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高中生物微专题：PCR的七种类型及应用
【基础强化】
1.PCR反应过程
2.PCR反应体系的配方
10倍浓缩的扩增缓冲液（含Mg2+） 5μL
20mmol/L的4种脱氧核苷酸的等量混合液（实为dNTP） 1μL
20μmol/L的引物Ⅰ 2.5μL
20μmol/L的引物Ⅱ 2.5μL
H2O 28～33μL
1-5U/μL的Taq DNA聚合酶（即耐高温的DNA聚合酶） 1～2U
模板DNA 5～10μL
总体积 50μL
3.仪器设备
PCR仪 微量离心管 微量移液器
2
【拓展归纳】
1.热启动PCR——先控温，好处多
正如探究温度对酶活性的影响实验，先把反应底物与酶分别控制好温度，再将它们混合，可以避免在未达到所设定温度时，酶就催化反应。迁移到PCR，先将反应底物加热到80℃以上，再混入酶，可减少在升温过程一些杂质引物结合，Taq酶就发挥作用，催化产生一些非目标DNA。
典例：（2021江苏卷）热启动PCR可提高扩增效率，方法之一是：先将除TaqDNA聚合酶（Taq酶）以外的各成分混合后，加热到80℃以上再混入酶，然后直接从94℃开始PCR扩增。下列叙述正确的有（ ）
A．Taq酶最适催化温度范围为50～60℃
B．与常规PCR相比，热启动PCR可减少反应起始时引物错配形成的产物
C．两条子链的合成一定都是从5＇端向3＇端延伸
D．PCR产物DNA碱基序列的特异性体现了Taq酶的特异性
【答案】BC
2.交错延伸PCR——慢点好
反应有时需要快点，有时需要慢点！交错延伸PCR中就需要反应慢点，每一轮循环子链只延伸一小段，那怎么能让PCR反应慢下来呢？——控制温度，让酶的活性低一点，这就是交错延伸PCR中延伸温度也设为55℃的原因！
典例：基因克隆与重组：分别选取一株具有高热稳定性和一株高催化效率的菌株，通过PCR的方式获得各自的LipA基因片段，连入载体A（氨苄青霉素抗性），然后采用交错延伸PCR的方法获得不同重组DNA后，连入载体B（卡拉霉素抗性），并转入受体菌，最终筛选出既耐热又高效的重组酶。实验流程如图所示：
三楼
共计29间房 普通套房3间，豪华套房1间，单间15间
327 326 325 323 322 楼梯 电梯 321套房 320套房 319 318 楼梯 317 316 315 313 312
楼道
328 329 999豪华套房 331 332套房 301 302 303 305 306 307 308 309 310 311
四楼
共计29间房 普通套房3间，豪华套房1间，单间15间
427 426 425 423 422 楼梯 电梯 421套房 420套房 419 418 楼梯 417 416 415 413 412
楼道
428 429 666豪华套房 431 432套房 401 402 403 405 406 407 408 409 410 411 123 122 中心机房 中心机房 公共卫生间 楼梯 电梯 储物间 121 120 119 118 楼梯 117 116 115 113 112 一楼
共计27间房 单间27间 楼道
125 126 127 128 129 130 大厅
（入口） 101 102 103 105 106 107 108 109 110 111
二楼
共计27间房 普通套房5间，单间22间
227 226 225 223 222 楼梯 电梯 221套房 220套房 219 218 楼梯 217 216 215 213 212
楼道
228套房 229套房 230套房 大厅 201 202 203 205 206 207 208 209 210 211
６２ 动物医学进展２００２年第２３卷第５期（总第１２１期）
ＰＣＲ技术检测鲤鱼组织吉陶单极虫ＤＮＡ
冯现维 ，杨振国 ，闰广谋 ，周 玉 ，穆占昆 ，徐广宏ｚ，张鹏。
（１．解放军军需大学，吉林长春１３００６２；２．辽宁省辽中县水产技术推广站；３．辽宁省铁岭市水产技术推广站）
中图分类号：￥８５２．７３２ 文献标识码：Ａ 文章编号：１００７—５０３８（２００２）０５—００６２—０２ 摘要：采用ＰＣＲ方法对鲤鱼的鳃、口腔黏膜、
肌肉、心、肝、脾、肾、肠等组织进行了吉陶单极
虫ＤＮＡ的检测。从患病及健康鲤鱼的上述组织
提取模板ＤＮＡ，用吉陶单极虫的特异引物进行 ＰＣＲ扩增。结果：在发病池３条患病鲤鱼肠道均
扩增出一条长度为５６０ ｂｐ左右的特异片断，而 其他组织及其他鲤鱼各组织均未检测到吉陶单
极虫ＤＮＡ。初步认为吉陶单极虫在鲤鱼体内仅
寄生在肠道。 关键词：吉陶单极虫；ＰＣＲ
吉陶单极虫（Ｔｈｅｌｏｈａｎｅｌｌｕｓ ｋｉｔａｕｅｉ）是寄生在鲤鱼 体内的一种黏孢于虫，危害严重，流行广泛，特别是在 华北、东北等地区。曾有学者对该病做过一些研 究［１ｑ］，但在该病的早期诊断和防治方面的研究进展 缓慢，其中一个主要原因是对该虫的生活史所知甚少。 本文采用ＰＣＲ方法对鲤鱼组织进行了吉陶单极虫 ＤＮＡ检测，旨在对吉陶单极虫的早期诊断和生活史的 研究提供实验方法和依据。 １材料与方法 １．１材料
１．１．１ 试验用鲤鱼来源 ２００１年８月，采自辽宁省 辽中县某发病渔场。病鱼３条（分别编号为Ｏ１～Ｏ３ 号），同池未显症状鱼２条（０４～Ｏ５号），非发病池健康 鱼２条（０６￣０７号）。 １．１．２ 试剂 ＤＮＡ分子量标准ＤＬ２０００、ＸＤＮＡ／ ＨｉｎｄＫＩ、ｄＮＴＰ均为大连宝生物工程有限公司产品， Ｔａｑ酶和琼脂糖为华美公司产品。ＰＣＲ引物由上海生 工生物工程公司合成。动物基因组ＤＮＡ提取试剂盒 为鼎国生物技术发展中心产品。 １．１．３仪器ＰＴＣ一５１Ｂ型ＰＣＲ仪系军事医学科学院 放射医学研究所产品。 １．Ｚ 方法 １．２．１ 标本的采集和处理标本采集后低温运输。在 实验室无菌条件下取出鱼的各主要脏器、编号、分装。
后托架
后支腿中支腿起吊天车
前支腿
行走机构导梁前支腿导梁
控制柜
临时支撑导梁框架
设计
复核
审定比例
图号
第页共页洛—三高速公路工程N0.7合同段
中铁第二十工程局架桥机示意图A 向
A 向
步骤1 行走前准备：联结临时斜撑，两小车移到架桥机后部并
与主梁连接，前支腿上部与主梁下弦锚固，利用葫芦或其他联结
架将前支腿与桥台或已安装好的梁拉紧，放下后支腿。
步骤2 顶起前支腿，升高后支腿，利用起吊小车将中支腿移至
前支腿附近，调整中支腿至合适的位置，运梁平车移至架桥机后
下部与主梁联结，收起前支腿和后支腿，此时，架桥机置于中支
腿和运梁平车之上，具备纵移条件。
步骤3 拆除前支腿与主梁下弦的锚固，利用中支腿上行走机构及
运梁平车的动力使架桥机纵移且导梁前支腿至前一跨桥墩预定位
置，注油升高导梁前支腿使架桥机主梁水平，将导梁前支腿与墩
帽固定。
步骤4 拆除前支腿与桥台或梁板的联结，利用前支腿上的吊挂
轮使前支腿纵移到导梁前支腿处，前支腿与墩顶锚固，收起导梁
前支腿，准备再次纵移主梁。
步骤5 再次利用中支腿上行走机构及运梁平车的动力将架桥机主
梁再次纵移到如图所示的位置，前支腿上部与主梁下弦锚固，中
支腿上部与主梁下弦锚固，顶高后支腿，解除运梁平车与主梁的
联结，此时，架桥机具备架梁条件。
步骤6 利用运梁平车将预备安装的梁运至架桥机后部，改用前
小车吊梁，用前小车和后平车携梁继续前移至后小车下部，改用
后小车吊梁，前小车和后小车携梁前移，运梁平车退回制梁场继
续运梁。
步骤7 前、后小车携梁前移至安装位置，下落，收起后支腿，横
移架桥机使梁就位。
※若安装边梁，重复步骤6，到位后将边梁临时放在墩顶上，用
边梁挂架起吊边梁，整机携梁横移到位。
设计
复核
审定比例
图号
第页共页洛-三高速公路工程N0.7合同段
中铁二十局集团第四工程有限公司架梁工艺流程图前起吊小车后起吊小车
中支腿后支腿运梁平车
前支腿导梁前支腿
页
部并
他联结
移至
桥机后
于中支
机构及
预定位
腿与墩
吊挂
起导梁
桥机主
固，中
