薄层色谱检验通则标准操作规程JNYY-01-003

薄层色谱层析操作规程薄层色谱（TLC）是一种基于物质在液态或液固两相上的分配行为而进行的色谱分析方法。

它主要用于快速检测物质的分离纯化、成分分析和化学反应进程监测等方面。

下面是薄层色谱层析操作规程：1. 准备工作：- 检查所使用的薄层色谱板，确保其没有破损或污染。

- 准备合适的展开室和展开剂，一般常用的展开剂有：正己烷/乙酸乙酯（4:1）、己烷/醋酸乙酯（3:1）等。

- 预先准备好试样和标准品溶液，并标记清楚。

2. 样品的准备：- 根据需要，选择适当的试样溶剂将需要进行分析的样品溶解。

确保试样之间的溶解度保持一致。

- 如果有需要，可以进行样品的预处理，如提取、浓缩或分离纯化等。

3. 样品的上样：- 在薄层色谱板的底端绘制一条基线，用铅笔或者铅笔描红的方式标记。

- 在基线上标记好样品的位置，并用微量注射器或者吸嘴均匀地将样品滴在相应的位置上。

一般上样量控制在1-5微升之间。

4. 开展过程：- 将涂有样品的薄层色谱板放入展开室中，注意不要让样品滴过基线。

- 加入展开剂混合溶液至展开室中，确保液位超过薄层色谱板的底端。

展开室的盖子上开一个小缝隙，以防止气体积聚。

5. 色谱板的检测：- 根据需要，可以将薄层色谱板放在紫外灯下照射，观察化合物的荧光情况。

- 可以将薄层色谱板放在显色剂的气氛中，显色剂可以是碘酒、鲭鱼抽提液等。

注意控制显色时间和显色剂的浓度。

6. 结果分析：- 在色谱板上观察到的斑点（Spot）数量、颜色和位置可以提供样品中化合物的分离情况。

- 对照标准品进行比对，根据斑点的颜色、距离和形状，可以确定分析物质的成分和浓度。

7. 记录和报告：- 将实验结果记录在实验笔记本中，包括样品的标记、色谱展开室的条件、显色剂的使用和结果的观察等。

- 根据结果，撰写实验报告，并附上所使用的薄层色谱板的照片。

总结：薄层色谱层析操作规程主要包括准备工作、样品的准备、样品的上样、开展过程、色谱板的检测、结果分析、记录和报告等步骤。

薄层色谱层析操作规程1. 引言薄层色谱（TLC）是一种常用的分离和分析技术，适用于有机物和天然产物的检测、纯化和鉴定。

本操作规程旨在提供一种标准化的TLC操作步骤，以确保结果的准确性和可重复性。

2. 实验材料和仪器设备•薄层色谱板：选择合适的固定相和基底材料的薄层色谱板。

•检测溶剂：根据需要选择合适的溶剂，常用的有乙醚、醋酸乙酯、甲醇、正己烷等。

•样品：准备待测物的溶液或提取液。

•试剂：例如显色剂、定位剂等。

•色谱槽：用于放置色谱板的槽状容器。

•喷雾开发箱：用于显色和可视化样品。

3. 操作步骤3.1 准备工作1.检查薄层色谱板是否完整，如有损坏需更换。

2.在色谱板上使用铅笔标记出样品和参比物的位置。

3.2 样品处理1.准备待测物的溶液或提取液，并将其过滤以去除杂质。

2.如需测定混合物中的成分，可先进行分离提取。

3.3 上样1.使用微量锥或玻璃管在标记位置上均匀地涂抹样品。

2.上样后务必避免接触色谱板其他区域。

3.4 开发1.将色谱板放置在色谱槽中，加入适当的检测溶剂。

注意溶剂的选择应根据待测物的性质和溶解性来确定。

2.等待溶剂上升至足够高度，将色谱板取出并迅速标记并扫描涂点位置。

3.5 显色和观察1.将色谱板放入喷雾开发箱中，并加入适当的显色剂。

2.等待显色剂完全插入后，将色谱板取出并进行观察。

3.6 数据处理1.使用适当的测量工具，如图像分析软件，测量色谱带的迁移距离和Rf值。

2.进行定性和定量分析，根据需要绘制色谱图。

4. 安全注意事项1.使用化学品和有机溶剂时必须戴上防护手套和防护眼镜，以防止溅入眼睛或与皮肤接触。

2.所有操作需在通风良好的实验室中进行，避免吸入有害气体。

3.注意操作时避免产生火源，如禁止吸烟和使用明火。

4.做好废弃物的处理工作，避免对环境造成污染。

5. 结论本操作规程提供了一套标准化的薄层色谱层析操作步骤，涵盖了样品准备、上样、开发、显色和观察、数据处理等关键步骤。

通过遵守操作规程和安全注意事项，可以准确、高效地进行薄层色谱层析实验，并获得可靠的结果。

1.目的建立薄层色谱法检测操作规程。

2.适用范围本规程适用于薄层色谱法。

3.编制依据《药品生产质量管理规范（1998年修订）》国家药品监督管理局（1999）4.责任4.1 QC质检员对本规程的实施负责。

4.2 QC主管对本规程的有效执行承担监督检查责任。

5.正文5.1简述，经展开、检视所得的色谱图，与适宜的对照物按同法所行的色谱图作对比，用以进行药品的鉴别或杂质检查的方法。

5.2仪器与材料除另有规定外,玻板要求光滑、平整、洗净后不附珠，晾干。

最常用的固定相有硅胶G、硅胶GF254、硅胶H和硅胶HF254，其次有硅藻土、硅藻土G、氧化铝、氧化铝G、微晶纤维素、微晶纤维素F254等。

其颗粒大小，一般要求直径为5～40μm。

薄层涂布，一般可分无黏合剂和含黏合剂两种；前者系将固定相直接涂布于玻板上，后者系在固定相中加入一定量黏合剂，一般常用10%～15%煅石膏（CaSO4·2H2O在140℃加热4小时），混匀后加水适量使用，或用0.2%～0.5%羧甲基纤维素钠水溶液（取羧甲基纤维素适量，加水适量，加热煮沸至完全溶解）适量，调成糊状，均匀涂布于玻板上。

使用涂布器应能使固定相在玻板上涂成一层符合厚度要求的均匀薄层。

分普通薄层板和高效薄层板，如硅胶薄层板、硅胶GF254薄层板、聚酰胺薄膜和铝基片薄层板等。

有手动、半自动或自动点样器，一般采用微量注射器或定量毛细管。

应使用适合薄层板大小的专用薄层色谱展开缸，并有严密的盖子，底部应平整光滑，或有双槽。

按各品种项下规定。

可采用喷雾显色、浸渍显色或置碘蒸气中显色，检查斑点。

喷雾显色可使用玻璃喷雾瓶或专用喷雾器，要求用压缩气体使显色剂呈均匀细雾状喷出；浸渍显色可使用专用玻璃器皿或适宜的玻璃缸代替；碘汽熏碘显色可用双槽玻璃缸或适宜大小的干燥器代替。

为装有可见光、短波紫外光（254nm）、长波紫外光（365）光源及相应滤光片的暗箱，可附加摄像设备供拍摄色谱图用，暗箱内光源应有足够的光照度。

薄层色谱实验步骤薄层色谱是一种常用于化学分析和有机化学实验的技术，它可以快速、高效地分离和检测化合物。

下面是薄层色谱实验的一般步骤。

第一步：准备薄层板选择合适的薄层板，常用的有硅胶或铝箔薄层板。

将薄层板切割成适当大小的片段，通常大小为2-3厘米宽和5-10厘米长。

用铅笔在薄层板的底部标记样品的位置。

第二步：准备样品溶液将待分析的化合物溶解在合适的溶剂中，使得该溶液浓度适中，通常在0.1-1 mg/mL之间。

保持样品溶液的稳定性和一致性。

第三步：在薄层板上涂样品将薄层板放在水平表面上，使用毛细管或自动样品施加器，在薄层板的标记位置上点涂样品溶液。

每个样品点涂后，将薄层板放置在通风橱中使其完全干燥。

第四步：开展色谱分离将薄层板立即放入色谱槽中，加入色谱溶剂至约0.5-1 cm深度，使其刚好覆盖薄层板的底部。

将色谱槽密封，让样品在色谱槽内展开并分离。

第五步：显色和检测将色谱槽取出，让其干燥。

然后，将色谱板放入显色脱色槽中。

常用的显色剂有碘化钴、碘化钠和其他发色显色剂。

待显色剂被吸收后，取出薄层板，用吹风机快速干燥。

第六步：分析和计算结果用扫描仪或肉眼观察并记录薄层板上每个化合物斑点的颜色和Rf值（裂点位置的移动与色谱溶剂前端移动的比值）。

通过比较已知标准物质的Rf值，确定测试样品中化合物的身份。

第七步：数据分析和结果根据所得到的结果，进行数据处理和结果分析，可以绘制色谱图或使用其他合适的方式对数据进行展示和解释。

补充提示：-定量测定：可以通过测量化合物斑点的面积或浓度来定量确定样品中化合物的含量。

-实验安全：实验过程中，要注意化学品的安全使用，避免接触有毒或刺激性物质。

同时，要遵守实验室的安全操作规范，佩戴适当的防护装备。

-实验优化：根据化合物的性质和实验需要，可以调整薄层色谱实验的条件，如改变色谱溶剂的组成、改变显色剂的类型和浓度等，以获得更好的分离效果。

1、目的为规定薄层色谱法的检测方法和操作要求，特制定本操作规程。

2、依据《中华人民共和国兽药典》（2000年版）。

3、适用范围适用于本公司检品薄层色谱法的质量检测。

4、职责分工质保部对本规程的实施负责。

5、正文5.1简述：薄层色谱法，是将适宜的固定相涂布于玻璃板、塑料或铝基片上，成一均匀薄层。

待点样、展开后，与适宜的对照物按同法所得的色谱图作对比，用以进行药品的鉴别、杂质检查或含量测定的方法。

5.2仪器与用具：5.2.1薄层板（购买成品薄层板）5.2.2点样器：常用具支架的微量注射器或定量毛细管，应能使点样位置正确集中。

5.2.3展开室：应使用适合薄层板大小的玻璃制薄层色谱展开缸，并有严密的盖子，除另有规定外，底部应平整光滑，以便于观察。

5.3操作方法：5.3.1薄层板制备（购买成品薄层板）：将薄层板在110℃烘30分钟，立即置于有干燥剂的干燥箱中备用。

使用前检查其均匀度（可通过透射光和反射光检视）。

5.3.2点样：除另有规定外，用点样器点样于薄层板上，一般为圆点，点样基线距底边 2.0cm，点样直径为2～4mm，点间距离约为 1.5～2.0cm，点间距可视斑点扩散情况以不影响检出为宜。

点样时必须注意勿损伤薄层表面。

5.3.3展开：展开室如需预先用展开剂饱和，可在室中加入足够量的展开剂，并在壁上贴两条与室一样高、宽的滤纸条，一端浸入展开剂中，密封室顶的盖，待展开至规定的距离（一般为10～15cm），取出薄层板，晾干，按各品种项下的规定检测。

各种供试品，只有得到分离度和重现性好的薄层色谱，才能获得满意的结果。

5.4注意事项：5.4.1所用玻璃板应洗净不挂水珠，光滑平整。

5.4.2薄层板应在110℃活化30分钟，至于有干燥剂的干燥箱或干燥器中备用。

5.4.3点样一般为圆点，不能太大。

山东康源堂中药饮片有限公司标准操作规程题目：薄层色谱标准操作规程编号：颁发部门：质量管理部起草：日期：审核：日期：批准：日期：执行日期：分发部门：质量管理部、检验室依据：《中国药典》2015年版四部目的：建立薄层色谱标准操作规程。

范围：适用于薄层色谱的操作。

责任：检验操作人员负责实施。

内容：1．简述薄层色谱法系将供试品溶液点样于薄层板上，在展开容器内用展开剂展开，使供试品所含成分分离，将所得色谱图适宜的对照物按同法所得的色谱图比较，并可用薄层扫描仪进行扫描，用于鉴别、检查或含量测定的方法。

2．仪器与材料2.1 薄层板2.1.1 市售薄层板分普通薄层板和高效薄层板，按固定相种类又可分为硅胶G、硅胶GF254、硅胶H、微晶纤维素、硅藻土、氧化铝、聚酰胺薄膜等薄层板。

2.1.2 自制薄层板在保证色谱质量的前提下，如需对薄层板进行特别处理和化学改性，以适应供试品分离的要求时，也可用实验室自制的薄层板。

自制薄层板系指手工（或借助涂布器）将固定相涂布于玻璃板或其他适宜载板上使成为有一定厚度的均匀薄层。

常用的固定相有硅胶G、硅胶GF254、硅胶H和硅胶HF254、微晶纤维素等。

其粒径一般为10~40 um。

2.2 点样器采用手动、半自动或全自动点样器材，手动点样时一般采用微量毛细管。

2.3 展开容器应使用适合薄层板大小的平底或双槽薄层色谱专用展开缸，并配有严密的盖子。

水平展开时使用水平展开缸。

2.4 显色剂与显色装置按各品种项下规定。

可采用喷雾显色、浸渍显色或蒸汽熏蒸显色。

喷雾显色应使用玻璃喷雾瓶或专用喷雾器，要求用压缩气体使显色剂呈均匀细雾状喷出；浸渍显色可用专用玻璃容器或适宜的玻璃缸代替；蒸汽熏蒸显色可用双槽玻璃缸或适宜大小的干燥器代替。

2.5 检视装置为装有可见光、短波紫外光（254nm）、长波紫外光（365nm）光源及相应滤光片的暗箱，可附加摄像设备供拍摄色谱图用，暗箱内光源应有足够的光照度。

2.6 薄层色谱扫描仪系指用一定波长的光对薄层板上有吸收的斑点；或经激发后能发射出荧光的斑点，进行扫描，将扫描得到的谱图和积分数据用于定性或定量的分析仪器。

依据：《GMP》与药品生产质量检验的要求目的：建立一个薄层色谱鉴别的标准操作规程范围：各种检验中薄层鉴别的操作1．定义：薄层色谱法，系将细粉状的吸附剂或载体涂布于玻璃板、塑料板或铝基片上，成一均匀薄层，经点样、展开与显示以后，再与适宜的对照物质按同法所得的色谱图作对比,用于进行药品的鉴别，杂质检查或含量测定的方法。

2．仪器与材料2.1 展开室：可选用适合薄层板大小的玻璃缸,并有严密的盖子、底部平整。

必要时在展开槽盖处可涂抹少量凡士林增加密闭性，但需注意勿沾污薄层板或溶入展开剂。

2.2 玻璃板：除另有规定外,用5cm×20cm、10cm×20cm或20cm×20cm的规格。

也可用载玻片进行预试验。

各种薄层板要求光滑、平整，洗净后不附水珠，晾干。

玻璃板的质量有一定要求，厚度为2mm或3~4mm，预制板一般使用1mm的玻璃板。

应有良好的平面性，可用镜面玻璃或浮法玻璃，还应有一定的耐热性，以使在烘烤时不致破裂。

2.3 涂布器：有手工涂布器和自动涂布器(用于定量分析),均应能使吸附剂或载体在玻璃板上涂开层符合厚度要求的均匀薄层.2.4 点样器：玻璃毛细管2.5 吸附剂或载体首选为硅胶G、硅胶GF254.硅胶H、硅胶HF254，其次有硅藻土、硅藻土G、氧化铝、氧化铝G、微晶纤维素、微晶纤维素F254等。

其颗粒大小，一般要求为直径10~40μm。

其比表面积可达约600m2/g。

由于硅胶的质量、颗粒大小、分布均匀程度直接影响分离度及检出限度。

而且不同厂家生产的硅胶，其质量也有差别，甚至同一厂家生产的不同批号也会有分离效果不同的差别。

因此要使薄层分离的结果比较稳定，应严格控制硅胶质量。

3．薄层板的制备薄层板分为无粘合剂(软板)和有粘合剂(硬板)两种.前者系将吸附剂直接放在洗净干燥的玻璃板一端,置涂布器上并调节好一定的涂布厚度,一般为0.25～0.5mm(供分析用).由于使用中易被分散,现多采用含有粘合剂的薄层板。

——————————文件类别：技术标准 1/5文件名称薄层色谱法(一部)检验标准操作规程文件编号：09T-I692-01 起草人审核人批准人日期：日期：日期：颁发部门：质量管理部生效日期：分发部门：质量控制科1.目的：建立薄层色谱法(一部)检验标准操作规程，并按规程进行检验，保证检验操作规范化。

2.依据：2.1.《中华人民共和国药典》2010年版一部。

3.范围：适用于所有用薄层色谱法(一部)测定的供试品。

4.责任：检验员、质量控制科主任、质量管理部经理对本规程负责。

5.正文：5.1. 简述：薄层色谱法系将供试品溶液点样于薄层板上，在展开容器内用展开剂展开，使供试品所含成分分离，所得色谱图与适宜的对照物按同法所得的色谱图作对比，并可用薄层扫描仪进行扫描，用于鉴别、检查含量测定。

5.2 . 仪器与材料。

5.2.1. 薄层板。

5.2.1.1. 市售薄层板：市售薄层板分普通薄层板和高效薄层板，如硅胶薄层板、硅胶G F254 薄层板、聚酰胺薄膜等。

5.2.1.2. 自制薄层板：在保证色谱质量的前提下，如需对薄层板进行特别处理和化学改性，以适应供试品分离的要求时，也可用实验室自制的薄层板。

最常用的固定相有硅胶G、硅胶GF254、硅胶H、硅胶HF254，微晶纤维素等，其颗粒大小，一般要求粒径为5～40µm。

加水或用羧甲基纤维素钠水溶液（0.2%～0.5%）适量调成糊状，均匀涂布于玻片上。

使用涂布器涂布应能使固定相在玻板上涂成一层符合厚度要求的均匀薄层。

玻板应光滑、平整，洗净后不附水珠，晾干。

5.2.2. 点样器：一般采用微升毛细管或手动、半自动、全自动点样器材。

文件名称：薄层色谱法(一部)检验标准操作规程文件编号：09T-I692-01 分发部门：质量控制科5.2.3. 展开容器：上行展开一般可用适合薄层板大小的专用平底或双槽展开缸，展开时须能密闭。

水平展开用专用的水平展开缸。

5.2.4. 显色装置：喷雾显色应使用玻璃喷雾瓶或专用喷雾器，要求用压缩气体使显色剂呈均匀细雾状喷出；浸渍显色可用专用玻璃器械或用适宜的展开缸代用；蒸气熏蒸显色可用双槽展开缸或适宜大小的干燥器代替。

薄层色谱操作步骤流程简介薄层色谱是一种常见的分离和分析技术，广泛应用于有机化学、药物分析、环境监测等领域。

它基于分离物质在固定相上的吸附性质进行分离，通过不同物质在固定相上的吸附程度不同，实现对混合物的组分分离和定性分析。

实验所需设备和试剂•薄层色谱板•色谱层析溶剂（开发剂）•样品溶液•开发槽•显色剂操作步骤1.准备色谱板：将薄层色谱板切割成适当大小，并用铅笔在色谱板上标记出样品位置。

2.准备样品溶液：将待分析的样品溶解在适当的溶剂中，制备成适宜的浓度溶液。

3.样品上板：使用微量吸管直接在样品位置滴加适量的样品溶液，使其均匀地涂敷在色谱板上。

4.色谱板预处理：将样品涂敷后的色谱板放置在通风处或使用烘箱晾干，确保样品完全干燥，以免影响后续的分离和分析结果。

5.准备开发剂：根据需要选择适当的色谱层析溶剂，并在开发槽中加入足够的开发剂，使其深度达到足够的高度。

6.开发过程：将预处理后的色谱板快速且垂直地放置在开发槽中，确保样品位置不与开发剂接触。

待开发剂上升至适当高度（通常为色谱板的1-2cm）后，取出色谱板并迅速将其放置在室温下。

7.晾干过程：等待开发剂在色谱板上表现出理想的色谱迁移效果后，将色谱板再次晾干。

8.显色检测：根据待分析物的性质选择合适的显色剂，在色谱板中进行染色或者影像检测。

根据显色剂所表现的色带位置和颜色变化，可以判断混合物中各组分的迁移情况和相对含量等信息。

9.结果分析：根据色带的迁移距离、相对含量以及与已知标准品的对比等信息，对样品进行分析和定性。

实验注意事项1.色谱板在操作和处理时需小心，避免刮伤或破损。

2.各种试剂使用时需注意安全，避免接触皮肤和吸入气体。

3.色谱板处理过程中，需避免手指接触样品位置，以防止污染。

4.所使用的开发剂应遵循相应的危险品管理规定和操作规程。

5.显色剂的选择应符合实验要求，根据不同化合物的性质进行合理的选择和使用。

结论薄层色谱是一种简单、方便、快速的分离和分析方法，在实验操作中需要注意各个步骤的实施和安全操作。

薄层色谱的操作方法简介薄层色谱操作规程薄层色谱扫描仪是可以对斑点进行扫描的分光光度计，通常用可见光或紫外光作光源，线性扫描或锯齿扫描薄层板打开后的斑点，该斑点就汲取该组分特征波长的单色光，剩余的单色光经透射或反射或发射荧光，由检测器积分起来获得这块斑点面积的待测物质含量。

仪器适用于化工、医药、临床、农业、食品、毒理等领域的各种化合物的分别、精制、定性辨别、杂质检查和含量测定。

操作方法：1、薄层板制备：除另有规定外，将1份固定相和3份水在研钵中向一方向研磨混合，去除表面的气泡后倒入涂布器中，在玻板上平稳地移动涂布器进行涂布（厚度为0.2～0.3mm）取下涂好薄层的玻板，置水平台上于室温下晾干，后在110℃烘30分钟，即置有干燥剂的干燥箱中备用。

2、点样：除另有规定外，用点样器点样于薄层板上，一般为圆点，点样基线距底边 2.0cm，样点直径及点间距离同纸色谱法，点间距离可视斑点扩散情况应以不影响检出为宜。

点样时必需注意勿损伤薄层表面。

3、打开打开缸如需预先用打开剂饱和，可在缸中加入充足量的打开剂，并在壁上贴二条与缸一样高、宽的滤纸条，一端浸入打开剂中，密封缸顶的盖，使系统平衡或按正文规定操作。

将点好样品的薄层板放入打开缸的打开剂中,浸入打开剂的深度为距薄层板底边0.5—1.0cm密封缸盖，待打开至规定距离取出薄层板，晾干后按各品种项下的规定检测。

4、如需用薄层扫描仪对色谱斑点作扫描检出，或直接在薄层上对色谱斑点作扫描定量，则可用薄层扫描法。

薄层扫描的方法，除规定外可依据各种薄层扫描仪的结构特点及使用说明，结合实在情况，选择汲取法或荧光法，用双波长或单波长扫描。

由于影响薄层扫描结果的因素很多，故应在保证供试品的斑点在肯定浓度范围内呈线性的情况下，将供试品与对比品在同一块薄层上打开后扫描，进行比较并计算定量，以削减误差。

各种供试品，只有得到分别度和重现性好的薄层色谱，才能获得精准的结果。

薄层色谱仪的适用薄层色谱又叫薄板层析，是色谱法中的一种，是快速分别和定性分析少量物质的一种很紧要的试验技术，属固—液吸附色谱；它兼备了柱色谱和纸色谱的优点，一方面适用于少量样品（几到几微克，甚至0.01微克）的分别；另一方面在制作薄层板时，把吸附层加厚加大；因此，又可用来精制样品，此法特别适用于挥发性较小或较高温度易发生变化而不能用气相色谱分析的质。