 0.695 0.218 0.477 0.623 0.303 0.296 0.302 0.213 0.205 0.375 0.273 0.266 0.364 0.278 0.541 0.733 0.88 0.766 0.442 0.489 0.61 0.838 0.723 0.888 1.205 0.833 1.701 1.414 1.409 1.624 1.6 S/N值 0.432 0.135 0.296 0.387 0.188 0.184 0.188 0.132 0.127 0.233 0.170 0.165 0.226 0.173 0.336 0.455 0.546 0.476 0.274 0.304 0.379 0.520 0.449 0.551 0.748 0.517 1.056 0.878 0.875 1.008 0.993 结果判断 +++ +++ +++ +++ +++ +++ +++ +++ +++ +++ +++ +++ +++ +++ +++ +++ +++ +++ +++ +++ +++ +++ +++ +++ --+++ ----------备注 怀孕30天，12月3日蓝耳疫苗 怀孕30天，12月3日蓝耳疫苗 怀孕30天，12月3日蓝耳疫苗 怀孕60天，12月3日蓝耳疫苗 怀孕60天，12月3日蓝耳疫苗 怀孕60天，12月3日蓝耳疫苗 怀孕90天，12月3日蓝耳疫苗 怀孕90天，12月3日蓝耳疫苗 怀孕90天，12月3日蓝耳疫苗 分娩7天母猪，12月1日蓝耳疫苗 仔猪，12月1日蓝耳疫苗 仔猪，12月1日蓝耳疫苗 仔猪，12月1日蓝耳疫苗 仔猪，12月1日蓝耳疫苗 仔猪，12月1日蓝耳疫苗 断奶后10天肥猪，12月19日口蹄疫 断奶后10天肥猪，12月19日口蹄疫 断奶后10天肥猪，12月19日口蹄疫 断奶后30天肥猪，12月19日口蹄疫 断奶后30天肥猪，12月19日口蹄疫 断奶后30天肥猪，12月19日口蹄疫 断奶后30天肥猪，12月19日口蹄疫 断奶后30天肥猪，12月19日口蹄疫 断奶后90天肥猪，12月3日蓝耳疫苗 断奶后90天肥猪，12月3日蓝耳疫苗 断奶后90天肥猪，12月3日蓝耳疫苗 断奶后90天肥猪，12月3日蓝耳疫苗 60kg肥猪，12月1日蓝耳疫苗 60kg肥猪，12月1日蓝耳疫苗 60kg肥猪，12月1日蓝耳疫苗 60kg肥猪，12月1日蓝耳疫苗
非洲猪瘟病毒P72单克隆抗体的制备及抗体检测方法的建立课件

非洲猪瘟病毒P72单克隆抗体的制备及抗体检测方法的建立课件

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研究背景
研究背景
➢ VP72
参与病毒吸附和进入细胞的四种主要蛋白之一。 占病毒粒子蛋白的32%，是一种非常保守的抗原
性蛋白,对自然感染具有免疫原性。 是血清学检测的理想抗原。
研究目的及意义
➢ 诊断的意义
目前尚无理想的疫苗对非洲猪瘟进行预防。
➢ 抗体诊断的目的
发病猪产生的IgG抗体在体内能持续很长时间，特 别适用于亚急性和慢性病例的检出。
1
2
M
KD
↖
117
↖
85
49
34
泳道1：pGEX-VP72未诱导全菌 25
泳道2：pGEX-VP72诱导沉淀
19 M：蛋白质预染Marker。
检测用抗原的制备
重组细菌 pGEX-VP72S
IPTG诱导
表达GST-VP72S
4℃或 -20 ℃ 保存备用
Glutathione Sepharose 4B
统计学t测验分析p0321005差异不显著统计学t测验分析p0190005差异不显著获得获得55株抗株抗asfasfvp72vp72阳性的杂交瘤细胞株阳性的杂交瘤细胞株腹水效价可达到腹水效价可达到221616亚类鉴定为亚类鉴定为igg2bigg2b建立了间接建立了间接elisaelisa抗体检测方法抗体检测方法4ugml4ugml的融合蛋白的融合蛋白gstgstvp72svp72s作为包被抗原作为包被抗原碳酸盐缓冲液为包被液碳酸盐缓冲液为包被液3737包被包被2h2h作为包被条件作为包被条件55脱脂乳作为封闭液脱脂乳作为封闭液4封闭过夜作为封闭条件封闭过夜作为封闭条件05mnaclpbst05tween05mnaclpbst05tween2020为冲洗液为冲洗液单抗腹水的工作浓度为单抗腹水的工作浓度为11
非洲猪瘟病毒P72单克隆抗体的制备及抗体检测方法的建立ppt课件

非洲猪瘟病毒P72单克隆抗体的制备及抗体检测方法的建立ppt课件

细胞株上清 P/N值 效价
3E9
3E11 4A8 4H2 6E5
10.1
5.7 3.4 6.7 10.5
212
27 27 28 212
结论：细胞上清效价在27~212之间，腹水效价可达216。
单克隆抗体的亚类鉴定
细胞上清 3E9 3E11 4A8 4H2 6E5 阴性对照 IgA 0.203 0.170 0.194 0.232 0.217 0.221 IgG1 0.254 0.215 0.259 0.301 0.334 0.222 IgG2a 0.141 0.177 0. 198 0.242 0.174 0.223 IgG2b 1.2 0.859 0.915 0.95 2.261 0.306 IgG3 0.215 0.284 0.305 0.263 0.262 0.257 IgM 0.36 0.491 0.322 0.38 0.352 0.358
45
43
←
45
31
M：低分子量蛋白质marker 1：未纯化的GST-VP72s 2：纯化过的GST-VP72s
筛 选

方法
GST-VP72s GST
包被96孔板
{


抗GST-VP72s阳性 抗GST阳性
√
×
结果
筛选到五株阳性克隆，命名为3E9、3E11、4A8、 4H2、6E5。
单克隆抗体的效价测定

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研究背景


VP72
参与病毒吸附和进入细胞的四种主要蛋白之一。 占病毒粒子蛋白的32%，是一种非常保守的抗原 性蛋白,对自然感染具有免疫原性。 是血清学检测的理想抗原。

研究背景
常规实验室诊断技术
猪群健康监测-养猪技术PPT

猪群健康监测-养猪技术PPT


频率
1次/月 1次/季度
猪场水质和水线监控
定期水线消D的必要性
饮水系统是猪只再次感染病D（PRRSV、PCV-2、ASFV），以及消化道紊乱细菌的重要来源。
原水和药物（投药过后里面覆盖一层生物膜）致使水线内壁的污垢多，细菌菌落数很容易超标。
定期用过氧乙酸对输水线路进行消D，频率结合水质监测确定。
卢美宜编号取样点菌落数是否合格1隔离栏杆0合格2母猪地面0合格3保温箱地面0合格4保温箱墙壁20cm以下0合格5墙壁3合格6产床栏杆0合格7母猪料槽0合格8母猪后门0合格球虫监测抗体抗原检测应用季度抗体监测序号内容1查情公猪和后备舍超期母猪容易出现漏免2跟胎或一年三次普免猪瘟母源抗体能持续到35日龄3后备猪猪瘟二次免疫后群体有效保护可持续4个月4一年三次普免伪狂犬母源抗体能持续到70日龄5对于ped高水平的elisa抗体仍然丌能阻止发病6溶血严重样品会影响抗体结果判断要避免溶血7免疫口蹄疫oa苗后o型抗体阳性率高于a型抗体?血清季度抗体检测对我们在制定合理的免疫程序评估免疫和驯化效果以及疾病监测方面提供很好的数据参考与支撑
抽取生理盐水
1
抽加25ml到J液瓶
2
消D规格板
3
生理盐水湿润棉签
4
棉签擦拭规格板内全部面积
5
剪掉手持部分后放入瓶中
6
规范栏舍洗消消D药用量
消D药用量规范前
消D药用量规范后
FC场栏舍细菌计数抽检表（目标菌量60个/cm2）
日期：
编号
取样点
菌落数 是否合格
1
隔离栏杆
123 不合格
2
母猪地面
301 不合格
季度抗体监测-调整免疫程序
基础母猪一年普免3次，后备猪在18日龄、45日龄、135日龄分别免疫一次。从结果看，公猪母猪抗体水平非常好 （阻断平均值＞0.7，离散度＜25%）。8、12、15周龄的后备猪猪W抗体水平很差。 存在母源抗体干扰，造成2免 后抗体依然较差。
猪抗原抗体检测方案

猪抗原抗体检测方案

毒株
（3）猪群稳定性评估
蓝耳病的检测方法
（1）抗原：RT-PCR （2）抗体：ELISA
蓝耳病的抗体检测结果分析
（1）对于稳定的种猪群，S/P值为0-2左右， 很少大于2.5.
（2）良好免疫群的典型的S/P比值范围为：0.7 to 1.8 ；有些可能>2.0 。
（3）如果每年免疫两次，仍有多于20％的猪 抗体为阴性，需要对疫苗的管理和使用进行检 查。
（3）结果分析：猪瘟抗原ELISA阳性结果 代表野毒阳性，PCR和荧光抗体阳性结果有 可能是疫苗毒的干扰。
猪瘟抗体ELISA检测要点:
A.怎样评估母源抗体和免疫效果 1）当母源抗体的降到阻断率（Block）50% 以下时，才能不干扰疫苗的免疫。（确定首 免日龄） 2）免疫后阻断率（Block）上升到50%以上 才能代表免疫合格。 良好的种猪场要求：阳性率100%（>40）， 合格率90%（>50） cv<25%） CSFV判定标准:若%PC值大于或等于0.4则判 定阳性；若PC%值小于0.4则判定阴性
（9）母猪群间隔1-2个月对群体进行监控， 了解猪群等稳定状态
（10）仔猪了解病毒的感染时间，加强药 物保健
非免猪 非免猪 免疫猪
免疫猪
稳定
不稳定 稳定
稳定性标准
S/P≤1.0者比例≥90%者比 例≥90% S/P<1.0者比例<90% S/P≤2.0者比例≥90%者比 例≥90%
不稳定 S/P<2.0者比例<90%
PRRSV判定标准:S/P值大于等于0.4判定为阳性；S/P值小于0.4判定为阴 性
编号 原种场一场52 原种场一场54 原种场一场58 原种场一场66 原种场一场61 原种场一场68 原种场一场71 原种场一场75
抗原抗体检测技术ppt课件

抗原抗体检测技术ppt课件

目前应用最广的是人O型红细胞和绵羊红细胞。后 者应用更广，因为其来源方便，另外，绵羊红细胞 的表面有大量糖蛋白受体，极易吸附某种抗原物质， 吸附性能好，且大小均匀一致 。
采用PP管及配件：根据给水设计图配 置好PP管及配 件，用 管件在 管材垂 直角切 断管材 ，边剪 边旋转 ，以保 证切口 面的圆 度，保 持熔接 部位干 净无污 物
凝集实验是一个定性检测方法，即根据凝 集现象的出现与否判定结果阳性与阴性。
也可以进行半定量检测，即将标本作一系 列对倍稀释后进行反应，以出现阳性反应 的最高稀释度作为滴度。
间接凝集反应中所用与免疫无关的颗粒称为载 体（carrier）。
将抗原（或抗体）吸附或偶联于颗粒表面的过 程称为致敏（sensitization）。
吸附有已知抗原（或抗体）的颗粒称为致敏颗 粒（sensitized particle）。
敏感度比直接凝集反应高2~8倍，适用于各种可 溶性抗原（或抗体）的检测，敏感度也高于沉 淀反应。
环境条件
电解质
抗原抗体结合后由亲水胶体变为疏水胶体，易受电 解质影响。
若无电解质存在，则不出现可见反应。 但如果电解质浓度过高，则会出现非特异性蛋白质
沉淀，即盐析。
采用PP管及配件：根据给水设计图配 置好PP管及配 件，用 管件在 管材垂 直角切 断管材 ，边剪 边旋转 ，以保 证切口 面的圆 度，保 持熔接 部位干 净无污 物
采用PP管及配件：根据给水设计图配 置好PP管及配 件，用 管件在 管材垂 直角切 断管材 ，边剪 边旋转 ，以保 证切口 面的圆 度，保 持熔接 部位干 净无污 物
凝集反应的类型
直接凝集反应
颗粒性抗原在适当电解质参与下，直接与相应 抗体结合出现肉眼可见的凝集现象，成为直接 凝集实验（direct agglutination test）。
动物检疫技术操作规范PPT课件

动物检疫技术操作规范PPT课件

消毒和其它无害化处理，无法进行无害化处理的，予 以销毁。
2.若发现动物、动物产品未按规定进行免疫、检
疫；无检疫证明；检疫证明过期失效的；证物不符，
应进行补免、补检或重检。
第29页，共103页。
六、检疫记录
❖ 1. 检疫申报单。动物卫生监督机构须指导畜主填 写检疫申报单。
❖ 2. 检疫工作记录。检疫工作记录，详细登记畜主 姓名、地址、检疫申报时间、检疫时间、检疫地 点、检疫动物种类、数量及用途、检疫处理、检 疫证明编号等，并由畜主签名。
二类疫病，是指可能造成重大经济损失，需要 采取严格控制、扑灭等措施，防止扩散的；
三类疫病，是指常见多发、可能造成重大经济 损失，需要控制和净化的。
第12页，共103页。
四、动物检疫合格标准 （出证条件）
1 、来自非封锁区或未发生相关动物疫情的饲养场（养殖小区）、 养殖户.
2、 按照国家规定进行了强制免疫，并在有效保护期内。
1.临床检查发现异常的; 2. 发现患有本规程规定检疫对象以外动物疫病， 影响动物健康的;
3.发现不明原因死亡或怀疑为重大动物疫情 的;
第28页，共103页。
不合格的动物及动物产品
按国家有关法律法规进行处理
1.经检疫确定患有检疫对象的动物、疑似动物及染 疫动物产品为不合格的动物、动物产品，应做好防疫
动物检疫技术操作 规范
第1页，共103页。
动物检疫技术及操作规程
第2页，共103页。
产地检疫规程
第3页，共103页。
一、产地检疫的意义、要求
㈠产地检疫的概念 产地检疫是指为了预防、控制动物疫病的
传播、扩散和流行，保护养殖业生产和个人健 康，由当地动物卫生监督机构的官方兽医依照 法定的检疫项目、标准和方法，对离开饲养生 产地之前所实施的检疫。
猪场抗原抗体检测报告分析学习全解

猪场抗原抗体检测报告分析学习全解


猪场检测抗原抗体意义
什么叫抗体 指机体的免疫系统在抗原刺激下，由B淋巴细胞或记忆细 胞增殖分化成的浆细胞所产生的、可与相应抗原发生特 异性结合的免疫球蛋白
猪场检测抗原抗体意义
猪场检测抗原抗体意义
猪场检测抗原抗体的范围
一般使用在病毒性疾病的检测：血清 如：猪瘟、蓝耳、伪狂犬、圆环、口蹄疫、细小 某些病毒性疾病也可通过免疫器官、发病部位进行检测：荧光抗原抗体 如：猪瘟—扁桃体；流行性腹泻、传染性胃肠炎—肠道 通常对常规细菌、支原体、衣原体等疾病很少做抗原抗体检测，可通过 病原菌培养来检测----病原检测
例1： 该猪场免疫猪瘟、伪狂犬（gE基因缺失）、口蹄疫，未免疫蓝耳
猪场检测抗原抗体的报告分析
例1：
猪场检测抗原抗体的报告分析
例1：
猪场检测抗原抗体的报告分析
例1：
猪场检测抗原抗体的报告分析
例2：
抗体检测指导免疫程序修订
陕西西安某猪场抗体检测报告
猪场检测抗原抗体的报告分析
例3：练习
检测猪场：猪场 检测份数：26份 送样人： 采样日期：2012-3-14 动保中心联系方式： 检测结果 序号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 耳号 255 255-1 255-2 346 346-1 275 275-1 275-2 4027 4377 210 301 325 463 204 536 4322 290 488 60 442 1 2 3 4 5 阳性对照平均值 阴性对照平均值 样品OD值 0.305 0.131 0.179 1.229 0.261 0.38 0.276 0.362 0.412 0.314 0.895 0.359 0.239 0.668 0.773 0.262 0.299 0.494 1.269 0.406 0.994 1.091 0.259 0.223 0.253 0.21 2.406 0.135 结果判定 ------+++ --?? ----?? --+++ ----+++ +++ ----+++ +++ ?? +++ +++ --------对照符合试剂盒规定，试验成立 备注 哺乳母猪 21日龄仔猪 21日龄仔猪 哺乳母猪 19日龄仔猪 哺乳母猪 18日龄仔猪 18日龄仔猪 妊娠后期母猪 妊娠后期母猪 妊娠后期母猪 妊娠后期母猪 妊娠后期母猪 妊娠中期母猪 妊娠中期母猪 妊娠中期母猪 妊娠中期母猪 妊娠中期母猪 妊娠前期母猪 妊娠前期母猪 妊娠前期母猪 后备母猪 后备母猪 后备母猪 后备母猪 后备母猪 检测项目：蓝耳抗体 联系电话： 送样日期：2012-3-15 联系电话： 收费标准： 邮件地址: 检测日期:2012-3-16

正向间接血凝检测猪瘟抗体水平 猪瘟抗体检测 猪病防治课件

+++：血细胞凝集, 布满孔底, 边缘不整齐, 有 时卷曲成荷叶状。
出现“++” 以上凝集者判为阳性。
六、临床应用
1、间接血凝抗体滴度在1：32-1：64时，攻毒 可获得100%保护，1：16-1：32时有80%保护， 1：8时则完全不能保护。
2、猪瘟间接血凝实验适用范围 （1）检测仔猪母源抗体水平 （2）猪瘟疫苗免疫猪群抗体水平的监测 （3）测定猪瘟抗体消长时间
8、加间接血凝抗原 在第1排1－6孔和对照孔各 加血凝抗原25ul.
9、振荡 血凝板在振荡器上或用手轻拍摇动， 使诊断液中的红细胞与血清混匀。
10、盖上与血凝板相符的玻璃板，以防水分蒸 发，在室温下（10-36℃）静置2h判断结果。
五、结果断
1、先检查对照孔是否合格 阴性血清对照和 稀释液对照孔，红血球应全部沉入孔底，无凝 集现象(－)或呈阳性(+)的轻度凝集为合格；阳 性血清对照应呈(++)凝集为合格。
正向间接血凝检测猪瘟抗体水平
• 一、实验目的 掌握间接血凝测定猪瘟抗体的方法
• 二、材料用具 猪瘟间接血凝抗原（猪瘟正向血凝诊断液）、
阳性对照血清、阴性对照血清、稀释液、待检 猪血清样品、96孔110°微量血凝板 、微量移 液器10-100微升 、玻璃板。
三、反应原理
将可溶性抗原（或抗体）先吸附于适当大小的颗粒 性载体的表面，然后与相应抗体（或抗原）作用， 在适宜的电解质存在的条件下，出现特异性凝集现 象，称间接凝集反应或被动凝集反应。以红细胞为 载体的间接凝集反应叫间接血凝。
4、稀释待检血清 用微量移液器向血凝板的第1 孔-6孔各加稀释液50ul，吸待检血清50ul加入第 1孔，混匀后从中取出50ul加入第2孔，依此类 推直至第6孔混匀后弃去50ul，第1孔-6孔的血 清稀释度依次为1：2，1：4，1：8，1：16，1： 32和1：64。

猪病诊断技术ppt课件

临诊流行病学调查、血清学流行病学调查和病 原学流行病学调查。现就临诊流行病学调查的 方式、内容进行讨论。方式多样化,如充分利 用公司销售网络、现代通讯手段或以座谈方式 向畜主或相关知情人员询问疫情，或到现场进 行仔细调研，取得第一手资料，然后进行综合 归纳、分析处理，作出初步诊断。
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• （2）调查内容
定,或抗体的检测。
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• ④乳胶凝集试验：本法在猪病中主 要用于伪狂犬病和萎缩性鼻炎的诊 断,是用其病毒致敏乳胶抗原来检 测被检猪的血清、全血或乳汁中的 抗体,具有简便、快速、特异、 敏 感的优点。
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（2）沉淀试验
沉淀试验的原理是：利用可溶性抗原如细菌
的培养滤液、病毒的可溶性抗原和血清等,与 相应的抗体结合,在电解质存在时,可形成肉眼 可见的白色沉淀物。参加沉淀反应的抗原,称 为沉淀原，抗体叫做沉淀素。沉淀试验的具体 方法有多种,如环状沉淀试验、琼脂扩散试验 和免疫电泳等。在猪病的诊断中,目前最常用 的是琼脂扩散试验。本法可用已知抗原测定未 知抗体,反之亦然。在猪病的实验室诊断中， 常用于猪伪狂犬病的抗体检测,也可用此法检 查猪瘟、猪水疱病和猪痘等疾病。
• 我国猪流行性疾病的致病因素非常复杂，多 为混合感染、继发感染、多因素疾病，单从 病原学或血清学的方法诊断疾病，很难做出 确切诊断，不易分清主次病因，难免出现主 观武断或片面错误的结论。从尸体剖检入手 结合病原学、血清学及病理组织学诊断才能 得出科学的诊断结论。
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4、病理组织学诊断
• 病理组织学诊断：就是取病变组织，过切片或涂片、 染色处理，在光学显微镜下观察细胞组织病变，对疾 病做出诊断。包括细胞形态学、组织化学方法。
猪传染性胸膜肺炎 鼻气管分泌物、肺支气管粘膜、肺、肝、脾
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辰丰生物
猪抗原抗体检测方案
检测的目的
1．疾病预警 （1）了解疾病在场内的污染状况，制定相应策 略 （2）提前了解免疫抗体的高低及整齐度，及时 纠正 2．免疫程序的评估与优化 （1）了解母源抗体的消长情况 （2）疫苗接种的效果-----免疫抗体监控 3．疾病控制和清除计划：通过系统检测和措施， 实施疾病的控制或清除计划 4．疾病诊断
（2）PRVgE（I）：野毒抗体
（3）通过PRV-gB和PRV-gI抗体检测可了解 本场伪狂犬病的流行状况，制定相应的免 疫方案及措施。
伪狂犬清除计划
（1）在阳性率低的种猪群，建议一次性淘 汰所有阳性种猪。每个季度筛选一次，加 强疫苗免疫，同时保证引入阴性后备母猪 和种公猪，一般一年见效。
C. 猪瘟抗体检测结果分析
1）Cutoff值是 >1：16代表抗体阳性
2）实际生产中至少要在1：64以上才有一 定的保护，经产母猪多次疫苗免疫后抗体 水平一般会在1：256到1：1024左右波动。
D. 猪瘟抗体 ELISA检测时间表
品项 日常评估
种类 后备母猪 经产母猪
时间
目的
取样数量
在配种前
S/P值 0.652 0.693 1.322 0.378 0.258 0.237 4.171 2.746
结果 + + + + +
阴性对照 阴性平均值
0.072 0.078 0.075
成立
阳性对照 阳性平均值
0.735
0.734 0.7345
成立
蓝耳病抗体检测时间表
品项
种类
时间
目的
取样数量
日常评估 后备母猪 在配种前
不稳定 S/P<2.0者比例<90%
PRRSV判定标准:S/P值大于等于0.4判定为阳性；S/P值小于0.4判定为阴 性
编号 原种场一场52 原种场一场54 原种场一场58 原种场一场66 原种场一场61 原种场一场68 原种场一场71 原种场一场75
OD值 0.505 0.532 0.947 0.324 0.245 0.231 2.449 1.886
（2）在阳性率很高的种猪群，保证引入阴 性后备母猪和种公猪，加强免疫。每季度 抽样监控野毒阳性比例防止感染扩大并用 PRV-gB评估免疫抗体水平，三年可见效。
野毒感染和抗体水平
全部
3个月一次个月一 评估母猪群的健康状态和抵抗 20
次
力
商品猪
二免后4-6周4-6周 监控免疫效果
20
首免日龄 仔猪
21日龄日龄 28日龄日龄 35日龄日龄 42日龄日龄
评估母源抗体衰减水平，选择 15 最佳首免时间
15
15
15
蓝耳病的主要问题
（1）毒株的变异与交叉保护 （2）疫苗的选择：灭活疫苗、弱毒疫苗、
（8）公猪抗体阳性值SP>2.5的最好不要使 用
（9）母猪群间隔1-2个月对群体进行监控， 了解猪群等稳定状态
（10）仔猪了解病毒的感染时间，加强药 物保健
非免猪 非免猪 免疫猪
免疫猪
稳定
不稳定 稳定
稳定性标准
S/P≤1.0者比例≥90%者比 例≥90% S/P<1.0者比例<90% S/P≤2.0者比例≥90%者比 例≥90%
防止引入不稳定猪只 全部
经产母猪 2个月一次个月一次 了解猪群稳定性
20
商品猪 3个月一次个月一次 监控免疫效果和稳定性 20
伪狂犬的主要问题
（1）种猪群野毒抗体（gE抗体）阳性率居 高不下
（2）中大猪的呼吸道问题 （3）散发性母猪繁殖障碍 （4）净化方案的选择
伪狂犬的检测方法
（1）PRVgB：总抗体，S/N值和阻断率 （BLOCK值）
结果 + + + + + -
成立
成立
CSFV判定标准:若%PC值大于或等于0.4则判定阳性；若PC%值小于0.4则判定阴性
B. 剔除持续感染猪或无抗体反应 猪
个猪群的感染源。
2）首次使用应对母猪群进行检测，对抗 体低下猪只进行补针后6周复检。若仍然没 有抗体产生，应进行淘汰。
（4）当S/P >2.5 – 病毒血症 （5）当S/P >3.5-高于5.0 – 急性感染
SUCCESS
THANK YOU
2019/7/20
蓝耳病的抗体检测结果分析
（6）6-7周龄时，多数仔猪抗体可变为阴性 （无病毒循环）
（7）引进种猪，要剔出阳性值SP>1.2的猪 只，保证种群的稳定
重点进行监测四大猪病：猪瘟、蓝耳、伪狂犬、圆环
1. 猪瘟主要问题 （1）抗体水平偏低 （2）疫苗的选择及剂量：细胞苗？脾淋苗
？，150 RID = 37 PD50 （3）持续性感染猪的存在
猪瘟抗原检测
（1）常用方法：PCR、荧光抗体和ELISA
（2）检测目的：引进种猪或后备母猪时的 检查，疑似病例的确诊，猪群带毒率的定 期评估
（3）结果分析：猪瘟抗原ELISA阳性结果 代表野毒阳性，PCR和荧光抗体阳性结果有 可能是疫苗毒的干扰。
猪瘟抗体ELISA检测要点:
A.怎样评估母源抗体和免疫效果 1）当母源抗体的降到阻断率（Block）50% 以下时，才能不干扰疫苗的免疫。（确定首 免日龄） 2）免疫后阻断率（Block）上升到50%以上 才能代表免疫合格。 良好的种猪场要求：阳性率100%（>40）， 合格率90%（>50） cv<25%） CSFV判定标准:若%PC值大于或等于0.4则判 定阳性；若PC%值小于0.4则判定阴性
毒株
（3）猪群稳定性评估
蓝耳病的检测方法
（1）抗原：RT-PCR （2）抗体：ELISA
蓝耳病的抗体检测结果分析
（1）对于稳定的种猪群，S/P值为0-2左右， 很少大于2.5.
（2）良好免疫群的典型的S/P比值范围为：0.7 to 1.8 ；有些可能>2.0 。
（3）如果每年免疫两次，仍有多于20％的猪 抗体为阴性，需要对疫苗的管理和使用进行检 查。
表1：猪血清CSFV抗体检测结果
编号 6306 5841 5805 3711 保1 后备
阴性对照
阴性平均值
阳性对照
阳性平均值
OD值 0.347 0.277 0.218 0.172 0.159 0.699 0.818 0.817
0.8175 0.073 0.057
0.065
阻断率 0.625 0.718 0.797 0.858 0.875 0.157