南瓜多糖提取方法

1.南瓜粗多糖的提取：准确称取100g 新鲜南瓜，加入200ml蒸馏水，在榨汁机中搅拌5min，置于烧杯，放入70℃恒温水浴中加热2h，搅拌提取多糖，然后抽虑，滤液80℃真空浓缩至固形物含量约30%，在浓缩液中加入5倍体积95%酒精搅拌均匀，冰箱放置过夜，离心得沉淀物。

沉淀物以水溶解重复醇析1次，然后将沉淀物用无水酒精、丙酮、乙醚洗涤，冷冻干燥得南瓜粗多糖。

2.Sevag法除蛋白质取粗多糖的样品，用蒸馏水溶解，按多糖水溶液体积的1/3-1/4加入氯仿：正丁醇（4：1）混合液剧烈震荡，离心分离30min，除蛋白质，反复操作5次，直至紫外光谱分析在蛋白质280nm和核酸260nm处无特征吸收峰，说明含氮物质已除去。

3. 南瓜多糖降糖组分的分离、纯化（三氯乙酸）将南瓜多糖粗品饱和溶解至0.1 mol/L 氯化钠溶液中,4 ℃放置24 小时,离心,弃去沉淀,滤液中加入40 %三氯乙酸使其终浓度达到10 % ,4 ℃冷藏24小时, 离心, 沉淀用0.1 mol/L NaCl 溶液溶解, 经Sepharose CL24B 柱层析,用0.1 mol/L 氯化钠溶液洗脱、分离,采用硫酸- 蒽酮法跟踪检测,收集含多糖的组分,再用0.1 mol/L NaOH 中和,将洗脱液适当浓缩,透析,用Sephadex A2200 柱层析分离、纯化, 用0.1 mol/L 氯化钠溶液洗脱(洗脱液流速: 0.55 mL/min) ,收集洗脱液,减压浓缩,冷冻干燥得白色粉末状南瓜多糖精品,测定其多糖含量。

4.南瓜多糖精品的纯度鉴定柱层析法将多糖精品溶解在0.05 mol/L磷酸缓冲液(PH=7.0 的PBS 2mol/l 的91.4ml磷酸一氢钠+8.6ml磷酸二氢钠为100mlPBS) 中, 质量浓度为0.3g/dL , 经用0.05 mol/L PBS 平衡后的Sephadex G2200 层析柱洗脱,体积流量为4.8 mL/h ,每管收集洗脱液2 mL ,硫酸- 苯酚法部分收集检测，分析多糖组分。

南瓜多糖中药提取物南瓜多糖【提取来源】本品为葫芦科植物南瓜Cucurbita moschnta(Duch.ex Lam.) Poiret的果实提取的多糖类成分，总多糖含量≥60%。

【制法】南瓜切片水煮提取，沉淀，精滤，浓缩液加乙醇沉淀，粗多糖透析，脱蛋白，喷雾干燥，最后加入10%水提干粉混合而成。

【性状】本品为浅黄色至棕黄色粉末，可溶于热水。

【鉴别】取本品加热水制成46.0%的溶液作供试液。

取南瓜标准对照药材1.0g加热水40ml，80℃超声提取30分钟，滤液蒸干，残渣加40%甲醇1ml，热溶滤过作对照液。

取上述两液各10μl，分别点于同一硅胶G板，一次点三板。

(1)乙酸乙酯-甲醇-水(8：1：1)展开，喷5%三氯化铝乙醇溶液，紫外灯365nm下检视。

(2)乙酸乙酯-异丙醇(7：13)展开，喷茴香醛硫酸试液，热风吹显。

(3)正丁醇-乙醇-水(5：3：2)展开，喷茴香醛硫酸试液，热风吹显。

以上三板荧光斑点和可见光斑点对应率≥80%。

取本品与南瓜多糖对照品各20mg，分别加入2 mol/L硫酸2ml，110℃水解8小时，BaCO3中和至pH=6～7，离心，上清液浓缩至1ml，各取10μl，分别点于同一硅胶G板，以正丁醇-二甲基吡啶-水(6：3：1)展开，喷茴香醛硫酸试液，热风吹显，斑点对应率≥80%。

【检查】水分：不得过5. 0%(附录Ⅸ H)灰分：不得过3.0%(附录Ⅸ K)重金属：不得过10ppm(附录Ⅸ E)砷盐：不得过2ppm(附录Ⅸ F)糊精：不得过0.5%(附录Ⅳ)【含量测定】照多糖含量测定法(附录Ⅲ)测定。

【功能】降血糖，降血脂，抗肿瘤。

【贮藏】阴凉，干燥，避光。

食品科学农村经济与科技2020年第31卷第1期（总第477期）南瓜多糖提取分离条件的优化王志高，罗红宇（浙江海洋大学，浙江　舟山　316022）[摘要] 试验选用锦州当地南瓜为原料，对其中的南瓜多糖进行提取。

以投料比、提取温度、提取时间、碱液的浓度为因素进行正交试验，确定提取纯化南瓜多糖的最佳工艺参数，试验结果表明，提取温度为80℃，提取时间为2h，液料比为5：1，碱液浓度在0.4mol/L时为最佳。

纯化时采用糖液与乙醇比例为1：3的的沉淀条件，温度62℃，加热32min，活性炭添加量为3%的脱色条件，10%三氯乙酸除蛋白方法和2～3天的透析时间为最佳。

[关键词]南瓜多糖；提取；纯化[中图分类号]R284.2 [文献标识码]A南瓜葫芦科南瓜属中一年生蔓性草本植物。

南瓜多糖主要在两大方面有应用，一是医药方面，二是普通食品及保健品方面。

此外，多糖特殊的食品加工性能，例如增稠性、稳定性。

同时将其添加到肉制品中能提高肉制品的保水力，使肉具有较高的嫩度。

同时，保健品的研发也是层出不穷，好比以枸杞、银耳等为多糖原料开发的功能饮料已出现在市场上。

南瓜多糖不仅可防治糖尿病并发症，而且还具有较好的抗动脉粥样硬化的作用。

南瓜多糖有协助清除体内氧化自由基的作用，减少脂类物质过氧化反应，预防心血管疾病的发生。

此外它还具有减缓与抑制肿瘤生长的作用。

　目前南瓜多糖的主要提取方法有水提醇沉法、微波辅助提取法、复合酶提取法、碱液提取法、超声波提取法等方法。

本课题研究的目的是把在原有的基础上改进提取工艺，确定南瓜多糖提取纯化的最佳工艺参数，找到一条快速、性价比高、得率和纯度高的工艺流程，以便获得更多的南瓜多糖并以此提高南瓜利用率，降低南瓜在工业化生产中的损失。

1　实验材料与方法1.1　实验材料、试剂及设备南瓜（购买自锦州石桥子早市）乙醇，丙酮，石油醚，氢氧化钠，苯酚，乙醚，浓硫酸，葡萄糖，浓盐酸，三氯乙酸，酒石酸钾钠，乙酸锌，硫酸铜，亚铁氰化钾，活性炭，（均为分析纯）。

1.3试验方法1.3.1 南瓜多糖的制备南瓜切片后置于80 ℃烘箱中烘24 h，粉碎，过100目筛即得南瓜粉。

取一定量的南瓜粉置于250 mL烧瓶中，加水适当的蒸馏水，在适当的温度下恒温加热一定的时间，然后3000 r/min离心15 min，取上清液，上清液用饱和乙酸铅除去蛋白质、色素，再次离心取上清液，去除上清液中剩余铅，过滤，得南瓜多糖提取液，最后蒸发浓缩即得南瓜多糖。

1.3.2 单因子试验1.3.2.1 浸提取时间的影响在温度为80℃，瓜液比或加水量为1:20的条件下，分别在不同的 5 个时间（60 min、90 min、120 min、150 min、180 min）下进行提取，考察浸提时间对多糖提取的影响，以确定最佳浸提时间。

1.3.2.2 浸提取温度的影响选取60℃，70℃，80℃，90℃，100℃，5个温度水平，在上步中最佳浸提时间的基础上加水量为1:20的条件下进行提取，考察温度对多糖得率的影响，以确定最佳浸提取温度。

1.3.2.3 料液比（加水量）的影响选用l：10、l：15、l：20、l：25、l：30，5个料液比水平，在上两步的最佳浸提时间和最佳浸提温度的条件下进行提取，考察料液比对多糖得率的影响。

1.4多糖的测定蒽酮-硫酸法[15]据文献报道检测南瓜多糖主要是蒽酮-硫酸法，即酸性糖在蒽酮及浓硫酸的作用下显色，于620nm处检测，得到其多糖的含量。

1.4.1 标准曲线的绘制葡萄糖标准液的配制：精确称取干燥的葡萄糖100mg置于100 mL容量瓶中用蒸馏水定容，得浓度为1 mg/mL葡萄糖标准溶液。

蒽酮溶液的配制[17]：取0.2 g蒽酮溶解到80% 硫酸中，以80% 硫酸定容到100 mL现用现配。

取葡萄糖标准液1 mL、2mL、3mL、4mL、5mL、6 mL，于100 mL容量瓶，以蒸馏水稀释至刻度，摇匀。

分别取1 mL上述溶液于具塞的试管中，各自加入4 mL蒽酮试剂，定容至10mL，以1 mL蒸馏水作空白对照，立即摇匀，置沸水浴中加热8 min，迅速冷却至室温，于620 nm 处测定吸光度值，以吸光度对葡萄糖浓度作回归处理，得到葡萄糖浓度(C)与吸光度(A)的曲线列出直线回归方程。

㊀第９期㊀㊀收稿日期：２０２１－０２－０６㊀㊀基金项目：云南省教育厅科学研究基金项目（２０１９Ｊ０３７６）㊀㊀作者简介：蒋高华（１９８２ ），安徽巢湖人，高校讲师，研究方向：有机资源综合利用㊂南瓜多糖提取工艺优化研究蒋高华，赵江，彭兴华，杨文坪（云南能源职业技术学院资源与环境工程学院，云南曲靖㊀６５５００１）摘要：南瓜多糖是南瓜中具有重要活性的功能成分㊂通过实验研究了提取温度㊁超声功率㊁提取时间和液料比对提取南瓜多糖的影响㊂结果表明：在提取温度７０ħ，超声功率８０Ｗ，提取时间１５ｍｉｎ，液料比１ʒ２０下进行南瓜多糖的提取，南瓜多糖的提取率为３５．６ｍｇ／ｇ㊂关键词：南瓜多糖；提取；工艺优化中图分类号：ＴＱ２８１；ＴＳ２０１㊀㊀㊀㊀文献标识码：Ａ㊀㊀㊀㊀文章编号：１００８－０２１Ｘ（２０２１）０９－００１３－０２ＳｔｕｄｙｏｎＯｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎｏｆＥｘｔｒａｃｔｉｏｎＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙｏｆＰｕｍｐｋｉｎＰｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅＪｉａｎｇＧａｏｈｕａ，ＺｈａｏＪｉａｎｇ，ＰｅｎｇＸｉｎｇｈｕａ，ＹａｎｇＷｅｎｐｉｎｇ（ＣｏｌｌｅｇｅｏｆＲｅｓｏｕｒｃｅｓａｎｄＥｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌＥｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，ＹｕｎｎａｎＶｏｃａｔｉｏｎａｌＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆＥｎｅｒｇｙＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｑｕｊｉｎｇ㊀６５５００１，Ｃｈｉｎａ）Ａｂｓｔｒａｃｔ：ＰｕｍｐｋｉｎｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｗａｓａｎｉｍｐｏｒｔａｎｔｆｕｎｃｔｉｏｎａｌｃｏｍｐｏｎｅｎｔｉｎＰｕｍｐｋｉｎ．Ｉｎｔｈｉｓｐａｐｅｒ，ｔｈｅｅｆｆｅｃｔｓｏｆｅｘｔｒａｃｔｉｏｎｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ，ｕｌｔｒａｓｏｎｉｃｐｏｗｅｒ，ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎｔｉｍｅａｎｄｒａｔｉｏｏｆｌｉｑｕｉｄｔｏｍａｔｅｒｉａｌｏｎｅｘｔｒａｃｔｉｏｎｏｆＰｕｍｐｋｉｎｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｗｅｒｅｓｔｕｄｉｅｄ．ＴｈｅｒｅｓｕｌｔｓｓｈｏｗｅｄｔｈａｔｔｈｅｅｘｔｒａｃｔｉｏｎｒａｔｅｏｆＰｕｍｐｋｉｎｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｗａｓ３５．６ｍｇ／ｇａｔｔｈｅｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅｏｆ７０ħｕｌｔｒａｓｏｎｉｃｐｏｗｅｒｏｆ８０Ｗ，ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎｔｉｍｅｏｆ１５ｍｉｎａｎｄｒａｔｉｏｏｆｌｉｑｕｉｄｔｏｍａｔｅｒｉａｌｏｆ１ʒ２０．Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：ｐｕｍｐｋｉｎｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ；ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ；ｐｒｏｃｅｓｓｏｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎ㊀㊀南瓜系葫芦科南瓜属植物果实㊂南瓜富含南瓜多糖㊁氨基酸㊁蛋白质㊁纤维素及维生素等多种营养成分，其中南瓜多糖具有抗氧化㊁降血糖㊁降血脂㊁抗肿瘤㊁增强免疫等功效［１－５］㊂对南瓜多糖的研究引起人们的高度关注㊂本文以曲靖本地产南瓜为原材料，采用热水浸提加以超声方式来提取南瓜多糖，研究了提取温度㊁超声功率㊁提取时间和液料比对南瓜多糖提取的影响，为南瓜多糖的开发利用提供理论依据㊂１㊀材料与方法１．１㊀实验材料原料与试剂：菜市场购置本地南瓜；无水乙醇㊁丙酮㊁乙醚㊁双氧水㊁正丁醇㊁氯仿㊁浓硫酸㊁苯酚㊁葡萄糖标准品，均为分析纯．实验设备：鼓风干燥箱㊁１００目筛子㊁离心机㊁ＴＵ－１９０１双光束紫外可见分光光度计㊁ＳＫ２５１０ＬＨＣ数控超声波清洗器㊁分析天平㊂１．２㊀实验方法１．２．１㊀南瓜多糖提取新鲜南瓜洗净处理后，将其切成薄片，在６０ħ鼓风干燥箱烘干㊂将烘干的南瓜片研磨成粉，过１００目筛，制成南瓜粉㊂南瓜粉末按比例加水混合ң超声波浸提ң离心ң上清液浓缩ңＳｅｖａｇｅ法除蛋白ң活性炭脱色ң醇沉㊁洗涤㊁干燥ң南瓜粗多糖㊂１．２．２㊀标准曲线建立主要采用硫酸－苯酚比色法进行测定多糖得率［６］㊂分别准确量取１００ｍｇ／Ｌ的葡萄糖标准溶液０．０，０．２，０．４，０．６，０．８，１．０ｍＬ放入１０ｍＬ比色管，加蒸馏水至２．０ｍＬ，再加入５％苯酚溶液１．０ｍＬ，混合均匀后加入５．０ｍＬ浓硫酸，摇匀后置于沸水浴中１２ｍｉｎ，取出冷却时室温㊂在最大吸收波长４９０ｎｍ处测其吸光度，得到线性回归方程Ａ＝８．３３Ｃ＋０．５００，Ｒ２＝０．９９４２㊂结果表明具有良好的线性关系㊂１．２．３㊀单因素实验与参数优化称取２．０ｇ南瓜粉４份，分别在研究提取温度㊁超声功率㊁提取时间和液料比等参数对多糖得率影响㊂根据实验结果，在其他条件相同的情况下，先后改变提取温度㊁超声功率㊁提取时间和液料比，比较各因素对南瓜多糖得率的影响㊂在单因素实验的基础上选取提取温度㊁超声功率㊁提取时间和液料比４个因素为考察因素，选择Ｌ９（３４）正交表设计试验，优化南瓜多糖提取工艺㊂２㊀结果与分析２．１㊀单因素实验２．１．１㊀提取温度对南瓜多糖提取率的影响由图１可以看出，当提取温度升高到６０ħ时，多糖得率明显增加；后面温度继续升高，多糖得率会下降㊂结果表明，随着提取温度升高，南瓜多糖提取率会逐渐增加㊂一般来说，温度升高会增加溶剂分子和溶质分子的运动，促进扩散作用，有利于提高提取率［７］㊂所以选择提取温度为６０ħ㊂图１㊀提取温度的影响２．１．２㊀超声功率对南瓜多糖提取率的影响由图２可以看出，超声功率变大时，南瓜多糖得率出现先增加后降低的情况㊂结果表明，超声功率在８０Ｗ的时候，南瓜多糖的提取率最大㊂主要原因可能是因为超声的空化作用和机械振动作用，导致南瓜细胞破坏越来越容易，才会出现南瓜㊃３１㊃蒋高华，等：南瓜多糖提取工艺优化研究山㊀东㊀化㊀工多糖提取率增加㊂所以选择提取功率为８０Ｗ㊂图２㊀超声功率的影响２．１．３㊀提取时间对南瓜多糖提取率的影响由图３可以看出，随着提取时间变化，南瓜多糖得率出现先增后降的情况㊂结果表明，提取时间在２０ｍｉｎ的时候，南瓜多糖的提取率最高㊂主要原因是从南瓜中提取多糖属于固液提取过程，只要有足够时间就能保证固相和液相充分接触，使得溶剂渗入到南瓜细胞中并有利于传质过程㊂所以选择提取时间为２０ｍｉｎ㊂图３㊀提取时间的影响２．１．４㊀液料比对南瓜多糖提取率的影响由图４可以看出，随着液料比的变化，南瓜多糖得率出现先升高后降低的情况㊂结果表明，液料比在１ʒ２０的时候，南瓜多糖的提取率最高㊂主要原因是液料比可以使得固相和液相充分结合，从而提高南瓜多糖的提出率，液料比再增加不会对提出率有明显提升㊂所以选择液料比为１ʒ２０㊂图４㊀液料比的影响２．２㊀正交试验设计根据２．１的单因素实验结果，选用Ｌ９（３４）正交表，以提取温度㊁超声功率㊁提取时间和液料比为考察因素，因素水平见表１，实验结果见表２㊂表１㊀正交试验因素水平表水平因素Ａ提取温度／ħＢ超声功率／ＷＣ提取时间／ｍｉｎＤ液料比／（ｇ／ｍＬ）１５０７０１５１ʒ１５２６０８０２０１ʒ２０３７０９０２５１ʒ２５表２㊀正交试验结果试验编号因素ＡＢＣＤ多糖提取率／（ｍｇ／ｇ）１１１１１２８．４２１２２２３１．６３１３３３２９．５４２１２３２８．６５２２３１２９．８６２３１２３０．６７３１３２３４．５８３２１３３５．８９３３２１３６．４Ｋ１４．５６６５．２４６５．２１５４．８７５Ｋ２４．５９７４．９８６４．４９８４．７６６Ｋ３４．４３４４．８９１４．７８９４．８８１Ｒ０．１６３０．３５５０．７２６０．１１５㊀㊀从表２可以得知㊂极差大小顺序为：提取时间＞超声功率＞提取温度＞液料比㊂极差越小说明该因素对南瓜多糖提取的影响越小，极差越大说明该因素对南瓜多糖提取的影响越大㊂由此可以得出各因素对南瓜多糖的影响程度由大到小顺序为：提取时间＞超声功率＞提取温度＞液料比，最佳提取条件为：提取温度７０ħ㊁超声功率８０Ｗ㊁提取时间１５ｍｉｎ㊁液料比１ʒ２０，即最佳组合为：Ａ３Ｂ２Ｃ１Ｄ２，此时南瓜多糖的得率为３５．６ｍｇ／ｇ㊂３㊀结论在提取温度７０ħ，超声功率８０Ｗ，提取时间１５ｍｉｎ，液料比１ʒ２０下进行南瓜多糖的提取，结果南瓜多糖的提取率为３５．６ｍｇ／ｇ㊂为南瓜多糖提取及应用提供理论依据㊂参考文献［１］中国农业百科全书编辑部．中国农业百科全书（蔬菜卷）［Ｍ］．北京：农业出版社，１９９０：７１３．［２］罗双群，张桂红，陈海伟，等．南瓜功能特性研究进展［Ｊ］．粮食与油脂，２０１２（４）：４７－４９．［３］任永新．浅谈南瓜的保健功能及药理作用［Ｊ］．食品工程，２００７（２）：１０－１２．［４］赵婧，袁驰，周春丽，等．南瓜多糖降血糖作用研究进展［Ｊ］．食品研究与开发，２０１４，３５（７）：１０８－１１０．［５］毕新颖，王建南，姜玲玲，等．南瓜多糖的多重生理效用研究进展［Ｊ］．生物学杂志，２０１４，３１（１）：７８－８１．［６］向东，赖凤英，梁平．植物性多糖的强化提取［Ｊ］．食品与发酵工业，２００４，３０（５）：８１－８４．［７］赵二劳，李满秀，梁兴红．超声提取南瓜多糖的研究［Ｊ］．声学技术，２００８，２７（１）：５８－６０．（本文文献格式：蒋高华，赵江，彭兴华，等．南瓜多糖提取工艺优化研究［Ｊ］．山东化工，２０２１，５０（９）：１３－１４．）㊃４１㊃ＳＨＡＮＤＯＮＧＣＨＥＭＩＣＡＬＩＮＤＵＳＴＲＹ㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀２０２１年第５０卷。

精品整理
南瓜多糖清洁生产提取工艺
南瓜多糖是一种非特异性免疫增强剂，具有丰富的活性功能，多项研究表明南瓜多糖对免疫系统有重要的调节作用，同时具有降血糖、降血脂、抗癌等作用，南瓜多糖作为长效、无毒、降血糖，调血脂药物或食疗剂，因此它在保健食品与医药上的广泛使用。

它的开发利用和研究越来越受到人们的关注，然而目前南瓜多糖的提取存在产品的纯度不高，有机溶剂的使用量比较大等多方面问题。

针对目前南瓜多糖提取工艺中存在的问题，通过正交试验设计进行提取操作单元优化，使用膜分离技术进行有效分离和纯化，从而进行南瓜多糖清洁。

通过南瓜多糖清洁生产工艺研究，先采用正交试验找到提取条件：温度40℃、浸提时间0.5h、料液比1∶3，此条件下多糖提取率达到95.6%。

提取液离心调节pH值后，依次经过微滤膜N100除杂，可使南瓜多糖透过率达97.3%、杂质截留率为21.6%；然后经纳滤膜DLC浓缩，浓缩后南瓜多糖截留率达94.5%，南瓜多糖的纯度为67.5%，其品质明显高于传统工艺提取的多糖。

整个新工艺过程，分离效率高、能耗低的特点充分体现的清洁生产的“节能、降耗、减污、增效”的宗旨，企业采用此清洁生产工艺可降低成本，减少污染，大大提高经济效益。