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高效液相色谱法测定腺苷中的有关物质【摘要】目的建立腺苷原料药中有关物质的高效液相色谱测试方法。
方法采用十八烷基硅烷键合硅胶柱;流动相为硫酸盐缓冲液-叠氮化钠液（1：10000）=60：40；流速为1.5ml/min；紫外检测波长为254nm。
结果腺苷和肌苷峰的分离度R≥9.0，RSD≤2.0%(n=5)；鸟苷、肌苷、尿苷、腺嘌呤杂质的线性关系良好，线性回归系数为0.998~1.000之间，回收率结果为鸟苷99.2%, 尿苷101.4%, 肌苷100.4%。
结论该检测方法操作简便，结果灵敏、准确，可用于腺苷中有关物质的限度测试。
【关键词】腺苷；高效液相色谱法；有关物质目前市场上销售的腺苷原料药主要是以发酵工艺制备得到，原料中存在着肌苷、鸟苷等核苷类杂质。
经查文献未见有腺苷原料的有关物质检测方法报道。
笔者通过实验研究，确定了用HPLC方法检测腺苷有关物质的新方法，能更有效地保证产品质量。
1仪器与试药1.1仪器USA Waters高效液相色谱仪（Waters 2695型泵，Waters 2487型检测器，SM7型自动进样仪器，Empower pro软件数据处理系统）；AE240型分析天平(瑞士梅特勒公司)1.2试药腺苷（浙江诚意药业有限公司，批号：20081001、20081002、20081003）；腺苷BP参照品（Batch/lot n01）；鸟苷参照品（lot A011405101）；肌苷参照品（J0310035）；尿苷参照品（lot A014531601）；腺嘌呤BP参照品（Batch/lot n01）。
2 方法与结果2.1色谱条件C18柱ODS (4. 6mm×250mm ,5μm)；流动相为硫酸盐缓冲液-0.01%叠氮化钠液（60：40，硫酸盐缓冲液配制方法为：精密称取硫酸氢钾约6.8g和硫酸氢四丁基铵约3.4g，同置1000ml容量瓶中，加900ml水溶解，用2M 氢氧化钾溶液调节pH至6.5，再加水至刻度，混匀。
高效液相测定注射用环磷腺苷葡胺中环磷腺苷含量作者：刘云娜李岩来源：《科学与财富》2017年第06期摘要：目的：建立环磷腺苷葡胺葡萄糖注射液中环磷腺苷含量的HPLC检测方法。
方法：采用Agilent 1200高效液相色谱仪，Agilent ZORBAX SB-C18柱（150x4.6mm，5μm），流动相为乙腈：pH2.5磷酸缓冲液（95：5），流速为1 ml/min，检测波长为259 nm，柱温为30℃进行测定。
结果：环磷腺苷浓度在0.01082～0.2104 mg/ml范围内时，浓度与峰面积线性关系良好，方程相关系数r=0.9999，平均回收率99.7 %，RSD=1.22%。
结论：用该方法检测注射用环磷腺苷葡胺中环磷腺苷含量准确，简便，高效。
关键词：HPLC；环磷腺苷葡胺注射液；环磷腺苷环磷腺苷葡胺注射液非洋地黄类强心剂，具有正性肌力作用，能增强心肌收缩力，改善心肌泵血功能，有扩张血管作用，可降低心肌耗氧量；改善心肌细胞代谢，保护缺血、缺氧的心肌；能够改善窦房屋结P细胞功能等作用[1]。
环磷腺苷葡胺由环磷腺苷和葡甲胺两种成分组成[2]。
环磷腺苷葡胺注射液的含量测定在现行质量标准中为纸色谱法[3]，但由于纸色谱法耗时长，操作过程复杂，人为因素过多，精确度差，灵敏性低。
高效液相色谱法（High Performance Liquid Chromatography ＼ HPLC）有“三高、一广、一快”的特点：高压、高效、高灵敏度；应用范围广；分析速度快、载液流速快；本文采用高效液相的方法对注射用环磷腺苷葡胺中环磷腺苷的含量进行测定。
1.仪器与试剂1.1仪器电子天平（BSA224S赛多利斯）；高效液相色谱仪（1200美国安捷伦公司）；ZORBAX SB-C18 柱（150 x 4.6 mm，5 μm 美国安捷伦公司）；紫外分光光度计TU—1901（北京普析通用仪器有限责任公司生产）；pH计（PHS-3C上海雷磁仪器厂）。
分析HPLC法测定注射用肌苷的含量日期： 05月25日【摘要目的用高效液相色谱法测定注射用肌苷的含量。
方法采用Kromasil C18柱（5μm4.6mm×250mm)，以甲醇-水（10摘要：90）作流动相，在248nm紫外波长检测。
结果肌苷在4.23～63.48μg/ml范围内有良好的线性关系（r=0.9999)。
低、中、高3个浓度的平均回收率（n=2）分别为101.4%、101.8%、101.1%，RSD为0.46%。
结论该法简便、快速、准确，可作为测定注射用肌苷中肌苷的含量。
【注射用肌苷；高效液相色谱法；含量测定【Abstract Objective A high-performance liquid chromatography (HPLC) was established for the determination of inosine contents in injection. Methods Impurity in the inosine injection could be separated on Kromasil C18 colnmn (5μm 4.6mm×250m m) using methanol-water (10摘要:90) as mobile phase and UV detector at 248nm. Results The linear range was 4.23～63.48μg/ml(r=0.9999).Average recovery in the lower,moderate and higher inosine concentration groups was respectively 101.4%,101.8% and 101.1%(n=2) with RSD of 0.46%. Conclusion The method is simple,rapid and accurate. 【Key words inosine injection;HPLC;concentration determination 肌苷为微生物发酵制得的辅酶类药物，有改善机体代谢功能，临床用于各种类型的肝脏疾患、心脏疾患、白细胞和血小板减少症、中心视网膜炎及视神经萎缩等。
一种腺苷含量的检测方法腺苷是一种核苷，由腺嘌呤和核糖通过糖苷键连接而成。
腺苷在活体内发挥多种生物学功能，如调控细胞生长和凋亡、抑制炎症反应和免疫系统等。
因此，腺苷的含量检测对于了解生物体的生理状态以及疾病的发展具有重要意义。
本文将介绍一种常用的腺苷含量检测方法——高效液相色谱法。
高效液相色谱法（High Performance Liquid Chromatography，HPLC）是一种高效、灵敏、选择性好的分析方法，已被广泛应用于药物分析、环境监测和生物医学研究等领域。
在腺苷含量检测中，HPLC方法具有较高的精确度和准确度，能够快速、可靠地测量腺苷的含量。
HPLC法测定腺苷含量的步骤如下：1. 样品的制备：将待测的生物样品（如血液、细胞培养液等）加入酸性介质中，经过离心等处理，得到纯化的样品溶液。
2. 色谱柱的选择：根据腺苷的理化性质，选择具有一定分离效果和保留能力的色谱柱。
目前，常用的色谱柱有正相柱（如C18柱）和反相柱（如盐酸苯基柱）。
3. 流动相的选择：在HPLC法中，流动相的选择对测定结果有重要影响。
一般情况下，可以选择含有有机溶剂和缓冲液的混合物，如甲醇-磷酸盐缓冲液体系。
4. 柱温和流速的优化：通过改变柱温和流速，调整分离效果和分析时间。
5. 样品注入和定量检测：将样品注入HPLC仪器中，设置所需的检测波长和检测时间，并根据标准曲线对腺苷进行定量测定。
6. 数据处理和结果分析：根据所得测定值和标准曲线，计算样品中的腺苷含量，并进行数据处理和结果分析。
HPLC法测定腺苷含量的优势在于其分离效果好、灵敏度高、准确性强。
此外，HPLC法还可与其他技术方法结合，如质谱联用技术（LC-MS），提高测定的灵敏度和选择性。
总结起来，HPLC法是一种可靠、高效的腺苷含量检测方法。
通过选择适当的色谱柱、合适的流动相和优化的柱温和流速，结合标准曲线的建立和样品定量检测，可以准确、快速地测定生物体中腺苷的含量。
注射用甲钴胺含量测定方法分析作者：杜长英来源：《科学与财富》2016年第32期摘要：目的：探究如何能够更加准确的对注射用的甲钴胺含量进行测定。
方法：采用高效液相色谱法以及紫外分光光度法两种方法对注射用的甲钴胺含量进行检测。
结果：通过两种方法能够达到预期的效果，都取得了成功。
结论：对于高效液相色谱法以及紫外分光光度法两种方法而言，虽然都能对注射用甲钴胺的含量进行测量，但是选择前者能够更加的准确性的得出结论，效果要明显由于后者，在今后的检测过程中，可以进一步的对这一检测方法加以推广，以实现对注射用的甲钴胺更加精准的测量。
关键词：注射用甲钴胺；液相色谱法；紫外分光光度法；稳定性从性状上来看，甲钴胺是一种结晶性的粉末，主要颜色是暗红色，没有明显的气味，具有极强的吸湿性，在光照下可以很容易的进行分解，将其置于水中或者乙醇中，具有轻微的溶解现象，而将其置于丙酮或者是氯仿以及乙醚中，并没有出现溶解的现象，在当前注射用的甲钴胺中，主要采用的规格是0.5mg，这一规格可以确保主药满足含量均匀度方面的要求，符合规定的标准，在当前生产的过程中需要进一步提高主药均匀性的意识，对均匀度采用合理的含量检测方法进行检验，这样才能满足药物的需求。
本文以此为出发点，采用两种不同的方法对注射甲钴胺的含量进行检测，希望能够对今后的含量检测工作带来一定的帮助。
在实验中需要注意的问题是，因为甲钴胺见光容易分解，所以需要在避光的环境下进行实验。
1 仪器及材料1.1 仪器。
在采用高效液相色谱检测法中，主要应用的仪器设备是高效液相色谱仪，主要型号为SPD-10Avp型，能够对紫外线进行检测的可见-紫外检测器，由日本岛津制造所生产，同样由日本岛津制造所生产的可见紫外分光光度计是紫外分光光度法实验中需要的主要设备，色谱柱的规格为C18柱，200mm×4.6mm，生产厂家为迪马公司。
1.2 材料。
在实验中主要应用的对照品材料是由中国药品生物制品检定所提供的甲钴胺对照品，由邯郸四友生物医药有限公司生产的乙腈，还有注射用的甲钴胺，主要是在制剂室生产获得的。
HPLC法测定注射用腺苷钴胺有关物质
作者：王金柱徐莹莹
来源：《科学与财富》2017年第06期
摘要：目的：采用高效液相色谱法（HPLC法）测定注射用腺苷钴胺有关物质含量。
方法：应用C18色谱柱，流动相选磷酸二氢钾-乙腈（PH调节采用磷酸，并将PH控制在
3.2），最佳流速为1.0mL·min-1，柱温控制在30摄氏度左右；检测波长260nm，进样量
10μL；以此测定注射用腺苷钴胺中有关物质的含量。
结果：实验中精密度及准确度等全部符合样品分析的要求。
其中，腺苷钴胺、氰钴胺与相邻峰的分离度佳，其线性范围分别是100～0.2μg·mL-1（R=0.9999）、10～0.1μg·mL-1（R=10000）。
结论：HPLC法操作过程简单、快速，精密度及准确率高，专属性强，能够良好的测定注射用腺苷钴胺有关物质含量，值得推广。
关键词：注射用腺苷钴胺；HPLC法；有关物质；氰钴胺
注射用腺苷钴胺为抗贫血药，可用于贫血（巨幼红细胞性、营养不良性、妊娠期）、神经根炎、三叉神经炎、坐骨神经痛、神经麻痹、多发性神经炎等疾病的辅助治疗，也可以用于营养性神经疾患及由于放射线或药物所引起的白细胞减少症等[1]。
腺苷钴胺是维生素B12在人体内的活性辅酶之一，是细胞生长及繁殖、维持神经髓鞘完整性的必需物质之一[2]。
然而，腺苷钴胺缺点在于对酸、碱、光的不稳定性，且在制备过程中多产生杂质氰化钴胺[3]。
氰化钴胺在结构上含有氰根这种剧毒性结构，其不能作为注射药物。
注射用腺苷钴胺有关物质的测定利用吸光度法对药品中氰化钴胺一类已知杂质加以控制，因此，运用恰当的方法测定注射用腺苷钴胺内有关物质含量，来更加严格的控制药品质量，保证药品安全是十分重要的。
1 仪器与试剂、药品
1.1仪器
电子天平，高效液相色谱仪。
1.2 试剂与药品
腺甘钴胺标准品；氰钴胺对照品；注射用腺甘钴胺样品；色谱纯：乙腈；分析纯：磷酸二氢钾、磷酸。
2方法
2.1.溶液的制备[4]
取腺甘钴胺加水分别稀释成含腺甘钴胺1.0mg/mL和25μg/mL对照溶液，取氰钴胺药品，加水制备成含氰钴胺2μg/mL的溶液作对照品溶液。
2.2色谱条件[5]
色谱柱为C18色谱柱；检测波长260nm；柱温大概控制在30摄氏度左右；流动相选磷酸二氢钾-乙腈，选用磷酸来调节PH值，并将PH值大约控制在3.2。
最佳流速设置为
1.0mL·min-1；每次注入药量为10μL。
2.3方法
取用10μL对照溶液注入高效液相色谱仪中，并调节好灵敏度，令主成份的峰高可以达到总量程的20%-25%之间。
精密测量并取用供试品溶液，对照用溶液及氰化钴胺对照品溶液，每种各为10μL，且将其分别注进高效液相色谱仪中，观察并记录色谱图，并记下色谱图达到主成分峰的保留时间的2.5倍。
如果供试品溶液色谱中出现了与氰钴胺相对应的峰，则要求含量小于1.0%，而供试品溶液中各种杂质的峰的面积的和必须小于等于主峰面积的两倍。
2.4最低检测限与定量限试验
2.4.1腺苷钴胺的检测限及定量限
利用电子天平精确称取腺苷钴胺对照品，并对其加水进行稀释，在已选定好的色谱条件下进行检测。
当腺苷钴胺的信噪比达到10：1时，可计算出腺苷钴胺的定量限约为0.915ng，而在信噪比为3：1的时候，计算出的腺苷钴胺的定量限大概是0.57。
2.4.2氰钴胺的检测限和定量限
利用电子天平精确称取氰钴胺对照品，并对其加水进行稀释，在已选定好的色谱条件下进行检测。
当氰钴胺的信噪比达到10：1时，可计算出腺苷钴胺的定量限约为0.915ng，而在信噪比为3：1的时候，计算出的氰钴胺的定量限大概是0.57。
3 结果
实验中精密度及准确度等全部符合样品分析的要求。
其中，腺苷钴胺、氰钴胺与相邻峰的分离度佳，其线性范围分别是100～0.2μg·mL-1（R=0.9999）、10～0.1μg·mL-1
（R=10000）。
4 讨论
腺苷钴胺是维生素B12在人体内的活性辅酶之一，是细胞生长及繁殖、维持神经髓鞘完整性的必需物质之一，腺甘钴胺常被用来治疗巨幼细胞性贫血、妊娠期贫血等，还被用来辅助治
疗各类神经炎等神经性疾病[6-9]。
但是，其成分内的有关物质的相关研究文献较少。
而其中，氰钴胺及羟钴胺是现阶段已知的注射用腺甘钴胺成分中的杂质[10-12]。
由于药物的生产工艺的改变，其中的杂质物质不能够有效的分离出去[13]。
因此，为达到提高腺甘钴胺主成分峰与杂质峰的分离度的目的，本文设计的实验则是选用适合于HPLC法条件的样品，改善有关物质和待测成分的分离的效果，并控制总的杂质与氰钴胺。
HPLC法方法简单，操作便利、快捷，且具有很高的灵敏度，准确度、检测限与定量限全部附合相关要求，适合用于控制注射用腺甘钴胺有关物质，值得推广[14-15]。
参考文献
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作者简介：王金柱，哈尔滨三联药业股份有限公司，工程师，150025，本科，1989年03月03日，药品质量方向。
