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附件2人感染高致病性禽流感标本采集及实验室检测技术方案为及时、科学地采集和运送人禽流感病例或疑似污染环境等各种类型的标本，规范实验室检测程序和检测方法，提高检测质量，明确诊断或开展相关科学研究，特制定本方案。
1 采集对象1.1 人禽流感医学观察病例、疑似病例、临床诊断病例及需要进一步研究的确诊病例。
1.2 其它需要进行人禽流感诊断或排除者。
1.3 需要采集的环境标本。
2 采集要求2.1 从事人禽流感检测标本采集的技术人员必须经过生物安全培训和具备相应的实验技能。
在标本采集过程中，采样人员参照（附件5）规定的防护措施进行安全防护。
2.2 住院病例的标本由所在医院医护人员在当地疾病预防控制机构专业人员指导下采集。
2.3 标本采集具体种类和数量由现场工作组确定。
2.4 密切接触者标本由当地疾病预防控制机构负责采集。
2.5 根据实验室检测工作的需要，结合病程再次采样。
3 标本种类每个病例应尽可能同时采集上、下呼吸道标本；需要排除人禽流感的死亡病例则依据《传染病病人或疑似传染病病人尸体解剖查验规定》（中华人民共和国卫生部令第43号）的规定采集尸体标本，没有条件进行尸体解剖的，可采集呼吸道灌洗液或经皮穿刺采集肺组织标本。
3.1 上呼吸道标本：包括咽拭子、鼻拭子、鼻咽抽取物、咽漱液、深咳痰液。
最佳采集时间为发病后3天内。
3.2 下呼吸道标本：包括呼吸道抽取物、支气管灌洗液、肺组织活检标本。
3.3 尸检标本：病人死亡后应依法尽早进行解剖，在严格按照生物安全防护的条件下，进行尸检，主要采集肺、气管组织标本，条件允许下也可采集肝、肾、脾、心脏、脑、淋巴结等组织标本。
3.4 血清标本：每一病例必须采集血清标本，须采集急性期、恢复期双份血清。
第一份血清应尽早（最好在发病后7天内）采集，第二份血清应在发病后1第3～4周采集。
采集量要求5ml，以空腹血为佳，建议使用真空采血管。
3.5 其它标本：如果病例有腹泻症状，可在发病后采集粪便标本；有胸水者可采集胸水标本。
一、目的确保疑似禽流感病例标本得到有效的检测，为禽流感病毒感染提供可靠的实验室诊断依据。
国家流感中心实验室按照规定方法对疑似禽流感感染病例的标本进行处理和检测，使疑似禽流感病例标本的处理和检测得到有效的控制。
保证检测结果的快速性和可靠性，同时确保样本不被污染和污染环境。
二、范围适用于中国国家流感中心所有技术人员进行疑似禽流感病例标本的检测。
三、背景本SOP 是为配合疑似H5N1禽流感感染病例的诊断而制定，确保禽流感病例诊断的快速性和可靠性，同时要求实验操作过程中标本不被污染或污染环境。
四、程序（一）生物安全要求分装标本、裂解病毒需在BSL-3级实验室操作；核酸提取可在BSL-2级实验室生物安全柜内操作；PCR 反应体系配制在体系配制区；PCR 产物检测在电泳区操作。
要遵守相应生物安全规定（见“生物安全个人防护SOP ”）。
（二）材料及仪器1．提RNA Kit ：QIAGEN RNeasy Mini Kit （catalog #74104）2．β－巯基乙醇（SIGMA β-Mercaptoethanol Lot 062K0115）3．70％乙醇4．RT-PCR Kit ：QIAGEN One step RT-PCR Kit （catalog #210212）5．Promega RNasin Ribonuclease Inhibitor （catalog #N2111）6．检测引物：Forword and Reverse Primers （均为10μM ），序列如下：标准操作规程（SOP ）——PCR 检测类型序列甲型通用FluA-M-F173FluA-M-R3825’-GAC CAA TCC TGT CAC CTC TGA C-3’5’-AGC TGA GTG CGA CCT CCT TAG-3’H5 H5HA-F920H5HA-R11385’-GCC ATT CCA CAA CAT ACA CCC-3’5’-CTC CCC TGC TCA TTG CTA TG-3’N1 AN1-F550AN1-R11645’-TTG CTT GGT CAG CAA GTG C-3’5’-CAG TCA CAC CAT TTG GA TCC-3’H7 H7HA-F245H7HA-R4285’-CCC AAT GTG AYC AAT TCC T-3’5’-GCT CCA TTR GTT CTT ATT CC-3’N7 N7-F1126N7-R14075’-ATG YTG AAR ATA CCT AAT GC-3’5’-GTA TTN GAT YTG TGC CCC ATC-3’H9 H9HA-F426H9HA-R8085’-GAA TCC AGA TCT TTC CAG AC-3’5’-CCA TAC CAT GGG GCA ATT AG-3’N2AN2-F1121AN2-R14015’-CGC TAC GGT TAT GAG ACT TTC AG-3’5’-ATA TTC GCC CCA TCA GGC CAT GAG-3’ 7．Axygen 1.5mL离心管，货号：MCT-150-C8．Axygen 0.2mL PCR管，货号：PCR-02-C9．Axygen 10μL，100μL，200μL，1000μL带滤芯枪头10．BIOHIT 10μL，100μL，200μL，1000μL加样器11．可调转速14K离心机：Eppendorf 5417R12．旋涡混合器：QL-901（国产）13．生物安全柜：LABCONCO（CLASS11）14．PCR仪：Biometra15．琼脂糖：Biowest Agarose Distributed by Gene Tech（Shanghai）Company Limited Lot No. 10168516．核酸染料：Gold View，北京赛百盛基因技术有限公司，cat# HGV－1。
人感染H7N9禽流感病毒核酸检测实验室生物安全管理为规范人感染H7N9禽流感病毒核酸实验室检验活动，强化生物安全管理，防止内部感染和交叉感染，该文参照《病原微生物实验室生物安全管理条例》（国务院424号令）等有关规定，结合实际情况，从检测室布局到样品处理分析等多方面阐述人感染H7N9禽流感病毒核酸检测生物安全管理要求，以供相关人员参考。
标签：H7N9；核酸检测；生物安全H7N9禽流感病毒属于甲型流感病毒中的一种亚型，可引发人类急性呼吸道感染，病情进展到后期时可并发多种严重疾病，传染源尚未确切证实，可能为携带H7N9禽流感病毒的禽类（该实验室从确诊病例密切接触禽类的分泌物和排泄物中检出多株H7N9阳性病毒），传播途径可能是经呼吸道、密切接触感染禽类的分泌物或排泄物等途径传播，或通过接触病毒污染的环境传播至人，不排除有限的非持续的人传人[1]。
我国自从2013年3月31日在上海和安徽两地发现全球首次病例以来，内地共有19个省份累计报告H7N9病例1 000余例，死亡逾400例，病死率达高40%左右[2]。
人感染H7N9禽流感危害程度大，重症患者预后差、病死率高，且病毒可能发生变异形成人际间的传播能力，其危害水平将极速增加[3]。
在传染源和传播途径等诸多因素不能明确的情况下，对其生物安全管理的若干问题进行初步探讨，对强化生物安全，防范实验室内部感染和交叉感染，具有重要意义。
1 实验室生物安全管理内容1.1 危害评估实验室开展人感染H7N9禽流感病毒实验室核酸检测之前必须组织专业人员进行危险评估，基本内容应包括：标本中可能的致病生物因子、传播方式、感染性与致病性、对各种物理化学因子的敏感性、人体剂量反应和危害程度，以及实验室的功能定位、涉及的人员、具体操作方法和过程等。
根据评估结果确定相应的防护级别。
1.2 生物安全管理综合措施加强管理，制定并健全与之相适应的生物安全管理制度，应包括：实验室安保和准入、标准化操作规程、仪器使用和维护、实验室人员培训和考核、样本采集运输与保存、实验室消毒和医疗废弃物处理、阳性标本保存和处理、意外事故处理和报告、实验室人员健康体检等。
人感染H7N9禽流感“监测病例”报告方法第一篇：人感染H7N9禽流感“监测病例”报告方法人感染H7N9禽流感“监测病例”报告方法一、人感染H7N9监测病例定义监测病例要求同时具备以下4项条件：（1）发热(腋下体温≥38℃)；（2）具有肺炎的影像学特征；（3）发病早期白细胞总数降低或正常,或淋巴细胞分类计数减少；（4）不能从临床或实验室角度诊断为常见病原所致肺炎。
二、发现与报告各级各类医疗机构发现符合人感染H7N9禽流感监测定义的病例后，须于24小时内进行网络直报。
报告疾病名称选择“其他传染病”中“H7N9监测病例”。
尚不具备网络直报条件的医疗机构，应当于24小时内以最快的通讯方式（电话、传真等）向当地县级疾病预防控制机构报告，并寄出传染病报告卡，县级疾病预防控制机构在接到报告后立即进行网络直报。
“H7N9监测病例”病例类型选择为“临床诊断”。
“H7N9监测病例”一旦诊断为“人感染H7N9禽流感疑似病例与确诊病例”，要求对相应的报告卡进行订正。
第二篇：医院感染病例监测报告制度医院感染病例监测报告制度1、院感办应对住院病人开展医院感染病例感染监测,以掌握本院医院感染发病特点,为医院感染控制提供科学依据。
2、医院感染病例由临床主管医生按照《医院感染诊断标准》进行初步诊断,及时进行病原微生物检测,并且保证感染病例病原微生物生物检测率>50%。
科室监控医生认真如实记录本科室抗菌药物使用情况、医院感染登记表以及相关消毒情况。
3、诊断明确的感染病例,应于24小时内认真填报“医院感染病例报告卡”报告院感办,同时在出院病历首页院内感染名称栏内写医院感染疾病名称。
4、感控科应每月月进行归类整理,并将结果反馈相关部门。
5、确诊为传染病的医院感染病例,应按《中华人民共和国传染病防治法》的有关规定进行报告。
6、临床医护人员发现有医院感染流行趋势时,立即向院感办报告,积极调查发病原因,寻找感染源和途径,控制蔓延,采取有效控制措施;确定为医院感染暴发时,按照《医院感染暴发报告及处置管理规范》进行上报。
《人感染H7N9禽流感医院感染预防与控制技术指南(2021年版)》人感染h7n9禽流感是由h7n9亚型禽流感病毒引起的急性呼吸道传染病。
自2021年2月以来,上海市、安徽省、江苏省先后发生不明原因重症肺炎病例,其中确诊人感染h7n9禽流感3例,2例死亡。
3例均为散发病例,目前尚未发现3例病例间有流行病学关联。
一、病原学禽流感病毒属于正黏病毒科甲型流感病毒属于。
禽甲型流感病毒颗粒呈圆形多形性,其中球形直径80~120nm,存有囊膜。
基因组为分节段单股负链rna。
依据其外膜血凝素(h)和神经氨酸酶(n)蛋白抗原性相同,目前可以分成16个h亚型(h1~h1⑴和9个n亚型(n1~n9)。
甲型流感病毒除病毒感染禽外,还可以病毒感染人、猪、马、水貂和海洋哺乳动物。
可以病毒感染人的禽流感病毒亚型为h5n1、h9n2、h7n7、h7n2、h7n3,此次报导的为人病毒感染h7n9禽流感病毒。
该病毒为新型重配病毒,其内部基因源自于h9n2禽流感病毒。
禽流感病毒广泛对热脆弱,对低温抵抗力较强,65℃冷却30分钟或煮熟(100℃)2分钟以上可以灭活。
病毒在较低温度粪便中可以存活1周,在4℃水中可以存活1个月,对酸性环境存有一定抵抗力,在ph4.0的条件下也具备一定的存活能力。
在存有甘油存有的情况下可以维持活力1年以上。
二、流行病学(一)传染源。
目前尚不明晰,根据以往经验及本次病例流行病学调查,推断可能将为随身携带h7n9禽流感病毒的禽类及其分泌物或排泄物。
(二)传播途径。
经呼吸道传播,也可通过密切接触感染的禽类分泌物或排泄物等被感染,直接接触病毒也可被感染。
现尚无人与人之间传播的确切证据。
(三)极易感人群。
目前未有清楚证据表明人类对h7n9禽流感病毒极易感。
现有诊断病例均为****。
(四)高危人群。
现阶段主要是从事禽类养殖、销售、宰杀、加工业者,以及在发病前1周内接触过禽类者。
三、临床表现根据流感的潜伏期及现有h7n9禽流感病毒感染病例的调查结果,潜伏期一般为7天以内。
一、目的确保禽流感疑似病例标本得到有效的检测，为禽流感感染提供可靠的实验室诊断依据。
国家流感中心实验室按照规定方法对疑似禽流感感染病例的标本进行处理和检测，使疑似禽流感病例标本的处理和检测得到有效的控制。
保证检测结果的快速性和可靠性，同时确保样本不被污染和污染环境。
二、范围适用于中国国家流感中心操作人员进行疑似禽流感病例标本的检测。
三、定义实时荧光定量（Real-time ）RT-PCR 技术，是指在RT-PCR 反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号积累实时监测整个RT-PCR 进程，最后通过标准曲线对未知模板进行定量或定性分析的方法。
如下是几个在结果判断中涉及到的几个概念：图1：Real-Time RT-PCR 反应标准曲线1．阈值（threshold ）：PCR 反应前15个循环荧光信号作为荧光本底信号，荧光阈值的缺省设置是6～15个循环荧光信号标准偏差的10倍。
标准操作规程（SOP ）——光定量PCR2．基线（baseline）：指PCR反应指数扩增前平均本底荧光信号值，通常取6～15个循环的平均荧光信号值。
3．Ct值：C代表Cycle，t代表threshold。
Ct值是指反应管内的荧光信号到达设定的阈值时所经历的循环数。
4．Ct值与起始模板的关系：每个模板的Ct值与该模板的起始拷贝数的对数存在线性关系，起始拷贝数越多，Ct值越小。
利用已知起始拷贝数的标准品可做出标准曲线，其中横坐标代表起始拷贝数的对数，纵坐标代表Ct值。
因此，只要获得未知样品的Ct值，可从标准曲线上计算出该样品的起始拷贝数。
四、背景本SOP是为配合疑似禽流感感染病例的诊断而制定，确保禽流感病例诊断的快速性和可靠性，同时要求实验操作过程中标本不被污染或污染环境。
五、程序（一）生物安全要求标本裂解在BLS-3实验室，其余操作部分在具有规范分区（体系配制区、核酸提取区和检测分析区）的BSL-2级实验室进行并遵守相应生物安全规定。
医院人感染H7N9禽流感病毒核酸检测标准操作程序一、目的确保人感染H7N9禽流感病毒核酸检测过程标准化、规化，降低人为不规操作对检测结果造成的影响，保证结果的准确性和可重复性。
二、适用围医疗机构临床基因扩增检验实验室按照《关于医院开展人感染H7N9禽流感病毒核酸检测有关工作的通知》（卫办医政函〔2013〕383号）和《关于做好医疗机构人感染H7N9禽流感检测试剂供给保障工作的通知》（卫发明电〔2013〕29号）有关要求，使用国家疾病预防控制中心制备或商品化试剂盒开展人感染H7N9禽流感病毒核酸检测工作。
三、样本采集、运送和保存尽量采集病例发病早期的呼吸道样本(上呼吸道样本包括咽拭子、鼻拭子、鼻咽抽取物、咽漱液和鼻洗液, 下呼吸道样本包括痰液、气管吸取物、肺洗液、肺组织等)。
可将鼻、咽拭子收集于同一采样管中，以便提高检出率。
患者有下呼吸道样本时，应优先采集。
根据试剂说明书对样本采集方法有关要求，制订样本采集标准操作程序（SOP），并组织样本采集人员进行培训及考核。
样本的采集应当严格按照SOP进行。
样本采集后，按照《人间传染病的病原微生物名录》中高致病性禽流感病毒的相关规定进行包装，用密封容器立即送往实验室。
若气温高时，需放入冰块降温。
样本抵达实验室后，应尽快进行检测，24小时能检测的样本可置于2～8℃暂时保存，24小时无法检测的样本则应置于≤-70℃状态保存。
如无-70℃保存条件时，可于-20℃冰箱暂存。
样本避免反复冻融。
样本采集、处理、运输及保存不当时，可因病毒RNA降解出现假阴性结果，也可因为样本“污染”出现假阳性结果。
四、PCR检测（一）样本处理样本的核酸提取应当在样本处理区进行。
按所采用的商品化试剂盒说明书要求，取适量待检样本、阳性及阴性对照进行核酸提取。
样本应尽可能新鲜，提取过程应严防RNA酶污染及操作不当导致的RNA降解。
提取过程如涉及离心步骤，应采用低温冷冻离心机；在生物安全柜进行加样、提取过程中，为防止RNA降解，可将试管架置于托盘平铺的碎冰上。
提取好的RNA应及时用于检测，否则应当-70℃保存。
如无-70℃保存条件，可于-20℃冰箱暂存。
（二）试剂准备试剂准备应当在试剂准备区进行。
根据所用的试剂盒，样本可进行甲型流感病毒核酸、禽流感H7亚型或H7N9病毒核酸的检测。
试剂的配制按所用商品化试剂盒说明书进行。
除酶混合物外，其它试剂在使用前应当在室温充分复融，混匀并瞬时低速离心。
反应液分装时尽量避免产生气泡，上机前注意检查各反应管是否盖紧，以免管溶液泄露污染仪器。
分装有扩增反应液的反应管应当扣盖或装入密实袋再转移至样本处理区。
（三）加样加样应当在样本处理区进行。
加样时应当使样品完全落入反应液中，不应有样品粘附于管壁上，加样后应尽快盖紧管盖。
按试剂、仪器说明书完成加样和PCR反应管准备。
（四）PCR扩增检测PCR扩增检测在扩增区进行。
待检PCR管转移至扩增区，按顺序置于PCR仪上，编辑样本信息，按试剂和仪器说明书设定循环参数。
（五）结果分析根据所用试剂盒说明书设置基线值（baseline）。
荧光阈值（threshold）设定以阈值线刚好超过阴性对照品扩增曲线（无规则的噪音线）的最高点为原则，且Ct值应大于所设置的扩增循环数（或显示为undet）。
使用仪器配套软件自动分析结果。
（六）质量控制检测过程对可能出现的假阳性和假阴性进行质量控制，除了检测商品试剂盒所提供阳性和阴性对照外，每次临床样本检测时，至少应当有1份弱阳性和3份阴性质控样本（多份阴性质控样本设置对实验室“污染”所致假阳性的监控更为有效），随机放在所检测标本的中间。
弱阳性质控样本可为检测阳性的灭活稀释后保存的临床样本、灭活病毒或假病毒颗粒等，如所采用的商品化试剂盒有“标”控制假阴性，或弱阳性质控样本来源困难，可暂不设弱阳性质控。
阴性质控样本采用标本采集管溶液即可。
质控样本应与临床标本同等对待，参与样本核酸提取和扩增检测全过程。
试剂盒中的阳性和阴性对照用于判断实验室的有效性，按试剂盒说明书进行。
（七）实验结果的判定与解释。
按照试剂盒说明书进行。
对于出现弱阳性结果的样本应进行重复检测，并注意与可能的实验室轻度或样本交叉“污染”所致假阳性结果区别。
五、检测结果报告按照试剂盒说明书进行。
六、其它注意事项（一）人感染H7N9禽流感病毒实验室活动、样本采集和运输按照《人间传染的病原微生物名录》中高致病性禽流感病毒进行管理。
从事人感染禽流感检测的技术人员必须经过生物安全培训并具备相应的实验技能，在检测过程中必须采取生物安全防护措施（使用眼罩、N95型口罩等）。
样本核酸提取必须在Ⅱ级生物安全实验室，经过年检合格的二级生物安全柜进行。
实验室应具有良好的通风。
（二）注意仪器设备的日常和定期维护，加样器、扩增仪和温育设备应进行定期校准。
试剂盒及一次性使用的无DNA酶和RNA酶PCR反应管、离心管、带滤芯吸头等应进行每批质检。
（三）实验应严格分区操作；各区物品、工作服等均应当专区专用，不得交叉使用。
实验后应及时清洁工作台，以防污染。
（四）每批实验室后，可采取实验室通风、10%次氯酸钠溶液擦洗地台面、紫外照射等措施，消除可能存在的扩增产物气溶胶污染。
（五）使用中国疾控中心制备试剂开展检测工作时，可参考相应试剂盒说明书（见附件1、2）有关要求。
附件：1.H7N9亚型禽流感病毒RNA检测试剂盒（荧光PCR法）说明书2.H7N9禽流感病毒核酸检测试剂盒（PCR-荧光探针法）说明书H7N9亚型禽流感病毒RNA检测试剂盒（荧光PCR法）说明书【产品名称】通用名称：H7N9亚型禽流感病毒RNA检测试剂盒（荧光PCR法）英文名称：Diagnostic Kit for H7N9 subtype avian flu virus RNA（Fluorescence PCR）【包装规格】48人份/盒。
【预期用途】本试剂用于对咽拭子样本中H7N9亚型禽流感病毒RNA 进行定性检测，用于H7N9禽流感病毒感染的辅助诊断及流行病学监控。
【检验原理】根据荧光PCR技术原理，针对H7N9亚型禽流感病毒的HA基因和NA基因设计特异性引物和Taqman 探针，通过荧光PCR检测仪进行检测，从而实现对H7N9亚型禽流感病毒RNA的定性检测。
试剂盒以正常人上皮细胞中广泛存在的核糖核酸酶P（RNase P）的mRNA为正常人体细胞对照，对提取和检测过程进行监控。
【主要组成成分】本品各组成成分均不得与其他产品或不同批号产品中的相应组成成分进行互换。
本品不包含，但对试验必须的设备和试剂：生物安全柜、台式离心机、旋涡震荡器、拭子、采样管、无菌病毒采样液、1.5 ml无核酸酶的离心管、全自动荧光PCR检测仪专用PCR扩增管和核酸分离试剂盒(硅胶膜吸附法，北京金豪制药股份有限公司，Cat：BJH101)。
【储存条件及有效期】-20℃冷冻保存，有效期2个月，阳性对照反复冻融次数不得超过5次。
【适用仪器】RG3000、LightCycler、ABI Prism 7500、ABI Prism 7000型全自动荧光PCR检测仪。
【样本要求】1. 样本类型：咽拭子。
推荐使用金豪公司生产的微生物采样及运送管（12人份/盒）。
2. 拭子、采样管和保存液：2.1拭子选择：应使用头部为合成纤维（例如，聚酯纤维），杆部为铝或塑料的拭子。
2.2采样管：外螺旋口、耐-70℃冻存，可容纳3 ml病毒采样液。
2.3无菌病毒采样液：应含有蛋白质稳定剂，阻止细菌和真菌生产的抗生素，缓冲液，经无菌处理。
3.样本采集、运输和保存：由于H7N9亚型禽流感病毒为呼吸道传播病毒，有关生物安全应按照“《人间传染的病原微生物名录》”中高致病性禽流感病毒进行管理。
3.1采集：采集病人发病3日的咽拭子标本，用于病原检测。
用微生物采样及运送管的采样棉签，适度用力拭抹咽后壁和两侧扁桃体部位，应避免触及舌部；迅速将棉签放入装有3ml保存液的15ml外螺旋盖采样管中，在靠近顶端处折断棉签杆，旋紧管盖并密封，以防干燥，外表贴上带有唯一识别的标签。
4℃暂存并在48小时送达实验室。
3.2保存和运输：新鲜采集样本应在4℃条件下48小时运送到检测实验室。
保存样本可在-20℃以下低温冷冻保藏，需长期保存的标本存于-70℃冰箱。
冷冻样本应在冷冻条件下送至实验室。
运输时在包装箱填充吸水材料，运输过程中保持标本采集管直立状态，不能倾斜。
样本送至实验室后，立即进行处理和分装，避免反复冻融。
临床样本保存在4℃不能超过4天。
4.咽拭子标本的处理咽拭子要在标本保存液中充分搅动（至少 40 下），以洗脱拭子上粘附的病毒及含有病毒的细胞等，用于病毒分离时，需要冻融一次（防止多次冻融），使细胞破裂，释放病毒颗粒。
然后在4℃条件下，10000rpm离心20分钟，用上清接种细胞或直接提取RNA。
如果发现有细菌污染，须用滤器过滤除菌。
【检验方法】1. 核酸提取：取200μl咽拭子样本进行核酸提取。
采用北京金豪制药股份有限公司的核酸分离试剂盒 (硅胶膜吸附法)，该试剂盒可用于对呼吸道悬浮液样本中的病毒RNA提取，并按试剂盒说明书要求操作。
本品的阳性对照和阴性对照均参与核酸提取。
1.1. 准备及注意事项：1.1.1 分别在洗液A瓶和洗液B瓶中加入16ml和60ml 无水乙醇，颠倒充分混匀，并在瓶身上加以标识。
1.1.2 吸取所需的洗脱液，加至一无核酸酶的eppendorf管中，于70℃预热。
1.1.3 冷冻样本应室温融化，轻微震荡混匀后使用。
1.1.4 区分操作中的离心设置（rpm和g），本产品操作过程均为室温离心。
1.1.5 助沉剂在低温保存时可能呈胶状，吹打混匀即可使用。
1.2. 样本裂解及核酸吸附1.2.1 在1.5ml无核酸酶的离心管中加入10μl助沉剂和400μl裂解液，加入200μl待处理样本，剧烈震荡2分钟，室温静置10分钟。
注：如样本体积小于或大于200μl，需按比例改变助沉剂、裂解液以及无水乙醇体积。
体积大于400μl样本应分多次进行处理。
1.2.2 加入480μl无水乙醇，颠倒混匀，吸取600μl裂解混合物转移到核酸吸附柱中。
注：如样本体积小于或大于200μl，需按比例改变乙醇用量。
1.2.3 3500g离心2分钟，取下套管，倒掉套管中的液体。
将剩余裂解混合物转移至核酸吸附柱，重新离心一次，弃套管中的液体。
1.2.4 将核酸吸附柱重新装入套管，6000g离心1分钟，倒掉套管中的液体。
1.3. 核酸纯化1.3.1 将核酸吸附柱重新装入套管，在核酸吸附柱中加入500μl洗液A，6000g离心1分钟，将核酸吸附柱装入一个干净套管中。
1.3.2 在核酸吸附柱中加入500μl洗液B，静置1分钟，6000g离心1分钟。
1.3.3 倒掉套管中的液体，将核酸吸附柱重新装入套管。
