槐米中芦丁及槲皮素提取分离及鉴定

1 实验一 芦丁的提取、精制与鉴定

一、实验目的与要求

l、以芦丁为例学习黄酮类化合物的提取方法；

2.掌握黄酮类成分的主要性质及黄酮苷, 苷元和糖部分的鉴定方法。

R=-glu-rha 芦丁

R=H 槲皮素

芦丁溶解度: 冷水1: 8000 热水1: 200

冷乙醇1: 300 热乙醇1: 30

难溶于乙酸乙酯、丙酮, 不溶于苯、氯仿、乙醚、及石油醚等溶剂。

槲皮素溶解度: 冷乙醇1: 650 热乙醇1: 60

可溶于甲醇、冰醋酸、乙酸乙酯、丙酮、吡啶, 不溶于石油醚、乙醚、氯仿和水中。

二、实验原理

本实验是利用芦丁在热水中和冷水中溶解度相差较大的性质, 用热水提取和精制；芸香苷属于苷类化合物, 可被稀酸水解成槲皮素（苷元）, 葡萄糖和鼠李糖。芦丁和槲皮素通过化学反应, 色谱法和光谱分析进行检识与鉴定。

三、实验内容

（一）提取分离和纯化

l、芦丁的提取:

2.精制（重结晶）:

3、芦丁的水解:

OOOHOHOROHHO 2

流程图如下:

槐米（20g）

研碎, 于500ml烧杯中,

加350, 250ml水煮沸15min,10min

棉花过滤

提取液

放置1-1.5h

抽滤

滤液（弃去） 沉淀物（粗品芦丁）

水解 精制

1/2粗品芦丁 1/2粗品芦丁

150ml, 1%H2SO4 80倍水 加热溶解, 趁热抽滤

直火加热水解30min

槐花米中芦丁的提取、分离与鉴定

槐花是一种常见的中草药，其花中富含多种有效成分，其中包括芦丁。芦丁是一种天然的黄酮类化合物，具有明显的生理活性，如抗氧化、抗炎、降血压、保护心脑血管等作用。因此，芦丁的提取、分离与鉴定一直是研究的热点。

提取方法：

1.超声波提取法

超声波提取是一种利用高频声波的机械震荡作用使样品中植物成分迅速从固相进入溶液的方法。对于槐花花中芦丁的提取，超声波提取法是一种快速、高效的方法。具体步骤如下：

(1)将干燥的槐花花朵研磨成粉末。

(2)将槐花花粉末加入乙醇水溶液中，浸泡4小时。

(3)将浸泡的样品置于超声波清洗仪中，进行超声波萃取。

(4)离心沉淀，取上清液。

(5)将上清液蒸干，然后用乙醚-乙酸乙酯(1:1)提取，得到芦丁。

2.微波辅助提取法

分离方法：

1.硅胶柱色谱法

硅胶柱色谱法是一种利用柱填充物在不同极性条件下对化合物进行分离和纯化的方法。对于槐花花中芦丁的分离，硅胶柱色谱法是一种常用的方法。具体步骤如下：

(1)将经过提取的芦丁用甲醇溶解。

(2)将甲醇溶液在硅胶柱上进行逐级洗脱，采用乙醚、乙醇、混合溶液等不同极性的溶剂。

(3)收集洗脱液并进行旋蒸去除溶剂。

(4)取得芦丁。

2.高效液相色谱法 (2)将甲醇溶液注入高效液相色谱仪中，以C18为固定相，用水-醋酸溶液-甲醇混合物作为移动相，在一定的流速下进行分离。

(3)收集并分析分离得到的芦丁。

鉴定方法：

1.红外光谱法

红外光谱法是一种运用分子在红外辐射下的振动和旋转运动来研究分子结构和化学键的强有力的分析方法。对于芦丁的鉴定，红外光谱法是一种常用的方法。芦丁的红外光谱图谱表现为具有多种特征峰的典型光谱，如C=0伸缩振动、C-O键伸缩振动和苯环伸缩振动等。

天然药物化学设计实验

开题报告

题目：槲皮素提取及结构鉴定

学生姓名： 舒泉湧

学 号： 200804040125

院 （系）： 生命科学与工程学院

专 业： 制药工程

指导教师： 孔阳

一．【文献综述】

1．1研究意义

我国北部、华南和西南地区等地区都产槐花，尤河北和江苏省产量最为丰富。槐花中含有丰富的黄酮类化合物，其芦丁(nltin)为黄酮中的主要成分，含量为8—20％；槲皮素(quercetin)为芦丁的苷元。芦丁和槲皮素具有抗炎作用、抗氧化作用、抗肿瘤作用、抗血小板聚集作用；对糖尿病的肾脏、胃肠粘膜、器官缺血损伤具有保护作用；同时还有抗忧郁、抗心胸肥大、降压等作用。因此，对槐花中芦丁和槲皮素的提取分离研究具有非常重要的研究意义。

1．2研究现状

1．2．1槐花性状与产地简介

槐花为豆科植物槐Sophora japonica L.的干燥花及花蕾；前者习称为“槐花”，后者习称为槐米。落叶乔木，单数羽状复叶互生，长达25 cm，叶柄基部膨大，小叶7—15，卵状长圆形或卵状披针形，长2.55 cm，先端尖，基部圆形或阔楔形，全缘,上面绿色，下面伏生白色短毛。小叶柄长2.5cm；托叶镰刀状，早落。花瓣多数散落，完整花呈飞鸟状，花瓣5枚，黄色或淡棕色，皱缩，卷曲。雄蕊淡黄色，须状，有时弯曲，子房膨大；质轻，气微，味微苦；花期为7—8月。主产于我国北部、华南及西南地区；河北省产量较丰富，江苏主产于镇江、苏州、南京、徐州等地。

1．2．2槐花的化学成份及理化性质

1．2．2．1槐花中的化学成份

槐花中含赤豆皂甙（azukisaponin）Ⅰ、Ⅱ、Ⅴ，大豆皂甙（soyasaponin）I、Ⅲ，槐花皂甙（kaikasaponin）Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ。还含黄酮类：槲皮素（quercetin），芸香甙（rutin），异鼠李素（isorhamnetin），异鼠李素-3-芸香糖甙（isorhamnetin-3-rutinoside），山奈酚-3-芸香糖（kaempferol-3-rutinoside）。又含白桦脂醇（betulin），槐花二醇（sophoradiol）。花油中含月桂酸（lauric

槐花米中芦丁的提取与鉴定

槐花米是槐花籽的胚芽部分，富含植物化学物质，常被用作食品、保健品和药品。芦丁是一种重要的植物黄酮类化合物，在槐花米中也存在着。本文主要探讨了槐花米中芦丁的提取与鉴定方法。

一、提取方法

1. 酸碱水解法

将槐花米粉末用75%酒精浸泡后，用钝性气体保护，加入0.1mol/L的氢氧化钠溶液，水解2小时。水解完毕后，加入酸化剂使pH值调至5.5左右，然后提取2次，每次提取30分钟，使用乙醇使提取液达到所需的体积，完成提取过程。

2. 超声波辅助法

将槐花米粉末用95%乙醇提取2次，每次提取60分钟。取得的提取液储存在4℃条件下，超声波辅助溶解过程中，超声波功率设置为250W，处理时间为45分钟。超声波辅助能够加速溶剂的渗透和分解，提高提取效率。

3. 超临界流体法

将槐花米粉末与正己烷混合，注入超临界流体反应器中，流体选择二氧化碳，温度为90℃，压力为30Mpa。在45分钟内处理样品，得到高品质的芦丁提取物。

二、鉴定方法

1. 毛细管电泳法

使用毛细管电泳法确定芦丁的含量和纯度。在试验中，一般采用50 mM 磷酸盐缓冲液( pH=3.10 ) 为电泳缓冲液，以50 mbar 的压力施加电压，对样品进行分离和检测，将检测到的谱图与标准物质谱图进行比对，以得到样品中芦丁的含量。

2. 气相色谱法

使用气相色谱法测定芦丁在槐花米中的含量。首先，将提取物用氮气吹干至干燥，然后加入甲醇，溶解完毕后过滤。过滤后再用甲醇调整成正常体积。

将样品注入色谱柱，沿着柱从注射口到检测器方向以一定的压力进行分离，通过检测器检测分离出来的物质。将检测到的峰面积与已知含量的标准物质进行比较，以确定样品中芦丁的含量。

3. 紫外分光光度法 使用紫外分光光度法确定芦丁的含量。在试验中，将提取物稀释到一定浓度后，用紫外分光光度计检测其在不同波长下的吸光度值。根据芦丁的特征峰，在290 nm处进行检测。将检测到的吸光度值与标准物质进行比较，以确定样品中芦丁的含量。