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生物化学实验报告姓名：学号：专业年级：组别：生物化学与分子生物学实验教学中心实验名称质粒DNA的提取、定量、酶切与PCR鉴定实验日期实验地点合作者指导老师评分教师签名批改日期一、实验目的1、掌握PCR基因扩增的原理和操作方法。
2、掌握碱裂解法提取质粒的方法。
3、了解紫外吸收法检测DNA浓度与纯度的原理、方法。
4、学习水平式琼脂糖凝胶电泳操作。
二、实验原理1.PCR：PCR（Polymerase Chain Reaction）即聚合酶链式反应，是指在DNA聚合酶催化下，以DNA为模板，特定引物为延伸起点，通过变性、退火、延伸等步骤，在体外复制DNA的过程。
包括：（1）退火：降低溶液温度，使合成引物在低温（35－70℃,一般低于模板Tm值的5℃左右），与模板DNA互补退火形成部分双链；（2）变性：加热使模板DNA在高温下90℃-95变性，双链解链；（3）延伸：溶液反应温度升至中温72℃，在 Taq酶作用下，以dNTP为原料，引物为复制起点，模板DNA的一条单链在解链和退火之后延伸为一条双链。
2.质粒DNA的提取与定量：（1）碱裂解法：①基于染色体DNA与质粒DNA的变性与复性的差异；②高碱性条件下，染色体DNA和质粒DNA变性；③当以高盐缓冲液调节其pH值至中性时，变性的质粒DNA复性并保存在溶液中，染色体 DNA不能复性而形成缠连的网状结构，通过离心形成沉沉淀去除。
（2）离心层析柱：①硅基质膜在高盐、低pH值状态下选择性地结合溶液中的质粒DNA，不吸附蛋白质、多糖等物质；②通过去蛋白液和漂洗液将杂质和其它细菌成分去除；③低盐，高pH值的洗脱缓冲液将纯净质粒DNA从硅基质膜上洗脱。
原理示意图3、质粒DNA的定量测定——紫外分光光度法（1）物质在光的照射下会产生对光的吸收效应；（2）物质对光的吸收是具有选择性的；（3）各种不同的物质都具有其各自的吸收光谱。
因此不同波长的单色光通过溶液时其光的能量就会被不同程度的吸收，光能量被吸收的程度和物质的浓度有一定的比例关系。
生物化学实验报告姓名：学号：专业年级：组别：生物化学与分子生物学实验教学中心实验名称实验日期实验地点合作者指导老师评分教师签名批改日期格式要求：正文请统一用：小四号，宋体，1.5倍行距；数字、英文用Times New Roman；标题用：四号，黑体，加粗。
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一、实验目的1.掌握PCR基因扩增的原理和操作方法2.掌握碱裂解法提取质粒的方法3.了解紫外吸收法检测DNA浓度与纯度的原理、方法4.学习水平式琼脂糖凝胶电泳操作二、实验原理1.PCR(多聚酶链式反应)在DNA聚合酶催化下，可以DNA为模板，以特定引物为延伸起点，以dNTP为原料，通过变性、退火、延伸等步骤，在体外（缓冲液中）复制DNA，使目的DNA按2n方式呈指数形式扩增。
PCR一次循环的具体反应步骤为：A.变性：加热反应系统至95℃，使模板DNA在高温下完全变性，双链解链。
B.退火：逐渐降低溶液温度，使合成引物在低温（35－70℃,一般低于模板Tm值的5℃左右），与模板DNA互补退火形成部分双链。
C.延伸：溶液反应温度升至中温72℃，在Taq酶作用下，以dNTP为原料，引物为复制起点，模板DNA的一条单链在解链和退火之后延伸为一条双链。
2.质粒DNA的提取与制备(1)碱裂解法：染色体DNA与质粒DNA的变性与复性存在差异：A.高碱性条件下，染色体DNA和质粒DNA均变性；B.当以高盐缓冲液调节其pH值至中性时，变性的质粒DNA复性并保存在溶液中，染色体DNA不能复性而形成缠连的网状结构，可通过离心形成沉沉淀去除。
(2)离心层析柱：A.硅基质膜在高盐、低pH值状态下可选择性地结合溶液中的质粒DNA，而不吸附溶液中的蛋白质和多糖等物质；B.通过去蛋白液和漂洗液将杂质和其它细菌成分去除；C.低盐，高pH值的洗脱缓冲液将纯净质粒DNA从硅基质膜上洗脱。
3.质粒DNA的定量分析（紫外分光光度法）：A.物质在光的照射下会产生对光的吸收效应，且其对光的吸收是具有选择性；B.各种不同的物质都具有其各自的吸收光谱:DNA分对波长260nm的紫外光有特异的吸收峰蛋白质对波长280nm的紫外光有特异的吸收峰碳水化合物对230nm的紫外光有特异的吸收峰C.A260/A280及A260/A230的比值可以反应DNA的纯度；A260/A280=1.8 DNA纯净A260/A280<1.8 表示样品中含蛋白质（芳香族）或酚类物质A260/A280>1.8 含RNA杂质，用RNA酶去除。
质粒dna的提取实验报告质粒DNA的提取实验报告引言：DNA提取是分子生物学研究中的基础实验之一，通过提取DNA可以进一步进行PCR扩增、基因克隆等实验。
本实验旨在提取质粒DNA，质粒DNA是存在于细菌细胞质中的环状DNA分子，具有重要的研究价值。
本文将详细介绍实验的步骤、原理以及结果分析。
材料与方法：1. 细菌培养液：选择含有目标质粒的细菌进行培养，如大肠杆菌。
2. 细菌培养基：选择适宜的培养基，如LB培养基。
3. 细菌培养器具：如培养皿、离心管等。
4. DNA提取试剂盒：选择适合的DNA提取试剂盒，如酚/氯仿法或硅胶柱法。
5. 离心机：用于离心细菌培养液以获取细菌沉淀。
6. 紫外可见分光光度计：用于检测DNA的纯度和浓度。
实验步骤：1. 细菌培养：将含有目标质粒的细菌接种于LB培养基中，培养过夜，使细菌充分繁殖。
2. 收集细菌：将培养液离心，以12000转/分钟离心10分钟，将细菌沉淀收集。
3. 细胞裂解：加入适量的细胞裂解缓冲液，使细菌细胞裂解，释放DNA。
4. 蛋白质沉淀：加入酚/氯仿混合液，离心分离上层的DNA溶液和下层的蛋白质。
5. DNA沉淀：将DNA溶液转移至新的离心管中，加入等体积的冷乙醇，轻轻倒置离心管，使DNA沉淀出来。
6. DNA洗涤：用70%的乙醇洗涤DNA沉淀，去除残余的盐和杂质。
7. DNA溶解：用适量的去离子水溶解DNA沉淀，得到纯净的DNA溶液。
8. DNA浓度检测：用紫外可见分光光度计检测DNA的浓度和纯度。
结果与分析：通过实验，成功提取了质粒DNA，并进行了浓度检测。
根据实验结果，我们可以得到DNA的浓度和纯度信息，这对于后续的实验设计和操作非常重要。
此外，实验中还可以通过凝胶电泳等方法对提取的DNA进行进一步的分析，如确定DNA的大小和完整性。
结论：本实验成功提取了质粒DNA，并获得了纯净的DNA溶液。
通过浓度检测和进一步的分析，我们可以进一步了解DNA的特性和应用。
质粒dna的提取与鉴定实验报告质粒DNA的提取与鉴定实验报告引言：DNA是生物体内重要的遗传物质，其中质粒DNA作为细菌细胞外的环状DNA 分子，在基因工程、遗传学和生物技术研究中具有重要的应用价值。
本实验旨在通过提取和鉴定质粒DNA，探究其结构和功能。
材料与方法：1. 细菌培养液：含有质粒DNA的细菌培养物。
2. 离心管：用于离心细菌培养物。
3. 离心机：用于离心细菌培养物。
4. 细胞裂解液：用于破坏细菌细胞壁，释放质粒DNA。
5. 蛋白酶K：用于降解蛋白质，去除细胞核酸。
6. 高盐溶液：用于沉淀质粒DNA。
7. 乙酸：用于沉淀DNA。
8. 冷乙醇：用于沉淀DNA。
9. 紫外分光光度计：用于测定DNA的浓度和纯度。
10. 凝胶电泳仪：用于鉴定提取的质粒DNA。
实验步骤：1. 取适量细菌培养液，离心细菌培养物，收集菌体沉淀。
2. 加入适量细胞裂解液，充分混匀，使细菌细胞壁破裂，释放质粒DNA。
3. 加入适量蛋白酶K，降解蛋白质，去除细胞核酸。
4. 加入高盐溶液，使质粒DNA沉淀。
5. 离心沉淀，收集质粒DNA。
6. 加入适量乙酸和冷乙醇，沉淀DNA。
7. 离心沉淀，收集DNA。
8. 使用紫外分光光度计测定DNA的浓度和纯度。
9. 使用凝胶电泳仪鉴定提取的质粒DNA。
结果与讨论：通过实验，我们成功提取了质粒DNA，并进行了鉴定。
首先，通过紫外分光光度计测定，我们得到了DNA的浓度和纯度。
浓度的高低反映了提取的DNA量，纯度则表示DNA中杂质的含量。
高浓度和高纯度的DNA适合用于后续实验。
其次，通过凝胶电泳仪鉴定，我们观察到了DNA的迁移带，根据迁移带的大小和形状，可以判断DNA的大小和完整性。
此外，我们还可以通过与已知大小的DNA标准品对比，确定提取的质粒DNA的大小。
质粒DNA的提取与鉴定是基因工程和生物技术研究中的重要步骤。
通过提取质粒DNA，我们可以获取特定基因的DNA序列，用于进一步的分析和研究。
质粒DNA的提取与鉴定实验报告引言质粒DNA的提取与鉴定是分子生物学实验中常用的技术之一。
质粒DNA是一种圆形的DNA分子，广泛存在于细菌和真核生物中。
提取和鉴定质粒DNA能够帮助研究人员进行基因克隆、基因表达调控等实验。
本实验旨在介绍质粒DNA的提取与鉴定步骤，以供初学者了解和学习。
实验材料•细菌培养物•质粒DNA提取试剂盒•去离子水• 1.5 mL离心管•微量离心管•离心机实验步骤步骤一：培养细菌并收获培养物1.取一支含有目标质粒的细菌培养物，将其接种至含有适当抗生素的培养基中。
2.在37℃恒温摇床上培养过夜，确保细菌得到充分生长。
步骤二：收获细菌培养物1.将培养基离心机中以12000转/分钟离心2分钟，以沉淀细菌细胞。
2.弃去上清液，将细菌细胞沉淀保留在离心管中。
步骤三：质粒DNA的提取1.选择一款质粒DNA提取试剂盒，按照说明书中的步骤操作。
不同试剂盒所用方法有所差异，详细操作请参照试剂盒说明书。
2.在质粒DNA提取试剂盒提供的试剂中加入细菌细胞，充分混合。
3.通过离心将细菌细胞裂解，释放出质粒DNA。
不同试剂盒所用离心条件有所不同，一般为高速离心1-3分钟。
4.弃去上清液，留下含有裂解细胞的混悬液。
步骤四：质粒DNA的纯化1.将质粒DNA混悬液转移到新的离心管中。
2.加入适量的洗涤缓冲液，充分混合。
3.通过离心将质粒DNA沉淀，弃去上清液。
4.加入适量的洗涤缓冲液，充分混合。
5.通过离心将质粒DNA沉淀，弃去上清液。
6.加入适量的洗涤缓冲液，充分混合。
7.通过离心将质粒DNA沉淀，弃去上清液。
8.加入适量的洗涤缓冲液，充分混合。
9.通过离心将质粒DNA沉淀，弃去上清液。
10.加入适量的洗涤缓冲液，充分混合。
11.通过离心将质粒DNA沉淀，弃去上清液。
12.使用去离子水溶解沉淀的质粒DNA，使其浓度适宜。
步骤五：质粒DNA的鉴定1.使用紫外可见光分光光度计测定溶解后的质粒DNA的浓度。
2.准备一份对照组，即只含有去离子水的样品。
质粒dna提取实验报告实验目的：本实验旨在通过提取细菌质粒DNA，了解细菌质粒的结构、基因组成和使用纯度较高的质粒DNA的重要性，为后续分子生物学实验打下基础。
实验器材：- 细菌- LB液体培养基- 1.5mL微量离心管- 离心机- 动态温度水浴仪- 恒温振荡器- 超声波清洗器- 洁净平台和无菌技术用品- 始终细切割刀和取样刷- 蒸馏水、2% SDS、醋酸铵、90%乙醇、异丙醇和干燥机实验步骤：1. 制备细菌：在LB液体培养基中培养要提取质粒DNA的细菌，由于质粒DNA在对数生长期达到最高含量，因此在显微镜下观察到对数生长期的细菌时进行取样。
2. 细胞打破和溶解质粒：离心细胞，倒去培养基，加入10mL蒸馏水，用振荡器在4℃下以300rpm摇晃3小时。
然后沉淀细胞，在70℃下干燥30分钟。
随后加入150μL1%SDS和其他化学试剂混合物，使用至少15次的起始细切割刀切成绒毛状的颗粒，浸泡在低盐度醋酸铵中2小时以上。
3. 质粒DNA纯化：将浸泡了细菌绒毛颗粒的混合物离心，抽取上清液，将其加入2x体积的异丙醇与等体积的75%，然后用再生明胶抑制蛋白质在异丙醇中凝聚。
离心，除去异丙醇上清液，加入70%乙醇洗涤。
最后用干燥机吸干。
4. 质量分析：分析提取到的质粒DNA的浓度和纯度，使用分光光度计对其进行光谱分析，以检测质粒DNA的A260/A280比例和A260/A230比例。
通过比较纯度，然后将质粒DNA冻保存至-20℃或-80℃。
实验结论：本实验成功提取了细菌的质粒DNA，并进行了纯化和分析。
质粒DNA的提取和纯化是基于一系列物理和化学方法和技术的，实际操作中需要仔细操作，耐心等待，严格注意洁净操作，才能达到最佳的提取和纯化效果。
通过本实验，我进一步了解了在分子生物学和遗传学中质粒DNA的重要性，它可适用于多种研究项目和应用，例如质粒克隆、基因编辑、基因表达、和质粒蛋白质互作等。
实验一、质粒DNA的提取及检测【实验目的】1、掌握碱裂解法提取质粒的原理和步骤2、掌握琼脂糖凝胶电泳检测DNA的方法和技术3、学会PCR操作的基本技术第一部分质粒DNA的提取一、实验原理：碱裂解法提取质粒是根据共价闭合环状质粒DNA与线性染色体DNA在拓扑学上的差异来分离它们。
在pH值介于12.0～12.5这个狭窄的范围内，线性的DNA双螺旋结构解开而被变性，尽管在这样的条件下，共价闭环质粒DNA的氢键会被断裂，但两条互补链彼此相互盘绕，仍会紧密地结合在一起。
当加入pH4.8的乙酸钾高盐缓冲液恢复pH至中性时，共价闭合环状的质粒DNA的两条互补链仍保持在一起，因此复性迅速而准确，而线性的染色体DNA的两条互补链彼此已完全分开，复性就不会那么迅速而准确，它们缠绕形成网状结构，通过离心，染色体DNA与不稳定的大分子RNA，蛋白质-SDS复合物等一起沉淀下来而被除去。
二、仪器与试剂1、仪器恒温摇床、台式离心机2、试剂溶液I、溶液Ⅱ、溶液Ⅲ、无水乙醇、TE缓冲液、胰RNA酶、酚、氯仿三、实验步骤1、将2mL含相应抗生素（Amp:50μg/mL）的LB液体培养基加入到试管中，接入含pUC19质粒的大肠杆菌，37℃振荡培养过夜。
2、取1.5mL培养物倒入微量离心管中，4000r/min离心2min。
3、吸去培养液，使细胞沉淀尽可能干燥。
4、将细菌沉淀悬浮于100μL溶液I中，充分混匀，室温放置10 min。
5、加200μL溶液Ⅱ（新鲜配制），盖紧管皿，混匀内容物，将离心管放冰上5min。
6、加入150μL溶液Ⅲ（冰上预冷），盖紧管口，颠倒数次使混匀。
冰上放置15min。
7、12000r/min，离心15min，将上清转至另一离心管中。
8、向上清中加入等体积酚：氯仿（1：1）（去蛋白），反复混匀，12000r/min，离心5min，将上清转移到另一离心管中。
9、向上清加入2倍体积无水乙醇，混匀后，室温放置5～10min。
一、实验目的1. 掌握碱裂解法提取质粒DNA的原理和操作步骤。
2. 学习琼脂糖凝胶电泳技术，用于检测质粒DNA的大小和纯度。
3. 了解质粒DNA的酶切分析及其在分子生物学实验中的应用。
二、实验原理质粒是细菌染色体外的环状DNA分子，它们能够在宿主细胞中独立复制。
质粒DNA 的提取是分子生物学实验中常用的技术，用于基因克隆、基因表达分析等。
碱裂解法是一种常用的质粒DNA提取方法，其原理是利用碱处理使细菌细胞裂解，释放质粒DNA，并通过离心、洗涤等步骤纯化质粒DNA。
琼脂糖凝胶电泳是一种分离和分析DNA分子的技术。
DNA分子在琼脂糖凝胶中的泳动速度取决于其分子大小和构型。
通过比较已知分子量标准品和实验样品的泳动距离，可以确定质粒DNA的大小。
此外，酶切分析可以检测质粒DNA的序列和结构。
三、实验材料1. 仪器：离心机、凝胶电泳仪、紫外灯、微量移液器、微量离心管等。
2. 试剂：LB培养基、氯化钙、酚/氯仿/异戊醇混合物、无水乙醇、TE缓冲液、琼脂糖、DNA分子量标准品、限制性核酸内切酶等。
四、实验步骤1. 质粒DNA的提取（1）将含有pUC19质粒的大肠杆菌接种于LB培养基，37℃培养过夜。
（2）将培养物转移至微量离心管中，4000r/min离心2min，收集菌体。
（3）向菌体中加入1mL的酚/氯仿/异戊醇混合物，充分混匀，室温放置5min。
（4）12,000r/min离心5min，取上清液。
（5）向上清液中加入等体积的无水乙醇，混匀，室温放置15min。
（6）12,000r/min离心10min，弃去上清液。
（7）用70%乙醇洗涤沉淀，12,000r/min离心5min，弃去上清液。
（8）空气干燥沉淀，用50µL的TE缓冲液溶解。
2. 质粒DNA的琼脂糖凝胶电泳（1）制备琼脂糖凝胶，加入DNA分子量标准品。
（2）将质粒DNA样品和DNA分子量标准品混合，加样至琼脂糖凝胶。
（3）接通电源，进行电泳。
生化质粒鉴定实验报告引言质粒是细菌体内的一个环形DNA分子，广泛应用于分子生物学实验中。
通过鉴定质粒，可以确定其是否包含特定的基因片段，从而为后续的研究提供基础数据。
本实验旨在通过一系列生化实验方法，包括限制性内切酶酶切、琼脂糖凝胶电泳和DNA杂交，对质粒进行鉴定，并验证其所携带的目标基因。
材料与方法材料1. 双链质粒DNA样品2. 限制性内切酶3. 质粒载体4. DNA标记5. 琼脂糖凝胶电泳仪及相关试剂方法1. 酶切析取：将DNA样品与适当的限制性内切酶一起反应，并在适当的条件下进行酶切析取。
2. 凝胶电泳：将酶切后的DNA样品与质粒载体进行琼脂糖凝胶电泳，通过电泳显示出DNA片段的迁移情况。
3. DNA杂交：将酶切后的DNA片段进行转移，并进行DNA杂交检测。
实验结果1. 酶切析取：使用适当的限制性内切酶对质粒进行酶切析取。
根据实验条件，每个限制性内切酶都会在特定的酶切位点切割DNA分子，产生不同大小的DNA片段。
2. 凝胶电泳：将酶切后的DNA样品与质粒载体一起进行琼脂糖凝胶电泳。
通过电泳，我们观察到了一系列不同大小的DNA片段。
根据电泳结果，我们可以初步判断质粒中是否存在目标基因。
3. DNA杂交：将酶切后的DNA片段转移到膜上，然后进行DNA杂交检测。
通过杂交探针与目标基因的互补配对，我们可以检测目标基因是否存在于质粒中。
结果分析与讨论根据实验结果，我们发现酶切后的DNA样品产生了一系列不同大小的DNA片段。
通过与已知目标基因进行对比，我们确定其中一个特定大小的DNA片段可以与目标基因进行互补配对。
这表明质粒中含有目标基因。
同时，我们还进行了DNA杂交实验，结果显示杂交探针与酶切后的DNA片段发生了互补配对，进一步证实了质粒中的目标基因的存在。
通过本实验，我们成功鉴定了质粒，并验证了所携带的目标基因。
这对于后续的分子生物学研究提供了基础数据，并在基因工程领域具有潜在的应用价值。
结论通过限制性内切酶酶切、琼脂糖凝胶电泳和DNA杂交等一系列生化方法，我们成功鉴定了质粒，并验证了所携带的目标基因。
质粒dna酶切实验报告实验目的：通过酶切实验分析质粒DNA的结构和性质。
实验原理：酶切是利用限制性内切酶切割特定的DNA序列的方法。
限制性内切酶是一种从细菌体内提取的一类酶，具有切割DNA的特异性。
实验步骤：1.实验准备：准备好所需试剂，包括限制性内切酶、缓冲液、质粒DNA等。
2.酶切反应：在一个离心管中，依次加入适量的缓冲液、质粒DNA、限制性内切酶及适量的蒸馏水，混匀后转入恒温水浴中进行酶切反应。
3.电泳分离：将酶切后的DNA溶液取出一定量，加入适量的电泳样品缓冲液，用于电泳分离。
4.染色观察：将分离出的DNA胶片浸泡于DNA染色剂中，染色后进行观察。
实验结果：通过电泳分离和染色观察，我们可以看到质粒DNA在电场作用下被分离成多个带状。
每个带状代表着一段特定长度的DNA序列，不同的长度代表着不同的DNA片段。
实验分析：1.酶切结果：酶切后的DNA片段的长度可以根据电泳结果得出。
通过比对DNA 片段与已知DNA序列的长度，我们可以推断得到质粒DNA的特异性序列。
如果我们使用了多种限制性内切酶，那么在电泳结果中会出现更多的带状。
2.质粒结构：通过酶切实验可以初步了解质粒DNA的基本结构。
如果酶切结果显示出多个相同长度的DNA片段，说明质粒DNA具有对称的环状结构。
如果酶切结果显示出不同长度的DNA片段，那么质粒DNA可能是线性的。
3.酶切效率：酶切效率是指限制性内切酶切割质粒DNA的效率。
酶切效率越高，产生的DNA片段长度越精确。
如果酶切反应时间过长或者酶切温度不合适，都可能导致酶切效率下降。
实验结论：通过质粒DNA酶切实验，我们可以初步了解质粒DNA的结构和性质。
这对于进一步研究质粒DNA的功能和应用具有重要意义。
质粒DNA的提取一、实验方法碱裂解法抽提质粒DNA二、实验原理基于质粒DNA与染色体DNA变性与复性的差异。
三、实验步骤1）质粒提取1. 10,000g,1min离心收集1.5－5ml菌液沉淀于1.5ml离心管中。
2. 加入100μl溶液1，振荡至彻底悬浮。
3. 加入200μl溶液2，立即轻柔颠倒离心管6次，使菌体充分裂解，随后将离心管冰上放置3分钟4. 加入150μl溶液3，立即温和颠倒离心管数次，冰上放置3分钟，10，000g离心10min。
5. 将步骤4的上清转移至新的离心管（尽量去除杂质），加入等体积的苯酚/氯仿/异戊醇混合均匀10，000g离心5min。
6. 将步骤5的上清转移至新的离心管，加入2倍体积的无水乙醇，室温放置5－10min，沉降DNA7. 10，000g离心10分钟,弃乙醇，保留沉淀，加入1ml 70％的乙醇洗涤沉淀，10，000g离心5分钟8. 倒掉乙醇溶液，用吸水纸吸净管壁上的水珠，室温蒸发痕量乙醇9. 加入适量含RNase的TE或灭菌双蒸水溶解质粒DNA2）质粒鉴定→琼脂糖凝胶电泳灌胶：胶中加入荧光染料(SYBR Green I)加样：质粒+上样缓冲液→混匀电泳结果观察：UV灯下四、实验结果五、实验分析裂解细胞中除含有质粒DNA外，还含有基因组DNA、各种RNA、蛋白质和脂类等物质，因此用碱裂解法除去杂质1、防止DNA裂解：Solution 11）、所含糖增加溶液黏度，维持渗透压，防止DNA受机械剪切作用降解2）、所含EDTA抑制酶活性2、溶解与变性：Solution21)强碱使质粒DNA和染色体DNA变性2）离子型表面活性剂SDS可溶解膜蛋白3、沉降与复性：Solution31)质粒DNA复性2）在钾盐中，染色体DNA形成缠连的不溶性网状结构，和不稳定的大分子RNA以及变性的蛋白质和细菌碎片等一起沉淀预期结果为剩余质粒DNA4、琼脂糖凝胶电泳1）荧光染色染料分子可嵌入双链DNA分子配对碱基之间2）琼脂糖可起到电泳和分子筛的作用，因所带电荷、分子量大小和构型不同，泳动速度不同六、误差分析实验失败，本组实验出现4条带，3明1暗，明亮处应为DNA分子数最多的，为质粒DNA，质粒DNA前有较暗的两条带，推测其中一条为未复性质粒DNA，可能Solution2处变性过长，不易复性，或Solution3处时间过短，复性不充分。
质粒dna的制备实验报告质粒DNA的制备实验报告引言：DNA（脱氧核糖核酸）是生物体内负责遗传信息传递的重要分子。
质粒DNA是一种环状的双链DNA分子，广泛存在于细菌和其他一些原核生物中。
质粒DNA具有自主复制的能力，并携带了一些对细菌有益的基因信息。
因此，质粒DNA的制备对于基因工程研究和生物技术应用具有重要意义。
实验目的：本实验旨在通过离心、溶解、酶切及纯化等步骤，制备出高纯度的质粒DNA样品。
实验材料与方法：1. 细菌培养液：含有目标质粒DNA的细菌培养物。
2. 离心管：用于离心沉淀细菌。
3. 离心机：用于离心沉淀细菌和质粒DNA。
4. 细胞裂解缓冲液：含有细胞裂解所需的缓冲盐和酶切酶。
5. 酶切酶：用于切割质粒DNA。
6. 蛋白酶K：用于降解细胞中的蛋白质。
7. 酚/氯仿：用于提取DNA。
8. 异丙醇：用于沉淀DNA。
9. 纯化缓冲液：用于纯化DNA样品。
实验步骤：1. 收获细菌：将培养液离心10分钟，将菌体沉淀收集至离心管中。
2. 细胞裂解：加入适量的细胞裂解缓冲液，使菌体充分裂解，并加入蛋白酶K降解蛋白质。
3. DNA提取：加入等体积的酚/氯仿混合液，轻轻摇动离心管使两相混合，离心分离上下两相。
4. DNA沉淀：将上层水相转移至新的离心管中，加入等体积的异丙醇，轻轻摇动离心管使DNA沉淀。
5. DNA纯化：将DNA沉淀洗涤至纯化缓冲液中，离心沉淀DNA，去除上清液。
6. 测定DNA浓度：使用比色法或荧光法等方法测定DNA的浓度。
结果与讨论：经过上述步骤，我们成功制备出了高纯度的质粒DNA样品。
通过测定DNA浓度，我们可以得到质粒DNA的含量。
实验中使用的细菌培养物中含有目标质粒DNA，经过细胞裂解和酶切等步骤，我们成功地将质粒DNA从其他细胞组分中分离出来。
酚/氯仿提取和异丙醇沉淀的操作使得DNA得以纯化和浓缩。
最后，使用纯化缓冲液洗涤和离心沉淀，去除上清液，进一步提高了DNA的纯度。
质粒dna提取实验报告引言DNA的提取是生物学实验中非常重要的一步，它可以用于后续的分子生物学研究，比如克隆、PCR、基因测序等。
而本次实验的目的是从细菌中提取质粒DNA，并对提取的结果进行分析，评估提取效果。
材料与方法1. 实验材料- 大肠杆菌菌液- 细胞裂解液- RNase A- 莱文斯坦缓冲液- 高盐裂解液- 乙酰盐- 氯仿- 异丙醇- TE液- 离心管等实验仪器和耗材。
2. 实验步骤- 调制莱文斯坦缓冲液，用于细胞裂解和质粒DNA的稳定。
- 预处理大肠杆菌菌液，用高盐裂解液处理使其细胞壁破裂，释放出质粒DNA。
- 添加异丙醇与氯仿，用于分离DNA和其他细胞组分。
- 加入乙酸盐处理DNA上的蛋白质，使其沉淀。
- 用异丙醇洗涤DNA沉淀，去除杂质。
- 用TE液溶解提取得到的DNA。
结果与讨论经实验，我们成功地从大肠杆菌中提取到了质粒DNA。
通过紫外光照射，我们观察到了明亮的DNA带，证明提取得到的DNA具有较高的纯度。
另外，我们还使用琼脂糖凝胶电泳对提取的DNA进行了分析。
从琼脂糖凝胶电泳的结果中，我们观察到细长而连续的DNA 条带，说明提取得到的质粒DNA具有较好的完整性。
此外，我们还注意到，在琼脂糖凝胶中，质粒DNA的迁移速率要快于细菌染色体DNA，这是因为质粒DNA的分子量较小。
在实验的过程中，我们注意到了一些实验技巧和注意事项。
首先，在进行细胞裂解和DNA提取过程中，必须保持材料的无菌状态，以免外源性DNA的污染。
其次，避免在提取过程中显著提高DNA样本的温度，以防止DNA的降解。
最后，注意避免DNA溶液与金属物质接触，因为金属离子可能对DNA具有毒性。
结论通过本次实验，我们成功地从大肠杆菌中提取到了高质量的质粒DNA，并在琼脂糖凝胶上观察到清晰的DNA带。
实验过程中，我们掌握了DNA提取的基本操作技巧和注意事项，这对我们今后的分子生物学研究将产生积极的影响。
然而，本次实验还有一些改进的空间。
质粒dna提取实验报告
今天我要给你们讲一讲我做的一个超级酷的实验，那就是质粒DNA提取实验。
我刚知道要做这个实验的时候，心里可好奇了。
就像要去探索一个神秘的小世界一样。
我们进到实验室，看到好多奇奇怪怪的东西。
有小小的试管，那些试管就像一个个透明的小士兵，整整齐齐地站在那里。
还有一些溶液，颜色都不一样，有的像清水一样透明，有的带着一点点淡淡的蓝色，就像天空的颜色不小心掉进了瓶子里。
老师给我们讲了实验的步骤。
我们先把含有质粒的细菌放到一个小瓶子里，那感觉就像把一群小小的微生物宝宝放到了一个小房子里。
然后，我们往里面加了一种特殊的液体，这时候，瓶子里就像在开一场小小的派对，液体和细菌混在一起，开始发生奇妙的变化。
接下来，我们要把这个混合的东西放到一个机器里转一转，就像坐旋转木马一样。
转完之后，瓶子里就分成了两层，一层是清澈的，一层有点浑浊，这就像把好东西和杂质分开了一样。
再后来，我们又做了好多小操作，最后就得到了质粒DNA。
那质粒DNA就像一条小小的、看不见的小绳子，藏在那些液体里，但是它可重要，就像一把小钥匙，可以打开好多生物的小秘密。
这个实验就像是一场小小的冒险，我在里面看到了好多神奇的现象，也学到了好多有趣的知识。
你们要是有机会做这个实验，也一定会觉得特别好玩，像发现了一个全新的宝藏一样。
质粒DNA的提取与鉴定实验报告1. 实验目的本实验的目的是通过提取和鉴定质粒DNA，掌握质粒DNA的提取方法并验证提取的质粒DNA的纯度和完整性。
2. 实验原理质粒DNA提取是将质粒DNA从细菌细胞中分离出来的过程。
常用的提取方法包括碱裂解法和商业试剂盒法。
本实验使用商业试剂盒法进行质粒DNA的提取。
步骤如下： 1. 培养目标细菌，并收集细菌培养物。
2. 细菌培养物离心，收集细菌沉淀。
3. 加入细胞裂解缓冲液裂解细胞膜。
4. 加入溶解剂，使细胞溶解。
5. 加入酒精，沉淀出质粒DNA。
6. 分离质粒DNA，去除其他杂质。
7. 测定质粒DNA的纯度和完整性。
3. 实验步骤3.1 培养目标细菌1.取出目标细菌的冻存管，从-80°C的冷冻库中快速解冻。
2.取出琼脂平板，用无菌技术将细菌转接到琼脂平板上，利用无菌鹤嘴锄均匀涂抹。
3.将琼脂平板倒置放置在37°C恒温培养箱中，培养一夜。
3.2 收集细菌培养物1.取出含有细菌的琼脂平板，加入适量的无菌LB培养基。
2.用无菌移液管将培养基中的细菌转移到无菌离心管中。
3.将离心管放入低速离心机中，离心5分钟，将细菌沉淀收集。
3.3 细胞裂解1.向细菌沉淀中加入适量的细胞裂解缓冲液。
2.充分混合后，放置在冰上浸泡20分钟，使细菌细胞膜裂解。
3.4 细胞溶解1.加入等体积的溶解剂，充分混合。
2.将含有细胞裂解物的离心管放入冰上浸泡5分钟。
3.5 DNA沉淀1.向离心管中加入等体积的冷酒精。
2.轻轻倾斜离心管，使酒精与溶液充分混合。
3.放置在-20°C冷冻库中沉淀20分钟。
3.6 分离质粒DNA1.将离心管放入高速离心机中，离心10分钟。
2.将上清液倒出，保留下沉淀。
3.7 测定质粒DNA的纯度和完整性1.使用纳米比色计测定质粒DNA的浓度和纯度。
2.利用琼脂糖凝胶电泳检测质粒DNA的完整性。
4. 结果与讨论根据实验结果，我们成功提取到了质粒DNA，并验证了其纯度和完整性。
质粒dna的提取实验报告质粒DNA的提取实验报告。
实验目的，通过实验，掌握质粒DNA的提取方法，了解质粒DNA的结构和特点。
实验原理，质粒DNA是细菌细胞内的一种环状双链DNA，具有自主复制的能力。
提取质粒DNA的方法一般包括细胞破裂、蛋白质和RNA的去除、质粒DNA的纯化等步骤。
实验材料，细菌培养物、质粒DNA提取试剂盒、离心管、离心机、PCR仪等。
实验步骤：1. 取细菌培养物1ml，进行细菌离心，将菌体沉淀。
2. 加入细菌破裂液，使菌体破裂释放质粒DNA。
3. 加入蛋白酶和RNase，去除蛋白质和RNA。
4. 用离心机离心，将沉淀物中的DNA纯化。
5. 用PCR仪进行PCR扩增，验证提取的质粒DNA。
实验结果：经过实验，成功提取到了质粒DNA。
通过PCR扩增，验证了提取的质粒DNA 的完整性和纯度。
实验结论：通过本次实验，我们成功掌握了质粒DNA的提取方法，了解了质粒DNA的结构和特点。
质粒DNA的提取是分子生物学研究中的重要步骤，掌握了这一技术，将为我们今后的科研工作提供有力支持。
实验注意事项：1. 在实验过程中要注意细菌培养物的处理和离心操作的安全性。
2. 实验中使用的试剂盒要按照说明书操作，注意避光和保存条件。
3. 实验过程中要注意保持实验环境的清洁和整洁，避免外源DNA的污染。
4. 实验结束后要及时清理实验台和设备，保持实验室的整洁。
通过本次实验，我们不仅掌握了质粒DNA的提取方法，还培养了实验操作的技能和实验室的安全意识。
这对我们今后的科研工作具有重要的指导意义。
生物化学实验报告
姓名：
学号：
专业年级：
组别：
生物化学与分子生物学实验教学中心
实验名称质粒DNA的提取、定量与酶切鉴定
实验日期2014-12-11 实验地点第4实验室
合作者指导老师
评分教师签名批改日期
一、实验目的
1.掌握PCR基因扩增的原理和操作方法
2.掌握碱裂解法提取质粒的方法
3.了解紫外吸收法检测DNA浓度与纯度的原理、方法
4.学习水平式琼脂糖凝胶电泳操作
二、实验原理
（一）、第一部分聚合酶链式反应
1.PCR（Polymerase Chain Reaction）即聚合酶链式反应，是指在DNA聚合酶催化下，以DNA为模板，特定引物为延伸起点，通过变性、退火、延伸等步骤，在体外复制DNA 的过程。
1)加热使模板DNA，在高温下90℃-95变性，双链解链；
2)降低溶液温度，使合成引物在低温（35－70℃,一般低于模板Tm值的5℃
左右），与模板DNA互补退火形成部分双链；
3)溶液反应温度升至中温72℃，在Taq酶作用下，以dNTP为原料，引物为
复制起点，模板DNA的一条单链在解链和退火之后延伸为一条双链。
（二）、第二部分质粒DNA提取与定量
1.质粒（Plasmid）
1)独立于细菌染色体外，能独立自主复制的闭合环状DNA分子；
2)存在于细菌，放线菌，真菌以及一些动植物细胞中，在细菌细胞中最多。
2.碱裂解法、
1)基于染色体DNA与质粒DNA的变性与复性的差异；
2)高碱性条件下，染色体DNA和质粒DNA变性；
3)当以高盐缓冲液调节其pH值至中性时，变性的质粒DNA复性并保存在溶
液中，染色体DNA不能复性而形成缠连的网状结构，通过离心形成沉沉淀
去除。
3.离心层析柱
1)硅基质膜在高盐、低pH值状态下选择性地结合溶液中的质粒DNA，不吸
附蛋白质、多糖等物质；
2)通过去蛋白液和漂洗液将杂质和其它细菌成分去除；
3)低盐，高pH值的洗脱缓冲液将纯净质粒DNA从硅基质膜上洗脱。
4.紫外光吸收法
1)物质在光的照射下会产生对光的吸收效应；
2)而且物质对光的吸收是具有选择性的；
3)各种不同的物质都具有其各自的吸收光谱。
4)因此不同波长的单色光通过溶液时其光的能量就会被不同程度的吸收，光能
量被吸收的程度和物质的浓度有一定的比例关系。
（三）、第三部分酶切鉴定
1.限制性内切酶
1)限制性内切酶（restriction endonuclease）是DNA操作过程中所使用的基本
工具；
2)特异性地结合于一段被称为限制酶识别序列的特殊DNA序列之内或其附近
的特异位点上，并在此切割双链DNA；
3)分子克隆中常用的为II类限制酶，其识别位点长度为4、5或6个核苷酸的
反向重复序列。
（四）、第四部分琼脂糖凝胶电泳
1. 天然琼脂
1)天然琼脂（Agar）是一种多聚糖，主要由琼脂糖（Agarose ，约占80％）及
琼脂胶（Agaropectin）组成；
2)琼脂糖是由半乳糖及其衍生物构成的中性物质，不带电荷；
3)琼脂胶是一种含硫酸根和羧基的强酸性多糖，由于这些基团带有电荷，在电
场作用下能产生较强的电渗现象，加之硫酸根可与某些蛋白质作用而影响电
泳速度及分离效果。
琼脂糖透明无紫外吸收，因此，目前多用琼脂糖为电泳
支持物进行平板电泳。
2.基本原理
1)琼脂糖是一种天然聚合长链状分子，可以形成具有刚性的滤孔，凝胶孔径的
大小决定于琼脂糖的浓度；
2)DNA分子在碱性环境中带负电荷，在外加电场作用下向正极泳动；
3)DNA分子在琼脂糖凝胶中泳动时，有电荷效应与分子筛效应。
不同的DNA，
分子量大小及构型不同，电泳时的泳动率就不同，从而分出不同的区带(迁移
速度与分子量的对数值成反比关系)。
三、材料与方法：
（一）实验材料
1.试剂
1)菌液：大肠杆菌DH5a菌株(含靶基因CHD5片段的pMD19-T)
2)引物：正向：5’ GTA AAA CGA CGG CCA GT 3’
反向: 5’ CAG GAA ACA GCT ATG AC 3’
3)2×Premix Taq：Taq酶：5U/μl
4×dNTP: 各10mmol/L
10×缓冲液（buffer）: 500mmol/L KCl，100mmol/L Tris-HCl
4)灭菌去离子水
5)含pMD19-T质粒的大肠杆菌DH5α
6)LB培养基（液体、固体）
7)AXYGEN试剂盒质粒提取试剂盒（爱思进，中国）
a)溶液P1（S1)
b)溶液P2 (S2）
c)溶液P3（S3）
d)去蛋白液PE（W1)
e)漂洗液WB(W2）
f)洗脱液EB（Eluent)
8)DNA Marker
9)电泳缓冲液
2.仪器与器材
1)PCR仪(BioRad MJ mini)
2)台式离心机
3)微量加样枪
4)灭菌的薄壁离心管
5)凝胶电泳系统
6)凝胶成像系统
7)恒温培养箱
8)恒温摇床
9)超净工作台
10)台式离心机
11)高压灭菌锅（二）方法与步骤
4.要根据质粒的大小、大肠杆菌菌株、裂解后用于纯化的技术和实验要求选择碱裂
解法方法来提取质粒DNA 。
5.在提取质粒DNA 时，菌液一定悬浮均匀，不能有结块。
6.在质粒DNA 提取的实验中，加入溶液S2时，时间不
能太久，动作要温柔，轻轻颠倒几次。
7.在质粒DNA 提取实验中，复性时间不能太长。
8.在质粒DNA 提取实验中，将上清液转移到吸附柱时，
需小心谨慎，避免有蛋白质掺和进去，需用微量加样枪
100ul 或200ul 分几次取。
9.执比色皿时，应该拿着比
色皿的粗糙面，不能触碰光滑面。
空白对照比色测定和样品比色测定应该在同一比色皿中检测。
四、结果与讨论：
1.实验记录
测量次数质粒DNA浓度 (μg/ml) Ratio值(A260/A280)
1 95.4 1.77
2 95.5 1.78
3 97.1 1.79
平均值95. 7 1.78
2.结果与计算
相关实验图片：
3.分析与讨论
1)图片分析
a)在图片三中，其他三类DNA与Maker相比较，可知质粒DNA的分子大小
在2000bp~3000bp，酶切反应的质粒DNA片段分子大小在3000bp左右，PCR
的DNA分子大小在450bp。
b)预期PCR产物大小约400~500bp，基本符合。
2)原因分析
a)PCR颜色较浅，有可能与点样前操作失误相关。
4.复习与思考
1)碱法提质粒中溶液Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ的作用？
溶液Ⅰ：葡萄糖悬浮细胞，EDTA鳌合金属离子使DNase失活。
溶液Ⅱ：细胞壁肽聚糖在碱性下水解，核酸和蛋白质变性。
溶液Ⅲ：酸性条件下质粒DNA复性，变性蛋白-SDS＋线性DNA沉淀，Na＋可中和DNA。
2)结合实验情况，如何提高限制性酶切的反应效率？
a)酶量的选择任何时候2种酶的总量不能超过反应体系的1/10体积，而且
最大反应体系最好不要小于20 ul；
b)减少能抑制酶反应的主要污染DNA的某些物质，如酚、氯仿、乙醇等；
c)合适离子强度，主要是反应缓冲液中的离子强度,如NaCl和Mg2+,可以
激发酶切反应；
d)一般应尽量减小反应体系，且酶切反应中甘油浓度应低于5%；
e)保温时间与温度。
