1序论——蛋白质与酶工程
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酶工程与蛋白质工程酶工程与蛋白质工程是现代生物技术的重要领域,它们以分子水平为基础,通过基因工程技术来改造酶和蛋白质。
酶工程主要研究酶的结构与功能关系以及酶催化反应机理,以此来优化酶的性质和功能;而蛋白质工程则致力于蛋白质的高表达、纯化和改造,进而实现分子水平的控制和利用。
两者交叉融合,共同应用于工业、医药、环保和食品等各个领域,促进了生物技术的发展和推广。
一、酶工程简介酶是一种生物催化剂,具有极高的选择性和催化效率。
酶工程旨在通过对酶的分子结构和催化机理的研究,优化酶的性质和功能,使其在特定条件下能够更高效地催化反应。
比如,通过改变酶的氨基酸序列,可以实现酶催化活性和稳定性的提高。
再比如,通过引入新的催化中心或变异剂,可以改变酶的底物特异性和反应特性。
这些优化方法可以显著提高酶的效率和选择性,为实现工业生产和科学研究提供了有效手段。
酶工程的具体步骤如下:1. 酶的筛选和分离。
这个步骤是酶工程的基础,通常需要从自然界中分离出能够催化特定反应的酶。
现代酶工程技术一般采用高通量筛选法,通过分子筛、高速离心、色谱法等方法来分离出酶的纯品。
2. 酶的分子结构分析。
这个步骤是为了了解酶的分子结构和功能关系,找到优化方案的基础。
目前,常用的酶的分析方法有X射线晶体学和核磁共振法。
3. 酶的基因工程改造。
通过基因工程技术,改变酶的氨基酸序列和三维结构,使其获得更高的活性和稳定性。
常用的方法有扩展、交换和修饰等方法。
4. 酶的活性和特性检测。
通过活性酶测定、底物特异性、pH和温度对酶催化反应的影响等方法来检测酶的改造效果。
5. 酶的产量提高。
通过使用表达载体、调节生产菌株的生长条件等方法,使酶的产量达到最高。
二、蛋白质工程简介蛋白质工程是将目标蛋白基因从生物体内放大、纯化、定位和表达,以达到高效率和高纯度的目的。
主要应用于药物研发、工业化生产、分子诊断和分子工业等领域,对于制造可溶性蛋白、表达蛋白、纯化蛋白和修饰蛋白等方面都发挥着重要作用。
蛋白质与酶工程名词解释一、名词解释1.蛋白质工程(Protein Engineering):以蛋白质分子的结构规律及其与生物功能的关系为基础,通过有控制的修饰和合成,对现有蛋白质加以定向改造,设计、构建并最终生产出性能比自然界存在的蛋白质更加优良、更加符合人类社会需要的新型蛋白质。
2.蛋白质分子设计(Protein Molecule Design):从分子、电子水平上,通过数据库等大量实验数据,结合现代量子化学方法,通过计算机图形学技术等设计新的分子。
3.亲和标记/亲和标记试剂(Affinity Labeling /reagent):试剂对蛋白质分子中被修饰部位的专一性修饰,为亲和标记或专一性的不可抑制作用。
(亲和标记试剂,不仅具有对被作用基团的专一性,而且具有对被作用部位的专一性,即试剂作用于被作用部位的某一基团,而不与被作用部位以外的同类基团发生作用。
这类修饰试剂也被称为位点专一性抑制剂)4.定向进化(Directed Evolution):在较短时间内完成漫长的自然进化过程(突变、重组和筛选),有效地改造蛋白质,使之适合于人类的需要,这种策略只针对特定的蛋白质的特定性质,因而被称为定向进化。
5.DNA改组技术(DNA Shuffling):是指DNA分子的体外重组,是基因在分子水平上进行有性重组,通过改变单个基因原有的核苷酸序列,创造新基因,并赋予表达产物以新功能。
DNA家族改组技术(DNA Family Shuffling):是以来自不同种属的同源基因作为重排对象进行DNA改组操作的技术。
该技术打破不同种、属间的遗传界限,利用同源基因之间的同源序列进行DNA改组6.超滤(Ultrafiltration):利用压力或离心力使溶液中的小分子物质通过超滤膜,而大分子则被截留,一次实验就可以将蛋白质混合物分为分子大小不同的两部分的分离方法。
7.亲和层析(Affinity Chromatography):是利用蛋白质与配体专一性识别并结合的特性而分离蛋白质的一种层析方法。
蛋白质与酶工程重点1.蛋白质工程:以蛋白质结构与功能的关系研究为基础,利用基因工程技术或化学修饰技术对现有蛋白质加以改造,组建成新型蛋白质的现代生物技术。
2.酶工程:利用酶、细胞器或细胞的特异催化功能,通过适当的反应器工业化生产人类所需产品或达到某种特殊目的的一门技术科学。
3.酶工程研究的主要内容:1)化学酶工程2)生物酶工程3)固定化酶与细胞4)酶反应器与传感器5)酶的非水相催化4.蛋白质的融合:将编码一种蛋白质的部分基因重组到另一种蛋白质基因上,或将不同蛋白质基因的片段组合在一起,经基因克隆和表达产生新的融合蛋白。
5.蛋白质的融合的作用:1)用于表达产物的分离纯化;2)提高表达产物的溶解度;3)提高蛋白质稳定性。
6.蛋白质晶体学:利用X射线衍射技术,进行生物大分子结构研究的工程,是结构生物学的一个重要组成部分。
8.定点突变:通过分子克隆手段定点的改变特定基因的局部核苷酸序列,通常被用来研究蛋白质的功能结构以及用于目的蛋白的改造。
10.酶工程的研究范围:1)各类自然酶的开发和生产;2)酶的分离纯化和鉴定技术;3)固定化技术;4)利用其他的生物技术领域交叉渗透;5)多酶反应器的研制和应用。
11.酶的稳定性和稳定化:(一)引起酶失活的原因:1)酶的活性中心一些特定氨基酸残基被化学修饰,使酶活性丧失(微观);2)外部环境的影响,酶活性中心出现空间障碍,使其不能与底物结合;3)酶的高级结构发生变化(螺旋、折叠发生变化);4)多肽链的断裂(很强烈);(二)酶的稳定化:1)低温保存(酶的本身不易变性,不易使其他酶把目的蛋白降解);2)添加盐类(高浓度(NH4)2SO4);3)添加底物辅酶等配体;4)添加强变性剂(保护一级结构,使用时可复活);5)结晶化。
12.微生物作为酶源的优越性:1)容易获得酶需要的酶类;2)容易获得高产菌株;3)生产周期短;4)生产成本低;5)生产易管理;6)提高微生物产酶的途径比较多。