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《仪器分析实验》讲义化学化工学院2012年09月目录葛根样品溶液的制备：将葛根药材用植物粉碎机粉碎，过60目筛，置于小烧杯中，于烘箱中60℃干燥2h，取出，置于干燥器中冷却备用。
(4)实验三火焰原子吸收法测定铜－标准曲线法 (5)实验四分子荧光光谱法测定二氯荧光素 (7)实验五氢化物发生－原子荧光法测定痕量硒 (9)实验六紫外吸收光谱法测定废水中的苯酚 (10)实验七气相色谱法测定混合苯的组成 (12)一、实验目的 (12)二、实验原理 (13)三、仪器与试剂 (13)四、实验步骤 (13)五、结果处理 (13)六、注意事项 (13)七、思考题 (14)实验八薄层色谱法在药物分析中的应用 (14)实验九库仑滴定法测定维生素C (17)实验十吹扫捕集/气相色谱-质谱法分析 (20)水中苯系物的组成 (20)实验十一ICP-OES法测定自来水中的Cu、Pb含量 (22)实验十二松果菊中组分的LC-MS分析 (24)1实验一离子色谱法测定环境水样中的无机阴离子一、实验目的1、掌握离子色谱法测定自来水中的阴离子的原理和方法2、熟悉ICS-90型离子色谱仪的正确使用方法二、实验原理离子色谱法是高效液相色谱的一种。
在高压泵的作用下，淋洗液通过定量管，将样品载带到离子交换分离柱中，依据各组分对离子交换剂亲合力的不同而得到分离。
亲和力越大，则保留值越大，出峰越晚。
淋洗液和分离后的各组分进入抑制器，可降低淋洗液的背景电导，增加样品离子的响应值，提高测定的灵敏度；然后通过电导池，测量出各组分的信号响应值；通过与标准溶液对照，用外标法计算出自来水中Cl-和SO42- 的浓度。
在离子色谱中，抑制器串联在分离柱与电导检测器之间，通过电解水产生H+。
其作用:(1) Na+, A-→H+, A- 提高待测离子的电导值，从而提高灵敏度。
(2) OH-, H+→H2O 降低淋洗液的背景电导值，以减少噪音。
ICS-90离子色谱仪由以下几个基本部分组成：淋洗液，高压输送泵，进样阀，分析柱，抑制器和电导池。
检验仪器分析技术及应用公司标准化编码 [QQX96QT-XQQB89Q8-NQQJ6Q8-MQM9N]一绪论临床检验技术技术分类：①临床化学检验分析技术（包括自动生化分析、干化学分析、血气分析、电解质分析、电泳分析）②临床免疫学检验分析技术③临床血液学检验和尿液检验分析技术（血细胞分析、血液凝固分析、血液流变分析、流式细胞分析、血红细胞沉降分析和尿液分析）④临床微生物学检验分析技术⑤临床分子生物学检验分析技术二．血细胞分析技术血液由血浆（55%）和血细胞（45%）组成。
（填空题）所谓血细胞计数主要是指计数单位容积中红细胞、白细胞和血小板的个数。
（填空题）白细胞被称为人体卫士，它可以防止外来微生物的侵害及其他感染。
血细胞计数有变阻脉冲法（简称变阻法）、光电计数法和激光计数法。
（大题）变阻法血细胞计数原理：血细胞是电的不良导体，将血细胞置于电解液中，由于细胞很小，一般不会影响电解液的导通程度。
但是如果构成电路的某一小段电解液截面很小，其尺度可与细胞直径相比拟，那么当有细胞浮游到此时，将明显增大整段电解液的等效电阻。
如果该电解液外接恒流源(不论负载阻值如何改变，均提供恒定不变的电流)，则此时电解液中两极间的电压是增大的，产生的电压脉冲信号与血细胞的电阻率成正比。
如果控制定量溶有血细胞的电解溶液，使其从小截面通过，也即使血细胞顺序通过小截面，则可得到一连串脉冲，对这些脉冲计数，就可求得血细胞数量。
由于各种血细胞直径不同，所以其电阻率也不同，所测得的脉冲幅度也不同，根据这一特点就可以对各种血细胞进行分类计数。
这就是变阻脉冲法原理。
（填空题）变阻脉冲法计数在大多数细胞计数器中是利用小孔管换能器装置实现的。
（填空题）脉冲的个数与通过小孔的细胞个数相当，脉冲的幅度与细胞体积成正比。
脉冲信号经过下列步骤得出细胞计数结果：放大，阈值调节，甄别，整形。
（填空题）体积不同的红细胞、白细胞、血小板，其产生的脉冲幅度也不同，排列序列以白细胞最大，红细胞次之，血小板最小。
第一章引言内容提要：仪器分析与化学分析的区别与联系、仪器分析方法的分类及发展趋势。
重点难点：仪器分析方法的分类一、仪器分析和化学分析分析化学是研究物质的组成、状态和结构的科学，它包括化学分析和仪器分析两大部分。
化学分析是指利用化学反应和它的计量关系来确定被测物质的组成和含量的一类分析方法。
测定时需使用化学试剂、天平和一些玻璃器皿。
仪器分析是以物质的物理和物理化学性质为基础建立起来的一种分析方法，测定时，常常需要使用比较复杂的仪器。
仪器分析的产生为分析化学带来革命性的变化，仪器分析是分析化学的发展方向。
仪器分析的特点（与化学分析比较）L级，甚至更低。
适合于微量、痕量和超痕量成分的测定。
g、灵敏度高，检出限量可降低：如样品用量由化学分析的mL、mg级降低到仪器分析的选择性好：很多的仪器分析方法可以通过选择或调整测定的条件，使共存的组分测定时，相互间不产生干扰。
操作简便，分析速度快，容易实现自动化。
仪器分析的特点（与化学分析比较）相对误差较大。
化学分析一般可用于常量和高含量成分分析，准确度较高，误差小于千分之几。
多数仪器分析相对误差较大，一般为5%，不适用于常量和高含量成分分析。
需要价格比较昂贵的专用仪器。
仪器分析与化学分析关系仪器分析与化学分析的区别不是绝对的，仪器分析是在化学分析基础上的发展。
不少仪器分析方法的原理，涉及到有关化学分析的基本理论；不少仪器分析方法，还必须与试样处理、分离及掩蔽等化学分析手段相结合，才能完成分析的全过程。
仪器分析有时还需要采用化学富集的方法提高灵敏度；有些仪器分析方法，如分光光度分析法，由于涉及大量的有机试剂和配合物化学等理论，所以在不少书籍中，把它列入化学分析。
应该指出，仪器分析本身不是一门独立的学科，而是多种仪器方法的组合。
可是这些仪器方法在化学学科中极其重要。
它们已不单纯地应用于分析的目的，而是广泛地应用于研究和解决各种化学理论和实际问题。
因此，将它们称为“化学分析中的仪器方法”更为确切。
仪器分析完整版(详细)第一章绪论1.仪器分析是以物质的物理组成或物理化学性质为基础，探求这些性质在分析过程中所产生分析信号与被分析物质组成的内在关系和规律，进而对其进行定性、定量、进行形态和机构分析的一类测定方法，由于这类方法的测定常用到各种比较贵重、精密的分析仪器，故称为仪器分析。
与化学分析相比，仪器分析具有取样量少、测定是、速度快、灵敏、准确和自动化程度高的显著特点，常用来测定相对含量低于1%的微量、痕量组分，是分析化学的主要发展方向。
2.仪器分析的特点：速度快、灵敏度高、重现性好、样品用量少、选择性高局限性：仪器装置复杂、相对误差较大3.精密度：是指在相同条件下对同一样品进行多次测评，各平行测定结果之间的符合程度。
4、灵敏度：仪器或方法的灵敏度是指被测组分在低浓度区，当浓度改变一个单位时所引起的测定信号的该变量，它受校正曲线的斜率和仪器设备本身精密度的限制。
5.准确度：是多次测定的平均值与真实值相符合的程度，用误差或相对误差来描述，其值越小准确度越高。
6．空白信号：当试样中没有待测组分时，仪器产生的信号。
它是由试样的溶剂、基体材质及共存组分引起的干扰信号，具有恒定性，可以通过空白实验扣除。
7.本底信号：通常将没有试样时，仪器所产生的信号主要是由随机噪声产生的信号。
它是由仪器本身产生的，具有随机性，难以消除，但可以通过增加平行测定次数等方法减小；、8.仪器分析法与化学分析法有何异同：相同点：①都属于分析化学②任务相同：定性和定量分析不同点：①与化学分析相比，仪器分析具有取样量少、测定快速、灵敏、准确和自动化程度高等特点②分析对象不同：化学分析是常量分析，而仪器分析是用来测定相对含量低于1%的微量、衡量组分，是分析化学的主要发展方向9.仪器分析主要有哪些分类：①光分析法：分为非光谱分析法和光谱法两类。
非光谱法：是不涉及物质内部能级跃迁的，通过测量光与物质相互作用时其散射、折射、衍射、干涉和偏振等性质的变化，从而建立起分析方法的一类光学分析法。
现代仪器分析技术第一章概论随着近代科学技术的进步，尤其是电子技术．计算机技术和激光技术的应用，分析化学的理论和测试技术也有了飞跃的发展。
应用机械、光学和电子技术的新物理分析方法也不断勇现，从而在分析化学范畴内形成了一个较完整的领域，称为现代仪器分析技术。
物质的许多物理性质与其化学组成．含量和结构之间存在着密切的内在联系。
因此，测量物质的物理性质，可以获得所需的定性定量分析以及结构信息。
从而为确定物质成分及其数量与结构，以至空间取向旋光异够等方面的研究，提供了强有力的手段。
分析化学从以化学分析为主的经典分析化学，发展到当今以仪器分析为主的现代分析化学，是由生产技术发展的需求所决定的，可以毫不夸张地说，一个国家所具备的分析化学水平，是衡量其科学技术水平的重要标志之一。
一．仪器分析法的分类通常将利用较特殊的仪器，以测量物质的物理性质为基础的一大类化学分析法，称为''现代仪器分析''。
1较特殊的仪器：1.1色谱分析仪器：薄层色谱扫描法、气相色谱法、高效液相色谱法、毛细管电永法气相色谱仪，主要对物质的各组分先行分离并同时进行定性、定量分析。
1.2光谱分析仪器：可见一紫外分光光度法、荧光分光光度法、原子吸收光谱法，等离子体发射波谱法，主要对物质的组分及元素组成进行分析。
1.3质谱分析仪器：高分辨磁质谱、飞行时间质谱、四级杆质谱、离子阱质谱，主要确定物质的分子量和结构。
1.4核磁共振波谱分析仪器：氢谱、碳谱，主要确定物质的分子结构。
1.5电子显微镜分析仪器：透射电子显微镜、扫描电子显微镜、原子力显微镜等，主要用于物质的晶体结构和微观形态分析。
1.6电化学分析仪器：电位分析、库伦分析、极谱分析等，主要用于无机离子的定量分析。
2物质的物理性质（一）（二）（三）（一）、有机分子1沸点低于400℃含碳、氢、氧、氮硫的低沸点有机物。
2沸点高于于400℃含碳、氢、氧、氮硫的高沸点有机物。
3含有多个不饱和双键和芳香族化合物。
一．绪论临床检验技术技术分类：①临床化学检验分析技术（包括自动生化分析、干化学分析、血气分析、电解质分析、电泳分析）②临床免疫学检验分析技术③临床血液学检验和尿液检验分析技术（血细胞分析、血液凝固分析、血液流变分析、流式细胞分析、血红细胞沉降分析和尿液分析）④临床微生物学检验分析技术⑤临床分子生物学检验分析技术二．血细胞分析技术血液由血浆（55%）和血细胞（45%）组成。
（填空题）所谓血细胞计数主要是指计数单位容积中红细胞、白细胞和血小板的个数。
（填空题）白细胞被称为人体卫士，它可以防止外来微生物的侵害及其他感染。
血细胞计数有变阻脉冲法（简称变阻法）、光电计数法和激光计数法。
（大题）变阻法血细胞计数原理：血细胞是电的不良导体，将血细胞置于电解液中，由于细胞很小，一般不会影响电解液的导通程度。
但是如果构成电路的某一小段电解液截面很小，其尺度可与细胞直径相比拟，那么当有细胞浮游到此时，将明显增大整段电解液的等效电阻。
如果该电解液外接恒流源(不论负载阻值如何改变，均提供恒定不变的电流)，则此时电解液中两极间的电压是增大的，产生的电压脉冲信号与血细胞的电阻率成正比。
如果控制定量溶有血细胞的电解溶液，使其从小截面通过，也即使血细胞顺序通过小截面，则可得到一连串脉冲，对这些脉冲计数，就可求得血细胞数量。
由于各种血细胞直径不同，所以其电阻率也不同，所测得的脉冲幅度也不同，根据这一特点就可以对各种血细胞进行分类计数。
这就是变阻脉冲法原理。
（填空题）变阻脉冲法计数在大多数细胞计数器中是利用小孔管换能器装置实现的。
（填空题）脉冲的个数与通过小孔的细胞个数相当，脉冲的幅度与细胞体积成正比。
脉冲信号经过下列步骤得出细胞计数结果：放大，阈值调节，甄别，整形。
（填空题）体积不同的红细胞、白细胞、血小板，其产生的脉冲幅度也不同，排列序列以白细胞最大，红细胞次之，血小板最小。
（简答）什么叫细胞直方图：以体积为横坐标，以细胞的相对数量为纵坐标。
把细胞在一个个很小的体积范围（小于2fld，又称通道，频道）内的数量分布情况表达出来，我们称之为直方图。
红细胞直方图（显示范围从24—360fl）血小板直方图（显示范围0—36fl）白细胞直方图（显示范围是30—450fl，在直方图上表现为3个白细胞亚群，35—90fl 范围的淋巴细胞群，可以包括淋巴细胞，91—160fl范围的单个核细胞群，可以包括单核细胞、幼稚细胞，161—450fl 范围的粒细胞群，可以包括嗜酸性细胞、嗜碱性细胞、中性粒细胞。
）白细胞直方图除显示分类外，还显示4个报警区域，如果某个报警区域里的计数值异常增多，就在此区域出现R 报警，R1为直方图上淋巴峰左侧区域有异常，可能有血小板凝块、巨大血小板、有核红细胞、不溶性红细胞和冷凝集素等因素的影响，R2为直方图上淋巴峰和单和峰之间的区域有异常，可能有异型淋巴细胞、幼稚淋巴细胞、浆细胞、嗜酸性细胞或嗜碱性细胞等因素的影响，R3为直方图上核峰和中性粒峰之间的区域有异常有不成熟粒细胞、嗜酸性粒细胞等因素的影响，R4为直方图上中性粒峰右侧区域有异常，粒细胞数量过多，Rm为以上区域2个或2个以上同时有异常。
存在着2个以上的细胞同时通过细孔的现象称为重合现象。
为了在物理上最大限度地减少重合现象，开发出了鞘流法，具体方法为：具体做法是用一毛细管对准小孔管,细胞混悬液从毛细管喷出,同时与四周流出的鞘液一起流过敏感区,保证细胞混悬液在中间形成单个排列的细胞液,四周被鞘液围绕.鞘流技术可应用于两种细胞计数原理:一为电阻抗原理,鞘流通过小孔的敏感区进行细胞计数,另一种为激光计数原理,细胞液流室较长,与激光垂直相交,激光光束对流经的每一个细胞照射后产生光散射,利用此原理进行细胞计数。
（大题）为控制细胞通过小孔时的精密度，除采用鞘流技术外，各厂家还采用了一系列相关技术：脉冲编辑，高精度体积分析，扫流技术，防反流装置VonBehrens感应器，延时计数。
定量装置中的特殊部件主要有负压泵、压力调节器、废液瓶等。
（大题）白细胞分类技术：1.容量、电导、光散射法(VCS)体积（V）：测量使用的是电阻抗原理。
电导法（C）：根据细胞壁能产生高频电流的性能采用高频电磁探针，测量细胞内部结构、细胞核和细胞浆的比例以及细胞内质粒的大小和密度。
光散射（S）：是根据细胞表面光散射的特点提供了注重细胞类型的鉴别方式，来自激光光源的单色光束直接进入计数池的敏感区，在10~70°时对每一个细胞进行扫描分析，提供了细胞结构，形态的光散射信息。
2.阻抗与射频联合法：此类仪器白细胞分类通过三个不同检测系统完成.a嗜酸性细胞检测系统b嗜碱性细胞检测系统c淋巴、单核、粒细胞（中性、嗜碱性、嗜酸性）检测系统3.光散射与细胞化学技术联合法4.多角度偏振光散射技术。
测量正常标本时，可以从这4个角度（0°<1-3>、10°<7-11>、90°垂直光散射<70-110>对白细胞进行测量。
同一种特定的程序自动存储和分析数据，将白细胞分为嗜酸性粒、中性粒、嗜碱性粒、淋巴和单核五种。
（大题）血红蛋白测量原理：血红蛋白的单位是g／100m1(新制是g／L)，临床检验时因难以从血液中将其分离出来而采用相对比色法进行间接测量。
用溶血剂将经过稀释的血液中的红细胞破坏，血红蛋白便溶解出来，再加入转化试剂进而转化为颜色稳定的氰化血红蛋白。
血红蛋白含量越高，它的颜色就越深，透光性就越差(或吸光性越强)。
用光电器件检测透射光强度，并与已定标的血红蛋白值相比较，即可得出血红蛋白含量。
常用的光路系统为了防止光散射和外来光干扰，均采用双波长法测量。
在血液样品中加入氰化钾，将生成氰化血红蛋白，这是一种颜色很稳定的物质。
它的光密度曲线在540nm处有一个吸收峰。
（填空）血样分析一般包括吸样、稀释、送样等过程。
三．流式细胞分析技术（简答题）流式细胞仪（FCM）：主要功能：可进行细胞多参量分析，包括细胞大小、形状、蛋白荧光、氧化还原状态、膜的结构、流动性、微黏性、膜电位、酶活性、钙离子含量、pH、染色质结构、DNA合成、碱基比例等；进行细胞表型分析；细胞分选、DNA含量分析以及细胞分化周期分析等。
FCM工作原理：将待测细胞染色后制成单细胞悬液。
用一定压力将待测样品压入流动室，不含细胞的磷酸缓冲液在高压下从鞘液管喷出，鞘液管入口方向与待测样品流成一定角度，这样，鞘液就能够包围着样品高速流动，组成一个圆形的流束，待测细胞在鞘液的包被下单行排列，依次通过监测区域。
流式细胞仪通常以激光作为激发光源。
经过聚焦整形后的光束，垂直照射在样品流上，被荧光染色的细胞在激光束的照射下产生散射光和激光荧光。
光散射信号在前向小角度进行检测，这种信号基本上反映了细胞体积的大小。
这些荧光信号的强度代表了所测细胞膜表面抗原的强度或其核内物质的浓度，经光电倍增管接收后可转换为电信号。
细胞的分选是通过分离含有单细胞的液滴而实现的。
流式细胞仪中所用的滤片有中性滤片、带通滤片、带阻滤片、长波通滤片、短波通滤片、长波通双色性反射片（填空题）影响流式细胞术分析的因素：细胞的荧光染色、激光光源的稳定性、细胞流速的稳定性、细胞悬液样品的影响（细胞黏连，团块常造成管道阻塞，重叠细胞可造成分析误差。
）流式细胞仪的组成：光学系统，液流系统，电子系统，计算机系统和数据转换处理系统。
（大题）流式细胞仪的临床应用：在免疫学中的应用（外周血T淋巴细胞亚群的测定，T淋巴细胞亚群用于器官移植后排斥反应的监测，肺泡灌洗液中T淋巴细胞亚群的测定，在艾滋病监测中的应用，细胞内染色和细胞因子的测定）；在血液病学中的应用。
四．血凝分析技术生物学方法：凝固法，即将凝血因子激活剂加入到待检血浆中，使血浆发生体外凝固，凝血仪连续记录血浆凝固过程中的一系列变化，并将这些变化信号转变成数据，用计算机收集、处理数据后得出检测结果。
（填空题）可分为三类：电流法、黏度法、光学法。
（判断题）凝血仪根据这种由于血液凝固而导致光强度的变化来判断凝固终点的方法称之为光学法。
（填空或判断题）散射比浊法：根据待检样品在凝固过程中散射光的变化来确定凝固终点的检测方法。
透射比浊法：根据待检样品在凝固过程中吸光度的变化来确定凝固终点的检测方法。
黏度法：在待检样品中加入小铁珠，利用变化的磁场使小铁珠产生运动，随着血浆的凝固，血浆粘稠度增加，小铁珠的运动强度逐渐减弱，仪器根据小铁珠运动强度的变化来确定凝固终点。
生物化学方法是以酶学方法为基础的直接定量法，其优点是用酶学方法直接定量；测定结果准确；重复性好；便于自动化；标准化；所需样品量小。
五．血液流变学分析技术影响血液流变特性因素：红细胞的特性、白细胞的变形性、血小板的聚集性、纤维蛋白原浓度等血液流变特性：红细胞聚集性，红细胞变形性，血液黏度（全血黏度<与流变场中切变率有一定关系>、运动黏度、相对黏度、比黏度、还原黏度）。
血液黏度的测量是其中最重要的指标。
测量血液黏度的仪器目前普遍应用的是毛细管黏度计及回转锥板式黏度计。
毛细管法测血黏度的理论依据是泊肃叶定律。
血液黏度的影响因素：血液中细胞因素的影响<红细胞对血液黏度的影响（红细胞压积是主要影响因素），白细胞对血液黏度的影响，血小板对血液黏度的影响>；血浆血清黏度对血液黏度的影响；温度对血液黏度的影响；酸碱度及渗透压对血液黏度的影响；血液流速对血液黏度的影响；血管对血液黏度的影响；其他如性别，新生儿，运动，时间，季节等。
六．尿液分析技术尿液分析仪是某些化学成分含量的专用自动化仪器，可分为湿式和干式化学系统两大类。
自动尿液分析的原理和方法：（填空或选择题）按测试项目分类：8项尿液分析仪包括尿蛋白（PRO）、尿糖(GLU)、尿PH（PH）、尿酮体（KET）、尿胆红素(BIL)、尿胆原(URO,UBG)、尿潜血(ERY)、尿亚硝酸盐(NTT)。
9项尿液分析仪包括尿8项+尿白细胞（WBC或LUE）。
10项尿液分析仪包括尿8项+尿白细胞、尿比重。
11项尿液分析仪包括尿8项+尿白细胞、尿比重和颜色或维生素C。
12项尿液分析仪包括尿8项+尿白细胞、尿比重、尿液颜色和浊度。
（大题）尿液干化学分析仪的测试原理：多联试剂带的多层膜结构：1尼龙膜<保护作用>2绒制层<过碘酸盐试剂区>3吸水层<使尿均匀快速浸入抑制流到相邻反应区>4塑料片<支持体>空白块是为了消除尿液本身的颜色及试剂块分布的状态不均等所产生测试误差，提高测量准确度而设置的。
原理：当把浸了尿液的试剂带放入分析仪的试剂带传送带槽内，传送系统将试剂带传送到检测器下面进行扫描时，实际带上已经产生化学反应的各种试剂块被光源照射，其反射光被检测器吸收。
