卵黄抗体的制作和应用

抗鸡球虫卵黄抗体制备及初步应用作者：钱玮霖指导老师：徐前明（安徽农业大学植保学院合肥 230061）摘要：本项目旨在研制抗鸡球虫卵黄抗体，为防治鸡球虫病提供一种新的手段。

利用对临床所分离的球虫，经超声波裂解制备粗抗原，然后将所得抗原分别于弗氏完全佐剂和不完全佐剂混合，经肌肉注射方式对鸡蛋进行免疫，收集免疫后的卵黄；采用饱和硫酸铵法分离卵黄中的抗体，并用聚乙二醇浓缩获得较高浓度的抗体；采用凝集试验确定其抗体水平，并采用十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）方法进行抗体纯度分析；最后将所分离的抗鸡球虫卵黄抗体用于鸡感染球虫保护试验。

结果表明：（1）临床所分离得球虫多为混合感染，达3种以上；（2）蛋鸡经免疫后，经凝集试验可证实其抗体水平可达1:28，SDS-PAGE电泳显示：纯化后抗体大小为67.0kD 和23kD，且纯度较高。

基于上述情况，认为本试验制备出抗鸡球虫卵黄抗体方法并初步阐明了其抗鸡球虫的基本功能。

关键词：鸡球虫病；卵黄抗体；保护试验引言鸡球虫病广泛存在于养鸡业中，常造成大批死亡，其死亡率可最高达80％，且病愈鸡生长严重受阻，抵抗力降低，易继发其他疾病。

每年，全世界因为鸡球虫病造成的损失高达数十亿美元[1]。

因此，鸡球虫病是养鸡业中危害最严重的疾病之一。

在我国，特别是在南方地区，由于气温高、湿度大，这种环境利于球虫卵囊的孢子发育，本病常常呈暴发性流行，危害更加严重。

然而，目前对鸡球虫病的防治措施绝大部分多依赖于药物的预防和治疗上,即化学合成药物和抗生素两大类，自从1936年首次出现专用抗球虫药以来，已报道的抗球虫药达40余种，但是因为球虫对药物极易产生抗药性，大量使用化学药物势必会造成严重的药物残留问题等，这也是当今养禽业所遇到最棘手的问题之一。

上述问题存在，为临床防治鸡球虫病提出紧迫任务。

卵黄抗体在禽胚孵化过程中逐渐进入禽胚血液，为刚出壳雏鸡提供被动免疫保护，在雏鸡疾病预防中具有重要作用。

卵黄抗体的制备方法
1、选择健康、产蛋率高的蛋鸡，购进后饲养1周左右，观察其健康情况。

2、采用多种抗原进行免疫，如灭活的病原体、激素类、蛋白类物质等，使用前可以选用弗氏完全佐剂乳化抗原。

3、采用不同的免疫方式，如肌肉注射、腹腔注射、皮下注射等，并设定合适的免疫剂量和免疫次数。

4、使用琼脂免疫扩散实验检测免疫鸡血清中的抗体效价，效价达到1:64以上时，可开始收集免疫蛋鸡所产鸡蛋。

5、收集卵黄抗体，先用清洁水洗去蛋壳表面的粪污，再使用碘酊和酒精消毒。

无菌条件下打开胚壳，倾出蛋黄至灭菌大烧杯中，以1:9的比例加入灭菌生理盐水或0.01 mol/L pH7.2的PBS稀释并充分混匀，调节pH至5.2。

6、对卵黄抗体进行纯化，可采用硫酸铵沉淀法、PEG沉淀法等方法进行纯化。

如何制作应用卵黄抗体(鸡新城疫)卵黄抗体是治疗鸡新城疫（ND）和传染性法氏囊病（IBD）的一种特效药，于20世纪90年代，利用免疫学理论研究生产的新药，具有特异性诊断、治疗和预防作用。

目前，已广泛应用于鸡新城疫和传染性法氏囊病的防治上，均收到了良好效果。

制作方法将新城疫I系苗、传染性法氏囊强毒苗连续注射健康无病产蛋鸡三次，第一次1个免疫量，第二次2个免疫量，第三次3个免疫量。

待3周后收集母鸡所产的蛋，无菌采取蛋黄，加灭菌生理盐水稀释成1∶20的混悬液，测定效价，加入抑菌剂，然后进行分装，在0℃以下保存备用。

卵黄抗体成分与效价卵黄抗体也称母源抗体、IgG抗体。

是母体血液中小分子抗体IgG通过胎盘、输卵管、滋养层传给后代。

保存入卵的蛋黄中，若孵化出鸡雏，则对新城疫、传染性法氏囊有特异的抵抗作用。

这种抵抗作用称为抗体，其分子结构称为单体Ig，由2条多肽重链和2条多肽轻链组成。

沉淀系数7S，分子量160000-180000，含糖2.5%。

现已发现有四种IgGT型重链同种异型，也称作四个亚型并含硫的半胱氨酸。

具有抗感染、抗菌、抗病毒作用。

由于氨基酸排列顺序具有高度可变性，能接触到抗原的物质，并发生特异结合，产生中和作用，从而体现特异作用。

卵黄抗体好与否的标准是用HA和HI试验测定的稀释倍数，称为效价，Iog2的指数越大，效价越高，通常把1∶64效价称为高免卵黄抗体，其半衰期为4天左右，因此，用卵黄抗体替代主动免疫时间在2周~4周，应科学选择使用日期，注意半衰期，计算保护期，当降到临界线时，应及时补充。

卵黄抗体的作用诊断作用：卵黄抗体具有沉淀素的特性，当诊断时，若怀疑鸡群发生传染性法氏囊病，可采取病料5克，加灭菌生理盐水10毫升，研磨，加抗菌剂抑菌，置于冰箱过夜，作为未知抗原，制作备用琼脂板，打成梅花状七孔后，同时加入未知病料抗原和已知的卵黄抗体各一份，约0.5毫升，25℃放置24小时~72小时，出现肉眼可见白色沉淀线，为阳性反应。

卵黄抗体的制作卵黄抗体是治疗鸡新城疫（ND）和传染性法氏囊病（IBD）的一种特效药，于20世纪90年代，利用免疫学理论研究生产的新药，具有特异性诊断、治疗和预防作用。

目前，已广泛应用于鸡新城疫和传染性法氏囊病的防治上，均收到了良好效果。

制作方法将新城疫I系苗、传染性法氏囊强毒苗连续注射健康无病产蛋鸡三次，第一次1个免疫量，第二次2个免疫量，第三次3个免疫量。

待3周后收集母鸡所产的蛋，无菌采取蛋黄，加灭菌生理盐水稀释成1∶20的混悬液，测定效价，加入抑菌剂，然后进行分装，在0℃以下保存备用。

卵黄抗体成分与效价卵黄抗体也称母源抗体、IgG抗体。

是母体血液中小分子抗体IgG通过胎盘、输卵管、滋养层传给后代。

保存入卵的蛋黄中，若孵化出鸡雏，则对新城疫、传染性法氏囊有特异的抵抗作用。

这种抵抗作用称为抗体，其分子结构称为单体Ig，由2条多肽重链和2条多肽轻链组成。

沉淀系数7S，分子量160000-180000，含糖2.5%。

现已发现有四种IgGT型重链同种异型，也称作四个亚型并含硫的半胱氨酸。

具有抗感染、抗菌、抗病毒作用。

由于氨基酸排列顺序具有高度可变性，能接触到抗原的物质，并发生特异结合，产生中和作用，从而体现特异作用。

卵黄抗体好与否的标准是用HA和HI试验测定的稀释倍数，称为效价，Iog2的指数越大，效价越高，通常把1∶64效价称为高免卵黄抗体，其半衰期为4天左右，因此，用卵黄抗体替代主动免疫时间在2周~4周，应科学选择使用日期，注意半衰期，计算保护期，当降到临界线时，应及时补充。

卵黄抗体的作用诊断作用：卵黄抗体具有沉淀素的特性，当诊断时，若怀疑鸡群发生传染性法氏囊病，可采取病料5克，加灭菌生理盐水10毫升，研磨，加抗菌剂抑菌，置于冰箱过夜，作为未知抗原，制作备用琼脂板，打成梅花状七孔后，同时加入未知病料抗原和已知的卵黄抗体各一份，约0.5毫升，25℃放置24小时~72小时，出现肉眼可见白色沉淀线，为阳性反应。

卵黄抗体的制作 This manuscript was revised by the office on December 10, 2020.卵黄抗体的制作卵黄抗体是治疗鸡新城疫（ND）和传染性法氏囊病（IBD）的一种特效药，于20世纪90年代，利用免疫学理论研究生产的新药，具有特异性诊断、治疗和预防作用。

目前，已广泛应用于鸡新城疫和传染性法氏囊病的防治上，均收到了良好效果。

制作方法将新城疫I系苗、传染性法氏囊强毒苗连续注射健康无病产蛋鸡三次，第一次1个免疫量，第二次2个免疫量，第三次3个免疫量。

待3周后收集母鸡所产的蛋，无菌采取蛋黄，加灭菌生理盐水稀释成1∶20的混悬液，测定效价，加入抑菌剂，然后进行分装，在0℃以下保存备用。

卵黄抗体成分与效价卵黄抗体也称母源抗体、IgG抗体。

是母体血液中小分子抗体IgG通过胎盘、输卵管、滋养层传给后代。

保存入卵的蛋黄中，若孵化出鸡雏，则对新城疫、传染性法氏囊有特异的抵抗作用。

这种抵抗作用称为抗体，其分子结构称为单体Ig，由2条多肽重链和2条多肽轻链组成。

沉淀系数7S，分子量，含糖%。

现已发现有四种IgGT型重链同种异型，也称作四个亚型并含硫的半胱氨酸。

具有抗感染、抗菌、抗病毒作用。

由于氨基酸排列顺序具有高度可变性，能接触到抗原的物质，并发生特异结合，产生中和作用，从而体现特异作用。

卵黄抗体好与否的标准是用HA和HI试验测定的稀释倍数，称为效价，Iog2的指数越大，效价越高，通常把1∶64效价称为高免卵黄抗体，其半衰期为4天左右，因此，用卵黄抗体替代主动免疫时间在2周~4周，应科学选择使用日期，注意半衰期，计算保护期，当降到临界线时，应及时补充。

卵黄抗体的作用诊断作用：卵黄抗体具有沉淀素的特性，当诊断时，若怀疑鸡群发生传染性法氏囊病，可采取病料5克，加灭菌生理盐水10毫升，研磨，加抗菌剂抑菌，置于冰箱过夜，作为未知抗原，制作备用琼脂板，打成梅花状七孔后，同时加入未知病料抗原和已知的卵黄抗体各一份，约毫升，25℃放置24小时~72小时，出现肉眼可见白色沉淀线，为阳性反应。

卵黄抗体的提纯及应用
卵黄抗体是一种针对鸡蛋卵黄中的蛋白质进行识别和结合的抗体。

由于鸡蛋卵黄含有大量蛋白质和营养成分，因此卵黄抗体被广泛应用于生物学、医学和食品科技领域等。

卵黄抗体的提纯方法主要包括离子交换、凝胶过滤、亲和层析等多种技术。

其中，离子交换层析是最常用的技术之一。

该技术的步骤包括：将混合溶液加到已经平衡好的离子交换层析柱中，洗脱非特异性吸附物质，然后用适当的洗液洗脱目标蛋白质。

凝胶过滤是用孔径大小分列的凝胶包装柱，通过洗涤和吸脱的方式，将目标蛋白质从其他混杂物中分离出来。

亲和柱层析则是通过将特定的亲和剂固定在某种无机或有机材料上，制成柱后，再利用亲和剂与目标物质的特异性结合，从而将目标物分离出来。

这种方法利用目标物质与亲和剂之间的特定相互作用使其分离，可以保持目标物质的天然构象，纯度相对较高。

卵黄抗体作为一种重要的实验工具，被广泛应用于生物学、医学和食品科技等领域。

在生物学中，卵黄抗体可用于免疫印迹实验、免疫沉淀实验、流式细胞术、免疫组织化学等多种实验。

在医学中，卵黄抗体可以用于诊断和治疗某些疾病，如肿瘤、心血管疾病等。

在食品科技领域，卵黄抗体可以用来检测食品中的蛋白质含量和质量，也可以用于检测食品中的某些成分。

总之，卵黄抗体具有广泛的应用价值。

通过合适的提纯方法，可以获得高纯度的卵黄抗体，从而更好地发挥其应用价值。

卵黄抗体的制作卵黄抗体是治疗鸡新城疫（ND）和传染性法氏囊病（IBD）的一种特效药，于20世纪90年代，利用免疫学理论研究生产的新药，具有特异性诊断、治疗和预防作用。

目前，已广泛应用于鸡新城疫和传染性法氏囊病的防治上，均收到了良好效果。

制作方法将新城疫I系苗、传染性法氏囊强毒苗连续注射健康无病产蛋鸡三次，第一次1个免疫量，第二次2个免疫量，第三次3个免疫量。

待3周后收集母鸡所产的蛋，无菌采取蛋黄，加灭菌生理盐水稀释成1∶20的混悬液，测定效价，加入抑菌剂，然后进行分装，在0℃以下保存备用。

卵黄抗体成分与效价卵黄抗体也称母源抗体、IgG抗体。

是母体血液中小分子抗体IgG 通过胎盘、输卵管、滋养层传给后代。

保存入卵的蛋黄中，若孵化出鸡雏，则对新城疫、传染性法氏囊有特异的抵抗作用。

这种抵抗作用称为抗体，其分子结构称为单体Ig，由2条多肽重链和2条多肽轻链组成。

沉淀系数7S，分子量160000-180000，含糖2.5%。

现已发现有四种IgGT型重链同种异型，也称作四个亚型并含硫的半胱氨酸。

具有抗感染、抗菌、抗病毒作用。

由于氨基酸排列顺序具有高度可变性，能接触到抗原的物质，并发生特异结合，产生中和作用，从而体现特异作用。

卵黄抗体好与否的标准是用HA和HI试验测定的稀释倍数，称为效价，Iog2的指数越大，效价越高，通常把1∶64效价称为高免卵黄抗体，其半衰期为4天左右，因此，用卵黄抗体替代主动免疫时间在2周~4周，应科学选择使用日期，注意半衰期，计算保护期，当降到临界线时，应及时补充。

卵黄抗体的作用诊断作用：卵黄抗体具有沉淀素的特性，当诊断时，若怀疑鸡群发生传染性法氏囊病，可采取病料5克，加灭菌生理盐水10毫升，研磨，加抗菌剂抑菌，置于冰箱过夜，作为未知抗原，制作备用琼脂板，打成梅花状七孔后，同时加入未知病料抗原和已知的卵黄抗体各一份，约0.5毫升，25℃放置24小时~72小时，出现肉眼可见白色沉淀线，为阳性反应。

卵黄抗体生产工艺流程以卵黄抗体生产工艺流程为标题，我们将详细介绍卵黄抗体的生产过程。

卵黄抗体是一种重要的生物药物，具有广泛的应用价值。

下面我们将从卵黄的采集、抗原制备、免疫动物养殖、抗体提取和纯化等方面，逐步介绍卵黄抗体的生产工艺流程。

一、卵黄的采集卵黄抗体的生产首先需要采集新鲜的鸡蛋。

一般选择健康的蛋鸡作为免疫动物，确保卵黄中含有丰富的抗体物质。

采集时要注意卫生条件，避免污染。

采集到的鸡蛋要及时运送至实验室进行后续处理。

二、抗原制备抗原是刺激免疫动物产生抗体的物质。

在卵黄抗体的生产中，常用的抗原一般是蛋白质。

首先需要提取目标蛋白质，并进行纯化和浓缩。

然后根据抗原的性质，选择适当的方法进行抗原表达和抗原标记。

抗原的制备需要严格控制条件，确保抗原的稳定性和免疫原性。

三、免疫动物养殖在卵黄抗体生产中，免疫动物的选择是非常重要的。

一般可以选择小鼠、兔子等动物作为免疫动物。

在动物实验前，需要对免疫动物进行适应性饲养，确保其健康状态。

然后根据实验设计，进行抗原免疫。

四、抗体提取和纯化免疫动物经过一定周期的免疫后，其血液中会产生特异性抗体。

接下来，我们需要提取并纯化这些抗体。

首先，需要采集免疫动物的血液，分离血清。

然后，通过不同的分离和纯化技术，如盐析、层析、电泳等，将目标抗体从血清中提取出来。

这一步骤的目的是去除其他的蛋白质和杂质，提高抗体的纯度。

五、抗体的性质分析抗体的性质分析是卵黄抗体生产工艺中的重要环节。

通过对抗体的亲和力、特异性、活性等性质进行测试和分析，评估抗体的质量和功能。

常用的方法包括ELISA、Western blot、免疫组化等。

这些分析结果将直接影响卵黄抗体的应用效果。

六、抗体的应用卵黄抗体具有广泛的应用价值。

根据不同的抗体种类和功能，可以将其应用于医学诊断、药物研发、生物学研究等领域。

卵黄抗体的应用需要结合具体的实验需求和操作方法，以达到最佳的效果。

卵黄抗体的生产工艺流程包括卵黄的采集、抗原制备、免疫动物养殖、抗体提取和纯化、抗体的性质分析以及抗体的应用。