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植物细胞骨架的光学显微镜观察
首先，我们需要准备植物细胞标本。
可以选择一片老化或短时处理的叶片或根尖作为实验材料。
将其取下并迅速固定在伊红溶液中，避免细胞变形。
接下来，需要进行细胞固定和染色。
将固定好的细胞标本移至PBS （磷酸缓冲盐溶液）中进行洗涤，以去除残余的伊红溶液。
然后，在细胞中加入透明质酸，将其中和离子对骨架的结合，使骨架暴露出来。
接着，利用荧光染色剂如荧光素-鲍曼氏染液或Phalloidin染液来染色微丝以及微管。
准备好细胞标本后，我们可以将其放置在显微镜下进行观察。
在显微镜镜头下，可以看到细胞内微丝和微管形成的骨架结构。
微丝主要分布在细胞质内，形成一种网状结构，其中包括原生质流动的微丝束。
而微管主要分布在细胞中心，形成一个网络，并且辐放到细胞外围。
进一步观察时，可以调节显微镜的焦距和光源强度，以获得更清晰的图像。
可以使用高倍目镜观察细胞骨架的细节，并使用显微镜移动台来调整视野。
此外，还可以利用荧光显微镜技术，通过筛选不同波长的荧光滤光片，进一步突出特定荧光标记的细胞结构。
通过光学显微镜观察植物细胞骨架，可以更深入地了解细胞结构和功能。
通过观察微丝和微管的分布和连通性，可以了解细胞形态的维持和改变，细胞分裂以及细胞运动等生理过程。
此外，还可以观察植物细胞骨架在应对外界环境刺激，如生物逆境和激素信号的响应中的作用。
这些研究可以为揭示细胞生物学的本质和发展新的疾病治疗方法提供重要的参考。
第1篇一、实验目的1. 理解细胞骨架的基本概念及其在细胞生物学中的重要性。
2. 掌握使用荧光显微镜观察细胞骨架的方法和技巧。
3. 认识细胞骨架的主要组成成分，包括微丝、微管和中间纤维。
4. 分析细胞骨架在不同细胞类型和生理状态下的形态和分布。
二、实验原理细胞骨架是真核细胞内由微丝、微管和中间纤维组成的网状结构，负责维持细胞形态、细胞运动、物质运输、信号传导等重要功能。
微丝主要由肌动蛋白组成，微管主要由α-和β-微管蛋白组成，而中间纤维则由多种蛋白质组成。
细胞骨架的结构和动态变化对细胞的正常生理功能至关重要。
三、实验材料与仪器材料：1. 植物细胞样本（如洋葱鳞片叶表皮细胞）2. 动物细胞样本（如小鼠成纤维细胞）3. 荧光标记的细胞骨架蛋白抗体4. 抗荧光标记的抗体5. 胶体金标记的抗体6. 封片剂仪器：1. 荧光显微镜2. 激光共聚焦显微镜3. 冷冻切片机4. 液氮5. 恒温培养箱6. 电子显微镜四、实验步骤1. 样本制备：- 植物细胞样本：取洋葱鳞片叶表皮细胞，用2%的戊二醛固定，进行冷冻切片。
- 动物细胞样本：培养小鼠成纤维细胞，用2%的戊二醛固定，进行冷冻切片。
2. 荧光标记：- 将切片置于含有荧光标记的细胞骨架蛋白抗体的溶液中，室温孵育一段时间。
- 洗涤切片，去除未结合的抗体。
3. 抗荧光标记抗体：- 将切片置于含有抗荧光标记抗体的溶液中，室温孵育一段时间。
- 洗涤切片，去除未结合的抗体。
4. 胶体金标记抗体：- 将切片置于含有胶体金标记抗体的溶液中，室温孵育一段时间。
- 洗涤切片，去除未结合的抗体。
5. 封片：- 将切片置于封片剂中，覆盖玻片，封片。
6. 显微镜观察：- 使用荧光显微镜或激光共聚焦显微镜观察细胞骨架的形态和分布。
五、实验结果与分析1. 洋葱鳞片叶表皮细胞：- 在荧光显微镜下观察到洋葱鳞片叶表皮细胞的细胞骨架主要由微丝和微管组成。
- 微丝呈网状分布，主要位于细胞质膜内侧。
- 微管呈束状分布，主要位于细胞核周围。
细胞生物学实验教案实验一：特殊显微镜的使用及显微摄影术一、实验目的：1、掌握暗视野显微镜、相差显微镜的原理、构造及其使用方法。
2、掌握显微摄影装置及其操作技术，独立完成显微摄影全过程。
二、实验原理：暗视野显微镜应用丁达尔现象，装配暗示场聚光器，是入射光从聚光器斜向照明被检样品。
暗视野显微镜利用样品的散射光和放射光进行观察，只能观察物体的存在与运动而不能辨清其细微结构。
暗视场照明是照明光线仅照亮被检样品而不能进入物镜，使视场背景暗黑，样品明亮的照明方法。
相差显微镜利用被检物体的光程之差进行镜检，通过衍射和干涉现象，将肉眼看不到的相差，变为明暗的振幅差而能看到。
相差显微镜应用于生物学的主要价值，在于对透明的活体进行直接观察，无需采用是细胞致死的固定和染色的方法。
0lympus BH系列的BHS和BHT型显微镜有摄影装置，通过摄影装置，拍摄显微视场中被检样品。
三、实验仪器与试剂1、材料：洋葱鳞茎、人口腔细胞；2、器材：暗视场显微镜、相差显微镜、Olympus显微镜、活体生物样品、擦镜纸、消毒牙签、镊子、滴管、纱布、吸水纸、载玻片、盖玻片3、试剂：生理盐水（0.9%）、2%碘液、香柏油、二甲苯。
四、实验步骤与方法（一）口腔上皮细胞的制备及染色1、把载玻片和盖玻片擦拭干净；2、用滴管在载玻片的中央滴一滴生理盐水；3、用消毒牙签在自己漱净的口腔内壁轻轻地刮几下；4、把牙签上的碎屑放在生理盐水中轻涮几下；5、盖上盖玻片；6、在盖玻片的一侧滴一滴稀碘液；7、用吸水纸吸引,使染液浸润标本的全部。
（二）洋葱鳞茎内表皮装片制作1、把载玻片和盖玻片擦拭干净；2、用滴管在载玻片的中央滴一滴蒸馏水；3、用镊子撕取洋葱鳞茎内表皮置于蒸馏水中；4、盖上盖玻片；5、在盖玻片的一侧滴一滴稀碘液；6、用吸水纸吸引,使染液浸润标本的全部。
（三）分别用暗视场显微镜和相差显微镜观察（四）显微摄影的使用将装片置于显微摄影镜下,选一清晰的视野进行拍摄并打印出来。
光学显微镜细胞骨架的形态特征一、引言光学显微镜是生物学中常用的一种工具，它可以帮助我们观察细胞及其内部结构。
细胞骨架是维持细胞形态和功能的重要组成部分，通过光学显微镜观察细胞骨架的形态特征，有助于我们深入了解细胞的结构和功能。
二、细胞骨架概述1. 细胞骨架的定义细胞骨架是指一系列蛋白质纤维和微管等组成的网络结构，它们支撑着细胞膜，并且参与了许多重要的生物学过程。
2. 细胞骨架的组成（1）微丝：由肌动蛋白聚合而成，直径约为7纳米。
（2）中间纤维：由角蛋白聚合而成，直径约为10纳米。
（3）微管：由α-β二聚体排列而成，直径约为25纳米。
三、光学显微镜观察微丝的形态特征1. 观察前准备工作（1）将培养皿中的样本取出，用PBS缓冲液洗涤。
（2）将样本放在载玻片上，加入适量的荧光染料（如荧光素-鞘氨醇）。
（3）加盖玻片，用封口胶固定。
2. 观察微丝的形态特征（1）调节显微镜的焦距和亮度，找到合适的观察位置。
（2）使用荧光滤镜观察样本。
在激发波长下，荧光染料会发出绿色荧光。
（3）观察微丝的形态特征。
微丝通常呈现为细长而弯曲的线条，可以看到它们在细胞内部交错排列。
四、光学显微镜观察中间纤维的形态特征1. 观察前准备工作（1）将培养皿中的样本取出，用PBS缓冲液洗涤。
（2）将样本放在载玻片上，加入适量的荧光染料（如Alexa Fluor 488标记的抗角蛋白抗体）。
（3）加盖玻片，用封口胶固定。
2. 观察中间纤维的形态特征（1）调节显微镜的焦距和亮度，找到合适的观察位置。
（2）使用荧光滤镜观察样本。
在激发波长下，荧光染料会发出绿色荧光。
（3）观察中间纤维的形态特征。
中间纤维通常呈现为较粗的线条，它们与微丝交错排列，并且在细胞核周围形成网状结构。
五、光学显微镜观察微管的形态特征1. 观察前准备工作（1）将培养皿中的样本取出，用PBS缓冲液洗涤。
（2）将样本放在载玻片上，加入适量的荧光染料（如Alexa Fluor 568标记的抗β-管蛋白抗体）。
几种不同类型显微镜的使用及其对胞质环流的观察一、实验目的学会使用相差显微镜，掌握暗视野技术，以及荧光显微镜等技术二、实验原理在活细胞中，原生质流动是细胞活力强弱的重要标志，它的产生与细胞中微丝的作用是密不可分的。
微丝的纤维较细，直径为5－6nm，主要成分是肌动蛋白、肌球蛋白和原肌球蛋白，并像肌肉一样有收缩功能。
微管是由一种叫做微管蛋白的蛋白质组成的，位于原生质（静止的）外质，紧靠在质膜之下，离运动的内质至少有1µm的距离，与胞质川流运动无关，主要起保持细胞形状、承担细胞运动和细胞内物质运输的作用。
另外，用秋水仙素与细胞松弛素B处理也可产生不同的结果。
经秋水仙素处理后，细胞的纤维被扰乱，但不影响川流运动，这是与秋水仙素影响边缘微管作用有关。
相反，用细胞松弛素B处理，就可抑制细胞的川流运动，很明显，微丝担负着川流运动的功能。
胞质环流需要消耗能量，也受温度、渗透压以及离子浓度的影响。
三、实验材料新鲜洋葱鳞茎，刚毛藻等。
四、实验器材相差显微镜，普通光学显微镜，黑卡纸，载玻璃片，盖玻片，镊子，吸水纸，剪刀，滴管，擦镜纸。
五、实验药品100µg/ml秋水仙素溶液，20µg/ml细胞松弛素B(cytochalasin B)，蒸馏水，香玻油，二甲苯。
六、实验步骤1.取新鲜洋葱鳞茎内表皮约1cm2 或更小，放在干净的载玻片上，加一小滴水，将盖玻片倾斜盖上，并注意不出现气泡，即制成水封片。
2.取一块黑纸，把它剪成暗视野显微镜用的遮光板，并放入普通光学显微镜的聚光器下的光阑上，制成暗视野显微镜。
（须反复调整遮光板的尺寸以得到最佳效果）。
3.把制成的水封片放在暗视野显微镜下用10倍物镜观察，可以看到在明亮的细胞壁与半透明的细胞核之间有很多极小而明亮的“质点”或颗粒，仔细观察，可以看出这些正作有向的运动（速度很慢），水封片中多加些水会促进这种运动。
4.学习相差显微镜，荧光显微镜和倒置显微镜的使用方法和有关操作技术。
一、实验目的1. 了解细胞骨架的基本组成和功能。
2. 掌握观察细胞骨架的方法和技巧。
3. 培养学生的实验操作能力和观察能力。
二、实验原理细胞骨架是真核细胞中由蛋白质纤维组成的非膜结构系统，主要由微管、微丝和中间纤维组成。
细胞骨架在维持细胞形态、细胞运动、物质运输、信号传导和细胞分裂等方面发挥着重要作用。
本实验采用洋葱鳞片叶表皮细胞作为实验材料，利用Triton X-100处理细胞，破坏细胞膜和细胞质中的蛋白质，使细胞骨架系统的蛋白质得以保存。
通过考马斯亮蓝R250染色，在光学显微镜下观察细胞骨架的形态和结构。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：洋葱鳞片叶表皮细胞、PBS缓冲液、Triton X-100、M-缓冲液、考马斯亮蓝R250染液、蒸馏水。
2. 实验仪器：光学显微镜、解剖刀、镊子、小培养皿、吸水纸、纱布、胶头滴管。
四、实验步骤1. 取洋葱鳞片叶表皮细胞，用解剖刀将其撕成小块，放入盛有PBS缓冲液的小培养皿中，静置5分钟。
2. 吸去PBS缓冲液，向小培养皿中加入1.5ml Triton X-100（1%），浸没细胞20分钟。
3. 吸去Triton X-100，向小培养皿中加入2ml M-缓冲液，浸没细胞，置于摇床上5分钟，重复两次。
4. 向小培养皿中加入考马斯亮蓝R250染液，染色5分钟。
5. 吸去染液，用蒸馏水冲洗细胞，去除多余的染液。
6. 将处理好的细胞涂片，放在光学显微镜下观察。
五、实验结果与分析在光学显微镜下观察，可见洋葱鳞片叶表皮细胞内呈现出一种以微丝为主的网状结构，即细胞骨架。
细胞骨架在细胞内呈放射状分布，与细胞膜相连。
细胞骨架在细胞分裂、细胞运动、物质运输等过程中发挥着重要作用。
六、实验讨论1. 细胞骨架的组成和功能：细胞骨架由微管、微丝和中间纤维组成，它们在维持细胞形态、细胞运动、物质运输、信号传导和细胞分裂等方面发挥着重要作用。
2. 观察细胞骨架的方法：本实验采用Triton X-100处理细胞，破坏细胞膜和细胞质中的蛋白质，使细胞骨架系统的蛋白质得以保存。
植物细胞骨架的光学显微镜观察一、【实验目的】1、掌握植物细胞骨架处理及染色方法。
2、对洋葱鳞茎内表皮细胞进行染色，观察其细胞骨架。
二、【实验原理】用适当浓度的TritonX-100处理时，可将细胞内蛋白质破坏，但细胞骨架系统的蛋白质却被保存，后者用考马斯亮蓝R250染色，可在光学显微镜下观察到细胞骨架的网状结构。
三、【实验试剂】1、M-缓冲液；2、pH6.8磷酸缓冲液；3、1% TritonX-100，用M-缓冲液配制；4、0.2%考马斯亮兰R250；5、3%戊二醛，用pH6.8磷酸缓冲液配制；四、【实验步骤】（Ⅰ）1、撕取洋葱鳞茎内表皮细胞约1cm2大小若干片，置于装有pH6.8磷酸缓冲液的培养皿中，使其下沉(约1-2min)；2、吸去pH6.8磷酸缓冲液，用1% TritonX-100处理30min；3、吸去1% TritonX-100，用M-缓冲液洗3次，每次3-5min；4、3%戊二醛固定30min5、pH6.8磷酸缓冲液洗3次，每次3-5min；6、0.2%考马斯亮蓝R250染色10min；7、用蒸馏水洗1-2次，将内表皮细胞平铺于载玻片上，加盖玻片，于显微镜下观察。
注意事项：1、用去垢剂 TritonX-100 的缓冲液处理材料时，应控制在30min 左右；2、每一次加液或染色后，应用 PBS 洗2 次，并用滤纸吸干。
3、加 3%戊二醛溶液对细胞骨架和细胞形态的维持十分重要，固定时间应不低于20min。
4、在用考马斯亮蓝染色的时候应该注意把洋葱鳞茎表皮摊开,使其染色均匀.利于以后观察.5、在染色之前用滤纸吸去缓冲液再进行染色或许观察到的效果更好.6、在观察时,很清楚的看到细胞核的分布,但细胞骨架有点模糊,不过也可以观察到它的基本轮廓及其分布的网状结构.四、【实验步骤】（II）1、取洋葱内皮1cm 左右2、置于含PBS 液的载玻片上3、湿润后，吸去PBS4、加2 滴1%Triton X-100/M-缓冲液，5min5、吸去缓冲液，加3%戊二醛-PBS溶液，固定30min6、加PBS 洗2 次，共3min7、加0.2%考马斯亮蓝R250 染色30min8、用PBS 洗2 次，共2min，吸干，加盖玻片，于显微镜下观察四、【实验步骤】（III）1、取内表皮约0.5cm2，放在盛有PBS缓冲液的小烧杯中，浸泡处理10min。
植物细胞骨架的显示及光镜观察———试剂配制及注意事项1.M缓冲液：M缓冲液是使细胞骨架中的微丝保持稳定的溶液。
在M缓冲液中，其中咪唑是缓冲剂EGTA 和EDTA螯合Ca离子，溶液并提供Mg离子，在低钙条件下，骨架纤维保持聚合状态并且较为舒张，便于观察。
配制：试剂相对分子质量所需浓度每升加量备注咪唑68.08 50mmol/L 3.40g 稳定PH值，缓冲作用。
KCl 74.55 50mmol/L 3.73g 提供离子，对骨架起聚合作用MgCl2。
6H2O 203.30 0.5mmol/L 0.1g 提供离子，对骨架起聚合作用。
EGTA 380.40 1.0mmol/L 0.38g 螯合Ca离子Ca离子对聚合不利EDTA。
2H2O 372.24 0.1mmol/L 0.04g 螯合Ca离子Ca离子对聚合不利。
B-巯基乙醇78.13 1.0 mmol/L 70ul 起还原作用，稳定骨架结构。
甘油92.09 4.0mmol/L 294.8ul加水定容至1L，PH调至7.2注意：B-巯基乙醇危险品！经皮肤、吞咽吸收有致命危险；刺激眼睛、呼吸道粘膜，引起慢性咽炎！用药品时应适当穿戴防护服，手套。
取用时及时塞好瓶塞。
2.60mM磷酸缓冲液：维持细胞生理平衡使其保持正常活性。
配制：KH2PO4, 0.37g Na2HPO4.12H2O,1.2 g 加水到500ML注意：3.Triton X-100 (曲拉通 X-100) 化学名称为聚乙二醇辛基苯基:可以处理掉一部分蛋白质，使骨架成分更清晰。
配制方法：用M缓冲液稀释已有浓度的药品。
注意：对人体有危害，皮肤粘上后用大量清水冲洗，不慎入眼时应提起眼睑，用流动清水冲洗并就医，不慎食入后，应大量饮用清水催吐并就医。
4.3％戊二醛：室温下较好地保存细胞骨架成分。
配制：25％戊二醛12ml,6mM磷酸缓冲液 88ml注意：①2%酸性戊二醛对金属有腐蚀性；2%中性戊二醛对手术刀片等碳钢制品有腐蚀性，使用前应先加入0.5%亚硝酸钠防锈。
