单胺氧化酶酶活测试
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单胺氧化酶(MAO)
一、检测原理
基质中的苄胺在血清MAO作用下产生NH3,NH3在谷氨酸脱氢酶作用下与a-酮戊二酸和NADH反应,在340nm波长处,通过测定NADH吸光度的变化,从而求得样品中MAO 的活性。
二、参考区间
血清:小于12U/L
三、临床意义
1、单胺氧化酶含有铜离子,分布在肝、肾等组织的线粒体中,其含量依次为肝、心、肾、脑、肺、骨骼肌,血小板和胎盘中也含有单胺氧化酶。
2、病理性增高
(1)肝炎急性肝炎单胺氧化酶活性可正常或稍增高,而当有大块肝坏死,血液中单胺氧化酶会明显增高;慢性肝炎在无活动性肝细胞损害的情况下,单胺氧化酶多属正常,但当
有活动性肝细胞损害时,单胺氧化酶亦增高。
(2)肝硬化70%~80%重症肝硬化患者单胺氧化酶增高,而且与肝硬化结节程度呈正相关,但对早期肝硬化并不敏感。
(3)肝外疾病如甲状腺功能亢进症、系统性硬化症、慢性充血性心力衰竭、糖尿病,单胺氧化酶也可升高。
3、病理性降低常见于:烧伤、高尿酸血症。
血清单胺氧化酶(MAO)的检测及临床意义一、概述单胺氧化酶(monoamine oxidase,MAO)是一组催化多种单胺类化合物氧化脱氨的酶,广泛分布于肝、肾、胃、小肠和脑等组织中及细胞线粒体内,主要参与生物活性胺类物质的代谢灭活。
MAO催化胺类物质氧化脱胺,进而生成醛而灭活,进而被醛脱氢酶或醛还原酶催化生成酸或醇排出体外。
血清中MAO和结缔组织中的MAO性质相似,能促进结缔组织的成熟。
在胶原形成过程中,参与胶原成熟的最后阶段架桥的形成,使胶原和弹性硬蛋白相结合。
二、检测方法1、血清MAO测定有化学比色法、速率法等,目前应用较多的是速率法。
2、速率法原理:血清MAO催化苄胺的氧化反应,生成苄醛、过氧化氢和氨,氨在谷氨酸脱氢酶的作用下与α-酮戊二酸反应生成谷氨酸,同时转化NADH为NAD+,通过监测340nm波长处NADH吸光度的下降速率测定MAO活性。
三、参考区间血清MAO:12~40U/L。
不同方法测定结果可能有一定差异。
四、临床意义1、血清单胺氧化酶对诊断肝硬化和肝纤维化有一定的价值。
肝硬化时,MAO活性升高的阳性率可以高达80%以上,且活性升高与肝表面结节形成的进程相平行。
如果肝癌患者MAO增高,表明该患者同时伴有肝纤维化。
2、各型肝炎急性期患者的血清MAO活性多不升高,但急性重型肝炎时,因肝细胞坏死,线粒体释放大量MAO,可导致血清MAO活性升高。
3、肢端肥大症、结缔组织病、严重脂肪肝、慢性右心衰竭伴肝淤血等,血清MAO均会增高。
4、MAO增高还见于阻塞性黄疸、甲状腺功能亢进症、糖尿病、心功能不全及各种胶原性疾病等。
5、精神分裂症患者MAO明显降低,服用避孕药、肾上腺皮质激素、左旋多巴肼类等药物可引起MAO活性降低。
五、注意事项1、溶血不影响酶的测定结果2、标本在4℃时可稳定3d。
3、样本中氨浓度大于50umol/L,可能导致血清MAO检测结果假阳性4、个体血清MAO活性较易波动,故应多次测定5、若MAO活性超过80U/L,应将样品稀释后重新测定。
单胺氧化酶检测方法嘿,朋友们!今天咱来聊聊单胺氧化酶检测方法。
你说这单胺氧化酶啊,就好像是身体里的一个小“侦探”,它的情况能透露出好多健康的秘密呢!那怎么检测这个小“侦探”呢?咱先说说酶活性检测吧。
这就好比是要抓住这个“小调皮”,看看它有多活跃。
通过一些特定的化学反应,观察反应的快慢呀、产物的多少呀,就能大致知道单胺氧化酶的活跃程度啦。
这就像是你观察一个孩子玩游戏,看他玩得有多起劲儿,就能知道他对这个游戏有多感兴趣一样。
还有一种检测方法是检测单胺氧化酶的含量。
这就像是数数家里有多少个特定的玩具一样,直接知道数量的多少。
用专门的试剂和仪器,就能把单胺氧化酶的量给测出来啦。
你想想啊,要是能准确知道单胺氧化酶的情况,那医生们不就像有了一双“透视眼”,能更好地了解我们身体的状况啦?这多重要啊!就好像你知道自己的车子哪里出了问题,才能更好地去修理它呀。
检测的时候可不能马虎哦!就像做饭一样,调料放错了或者火候不对,那做出来的菜可就不好吃啦。
检测也是一样,每一个步骤都要认真对待,不然得出的结果可就不准确了。
而且啊,不同的检测方法都有各自的特点和适用情况呢。
这就跟不同的工具一样,有的适合拧螺丝,有的适合敲钉子。
咱得根据具体的需求来选择合适的检测方法。
咱再说说检测的环境和条件。
这就好比植物生长需要合适的阳光、温度和水分一样,检测也需要合适的环境和条件。
要是温度不对啦,试剂过期啦,那结果能准吗?那肯定不行啊!总之呢,单胺氧化酶检测方法可真是个大学问。
咱得重视起来,让它为我们的健康服务。
可别小看了这个小小的检测哦,它说不定能在关键时刻发挥大作用呢!它能帮医生更好地诊断疾病,帮我们更好地了解自己的身体。
所以啊,大家一定要认真对待单胺氧化酶检测呀!。
专利名称:单胺氧化酶活性测定方法及单胺氧化酶诊断试剂盒专利类型:发明专利
发明人:王尔中
申请号:CN200410066191.8
申请日:20041213
公开号:CN1789429A
公开日:
20060621
专利内容由知识产权出版社提供
摘要:本发明涉及单胺氧化酶活性的测定方法及其诊断试剂盒,以苄胺、对苯甲胺-β-偶氮萘酚、丁基胺、戊基胺、β-苯乙基胺、酪胺等胺类化合物作为底物,与单胺氧化酶反应生成相应醛类产物,再偶联醛脱氢酶,将氧化型辅酶反应成还原型辅酶,通过测定主波长340nm处吸光度的上升速度定量反映出样品中单胺氧化酶的活性大小。
该方法特异性高,不受内、外源物质的污染,测试结果精确、准确性好。
将诊断试剂盒制成双剂或三剂可减少各成分的交叉影响,保持试剂的稳定性,便于长期储存。
该方法在普通紫外/可见光分析仪或者半自动/全自动生化分析仪上便可快速检测,不需要特殊或额外仪器,测试成本低廉,便于行业内推广应用。
申请人:苏州艾杰生物科技有限公司
地址:215021 江苏省苏州市工业园区科技园(机场路328号122B)
国籍:CN
代理机构:南京苏科专利代理有限责任公司
代理人:姚姣阳
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血清单胺氧化酶(MAO)活性测定及意义单胺氧化酶(monoamine oxidase,MAO),为催化单胺氧化脱氨反应的酶,作用于一级胺及其甲基化的二、三级胺,也作用于长链的二胺。
对所谓生物胺,即酪胺、儿茶酚胺、5-羟色胺、去甲肾上腺素、肾上腺素等也有作用。
此酶多见于脊椎动物的各种器官,特别是分泌腺、脑、肝脏,但在无脊椎动物、豆类的芽等植物中也存在。
在细胞内存在于线粒体外膜上,是不溶性酶。
含FAD。
1-异烟酰-2-异丙基肼(iproniazid)、β-苯基异丙基肼(pheniprazine)等药物对此酶有强烈的竞争性的阻抑作用,称为MAO抑制剂,但如果给动物,则可提高脑中去甲肾上腺素和5-羟色胺等单胺的浓度,造成行动的刺激。
所以认为单胺氧化酶具有调节生物体内胺浓度的功能。
MAO有MAO-Ⅰ、MAO-Ⅱ及MAO-Ⅲ三型,血清MAO-Ⅰ活性升高常见于器官纤维化,特别是肝硬化和肢端肥大症;血清MAO-Ⅱ活性升高常见于大面积肝坏死。
1.正常参考值:健康成人血清MAO活性小于36 U/L。
2.临床意义:MAO为广泛分布于肝、肾、胃、小肠及脑组织中的酶,在细胞内定位于线粒体膜外。
血清MAO活性测定是检查肝纤维化病变的重要指标。
纤维化发生在汇管区之间或汇管中心区之间时,MAO活性明显增高,阳性率在80%以上;在假小叶周围有广泛纤维化形成时,则几乎全部增高,且升高同幅度最大。
纤维化病变侵入肝实质内时,升高率仅为30%。
血清MAO-Ⅰ活性升高主要见于肝硬化和肢端肥大症;而MAO-Ⅱ升高则主要见于大面积肝坏死。
器官纤维化患者血清MAO活性升高与结缔组织代谢亢进有关;爆发性肝炎患者血清MAO活性升高与MAO从坏死的肝细胞线粒体上脱落有关。
因此,爆发性肝炎、重症肝细胞坏死时,线粒体的MAO释放,血清中该酶活性增高,阳性率可达73%以上。
第40卷,第10期 光谱学与光谱分析Vol.40,No.10,pp117-1182 0 2 0年1 0月 Spectroscopy and Spectral Analysis October,2020 SERS光谱检测单胺类氧化酶活性刘亚文,马 昊,韩晓霞,赵 冰*吉林大学超分子结构与材料国家重点实验室,吉林长春 130012摘 要 单胺类氧化酶是动物体内一类重要的含有黄素腺嘌呤二核苷酸(FAD)的线粒体外膜蛋白,可以降解儿茶酚、血清素等单胺类神经递质,其表达水平和活性的高低与一些纤维化疾病、抑郁症、老年精神疾病等有关。
对氨基苯硫酚(PATP)作为探针分子在表面增强拉曼散射(SERS)光谱研究中被广泛地使用。
MAO可以将单胺类底物氧化成醛,进而与PATP的氨基发生席夫碱反应。
通过自组装方法得到了银(Ag)纳米粒子-PATP芯片,用以检测MAO催化产生的醛基产物,以达到体外甚至临床检测MAO酶活力水平的目的。
关键词 MAO;SERS;PATP;Ag纳米粒子;酶活力文献标识码:A 文章编号:1000-0593(2020)10-0117-02 收稿日期:2020-03-30,修订日期:2020-07-10 基金项目:国家自然科学基金项目(21773080,21711540292,21773079)资助 作者简介:刘亚文,1993年生,吉林大学超分子结构与材料国家重点实验室博士研究生*通讯联系人 e-mail:zhaob@jlu.edu.cn 单胺类氧化酶(monoamine oxidase,MAO)有A和B两种亚型[1-2],属于同工酶,有接近70%相同的氨基酸序列,各自特异性以及相同的底物,与两种酶独特的活性位点有关。
我们选用色胺(tryptamine,TA)作为两种酶共同的底物,TA可以被MAO氧化成吲哚-3-乙醛。
采用经典的Lee和Meisel的方法[3]制备了Ag纳米粒子,并通过PDDA组装到羟基化的玻璃片上,随后将Ag组装膜浸泡在一定浓度的PATP中4h,得到Ag NPS-PATP芯片。
中元单胺氧化酶检测方法中元单胺氧化酶(MAO-B)是一种在人体内广泛存在的酶,它参与了许多生理和病理过程。
因此,MAO-B检测成为了一种重要的临床检查手段,下面我们来详细介绍一下MAO-B检测的方法。
一、MAO-B检测方法介绍1、酶测法酶测法是MAO-B的检测常见方法之一。
它基于MAO-B对特定底物的催化作用,测定底物的反应物质生成量来确定MAO-B的含量和活性。
其中,活性MAO-B的含量通常是用比较其与内标物之间的信号强度来计算的。
2、免疫测法免疫测法是一种依靠特异性抗体与MAO-B结合的检测方法。
首先,利用特定的免疫反应从样品中纯化或富集MAO-B,再通过ELISA(酶联免疫吸附试验)或western blot(蛋白质免疫印迹)等方式来检测分离出的MAO-B。
这种方法具有高度的特异性和灵敏性,常用于MAO-B的检测。
二、MAO-B检测的研究进展近年来,随着科技的发展,MAO-B检测方法不断得到更新和发展。
其中,基于质谱技术的MAO-B检测方法已成为重要的研究领域。
1、多反应监测(MRM)法MRM法是一种能够同时检测多种MAO-B底物的质谱方法。
通过选择不同的MAO-B底物和内标,可以从复杂的样品中提取出MAO-B,进而进行定量的分析。
相比传统的ELISA等方法,MRM法更加灵敏和准确,可用于MAO-B的高灵敏度检测。
2、大规模分析方法对于现代分析技术的需求,大规模分析方法成为了研究热点之一。
利用大规模分析方法,可同时对多个样品中的MAO-B进行高通量筛查,并挖掘更多MAO-B的相关信息。
三、MAO-B检测的应用价值MAO-B检测在多种疾病的诊断和预后中具有重要应用价值。
如早期的帕金森病和阿尔茨海默病等,MAO-B活性的检测可以帮助确定初期病理变化并进行治疗性干预;另外,MAO-B的检测还可以预测某些疾病的风险和预后,如风湿性关节炎等。
总之,MAO-B检测是一种重要的临床检查手段,在现代医学领域中具有广泛的应用前景。
单胺氧化酶酶活的测试
作者:陈志坚
1 准备工作
0.2M pH=7.6的缓冲液的制备:A:B=87:13(抽滤冰箱后使用)
0.2M Na2HPO4:35.82g Na2HPO4于500mL蒸馏水溶解(A)
0.2M NaH2PO4:15.605g NaH2PO4于500mL蒸馏水溶解(B)
0.3M蔗糖:10.268g蔗糖,加入100mL缓冲液
2 酶液制备
将1只雄性wista大鼠脱颈椎处死,取出其肝脏,用预冷的磷酸缓冲液冲洗肝脏表面。
将肝脏剪碎,用磷酸缓冲液(pH=7.6)洗涤数次以冲洗去血水,待洗涤干净后,加入20 mL,0.3 M蔗糖缓冲液进行匀浆,充分匀浆后,各取10 mL倒入两个50 mL离心管中。
用20 mL,o.3 M蔗糖缓冲液洗涤匀浆器后,各取10 mL倒入前面所述的离心管中。
经托盘天平配平(误差不能超过0.01 g)后进行低温差速离,在-4℃下,1000×g离心10 min。
吸取上清液,将上清液配平,1200×g离心15 min,吸取上清液,将上清液配平,10000Xg离心30 min,弃去上清液,沉淀加4 mL的磷酸缓冲液混匀,得到Wistar大鼠肝脏线粒体浓缩物,即为实验用单胺氧化酶。
3 酶活性抑制测试
所提取的酶液按照1:3倍稀释(体积比),并进行超滤。
(2只小鼠肝脏,最后我们拿到4mL 酶原液,那我们就稀释到12mL使用)
3.1 配药液
配药液(浓度为100μmol/L)= (Mw *10-7 g/ml):x/(10-7*M)=Y 【X】克晶体,用【X*107/MW】ml溶剂溶解x为晶体质量,M为晶体的相对分子质量,Y为溶剂的体积。
例如:称出晶体质量为0.0010g,M=341,则溶解它的溶剂(DMSO:水=1:1)Y就为
Y=0.0010/(10-7*341)=29ml,用29ml的(DMSO:水=1:1)溶剂溶解0.0010g的晶体。
3.2 底物、显色液
底物:2.5mM酪胺,0.2M pH=7.6的PBS配制;
显色液:1Mm香草酸,0.5mM 4-氨基安替吡啉,4U/mL辣根过氧化物酶,0.2M pH=7.6的磷酸缓冲液配制。
3.3 酶活测试
3.3.1 空白时间测定
在96孔酶标板中加入25uL酶液,25uL缓冲液,37℃孵育1h,后加入160uL底物,再加入40uL显色液,开始计时,37℃孵育30-60min后,用酶标仪在490nm波长下测定其吸光度值,重复该过程直至吸光度值保持不变(或者溶液变为红色),记录时间为T空白。
3.3.2 样品测试
在96孔酶标板中依次加入25uL待测样品药液,25uL酶液,37℃孵育1h,后加入160uL底物,再加入40uL显色液,开始计时,37℃孵育30-60min,用酶标仪在490nm波长下测定其吸光度值,看其到达空白对照吸光度值时所用的时间为T样品。
实验时加一组阴性对照:把25uL药液换成25UlDMSO:H2O=1:1。
据下式计算抑制率:
抑制率=(T样品-T空白)/T样品*100%
注:空白组用25uL磷酸缓冲液(pH=7.6)代替25uL样品溶液。
当样品组的吸光度值达到跟空白组一致时即为样品终点。