木瓜蛋白酶水解发酵豆粕优化工艺研究

ｒ木瓜蛋白酶对大豆分离蛋白的水解作用研究１黄惠华何铁剑许南燕ｆ华南理工大学食品与生物工程学院，５１０６４１）摘要用木瓜蛋白酶对大豆分离蛋白进行了酶解研究，结果表明：以大豆分离蛋白作为底物，木瓜蛋白酶的反应动力学参数妇ｌ值为０．３４％，酶的最适反应ｐＨ值为７．５，在ｐＨ争Ｏ的碱性条件下有较好的适应性。

酶的最大反应温度为６０＂（２。

在此温度条件下，温浴１８０分钟仍能保持７０％的酶活。

２．０％一２ｊ％的大豆分离蛋白溶液经木瓜蛋白酶水解后，丝氨酸、苏氨酸、脯氨酸、组氨酸、蛋氨酸等游离氨基酸含量明显增加，大豆多肽每ｌＯＯｍｌ提高９２－－９４ｍｇ，等电点分布范围变宽，由原来大豆分离蛋白的ｐＨ３．１～４．３变为ｐＨ３．１—５．５。

关键词：大豆多肽木瓜蛋白酶大豆分离蛋白ＡＳｔｕｄｙＯｉｌＨｙｄｒｏｌｙｓｉｓｗｉｔｈＰａｐａｉｎｏｎＩｓｏｌａｔｅｄＳｏｙｂｅａｒｌ．ＰｒｏｔｅｉｎＨｕａｎｇＨ“ｉｈｕａＨｅＴｉｏｊｉａｎ）（ｎＮａｎｙａｎｇ（ＳｏｕｔｈＣｈｉｎａＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｈｉｓｐａｐｅｒｄｅａｌｓｗｉｔｈｔｈｅ坶ｄｒｏｌｙｓｉｓ０ｎｉｓｏｌａｔｅｄｓｏｙｂｅａｎｐｒｏｔｅｉｎｗｉｔｈｐ舢．Ｔｈｅｍｓｕｌｔｓｓｈｏｗｔｈａｔｔｈｅｋｍｖａｌｕｅｏｆｐａｐａ／ｎｗｉｔｈｉｓｏｌａｔｅｄｓｏｙｂｅａｎｐｒｏｔｅｉｎａｓｓｕｂｓｔｒａｔｅｗａｓ３．４％．ＴｈｅｏｐｔｉｍｕｍｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅａｎｄｐＨｖａｌｕｅｗａｓ６０＂ＣａｎｄｐＨ７．５．Ｐａｐａｉｎｗａｓａｄａｐｍｂｌｅｔｏｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓｏｆ６０＂（２ａｎｄｐＨ９．０．Ｐｅｐｔｉｄｅｗｅｒｅｒｅｌｅａｓｅｄｗｉｔｈｉ．ｎｅｒｃｍｅｎｔｏｆ９２·９４ｍｇ／ｌＯＯｍｌｗｈｉｌｅｔｈｅＳｏｌｕｔｉｏｎｏｆｉｓｏｌａｔｅｄｓｏｙｂｅａｎｐｒｏｔｅｉｎ埘ｔｌｌ２．０－２．５％Ｗａｓｈｙｄｒｏｌｙｚｃｄｂｙｐａｐａｉｎ．Ａｎｄｔｈｅｉｓｏｅｌｅｅｔｒｉｃｐｏｉｎｔｓｏｆｔｈｅｐｅｐｔｉ幽ｓｗｅｒｅｒａｎｇｅ．ｄｆｒｏｍｐＨ３．ＩｔｏｐＨ５５ｋｅｙｎｏｒｄｓ：ｐｅｐｔｉｄｅｏｆｓｏｙｂｅａｎｐａｐａｉｎｉｓｏｌａｔｅｄｓｏｙｂｅａｎｐｒｏｔｅｉｎ１、前言大豆含有近４０％的蛋白质，开发大豆蛋白系列产品，对于充分利用我国的现有食品资源，改善我国人民的膳食结构有着重要的意义。

食品酶学课程论文题目木瓜蛋白酶研究进展姓名孟超学号2010309110045 专业食品科学评分中国·武汉二○一○年一月木瓜蛋白酶研究进展摘要：木瓜蛋白酶是一类巯基蛋白酶，大量存在于木瓜乳汁中。

对其组成成分、结构、制备、固定化、在非水介质中的特性及在医药上的用途等方面的研究进展进行了综述。

关键词：木瓜蛋白酶；固定化；医药用途Abstract: Papain is a sulfhydry lprotease from the latex of the papaya fruit. The paper summarized the research development abou t it’s composition,structure, processing, immobilization, properties in non-aqueous medium and uasage in medicine.Keywords: Papain; Immobilization; Uasage in medicine前言木瓜蛋白酶（Papain）简称木瓜酶，又称为木瓜酵素。

是利用未成熟的番木瓜（Carica papaya）果实中的乳汁，采用现代生物工程技术提炼而成的纯天然生物酶制品。

它是一种含疏基(-SH)肽链内切酶，具有蛋白酶和酯酶的活性，有较广泛的特异性，对动植物蛋白、多肽、酯、酰胺等有较强的水解能力，同时，还具有合成功能，能把蛋白水解物合成为类蛋白质。

溶于水和甘油，水溶液无色或淡黄色，有时呈乳白色；几乎不溶于乙醇、氯仿和乙醚等有机溶剂。

最适合PH值5.7(一般3～9.5皆可)，在中性或偏酸性时亦有作用，等电点18.75；最适合温度55～60℃(一般10～85℃皆可)，耐热性强，在90℃时也不会完全失活；受氧化剂抑制，还原性物质激活。

1.木瓜蛋白酶的组分工业用的木瓜蛋白酶一般都是未经纯化的多酶体系。

木瓜蛋白酶生产工艺
木瓜蛋白酶是一种由木瓜果实中提取的天然酶制剂，具有广泛的应用领域，如食品加工、医药制造和纺织印染等。

下面介绍一下木瓜蛋白酶的生产工艺。

一、原料准备：
采用新鲜成熟的木瓜果实作为原料，果实应经过洗净、去皮和去籽等处理，然后切成小块备用。

二、榨汁提取：
将木瓜果块放入榨汁机中进行榨汁，获得木瓜浆。

榨汁过程中可以加入适量的酶源促进蛋白酶的产生。

三、发酵过程：
将木瓜浆通过过滤和杀菌等工艺处理，然后将其倒入发酵罐中。

可以加入适当的培养基和营养源来促进微生物的生长和蛋白酶的产生。

四、菌种培养：
将所选的产木瓜蛋白酶的微生物菌种接种到发酵罐中，并进行适当的培养条件控制，如温度、pH值和氧气供应等。

培养时
间一般为24-48小时。

五、酶的分离和提取：
将发酵罐中的培养液进行离心分离，分离出固体的微生物细胞。

然后通过酒精沉淀、低温冷冻、脱水和干燥等工艺，提取木瓜蛋白酶。

六、酶的精制：
通过离子交换层析、凝胶过滤和超滤等工艺，对提取的酶液进行精制，去除杂质和其他不需要的成分，提高酶的纯度。

七、包装和贮存：
将精制后的酶液进行包装，常见的包装形式有液体剂和固体剂。

然后对包装好的产品进行质量检验和贮存，保证酶的稳定性和活性。

通过上述生产工艺，可以得到高纯度、稳定性好的木瓜蛋白酶。

在生产过程中，需要严格控制各个环节的温度、pH值和微生
物的生长条件等，以保证酶的质量和产量。

此外，还需要进行严格的质量检验和贮存，确保产品的安全和有效性。

木瓜蛋白酶与中性蛋白酶水解大豆分离蛋白的研究钟振声，陈钰，文锡莲（华南理工大学化学与化工学院，广东广州 510640）摘要：研究了大豆分离蛋白经过加热预处理后用木瓜蛋白酶和中性蛋白酶水解的可行性。

以水解度(DH)为指标，考察了单因素水解条件得出：木瓜蛋白酶水解反应的最佳条件为反应底物浓度3.0%，pH 7.0，反应温度55 ℃，酶用量30 μg/g；中性蛋白酶水解反应的最佳条件为反应底物浓度5.0%，pH 7.0，反应温度55 ℃, 酶用量40 μg/g。

在此条件下，大豆分离蛋白水解度分别为3.69%和9.80%。

在一定条件下复合酶分步水解优于单一酶水解。

关键词：木瓜蛋白酶；中性蛋白酶；大豆分离蛋白；水解反应；水解度中图分类号：Q814；文献标识码：A；文章篇号:1673-9078(2009)09-1039-05Hydrolysis of Soybean Protein Isolate by Papain and NeutralProteaseZHONG Zhen-sheng, CHEN Yu, WEN Xi-lian(School of Chemistry and Chemi cal Engineering, South China University of Technology, Guangzhou 510640, China) Abstract: The feasibility of hydrolysis of heat-treated soybean protein isolate (SPI) by papain and neutral protease was studied. Single factor experiment showed that the optimum conditions for papain catalyzed hydrolysis of SPI were as follows: papain dosage 30 μg/g, mass concentration of substrate 3.0%, hydrolysis temperature 55 ℃ and pH 7.0. For neutral protease catalyzed hydrolysis of SPI, the best conditions were neutral protease dosage 40μg/g, mass concentration of substrate 5.0%, hydrolysis temperature 55 ℃, and pH 7.0. Under the above-mentioned two kinds of conditions the hydrolysis degree of protein reached 3.69% and 9.80%, respectively. It was also found that hydrolysis by mixed enzymes was more efficient than that by single enzyme.Key words: papain; neutral protease; soybean protein isolate; hydrolysis reaction; hydrolysis degree大豆分离蛋白的蛋白质含量高达85%-90%，含有丰富的赖氨酸、亮氨酸、苏氨酸和色氨酸等八种人体必需的氨基酸[1]，应用前景十分广阔。

木瓜蛋白酶在酿造过程中的应用研究木瓜蛋白酶是一种取自木瓜中的蛋白水解酶，被广泛应用于食品、医药和酒类等领域。

在酿造过程中，木瓜蛋白酶的应用研究不仅能够改善酿造产品的品质，提高酿造效率，还能减少生产成本。

本文将探讨木瓜蛋白酶在酿造过程中的应用研究。

首先，木瓜蛋白酶在酿造过程中的应用可以帮助改善酿造产品的品质。

在啤酒酿造中，木瓜蛋白酶能够降解麦芽中的大分子蛋白质和多肽，使得麦汁中的蛋白质含量降低，从而减少啤酒的混浊度，使得啤酒呈现出清澈透明的外观。

同时，木瓜蛋白酶还能够去除啤酒中的苦味，提高啤酒的口感。

在葡萄酒酿造中，木瓜蛋白酶可以降解葡萄汁中的蛋白质，减少葡萄酒中的浑浊物质，提高葡萄酒的清澈度和稳定性。

其次，木瓜蛋白酶在酿造过程中的应用还能够提高酿造效率。

在啤酒酿造中，木瓜蛋白酶能够缩短糖化和过滤时间，加快酿造过程。

这是因为木瓜蛋白酶能够将麦芽中的蛋白质降解成小分子肽或氨基酸，促进糖化反应的进行，使得糖化过程更加完全。

此外，木瓜蛋白酶还能够降低酿造中的粘度，改善酿造物料的流动性，便于酿造过程的操作。

最后，木瓜蛋白酶在酿造过程中的应用还能够减少生产成本。

传统上，酿造过程中清理蛋白质和多肽是一项费时费力的工作，并且需要高温处理。

而木瓜蛋白酶能够在较低的温度下快速降解蛋白质，减少能耗，降低生产成本。

此外，木瓜蛋白酶的应用还可以减少使用化学品的数量，对环境的污染更小，符合可持续发展的要求。

当然，在实际应用木瓜蛋白酶时还需要注意一些问题。

首先，选择适合酿造过程的木瓜蛋白酶种类和用量是非常重要的。

不同种类的木瓜蛋白酶具有不同的温度、pH值和酶活性适应范围，选择合适的酶种和用量能够最大限度地发挥酿造效果。

其次，酿造过程中的温度和pH值的控制也会影响木瓜蛋白酶的酶活性和稳定性，需要根据具体情况进行调节和掌握。

另外，木瓜蛋白酶的添加时间和保温时间也需要根据产品的要求和工艺流程进行合理安排。

总之，木瓜蛋白酶在酿造过程中具有广泛的应用前景。

木瓜蛋白酶水解黄粉虫蛋白提取氨基酸工艺条件优化的研究摘要本实验主要是用木瓜蛋白酶对水解黄粉虫蛋白进行了研究，并对影响酶解反应的因素进行了选择和分析。

最佳的反应条件是：黄粉虫与水的重量比为1∶3；酶用量为黄粉虫重量的2.5%；酶解温度为50℃；酶解时间为6h；酶解pH 值为6.75。

关键词黄粉虫蛋白；木瓜蛋白酶；水解；氨基酸黄粉虫，俗称面包虫，是一种高蛋白、高脂肪、氨基酸含量较全面的昆虫，被誉为“动物的营养宝库”，加工其产品，具有更高的饲用、药用和食用价值[1]。

黄粉虫虫体粗蛋白含量达56.58%，18种氨基酸齐全，其必需氨基酸含量占氨基酸总量的39.14%，高于世界卫生组织和联合国粮农组织（WHO/FAO）推荐的蛋白质氨基酸记分模式（36%以上）的标准。

因此，它是一种优质的蛋白资源[2]。

黄粉虫的生长过程分为卵、幼虫、蛹、成虫四个阶段，属于完全变态昆虫。

广泛分布于我国的黑龙江、辽宁、甘肃、四川、山东、湖北等省区，其生长周期为一年一代或两代。

目前，黄粉虫被做为高级饲料主要应用于饲养业，由于对其缺乏系统的研究，因此开发利用的较少。

本文就此利用木瓜蛋白酶水解黄粉虫蛋白提取氨基酸工艺条件优化方面进行了研究。

1材料与方法1.1试验原料及主要试剂黄粉虫幼虫，木瓜蛋白酶，甲醛，氢氧化钠，盐酸，酚酞，邻苯二甲酸氢钾。

1.2主要仪器设备PB203－N电子精密天平，DECTA320PH计，88-1型定时恒温磁力搅拌器，HH－6数显恒温水浴锅，SHB－Ⅲ循环水式多用真空泵，80－2B台式离心机，WD850CMG－5578MTW微波炉，KQ－B玻璃仪器气流烘干器，RE－52AA旋转蒸发器。

1.3氨基氮含量测定方法采用甲醛滴定法。

原理：氨基酸为两性电解质。

在接近中性的水溶液中，全部解离为双极离子。

当甲醛溶液加入后，与中性的氨基酸中的非解离型氨基反应，生成单羟甲基诱导体，此反应完全定量进行。

此时放出氢气可用标准碱液滴定，根据碱液的消耗量，计算出氨基氮的含量。

今日畜牧兽医５５饲料天地为了减轻养殖中对抗生素、血浆蛋白等动物蛋白原料的依赖，国内外的科研人员经过大量研究：运用现代生物工程、代谢调控发酵技术、动物营养平衡吸收理论等一系列高新技术生产出富含生物活性多肽、蛋白酶以及大量益生菌的绿色生物饲料。

酶解豆粕和发酵豆粕即是利用现代生物技术将大豆蛋白通过蛋白酶酶解或微生物发酵降解为可溶性蛋白和小分子多肽的混合物。

经过酶解或发酵处理的蛋白由于比传统大豆中蛋白质更易于吸收、低抗原等特点，被认为是幼龄动物饲料的理想植物蛋白。

近几年酶解豆粕和发酵豆粕产品的研究开发酶解豆粕和发酵豆粕的研究进展范彦令，张士辉（石家庄依欣饲料有限公司，河北石家庄０５００００）３苜蓿的青贮与利用苜蓿青贮或半干青贮，养分损失小，具有青绿饲料的营养特点，适口性好，消化率高，能长期保存，目前畜牧业发达国家大都以干草为重点的调制方式向青贮利用方式转变。

主要采用以下几种青贮方式。

３．１半干青贮国外普遍采用青贮塔进行半干青贮保存苜蓿，青贮塔造价较高，我国一般采用青贮窑贮存苜蓿，无论采用哪种方式，关键首先使苜蓿迅速风干使含水量降到４０％～５０％再进行青贮。

这种青贮料兼有干草和青贮的优点。

３．２加甲酸青贮这是近年来国外推广的一种是每吨青贮原料加８５％～９０％甲酸２．８～３千克，分层喷晒。

甲酸在青贮和瘤胃消化过程中，能分解成对家畜无毒的ＣＯ２和ＣＨ４，并且甲酸本身也可被家畜吸收利用，用这种青贮料饲喂乳用犊牛，平均日增重达０．７５７～０．８１７千克，比普通青贮料增重提高近１倍。

３．３拉伸膜青贮技术这是近年来国外采用的一种新方法，全部机械化作业。

操作程序为：割草－打捆－出草捆－缠绕拉伸膜。

其优点主要是不受天气变化影响，保存时间长，一般可存放３～５年，使用方便。

４紫花苜蓿叶蛋白的利用紫花苜蓿叶蛋白（ＡＬＰ）是将适时收割的苜蓿粉碎，压榨、凝固、析出和干燥而形成的蛋白质浓缩物。

一般粗蛋白５０％～６０％，粗纤维０．５％～２％，并含有丰富的维生素、矿物质等。

木瓜蛋白酶的生产工艺研究，又称木瓜酶，是一种蛋白水解酶。

木瓜蛋白酶是番木瓜中含有的一种低特异性蛋白水解酶，广泛地存在于番木瓜的根、茎、叶和果实内，其中在未成熟的乳汁中含量最丰富。

木瓜蛋白酶的活性中心含半胱氨酸，属于巯基蛋白酶，它具有酶活高、热稳定性好、天然卫生安全等特点，因此在食品、医药、饲料、日化、皮革及纺织等行业得到广泛应用。

由木瓜的未成熟果实，经提取乳液、凝固、沉降、干燥而成粗制品。

一般工业上以粗制品的应用为主。

木瓜蛋白酶韵生产方法有三种，分别是直接热风烘干法、喷雾干燥法及膜分离冻干法。

直接烘干法生产方法较简单、快速，但生产出来的成品只是粗酶，杂质多、色泽差且微生物超标，酶活力也较低，只有60万～80万单位/g。

多为个体工厂采用，已不能满足国内食品质量卫生安全等。

喷雾干燥法此法是先通过离心去除部分杂质后再进行喷雾干燥，所生产出的成品酶活力相对高，达到100万单位/g左右，杂质相对也较少，色泽相对也较白。

但产品喷雾时容易粘壁，酶活损失较大，水溶性相对也较差，而且酶活稳定性也较差。

该生产方法不但避免了以上两种方法的缺点，且生产过程卫生安全，收率也高，所生产的成品酶活损失小，酶活力一般可达到280万～350万单位/g，最高可达400万单位/g，且酶活稳定性好，纯度高，色泽洁白，细菌数低，严格操作可达到医药级别。

其提取工艺条件为超声波功率300W，超声处理时间200s，果浆质量分数30%；经超声波强化提取，酶活力提高到原先的1.71倍；该酶在40℃以下，pH为5.4～6.0时酶活力相对稳定；EDTA、Cys和维生素C对酶活力具有激活作用，CuS04和ZnCl2具有抑制作用，而KCl、NaCI、CaCl2、MgS04对酶活力的影响不大。

木瓜蛋白酶的分离纯化工艺采用初步采集处理，20%、40%硫酸铵分级沉淀、SP-sephadexC50柱色谱、羟基磷灰石柱色谱，从番木瓜乳汁中分离纯化木瓜蛋白酶。

可获得比活为1184U/mg的纯酶，活力回收率为55.79%，纯度达到99.31%，为高纯度的木瓜蛋白酶。

酶法提取豆粕中总膳食纤维的研究苗敬芝，吕兆启，曹泽虹，董玉玮(徐州工程学院食品工程学院，江苏徐州221008)摘要：本文以豆粕为原料，利用木瓜蛋白酶和糖化酶分别去除豆粕中蛋白质和淀粉，用95％乙醇沉淀可溶性膳食纤维，过滤后用乙醇、丙酮洗涤滤渣，去除脂肪等脂溶性物质，干燥，即得总膳食纤维。

结果表明：木瓜蛋白酶最佳工艺条件为：加酶量16％、温度50℃、时间3h、pH7；糖化酶最佳工艺条件：加酶量2．O％、温度60℃、时间2h、pH4．0～4．6。

总膳食纤维提取率为36．74％。

关键词：豆粕；木瓜蛋白酶；糖化酶；膳食纤维中图分类号：15202．1文献标识码：A文章编号：1006—251312009)05—0120—05St udy on enzym e ext r act i on of di et ar y f i berf r O m s oybean r esi dueM队o J i ng zhi，L U Z hao-qi，C A O Z e hong，D O N G Y u-w e i(C ol l ege of B i oengi neer i ng，X uzhou I ns t i t u t e of T ec hnol ogy，X uz hou221008)A b st r ac t：P r ot ei n a nd s t ar ch w e r e r em ov e d f r o m s oybe an re si due，鹊t he m a t er i a l，by papa i n a nd sacchar i f i case．D i—et ar y f i ber W a s pr eci pit at ed by95％M cohol and f il tr at ed by al co h01．T0t al di etar y f iber w a s ac qui r e d aft er w as hi ng f i l e r r esi due by acet one and r e m ovi ng f at．T he r esul t s s how e d t h at opt i m um condi t i ons of papa i n w er e16％papai n，50℃，3h f or hydr ol yzat i on，pH7．0．opt i m um condi t i ons of sacchar i f i ease w e r e2．O％s ac cha r i f i c as e，60℃，2h f or hydm l yza-t i on．pH4．0t o4．6．Theext r act i on r at e of di etar y f i ber W a g36．74％．K e y w or ds：soybe an r es i du e；pa pai n；sa ceh ar i f i case；di et ar y f i b er膳食纤维是一种不能被人体内的消化酶所消化分解的多糖类碳水化合物和木质素…。

今日畜牧兽医５５饲料天地为了减轻养殖中对抗生素、血浆蛋白等动物蛋白原料的依赖，国内外的科研人员经过大量研究：运用现代生物工程、代谢调控发酵技术、动物营养平衡吸收理论等一系列高新技术生产出富含生物活性多肽、蛋白酶以及大量益生菌的绿色生物饲料。

酶解豆粕和发酵豆粕即是利用现代生物技术将大豆蛋白通过蛋白酶酶解或微生物发酵降解为可溶性蛋白和小分子多肽的混合物。

经过酶解或发酵处理的蛋白由于比传统大豆中蛋白质更易于吸收、低抗原等特点，被认为是幼龄动物饲料的理想植物蛋白。

近几年酶解豆粕和发酵豆粕产品的研究开发酶解豆粕和发酵豆粕的研究进展范彦令，张士辉（石家庄依欣饲料有限公司，河北石家庄０５００００）３苜蓿的青贮与利用苜蓿青贮或半干青贮，养分损失小，具有青绿饲料的营养特点，适口性好，消化率高，能长期保存，目前畜牧业发达国家大都以干草为重点的调制方式向青贮利用方式转变。

主要采用以下几种青贮方式。

３．１半干青贮国外普遍采用青贮塔进行半干青贮保存苜蓿，青贮塔造价较高，我国一般采用青贮窑贮存苜蓿，无论采用哪种方式，关键首先使苜蓿迅速风干使含水量降到４０％～５０％再进行青贮。

这种青贮料兼有干草和青贮的优点。

３．２加甲酸青贮这是近年来国外推广的一种是每吨青贮原料加８５％～９０％甲酸２．８～３千克，分层喷晒。

甲酸在青贮和瘤胃消化过程中，能分解成对家畜无毒的ＣＯ２和ＣＨ４，并且甲酸本身也可被家畜吸收利用，用这种青贮料饲喂乳用犊牛，平均日增重达０．７５７～０．８１７千克，比普通青贮料增重提高近１倍。

３．３拉伸膜青贮技术这是近年来国外采用的一种新方法，全部机械化作业。

操作程序为：割草－打捆－出草捆－缠绕拉伸膜。

其优点主要是不受天气变化影响，保存时间长，一般可存放３～５年，使用方便。

４紫花苜蓿叶蛋白的利用紫花苜蓿叶蛋白（ＡＬＰ）是将适时收割的苜蓿粉碎，压榨、凝固、析出和干燥而形成的蛋白质浓缩物。

一般粗蛋白５０％～６０％，粗纤维０．５％～２％，并含有丰富的维生素、矿物质等。

使木瓜蛋白酶的方法
木瓜蛋白酶存在于木瓜的乳胶中，是一种天然的蛋白酶。

以下是一些常见的使木瓜蛋白酶的方法：
1. 传统提取法：将木瓜果实切开，收集乳胶，然后通过沉淀、过滤、离心等步骤提取木瓜蛋白酶。

这种方法简单易行，但提取效率较低。

2. 发酵法：将木瓜乳胶与微生物一起培养，利用微生物产生的酶来分解乳胶中的蛋白质，从而提取木瓜蛋白酶。

这种方法提取效率较高，但需要一定的发酵设备和技术。

3. 化学法：利用化学试剂处理木瓜乳胶，使其中的蛋白质变性，从而提取木瓜蛋白酶。

这种方法提取效率高，但可能会对酶的活性产生一定的影响。

4. 基因工程法：利用基因工程技术，将木瓜蛋白酶基因导入到其他生物体中，使其表达和分泌木瓜蛋白酶。

这种方法可以大规模生产木瓜蛋白酶，但需要一定的基因工程技术和设备。

需要注意的是，木瓜蛋白酶是一种蛋白酶，具有一定的生物活性和催化作用。

在使用木瓜蛋白酶时，需要根据具体的应用场景和需求选择合适的提取方法和使用条件，以确保其活性和效果。

同时，需要注意木瓜蛋白酶的安全性和稳定性，避免对人体和环境造成危害。

木瓜蛋白酶水解大豆蛋白的工艺研究程天德【摘要】本文研究了[E]、温度、pH和[S]等条件对木瓜蛋白酶水解大豆蛋白效果的影响,得出木瓜蛋白酶水解大豆蛋白的最佳工艺为:[E]15000u/g,55℃,pH7.0,[S]2%,水解3h,DH可达87.32%.【期刊名称】《清远职业技术学院学报》【年(卷),期】2010(003)003【总页数】3页(P20-22)【关键词】木瓜蛋白酶;大豆蛋白;水解度(DH)【作者】程天德【作者单位】清远职业技术学院食品药品系,广东清远,511500【正文语种】中文【中图分类】TS201利用蛋白酶水解大豆蛋白，可以得到肽、氨基酸等营养物质，大大提高了大豆蛋白的营养价值。

研究表明[1~3]：将蛋白质水解后所得的产物，其加工性能和产品功能都明显优于原蛋白，特别是水解后所得的肽类物质更容易被人体消化吸收，是一种非常有应用前景的功能食品原料。

本研究在不同的酶浓度、温度、pH和底物浓度条件下水解大豆蛋白，先后经过梯度实验和正交试验，以水解度（DH）为指标，确定了木瓜蛋白酶水解大豆蛋白的最佳工艺。

大豆蛋白：自制木瓜蛋白酶：丹麦诺维信生物工程有限公司主要仪器微量凯氏定氮装置pH计722型可见光分光光度计水浴锅磁力搅拌器1.3.1 蛋白质含量的测定：凯氏定氮法1.3.2 蛋白酶活力的测定：福林酚法[4]1.3.3 酶解反应大豆蛋白溶液先在85℃加热变性，冷却后置于恒温水浴锅中，调pH至设定值，加入酶溶液保温搅拌，到设定时间后于100℃加热灭酶。

1.3.4 水解度DH的测定：TCA法[5]2.1.1 [E]的影响在pH7.0，55℃，[S]2%条件下水解8h，结果如下：当[E]<15000u/g时，DH随[E]的增加而增加，当[E]>15000u/g后，DH增速缓慢。

故从节约成本考虑，选取[E]为15000u/g。

2.1.2 温度的影响在pH7.0，[E]15000u/g，[S]2%条件下水解8h，结果如下：当温度<55℃的时候，DH随温度的升高而增加，当温度>55℃以后，DH的增速减缓，超过60℃，DH迅速下降。

第21卷　第3期2002年 8月大　豆　科　学SO Y B EAN　SCIENCEVol.21　No.3Aug. 2002 木瓜蛋白酶水解大豆分离蛋白研究Ξ吴建中　赵谋明　宁正祥　姚玉静(华南理工大学食品与生物工程学院,广州510641)摘要　本文研究了木瓜蛋白酶对大豆分离蛋白的有限水解作用,分析了酶浓度、反应时间、温度、底物浓度、半胱氨酸、异Vc钠、亚硫酸钠浓度等因素对大豆蛋白水解作用的影响,试验得出木瓜蛋白酶水解大豆分离蛋白的较佳条件是酶浓度为8000U/g底物、反应时间150～200min、温度50℃、大豆蛋白浓度为4.5%～8%、半胱氨酸浓度0.25%。

关键词　大豆分离蛋白;木瓜蛋白酶;水解中图分类号　S56511 文献标识码　A 文章编号　1000-9841(2002)03-0187-04 大豆分离蛋白中必需氨基酸含量在植物蛋白中较为合理,营养价值较高,有着良好的胶凝、乳化、起泡能力,在肉类制品、饮料和冰淇淋等的生产中具有广泛的应用,但是大豆分离蛋白的使用也存在等电点易沉淀,粘度随浓度增大迅速升高等不利因素,影响了大豆分离蛋白在食品工业中的应用,为此食品科学家试图通过酶改性来改善大豆分离蛋白的理化性质,木瓜蛋白酶价廉易得,改性产品口味较好,适宜于大豆分离蛋白改性,但其酶水解效率较低、易失活。

为充分发挥木瓜蛋白酶的水解效率,本文研究了木瓜蛋白酶水解大豆分离蛋白的最佳条件,并探讨了半胱胺酸、亚硫酸钠、异Vc钠等添加剂对木瓜蛋白酶的保护作用。

1　材料和方法1.1　材料木瓜蛋白酶:选用广东省阳江市港阳食品添加剂香料厂产品大豆分离蛋白:选用哈尔滨市哈高科大豆食品有限公司产品。

1.2　分析方法1.2.1　木瓜蛋白酶酶活力测定方法:Q/HN01-941.2.2大豆分离蛋白中蛋白质含量测定:凯氏定氮法1.2.3DH值测定方法:p H-stat法DH=B×Nα×m×h×100%B:消耗碱量;N:NaOH摩尔浓;α:大豆蛋白氨基的平均解离度,当p H值为6.91时,α=0.365h=7.75。