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大鼠脑缺血再灌注损伤后Cx43蛋白的表达模式

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大鼠脑缺血再灌注损伤后Cx43蛋白的表达模式

程骁;翁銮坤;罗浩轩;周丽华;王立新;孙景波;黄燕;蔡业峰

【期刊名称】《中国微侵袭神经外科杂志》

【年(卷),期】2014(19)7

【摘 要】Objective To establish the model of middle cerebral artery

occlusion (MCAO) and ischemia reperfusion for exploring the expression

patterns of connexin 43 (Cx43) protein after reperfusion. Methods

Seventy-five rats were randomly divided into MCAO group (n=60) and

sham operation group (n=15). The rats in MCAO group underwent MCAO

operation, and were divided into 0.5, 4, 12 and 24 h subgroups according

to the ischemia reperfusion time after the operation, with 15 rats in every

group, while those in the sham operation group were not inserted of the

suture thread. All the groups were investigated by modified neurological

severity score (mNSS), TTC staining and neuron Nissl staining. The

expression of Cx43 in the brain was detected by Western blot and

immunohistochemistry, and statistical analysis was performed. Results The

success rate of modeling was 75%in MCAO group. Compared with sham

operation group, the mNSS scores increased significantly (P<0.05),

cerebral infraction area increased and the neurons were damaged in

frontal and parietal cortex area in MCAO group. The Cx43 expressions

were respectively 0.23±0.12, 0.58±0.18, 0.78±0.07, 0.61±0.05 and

0.27±0.07 in MCAO 0.5, 4, 12 and 24 h groups and sham operation group by Western blot. Significant differences were found between MCAO 0.5, 4,

12 h groups and sham operation group (P<0.05), while no significant

difference was found between MCAO 24 h group and sham operation

group (P>0.05). The expression of Cx43 in subventricular zone started to

increase at 0.5 h, reached the peak level at 4 h, decreased gradually at 12 h

and returned to baseline level at 24 h by immunohistochemistry, which

was similar to the results from Western blot. Conclusion Cx43 protein plays

a pivotal role in the development and progression of cerebral ischemia

reperfusion injury.%目的：建立大鼠大脑中动脉闭塞(MCAO)缺血再灌注模型,探索再灌注后Cx43蛋白的表达模式。方法75只大鼠随机分为MCAO组(60只)和假手术组(15只)。MCAO组均行MCAO手术,术后根据缺血再灌注时间分为0.5、4、12、24 h 4个亚组,每组15只；假手术组不插入线栓。各组进行改良神经损伤严重程度评分(mNSS)、脑组织TTC染色及神经元尼式染色,Western blot及免疫组织化学方法检测各组脑组织Cx43蛋白的表达并进行统计学分析。结果 MCAO组造模成功率75%。MCAO组大鼠mNSS评分明显高于假手术组(P＜0.05),脑梗死面积增加,额顶叶皮质区神经元大量损伤。Western blot结果显示：假手术组及MCAO 0.5、4、12、24 h组Cx43表达量分别为0.23±0.12、0.58±0.18、0.78±0.07、0.61±0.05和0.27±0.07, MCAO 0.5、4、12 h组与假手术组差异均有统计学意义(P＜0.05),而MCAO 24 h组与假手术组差异无统计学意义(P＞0.05)。免疫组化结果显示：MCAO组侧脑室下区Cx43的表达在0.5 h开始升高,4 h达高峰,12 h逐渐下降,直至24 h恢复基线水平；与Western blot结果一致。结论 Cx43蛋白在脑缺血性再灌注损伤发生、发展中起重要作用。

【总页数】4页(P323-326) 【作 者】程骁;翁銮坤;罗浩轩;周丽华;王立新;孙景波;黄燕;蔡业峰

【作者单位】510120 广州，广东省中医院脑病一科;510120 广州，广东省中医院脑病一科;510080 广州，中山大学中山医学院解剖学教研室;510080 广州，中山大学中山医学院解剖学教研室;510120 广州，广东省中医院脑病一科;510120 广州，广东省中医院脑病一科;510120 广州，广东省中医院脑病一科;510120 广州，广东省中医院脑病一科

【正文语种】中 文

【中图分类】R-332

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大鼠大脑局部脑缺血周围区海马及大脑皮质CLIC4及14-3-3gamma蛋白的表达及其意义

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大鼠大脑局部脑缺血周围区海马及大脑皮质CLIC4及14-3-3gamma蛋白的表达及其意义孙绍骞于春艳1刘玉和1（吉林大学中日联谊医院，吉林长春130033）〔摘要〕目的探讨局灶性脑缺血模型中，海马和大脑皮质14-3-3gamma和线粒体氯通道（CLIC4）蛋白的表达。方法通过大脑中动脉阻塞（MCAO）法，应用病理形态学染色发现海马和大脑皮质表现出局灶性脑缺血。应用TTC染色显示大脑缺血区面积。通过Western印迹检测Bax蛋白表达。结果脑缺血周围区海马及大脑皮质组织14-3-3gamma蛋白在神经元细胞质及细胞核呈阳性表达。对照组可见海马及大脑皮质组织CLIC4蛋白在细胞核阳性表达，缺血组可见脑缺血周围区海马及大脑皮质CLIC4蛋白在神经元细胞质呈阳性表达，Bax蛋白表达上调。结论14-3-3gamma和CLIC4蛋白在脑缺血周围区发挥保护神经元作用。〔关键词〕线粒体氯通道（CLIC4）；14-3-3gamma；局灶性脑缺血〔中图分类号〕R34〔文献标识码〕A〔文章编号〕1005-9202（2012）01-0106-03；doi：10.3969/j.issn.1005-9202.2012.01.045

1北华大学基础医学院病理学教研室通讯作者：刘玉和（1959-），男，教授，博士，硕士生导师，主要从事肿瘤病理学研究。第一作者：孙绍骞（1985-），男，医师，主要从事病理学研究。严重脑缺血缺氧是脑栓塞等神经系统疾病的主要原因。到目前为止，缺血性脑损伤后神经元的损伤机制尚不十分清楚。研究报道，14-3-3gamma在缺糖缺氧的星形胶质细胞中高表达〔1〕。最近研究表明，线粒体氯离子通道（mitochondriachloridechannel，CLIC4）在大鼠缺血脑皮质表达增加〔2〕。然而，14-3-3gamma和CLIC4蛋白在缺血海马组织的表达及意义还不清楚。本研究通过复制大鼠大脑中动脉阻塞（MCAO）模型，探讨14-3-3gamma及CLIC4蛋白在局灶性脑缺血的表达及意义。1材料与方法1.1材料健康Wistar大鼠，雌雄各半，体重200～250g，吉林大学实验动物部提供。1.2造模及分组〔3〕动物随机分为对照组及模型组，每组动物40只。MCAO模型制备：麻醉大鼠颈部正中切口，依次暴露右侧颈总、颈外和颈内动脉，在颈总动脉近心端结扎，远心端留置一结扎线，于颈总动脉剪一小口，用制备好的直径为0.28mm栓线插入颈总动脉并收紧留置结扎线，将栓线推送入颈内动脉。插入深度约18mm，堵塞大脑中动脉开口，结扎以防栓线脱落，剪断血管外的部分栓线，缝合浅筋膜和皮肤。模型成功标准：根据大鼠清醒后的行为和神经症状判断造模是否成功〔4〕。大鼠缺血48h后断头，剪开颅骨取出大脑，做冠状切片，2，3，5-氯化三苯基四氮唑（TTC）染色，未缺血的脑组织染成红色，梗死组织呈苍白色，应用CIMA-400医学图像分析系统测量缺血面积占整个脑组织切片的面积百分比。1.3局灶性脑缺血对海马和大脑皮质形态学的影响大鼠脑组织经10%甲醛固定，常规HE染色，OLYMPUS光学显微镜观察、摄片。1.4局灶性脑缺血对海马和大脑皮质CytC、Bax蛋白表达的影响提取总蛋白，以β-actin的水平作为等量蛋白质上样对照，取50μg蛋白质样品进行SDS-PAGE电泳，转至硝酸纤维素膜上；室温封闭2h后，用含0.01%Tween20的TBS缓冲液（TBST）漂洗3次，每次10min；加入相应的CytC、Bax抗体（Santa）（1∶200），4℃孵育过夜，TBST漂洗3次后加入相应的辣根过氧化物酶标记的二抗（1∶1000），37℃摇床温育2h，最后经DAB显色，凝胶图像分析系统分析蛋白的表达。1.5局灶性脑缺血对海马和大脑皮质14-3-3gamma、CLIC4蛋白表达的影响应用SP免疫组化染色法。抗CLIC4多克隆抗体（美国国家癌症研究中心细胞癌变实验室主任Stuart.H.Yuspa教授惠赠），14-3-3gamma蛋白单克隆抗体（首都医科大学宣武医院老年病研究所李尧华教授馈赠）分别以1∶800和1∶1000稀释，二抗为羊抗兔IgG抗体。显微镜（日本OLYM-PUS）下观察组织中蛋白表达，并摄片。2结果2.1对局灶性脑缺血面积的影响缺血模型组脑缺血面积〔（20.34±3.27）%〕明显增大。局灶性脑缺血组大鼠表现为右侧前肢屈曲，肌张力下降；自主运动时可见灵活度下降，可见向右侧转圈。提起尾部，躯体向右侧扭曲旋转。2.2病理组织学检查结果与对照组相比，脑缺血组海马及大脑皮质神经元皱缩、胞质红染，胞核固缩、溶解或消失；细胞间质明显疏松。见图1。2.3脑缺血区海马及大脑皮质细胞色素C、Bax蛋白表达与对照组相比，海马及大脑皮质脑缺血区细胞色素C、Bax总蛋白表达增加。见图2。2.4脑缺血区海马及大脑皮质的14-3-3gamma蛋白表达对照组海马及大脑皮质14-3-3gamma蛋白表达呈阴性，脑缺血周围区海马及大脑皮质组织14-3-3gamma蛋白在神经元细胞质及细胞核呈阳性表达。见图3。

丁苯酞对大鼠脑缺血再灌注损伤后Bcl—2蛋白表达影响的研究

丁苯酞对大鼠脑缺血再灌注损伤后Bcl—2蛋白表达影响的研究

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丁苯酞对大鼠脑缺血再灌注损伤后Bcl—2蛋白表达影响的研究

作者：萨丽波 李宇

来源：《中国实用医药》2017年第31期

【摘要】 目的 观察丁苯酞对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤后Bcl-2蛋白表达的影响及其神经保护机制。方法 60只健康SD大鼠， 制备大鼠大脑中动脉缺血再灌注模型， 造模成功2

h后拔除线栓， 再灌注， 将造模成功的SD大鼠随机分为丁苯酞治疗组、缺血再灌注组及假手术组， 每组20只。缺血再灌注组和假手术组按照150 mg/kg给予生理盐水， 丁苯酞治疗组在造模后2 h以同等剂量通过腹腔注射丁苯酞注射液。各组大鼠神经功能缺损评分均在麻醉苏醒后进行；在各组中各随机选取10只大鼠， 通过TTC染色观察脑梗死体积；各组余下大鼠进行免疫组化检测， 观察Bcl-2蛋白表达的变化。

结果 三组神经功能缺损评分、脑梗死体积比较差异均具有统计学意义（P

【关键词】 丁苯酞；脑缺血再灌注损伤；Bcl-2蛋白

DOI：10.14163/ki.11-5547/r.2017.31.113

【Abstract】 Objective To observe the effect of butylphthalide on the expression of Bcl-2

protein after cerebral ischemia reperfusion injury in rats and its neuroprotective mechanism. Methods

A total of 60 healthy SD rats were used to prepare rat middle cerebral artery ischemia-reperfusion

model. After 2 h of successful model， the suture was removed for reperfusion， and the successful

针刺对急性脑梗死大鼠海马区Cx43蛋白表达的影响

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刘坤;胡建功;张连城;肖震心;潘艳颖;杨宝旺;马妍;郭富斌;王占奎

【摘 要】Objective To investigate the effect of acupuncture on gap

junction protein Cx43 expression in the hippocampal region in

ischemia/reperfusion rats.Methods Wistar rats were randomized into

normal, model, non-point acupuncture and acupuncture groups. A rat

model of focal cerebral ischemia/reperfusion was made by modified

middle cerebral artery thread occlusion. The model, non-point

acupuncture and acupuncture groups were separately divide into four

subgroups: 30, 60, 180 and 360 min ischemia/reperfusion, 10 rats each.

The middle and lateral lines of vertex were given electroacupuncture in the

acupuncture group of rats. A subcostal fixed point 10 mm above the iliac

crest on the affect side was selected as an acupuncture point in the non-point acupuncture group. The model group was not treated. Cx43 protein

丙泊酚对肾缺血—再灌注损伤大鼠肾叶间动脉缝隙连接Cx43表达的影响

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摘要：目的：本研究旨在探讨丙泊酚对肾缺血再灌注损伤大鼠肾叶间动脉缝隙连接Cx43表达的影响。方法：本实验选取健康雄性大鼠40只，随机分为对照组、模型组、丙泊酚低剂量组和丙泊酚高剂量组，每组10只。通过结扎肾动脉15分钟后再灌注120分钟建立肾缺血再灌注模型。采用HE染色观察肾组织形态学变化，Western blot分析Cx43的蛋白表达水平，RT-PCR检测Cx43的mRNA水平，免疫组化法检测Cx43的表达情况。结果：与对照组相比，模型组大鼠肾组织发生明显损伤，Cx43的蛋白和mRNA水平明显上调，而丙泊酚处理组的肾组织形态学损伤明显减轻，Cx43的蛋白和mRNA水平较模型组显著下调。结论：丙泊酚可以通过下调Cx43的表达水平，减轻肾缺血再灌注损伤对肾叶间动脉的破坏。

关键词：丙泊酚，肾缺血再灌注损伤，Cx43，大鼠

引言

肾缺血再灌注损伤是临床常见的疾病，常见于肾血供缺乏、肾尿路梗阻、创伤、手术等情况下。肾缺血再灌注损伤会引起肾功能损伤和组织病理损害，严重时甚至导致肾功能衰竭。肾缺血再灌注损伤的发生机制尚不明确，但已有研究表明Cx43在其中发挥重要作用。

丙泊酚是一种常用的全身麻醉药，具有镇静、催眠、抗惊厥及肌肉松弛等功效。近年来的研究表明，丙泊酚在抗氧化应激、炎症反应抑制、细胞凋亡减少等方面具有保护作用。然而，关于丙泊酚对肾缺血再灌注损伤的影响和其机制的研究仍较少。

方法

1. 实验动物及组建实验组

本实验选取40只健康雄性大鼠作为研究对象，随机分为对照组、模型组、丙泊酚低剂量组和丙泊酚高剂量组，每组10只。

2. 建立肾缺血再灌注模型

对模型组、丙泊酚低剂量组和丙泊酚高剂量组的大鼠进行肾动脉结扎15分钟再灌注120分钟。