环境工程微生物实验报告
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环境工程微生物实践（实验）报告
实践（实验）项目名称： 放线菌形态观察的实验
学号 姓名 班级 15-环工
实践（实验）地点 化生实验楼317 实践（实验）时间 指导老师 马老师
一、 实践目的（实验原理与目的）
原理： 放线菌是由不同长短的纤细的菌丝所形成的单细胞菌丝体。菌丝体分为两部分，即潜入培养基中的营养菌丝和生长在培养基表面的气生菌丝。有些气生菌丝分化成各种孢子丝，呈螺旋形、波浪形或分枝状等。孢子常呈圆形、椭圆形或杆形。气生菌丝及孢子的形状和颜色常作为分类的重要依据。
目的： 放线菌自然生长状态的观察
二、 实践内容（实验内容与步骤）
1. 实验准备
（一）培养基
制作高氏一号培养基：准备可溶性淀粉10g、硫酸铁0.25g、硝酸钾0.5g、琼脂10g、氯化钠0.25g、磷酸钾0.25g、硫酸镁0.25g、蒸馏水500ml
（二）．溶液或试剂
10%酚酞液，盛9ml无菌水的试管，盛90ml无菌水并带有玻璃珠的三角烧瓶，4%水琼脂。
（三）.仪器
无菌玻璃涂棒、无菌吸管、接种环、无菌培养皿、土样。
（四）.流程
倒平板→制备梯度稀释液→涂布→培养→观察
2. 操作步骤： （一）．来源
土壤中放线菌丰富，品种齐全，可以筛选出新的放线菌。我们选择的是从实验室楼下的土壤中取样10g。
（二）．培养基的制备
1、称量和溶化
按配方先称取可溶性淀粉，放入小烧杯中，并用少量冷水将淀粉调成糊状，再加入少于所需水量的沸水中，继续加热，使可溶性淀粉完全溶化。然后再称取其他各成分，并依次溶化，对微量成分FeSO4 ．7 H2 O可先配成高浓度的贮备 液，按比例换算后再加入。待所有试剂完全溶解后，补充水分到所需的总体积。 配制固体培养基时，将称好的琼脂放入已溶的试剂中，在加热融化，最后补充所损失的水分。
2、调pH
用试纸测培养基的原始PH,如果偏酸，用滴管向培养基中加入1mol/L Na0H,边滴边搅拌，并随时用pH试纸测其pH,直至pH达7.6。反之，用1mol/LHCI进行调节。
3、分装和加塞
将配制的培养基装入磨口三角瓶内，在瓶口上塞上橡胶塞。
4、包扎
加塞后，外包一层报纸，其外再用一根麻绳扎好。用记号笔注明培养基名称、组别、配制日期。
5、灭菌
将上述培养基以120℃, 20min, 0.103MPa高压蒸汽灭菌。
6、无菌检查
将灭菌培养基放入25℃的培养箱中培养1h，以检查灭菌是否彻底。
(三)．分离
1、倒平板
将高氏I号培养基加热熔化待冷却至55-60°c时倒入培养皿。倒平板的方法：右手持培养基的试管或三角瓶置于火焰旁边。用左手将试管塞或瓶塞拔出，试管口或瓶口保持对着火焰；然后左手拿培养皿并将皿盖在火焰附近打开一缝，迅速倒入培养基15ml-20ml，加盖后平置于桌面上，待凝固后即为平板。
2、制备土壤稀释液
称取土样10g，去花坛等地方的土样，选好采样地点，除去表层5cm。用无菌器具规范采样几十克，装入无菌塑料袋扎好。采样后应尽快分离。振摇匀20min，使土壤与水充分混匀，将细胞分散。放入盛有90ml无菌水的三角瓶中，充分混合。用一支1ml无菌吸管从三角瓶中吸取1ml土壤悬液盛入放有9ml无菌水的试管中充分混匀，然后从此试管中吸取1ml加入另一盛有9ml无菌水的试管中，混合均匀，以此类推，制成10ˉ1、10ˉ2、10ˉ3、10ˉ4、10ˉ5、10ˉ6共六种不同稀释度的土壤溶液。
3、涂布
将上述每种的三个平板底面分别用记号笔写上10ˉ4、10ˉ5、10ˉ6 三种稀释度，然后用无菌吸管分别由10ˉ4、10ˉ5、10ˉ6 三管土壤稀释液中各吸取0.1ml，小心的滴在对应平板培养基表面中央位置。用无菌涂布器涂布。右手拿无菌涂布器放在平板培养基表面上，将细菌悬液先沿同心圆方向轻轻地向外扩展，使之分布均匀，室温下静置5-10min，使菌液浸入培养基。
4、培养
将高氏I号培养基平板倒置与28℃培养箱中培养24 h 。
5、挑菌落
将培养出的单个菌落分别挑取少许细胞接种到培养基斜面上，置28℃温室培养。若发现有杂菌，须再一次进行分离、纯化，直到获得纯培养。
三、 实践工艺流程（实验结果与数据处理）
四、 结果分析（分析与讨论）
菌落特征 卡那霉素链霉菌 卡特利链霉菌 卡那霉素链霉菌
培养基 高氏一号培养基
菌落形态 同心圆 放射状 表面干燥呈粉状 颜色 深黄色 淡白色 浅黄色
气味 土腥味
五、 总结
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六、 注意事项
教师评语：
签名：
日期：
年 月 日
