质粒小量提取试剂盒能提取多大的质粒

高纯度质粒小提试剂盒 Pure Mini Plasmid Kit(目录号：HS0103)产品包装试剂盒成分 50 preps Buffer P1 15 ml Buffer P2 15 ml Buffer P3 20 ml Buffer PD 30 ml RNase A(10 mg/ml)150 ul Buffer PW 60 ml Buffer EB 10 ml Spin Columns PA 50个 Collection Tubes (2 ml)50个（注意：使用前将全部RNase A 溶液加到Buffer P1中混合均匀，2 ~ 8℃保存）保存条件本试剂盒在室温(15 ~ 25℃)干燥条件下，可保存12个月；更长时间的保存可置于2 ~ 8℃。

若溶液产生沉淀，应在使用前置于37℃下溶解沉淀。

单独包装的RNase A 在室温可稳定保存12个月。

加入RNase A 后的Buffer P1应置于2 ~ 8℃保存，可稳定保存6个月。

产品简介本试剂盒用于高纯度质粒DNA 的小量制备与纯化。

菌体经碱裂解、高盐、低pH 处理，质粒可从菌体中释放出来，并特异、高效地被离心柱硅胶膜（Spin Columns PA ）吸附。

通过去蛋白液（Buffer PD ）和漂洗液（Buffer PW ）的清洗可去除蛋白及其他杂质，在低盐、高pH 条件下洗脱，最后得到高纯度的质粒DNA 。

北京厚生博泰科技有限公司Beijing Hooseen Biotech Co., Ltd.使用本试剂盒可从1 ~ 5 ml过夜培养的菌液中纯化得到高达20 ug的高纯度质粒DNA，可在30 min之内完成提取任务。

所得质粒可直接用于酶切、转化、PCR、测序、低敏感细胞株的转染等各种常规分子生物学操作。

产品特点1. 快速：步骤少，操作简便，节约时间。

2. 简便：离心吸附柱不需要预平衡，漂洗液Buffer PW 和去蛋白液Buffer PD不需要另加乙醇，即开即用。

质粒小量提取试剂盒说明书货号：D1100规格：50T/100T保存：常温保存，复检期一年。

（注：RNase A以附件形式发货，收到未使用前请-20℃保存）试剂盒内容：试剂盒组成D1100-50T D1100-100TRNase A300ul500ul溶液Ⅰ15ml30ml溶液Ⅱ15ml30ml溶液Ⅲ20ml40ml漂洗液15ml15ml×2洗脱液15ml30ml吸附柱50个100个收集管50个100个说明书1份1份产品说明：本试剂盒采用碱裂解法裂解细胞，根据离心吸附柱在高盐状态下特异性地结合溶液中的DNA的原理特异性提取质粒DNA。

离心吸附柱中采用的硅基质材料能高效、专一地吸附DNA，可最大限度去除杂质蛋白及细胞中其他有机化合物。

使用本试剂盒提取的质粒DNA可适用于各种常规操作，包括酶切、PCR、测序、连接和转化等试验。

使用前请先在漂洗液中加入无水乙醇，加入体积请参照瓶体上的标签。

溶液Ⅰ在使用前先加入RNaseA （将试剂盒中提供的RNaseA全部加入），混匀，置于2-8℃保存。

如非指明，所有离心步骤均为使用台式离心机在室温下离心。

操作步骤:1、取1-5ml细菌培养物，12000rpm离心1min，尽量吸除上清（菌液较多时可以通过多次离心将菌体沉淀收集到一个离心管中）。

2、向留有菌体沉淀的离心管中加入250ul溶液Ⅰ(请先检查是否已加入RNaseA），使用移液器或旋涡振荡器彻底悬浮细菌细胞沉淀。

注意：如果菌块未彻底混匀，会影响裂解导致质粒提取量和纯度偏低。

3、向离心管中加入250ul溶液Ⅱ，温和地上下翻转6-8次使菌体充分裂解。

注意：混匀一定要温和，以免污染细菌基因组DNA，此时菌液应变得清亮粘稠，作用时间不要超过5min，以免质粒受到破坏。

4、向离心管中加入350ul溶液Ⅲ，立即温和地上下翻转6-8次，充分混匀，此时会出现白色絮状沉淀。

12000rpm离心10min，用移液器小心地将上清转移到另一个干净的离心管中，尽量不要吸出沉淀。

水或 Elution Buffer，室温静置 1 分钟。 注）将灭菌蒸馏水或 Elution Buffer 加热至 60℃使用时有利于提高洗脱效率。 14. 12,000 rpm 离心 1 分钟洗脱 DNA。
● 使用例
使用本试剂盒纯化1.5 ml 的 TB 培养基的菌液（菌体 JM109），得到约16 μg 的质粒 DNA（OD260/OD280 ≥1.8），此质粒为 pUC119，用 Hind Ⅲ酶切1 小时（电泳结果见图2）。
会影响吸光度值的测定，此时建议使用琼脂糖凝胶电泳法进行定量。 ② 质粒 DNA 纯度不好。请严格遵守实验操作要求，使用新鲜菌体培养液提取质粒。 ③ 进行 DNA 洗脱时用灭菌蒸馏水洗脱。 ④ DNA 插入片段本身立体结构复杂。有些 DNA 立体结构复杂（如 GC rich、重复序列等）时难以测
序，应改进测序方法。 Q6. 质粒 DNA 的最小洗脱体积是多少？ A6. 我们建议的洗脱体积为 30-100 μl，此种洗脱体积下收率最佳（但要注意洗脱液需直接加至膜中心），
● 制品说明
本试剂盒是用于质粒（Plasmid）DNA 小量纯化的试剂盒。试剂盒采用了传统的 SDS 碱裂解法，结合硅 胶膜技术，具有高效、快速、方便之特点，全套操作只需 1 小时便可完成。使用本试剂盒可从 1～4 ml LB 培养基过夜培养的菌液中纯化得到 1～20 μg 的高纯度质粒 DNA（OD260/OD280 = 1.8～2.0），制备过 程无需苯酚抽提、乙醇沉淀等步骤，所得质粒 DNA 溶解于 Tris Buffer 或水中，纯度较高，可直接用于 转化、DNA 序列分析、体外转录、限制酶切以及其他各种酶促反应。
2. 加入 Solution Ⅱ和 Solution Ⅲ后，不要剧烈混合（Vortex 等），剧烈混合会导致基因组 DNA 的污染。 3. 加入 Solution Ⅲ后，应充分混合使蛋白质、基因组 DNA 等形成白色沉淀，离心后沉降于离心管底部。

质粒DNA的小量提取溶液配制配置储液（两周用量，小提）1. 10N NaOH 20ml:8g NaOH溶于16ml单蒸水，定容到20ml,注意橡胶塞保存。

2. LB培养基500ml:450ml单蒸水+蛋白胨5g+酵母浸提物2.5g+NaCl5g,混匀，加入10N NaOH 调PH至7.0，定容至500ml,分装，用于养细菌3. 0.9%NaCl 30ml4. 3M NaAc 10ml，调节PH至5.25. 甘油：用于保种6. 2-5高压灭菌7. 5MLiCl 25ml(4°C保存)8. 0.5M葡萄糖20ml（4°保存，避免长菌）9．0.5M Tris-Cl PH 8.0 30ml ：1.815gTris碱溶于24ml单蒸水，震荡后加入10N NaOH调节PH至8.0，然后定容至30ml.10. 0.5M EDTA 用10N NaOH调PH至8.0 （约2.6ml,EDTA不易溶解，起初乳白色，加入NaOH可助溶逐渐呈透明，故溶液还是乳白色时所测PH一般不准）11. 10%SDS 40ml反应吸热，故先加水再加试剂，SDS为强去污剂，使用时戴口罩，注意避风。

12. 5M NaAc 30ml 反应吸热，注意试剂是否带有结晶水。

13.无水乙醇-20°C保存14. 50×TAE 50ml15.氨苄青霉素1000×，超净台内配置（一）LB培养基每1000 mL加分析纯NaCl 10 g，蛋白胨10 g，酵母粉5 g，用ddH2O配制，再用10 M NaOH调pH至7.4（100 mL一般加450 µL，亦可不调），高压灭菌冷却后使用。

固体培养基加入琼脂粉1.5%琼脂粉。

10 M（或N）NaOH配制方法是称200 g NaOH加300 mLddH2O，搅拌充分溶解后定容至500 mL。

（二）溶液Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ溶液Ⅰ：葡萄糖50 mmol/L，EDTA 10 mmol/L，Tris-HCl 25 mmol/L，pH至8.0。

大班数学活动教案：拼图教案1. 教学背景学生年龄：4-5岁学生已具备的知识和技能：会数数、认识一到十的数字、知道形状与颜色的区别2. 教学目标2.1 知识目标1.学生能把简单的拼图拼好，并准确地说出拼图所属的几何形状。

2.学生能通过拼图，巩固对一到十个数字的认识。

2.2 技能目标1.提升学生的动手能力，能够按照图示，拼好拼图。

2.培养学生的观察能力，能够观察拼图的几何形状和数字，准确地做出判断。

2.3 情感目标1.养成学生对数学活动的兴趣，让学生体验到学习数学的快乐。

2.培养学生的合作意识，学生能够在小组内合作完成拼图。

3. 教学过程3.1 导入环节教师问学生：“你们在家里会玩拼图吗？”学生回答时，教师让学生展示一下自己的拼图，然后教师说：“好的，今天我们就来学习大一点的拼图，准备好了吗？”3.2 活动环节一：拼图过程1.分组：教师将学生分成小组，每组三到四名学生。

2.活动准备：教师为每个小组提供一份数字拼图图纸，和相应的拼图，每张图纸上有一到十个数字和图形，学生需要根据图纸上的数字和图形拼出对应的图片。

3.活动过程：教师告诉学生，现在开始拼图，让学生自由组合句子，优美表达以及敢于发言。

学生在拼图过程中，要注意拼图的位置和相互之间的关系，有效进行小组合作，完成自己的任务。

3.3 活动环节二：讲解数字与形状教师在学生完成拼图后，根据每个组完成拼图的情况，问学生完成拼图的过程，并带学生回顾每个数字都对应的几何形状，如数字一对应的图形是直线，数字五对应的图形是五边形等。

3.4 活动环节三：游戏比赛教师让每个小组选一名代表出来，分别进行拼图比赛，以时间最短和完成度最高的小组为胜者，并为获胜小组颁发奖励。

4. 教学反思这次的数学活动，让学生在拼图的过程中，不仅锻炼了学生的动手能力和观察力，还让学生对数字和几何形状有了更深刻的认识。

同时，我们也培养了学生的合作意识，让他们感受到集体的力量。

在今后的数学活动中，我们将进一步发扬数学活动的魅力，让学生在活动中感受到更多的乐趣。

质粒DNA 小量提取试剂盒一、产品简介采用SDS碱裂解法，结合硅胶膜选择性吸附DNA的方法，适合1-4ml细菌培养物中提取多至20 μg质粒DNA。

纯化的质粒DNA适合用于酶切、PCR、测序、转化和转染等分子生物学实验。

二、试剂盒组成和储存组成内容DK301-01 (50次) DK301-02 (200次)RNase A1＊30 μl 120 μlBuffer BL 15 ml 60 mlBuffer P1 15 ml 60 mlBuffer P2 15 ml 60 mlBuffer P3 20 ml 90 mlBuffer WA§19 ml 75 mlBuffer WB§16 ml 65 mlDNA吸附柱-B 50套200套1.5 ml离心管50个200个TE※15 ml 30 ml说明书1份1份＊RNase A1: 50 mg/ml, -20℃长期保存；第一次使用前将RNase A1全部加入Buffer P1中，于4℃保存。

§Buffer WA和Buffer WB，使用前按试剂瓶所示体积加入无水乙醇或者95%乙醇，混合均匀。

※TE：10 mM Tris-HCl, 0.1 mM EDTA, pH 8.0(25°C)。

除RNase A1和Buffer P1(已加入RNase A1)外，其他组成成分于室温储存。

三、注意事项1.Buffer P3和Buffer WA含刺激性化合物，避免沾染皮肤、眼睛和衣服、谨防吸入口鼻。

若沾染皮肤、眼睛，立即使用大量水或生理盐水冲洗沾染处，必要时寻求医疗咨询。

2. 使用后应及时盖紧试剂瓶盖子，以免影响下次使用效果。

3. 操作步骤A2和B2，充分悬浮细菌，无可见的块状菌团，不然会影响裂解效果。

4. 操作步骤A3和B3，缓慢翻转离心管，以免机械力打断基因组DNA而导致最后纯化的质粒DNA中有基因组DNA污染，同时避免打断质粒DNA，保持其完整性。

Biospin质粒DNA小量提取试剂盒检测Biospin质粒DNA小量提取试剂盒检测一、基础知识质粒(Plasmid)是一种染色体外的稳定遗传因子,大小从1-200kb 不等,为双链、闭环的DNA分子,并以超螺旋状态存在于宿主细胞中。

质粒主要发现于细菌、放线菌和真菌细胞中,它具有自主复制和转录能力,能在子代细胞中保持恒定的拷贝数,并表达所携带的遗传信息。

质粒的复制和转录要依赖于宿主细胞编码的某些酶和蛋白质,如离开宿主细胞则不能存活,而宿主即使没有它们也可以正常存活。

二、实验目的1，掌握碱裂解法抽提质粒的原理、步骤及各试剂的作用。

2，检测该商品是否合格。

三、实验原理从细菌中分离质粒DNA的方法都包括3个基本步骤:培养细菌使质粒扩增→收集和裂解细胞→分离和纯化质粒DNA。

采用溶菌酶可以破坏菌体细胞壁,十二烷基磺酸钠(SDS)和Triton X-100可使细胞膜裂解。

经溶菌酶和SDS或Triton X-100处理后,细菌染色体DNA会缠绕附着在细胞碎片上,同时由于细菌染色体DNA比质粒大得多,易受机械力和核酸酶等的作用而被切断成不同大小的线性片段。

当用强热或酸、碱处理时,细菌的线性染色体DNA变性,而共价闭合环状DNA(Covalently closed circular DNA,简称cccDNA)的两条链不会相互分开,当外界条件恢复正常时,线状染色体DNA片段难以复性,而是与变性的蛋白质和细胞碎片缠绕在一起,而质粒DNA双链又恢复原状,重新形成天然的超螺旋分子,并以溶解状态存在于液相中。

在细菌细胞内,共价闭环质粒以超螺旋形式存在。

在提取质粒过程中,除了超螺旋DNA外,还会产生其它形式的质粒DNA。

如果质粒DNA两条链中有一条链发生一处或多处断裂,分子就能旋转而消除链的张力,形成松驰型的环状分子,称开环DNA(Open circular DNA, 简称ocDNA)；如果质粒DNA的两条链在同一处断裂,则形成线状DNA(Linear DNA)。

质粒小质粒小量提取量提取量提取试剂盒试剂盒（Plasmid Miniprep Kit ）目录号目录号：：ZP101 版本版本：：2014-10-15 试剂盒内容： 试剂盒组成ZP101-1 (50次) ZP101-2 (100次) ZP101-3 (200次) RNaseA (10 mg/ml) 150 μl 300 μl 600 μl 溶液1 15 ml 30 ml 60ml 溶液2 15 ml 30 ml 60 ml 溶液3 20 ml 40 ml 80 ml去蛋白液W1 30 ml 60 ml 120 ml 漂洗液W2 15 ml 2X15 ml 2X30 ml 洗脱缓冲液TE 15 ml 15 ml 30ml 吸附柱 50个 100个 200个 收集管(2 ml) 50个 100个 200个 说明书 1份 1份 1份 储存条件： 本试剂盒在室温(15-25℃)干燥条件下，可保存1年；更长时间的保存可置于2-8℃。

若溶液产生沉淀，应在使用前置于37℃下溶解沉淀。

单独包装的RNase A 在-20℃可稳定保存1年以上。

加入RNase A 后的溶液1应置于2–8℃保存，可稳定保存半年。

产品简介： 本试剂盒采用碱裂解法裂解细菌，再通过离心吸附柱在高盐状态下特异性地结合溶液中的DNA。

离心吸附柱中采用的硅基质材料为本公司特有新型材料，高效、专一吸附DNA。

本说明书操作步骤适用于从1-5 ml过夜培养的大肠杆菌LB(Luria-Bertani) 培养液中，快速提取多至40 μg纯净的高拷贝质粒DNA。

使用本试剂盒提取的质粒DNA 可适用于各种常规操作，包括酶切、PCR、测序、连接、转化、文库筛选、体外翻译等。

注意事项：请务必在使用本试剂盒之前阅读此注意事项。

1． 按1：100的比例向溶液1中加入RNaseA，混匀，置于2–8℃保存。

2． 第一次使用前应按照试剂瓶标签的说明先在漂洗液W2中加入无水乙醇。

AxyPrep质粒DNA小量试剂盒本试剂盒采用改进的SDS碱裂解法，结合DNA制备膜选择性地吸附DNA的方法达到快速纯化质粒DNA的目的。

适合于从1-4 ml细菌培养物中提取多至20 μg高纯的质粒DNA，用于测序、体外转录与翻译、限制性内切酶消化、细菌转化等分子生物学实验。

一、试剂盒组成、贮存、稳定性说明书，耗材：DNA制备管，2 ml 离心管，1.5 ml 离心管。

RNase A：50 mg/ml，室温保存。

Buffer S1：细菌悬浮液。

加入RNase A后，4°C贮存。

Buffer S2：细菌裂解液，室温密闭贮存。

(若出现沉淀，应于37°C温浴溶解并冷却至室温后再使用。

）Buffer S3：中和液，室温密闭贮存。

Buffer W1：洗涤液，室温密闭贮存。

Buffer W2 concentrate：去盐液。

使用前，根据瓶上数量加入乙醇，混合均匀，室温密闭贮存。

可用100%乙醇或95%乙醇。

Eluent：2.5 mM Tris-HCl，pH 8.5，室温密闭贮存。

二、注意事项Buffer S2、Buffer S3和Buffer W1含刺激性化合物，操作时要戴乳胶手套和眼镜，避免沾染皮肤、眼睛和衣服，谨防吸入口鼻。

若沾染皮肤、眼睛时，要立即用大量清水或生理盐水冲洗，必要时寻求医疗咨询。

三、实验准备1. 第一次使用前，RNase A全部加入Buffer S1 中，4°C贮存。

2. 准备无核酸和核酸酶污染的Tip头、离心管。

3. 第一次使用前，Buffer W2 concentrate中加入指定体积的无水乙醇。

四、操作步骤第一次使用时，将试剂盒携带的RNase A全部加入到Buffer S1 中，混合均匀，4°C保存。

1. 取1-4 ml 在LB培养基中培养过夜的菌液（若使用丰富培养基，菌液体积应减半或更少），12,000×g离心1 min，弃尽上清。

质粒小提试剂盒I 简明步骤（PD1211）（详细内容请参考英文说明书）I.实验前准备 II. 注意事项RNase A: 使用前将提供的所有RNase A 瞬时离心后加入Buffer A1, 使用后将Buffer A1/RNase A 置于4o C 保存。

质粒拷贝数:纯化中低拷贝的质粒时，使用2倍的菌液体积，2倍的Buffer A1,B1,N1, 相同体积的Wash Buffer 和Elution Buffer.转化菌:若为-70o C 甘油冻存的菌，请先涂布平板培养后，再重新挑选新的单个菌落进行培养。

切勿直接取冻存的菌种进行培养。

DNA Wash Buffer*: 使用前请将8 mL (PD1211-00)或48 mL (PD1211-01)或216 mL (PD1211-02) or 90 mL (PD1211-03) 96-100% 乙醇加入DNA Wash Buffer 。

Buffer B1: 在低于室温时会沉淀，请于50o C 左右水浴加热至沉淀完全溶解，溶液澄清，使用后保证Buffer B1瓶盖旋紧。

在室温下（22-25o C ）进行所有离心操作。

III. 操作步骤1. 接种新鲜的单个菌落到1-5 mL 的LB 培养基（含适量抗生素），37o C 震荡培养14-16小时。

室温下10,000 x g 离心1分钟，收集菌体，并尽可能的吸去上清。

注：残留的液体培养基容易导致菌液裂解不充分，第5步离心后沉淀较松，不能有效吸取上清。

注：本说明书中的操作程序适用于标准LB （Luria Bertani ）培养基培养12-16 小时后，OD 600（细菌密度）在2.0-3.0之间的菌液。

若采用的是富集培养基，例如TB 或2×YT，请注意保证OD 600不超过3.0。

2. 加入250 µL Buffer A1（确保已加入RNase A ），用移液枪或涡流震荡充分悬浮细菌细胞。

洗脱液或者去离子水 65°C 预热以及增加洗 脱时间至 5min 都可提高洗脱效率。
3）菌量过多
4）加入Buffer S1后菌体没有 完全悬起
5）加入 Buffer S2 后裂解不 完全
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参见“A260/280 比值过高”
1. 盐污染 2. 乙醇污染 3. Buffer S2 作用时间过长 4. 核酸酶污染引起的质粒降解 5. 质粒序列缺失
确保用 Buffer W2 洗涤 2 次。
在最后一次 Buffer W2 洗涤后可将制备管离 心时间由原来 1min 增加至 2min。
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裂解 中和
结合 洗涤
洗脱
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六、常见问题分析
主要问题
原因
得率低或纯化
1. 质粒丢失
不到质粒
2. 细菌裂解不完全 1) 菌量过多
建议 在含有新鲜抗生素的平板上重新划甘油菌培 养。若当前使用的是氨苄青霉素，可以考虑 试用羧苄青霉素。如果有必要，可重新转化 质粒或使用不同的宿主菌。 将菌量减少为原先的ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ半（实际操作中可按 实验情况相应调整）。
2) Buffer S2 过期
* 确认在 Buffer W2 concentrate 中已按试剂瓶上的指定体积加入无水乙醇。 * 两次使用 Buffer W2 冲洗能确保盐份被完全清除，消除对酶切反应的影响。

质粒小量提取试剂盒（磁珠法）说明书货号：DM1100规格：50T/100T保存：磁珠可以在室温下（15-25℃）运输，但请在4℃冰箱中保存。

RNase A 需-20℃保存，以保证其活性。

其余试剂可以室温保存，更长时间的保存可置于2-8℃。

试剂盒内容：产品说明：本试剂盒采用碱裂解法裂解细胞，再通过具有独特分离作用的磁珠和缓冲液系统在高盐状态下特异性地结合溶液中的质粒DNA。

使用本试剂盒提取的质粒DNA可适用于各种常规操作，包括酶切、PCR、测序、连接、转化、文库筛选、体外翻译、转染一些常规的传代细胞等。

使用前请先在漂洗液中配置70%乙醇。

若溶液产生沉淀，使用前应将试剂盒内的溶液在室温放置一段时间，必要时可在37℃水浴中预热10min溶解沉淀，摇匀后使用。

操作步骤：1. 裂解取1～5 mL菌液至EP管中，12000 rpm离心2分钟，尽量吸净上清。

在菌体沉淀中加入250 μl裂解液R1和2.5μl RNase A，吸打或振荡至彻底悬浮菌体；加入250 μl裂解液R2，立即温和颠倒离心管5-10次混匀，室温静置2-4 min；加入350 μl裂解液R3，立即温和颠倒离心管5-10次充分混匀（此时底部可能会出现大量白色絮状沉淀属于正常现象）。

置于离心机12000rpm，4℃离心5-10 min。

2. 结合尽量取净上清于新的1.5 mL EP管中，加入等量异丙醇以及振荡混匀的50 μL磁珠，颠倒混匀1 min，静置3 min。

将EP管置于磁铁上进行磁分离，吸弃废液（吸净管盖及管底残液）。

3. 洗涤加入600 μL 漂洗液（使用前请预先配置70%乙醇），轻柔混匀1-2 min，然后磁分离，吸净管盖及管底的残液；重复本步骤一次。

4. 洗脱室温晾干5～10 min至乙醇挥发完全，加入50～100 μL洗脱液，缓慢抽吸混匀，56℃水浴10 min。

每隔2～3 min轻摇EP管几下混匀。

然后磁分离，小心吸取上清液至新的EP管中，进行下步实验。

2. 重悬：加入 250 μl 含 RNase A 的细胞悬浮液（S1），充分混悬振荡或用枪头反复抽打使细菌彻底分散悬浮。
3. 裂解：加入 250 μl 细胞裂解液（S2），轻轻上下颠倒混合 5 次，室温静置 1~5 分钟，待细菌充分裂解，溶液变半透明。
注意：避免剧烈振荡导致基因组 DNA 裂解；裂解时间不能超过 5 分钟。
4. 中和：加入 350 μl 中和缓冲液（S3），轻轻上下颠倒混合 5 次，充分混匀，避免剧烈振荡。室温下≥12,000 x g 离心
10 分钟。
5. DNA 结合：小心吸取上清，转移到插入收集管的离心吸附柱内，室温下≥12,000 x g 离心 1 分钟，弃除收集管中的废液，
将离心吸附柱重新插回收集管中。
不可用作荧光测序模板。
【质粒小量提取常见问题分析及其解决方案】
问题
可能原因
解决方案
未加抗生素或抗生素失效导致质粒丢失 确保培养基含有正确、有效的抗生素
无质粒
质粒拷贝数量低
提取低拷贝质粒需收集较多量菌液（不超过 10 ml），或采用添加氯霉素方法促使 质粒复制
浓缩漂洗液（WB）中未添加乙醇
按照说明书指定方法添加乙醇并做标记后使用漂洗液
溶液则无需二次洗脱；对 6 kb 以上的质粒，可使用预先加热至 55℃的 EB 溶液洗脱以提高产量；EB 溶液不含 EDTA，故不会影响荧光
测序等后续反应；如必须使用无菌去离子水洗脱，需注意其 pH 值是否接近中性，否则应使用 NaOH 溶液将 pH 值调节至 7.0~8.5 之间。
9. 储存：弃除离心吸附柱，纯化的质粒可直接用于后续反应或于－20℃长期保存。
养基类型等因素的综合影响。
1. 收菌：将过夜培养（37℃，12~16 小时）的菌液于室温≥10,000 x g 离心 1~2 分钟，彻底弃除上清。

EZ-10柱式质粒小量抽提试剂盒产品编号：B610413 包装规格：50/100 次试剂盒组成组分 50 次 100 次 RNase A Solution I Solution II Solution III Wash Solution Elution Buffer EZ-10 Column 2.0 ml Collection Tube 操作手册2.1mg 14ml 14ml 20ml 12ml 5ml 50 50 1份4.2mg 28ml 28ml 40ml 24ml 10ml 100 1001份a.RNase A 以干粉形式运输。

使用前，加入1ml solution I 到RNase A 中，彻底溶解后将RNase A 溶液全部加入到Solution I 中并混合均匀。

含RNase 的Solution I 如经常使用应保存于4°C ，不经常使用则保存于-20°C 。

b. Solution II 保存过程可能会形成沉淀。

如有沉淀，则将溶液于37ºC 温浴使沉淀溶解。

c.使用前，12ml Wash Solution (B610413，50次)中应加入48ml 96-100%的乙醇，或24ml Wash Solution(B610413，100次)中应加入 96ml 96-100%的乙醇。

如果是其他体积的wash solution ，只需要加入足够的乙醇使得比例为4:1 (无水乙醇:Wash Solution= 4:1)。

d. Elution Buffer 为2.0 mM Tris-HCl ，pH 8.0~8.5。

回收率相当于TE buffer pH 8.0或水的120%。

保存方法除RNase A 外，试剂盒的其他组分可室温保存。

RNase A 应保存于4ºC 。

试剂盒在室温下可稳定保存12 个月。

为长期保存，请将试剂盒置于低温环境中。

原理本试剂盒用于质粒DNA 小量抽提纯化，方法简单高效。

质粒小抽试剂盒产品简介：本试剂盒采用碱裂解法裂解细菌，再通过离心吸附柱在高盐状态下特异性地结合溶液中的DNA。

离心吸附柱中采用的硅基质材料，能高效、专一吸附DNA。

以下操作步骤适用于从1-5 ml过夜培养的大肠杆菌LB(Luria-Bertani) 培养液中，快速提取多至20μg纯净的高拷贝质粒DNA。

使用本试剂盒提取的质粒DNA 可适用于各种常规操作，包括酶切、PCR、测序、连接、转化、文库筛选等。

注意事项：请务必在使用本试剂盒之前阅读此注意事项。

1.溶液B1使用完毕后，请置于2 - 8℃保存。

(溶液B1 在使用前先加入RNaseA)2.第一次使用前应按照试剂瓶标签的说明先在漂洗液W中加入3倍体积的无水乙醇。

（例如向15 mL的漂洗液中加入45 mL的无水乙醇）。

3.使用前请先检查溶液B2是否有是否出现浑浊的白色结晶。

若有白色沉淀物，请置于37℃水浴锅中至完全澄清。

4.溶液B2和B3用完之后需及时盖紧瓶盖，室温保存。

5.提取的质粒量与细菌培养浓度、质粒拷贝数等因素有关。

质粒抽提常见问题解答实验步骤1.取1-5 ml 过夜培养的菌液，12,000rpm离心1min收集2-4ml菌液于离心管中，尽量吸除上清。

（菌液较多时，可以多次离心收集菌体于一个离心管中。

）2.向留有菌体沉淀的离心管中加入200ul溶液B1，使用移液器或涡旋振荡器彻底悬浮细菌沉淀。

未彻底悬浮的菌块，会影响裂解，导致提取量和纯度偏低。

3.向离心管中加入250ul溶液B2，立即轻柔颠倒Array离心管5～7次，混匀溶液至溶液透明粘稠。

◆动作须温和，不可剧烈，每一管裂解时间不宜超过3min。

4.向离心管中加入350ul溶液B3，立即温和颠倒离心管数次至出现大量白色絮状沉淀后，12,000rpm离心15分钟。

◆B3 加入后应立即混合，避免产生局部沉淀。

上清中有微小白色沉淀，可再次离心后取上清。

5.小心将上清倒入或用移液器转移至吸附柱中（尽量不要吸入沉淀杂质），室温放置1 - 2分钟，10,000rpm离心1min。

全能型质粒小提试剂盒简明说明书（BW-PD1228）Ver:1904产品简介本试剂盒适用于从1-12mL大肠杆菌培养液中提取质粒，用于所有可能的下游应用。

您可从以下四个方案中任选一个操作。

该试剂盒的特色，●最高得率：每次至多可获得120µg质粒（方案Ⅱ）●处理快速：10min（方案Ⅲ）●高纯度：转染级别（方案Ⅳ）●环境友好型：没有离液盐（方案Ⅲ）●对研究人员安全：无离液盐（方案Ⅲ）产品构成Catalog#-00-01-02 Preps1050250 Mini Columns(White ring)1050250 Lysate Clearance Columns(Green ring)210502mL Collection Tubes1050250 Buffer A15mL27mL135mL Buffer B15mL27mL135mL Buffer N16mL33mL165mL Buffer N33mL12mL60mL Buffer KB6mL30mL150mLBuffer RET1mL6mL30mLDNA Wash Buffer*3mL15mL3×24mLEndoFree Elution Buffer2mL9mL45mLRNase A(20mg/mL)25µL135µL675µLUser Manual111要点●RNase A：20mg/mL。

室温下（15-25℃）可稳定贮藏一年。

使用前将提供的所有RNase A瞬时离心后加入Buffer A1，使用后将Buffer A1/RNase A置于4℃保存。

●DNA Wash Buffer：使用前请将12mL(BW-PD1228-00)或60mL(BW-PD1228-01)或96mL(BW-PD1228-02)96-100%乙醇加入至每个DNA Wash Buffer瓶内。

●Buffer B1：低于室温时会沉淀，请于37℃水浴加热至沉淀完全溶解，溶液澄清。

质粒小提试剂盒说明书试剂盒组成50次100次RNase A 300ul 600ul溶液Ⅰ15ml 30ml溶液Ⅱ15ml 30ml溶液Ⅲ20ml 40ml漂洗液15ml 15ml×2洗脱液15ml 30ml吸附柱50个100个收集管50个100个说明书1份1份注：该试剂盒置于室温（15℃-25℃）干燥条件下可保存12个月，更长时间的保存可置于2℃-8℃。

产品简介：本试剂盒采用碱裂解法裂解细胞，通过离心吸附柱在高盐状态下特异性地结合溶液中的DNA的特性提取质粒DNA。

离心吸附柱中采用的硅基质材料能高效、专一地吸附DNA，可最大限度去除杂质蛋白及细胞中其他有机化合物，从1-5ml大肠杆菌LB培养液中，可快速提取5-15μg纯净地高拷贝质粒DNA，提取率达85-90％。

使用本试剂盒提取的质粒DNA纯度高，可直接用于细胞转染等要求较高的试验，以及其它一些常规试验如酶切、PCR、测序、连接和转化等试验。

本试剂盒无需使用酚、氯仿等有毒试剂，操作安全。

操作步骤：使用前请先在漂洗液中加入无水乙醇，加入体积请参照瓶上的标签。

溶液Ⅰ在使用前先加入RNaseA（将试剂盒中提供的RNaseA全部加入），混匀，置于2-8℃保存。

如非指明，所有离心步骤均为使用台式离心机在室温下离心。

1、取1-5ml细菌培养物，12000rpm离心1min，尽量吸除上清（菌液较多时可以通过多次离心将菌体沉淀收集到一个离心管中）。

2、向留有菌体沉淀的离心管中加入250μl溶液Ⅰ(请先检查是否已加入RNaseA），使用移液器或涡旋振荡器彻底悬浮细菌细胞沉淀。

注意：如果菌块未彻底混匀，会影响裂解导致质粒提取量和纯度偏低。

3、向离心管中加入250ul溶液Ⅱ，温和地上下翻转6-8次使菌体充分裂解。

注意：混匀一定要温和，以免污染细菌基因组DNA，此时菌液应变得清亮粘稠，作用时间不要超过5 min，以免质粒受到破坏。

4、向离心管中加入350ul溶液Ⅲ，立即温和地上下翻转6-8次，充分混匀，此时会出现白色絮状沉淀。