放线菌的选择培养基

什么是选择培养基？常⽤的选择培养基有哪些。

选择培养基是根据某⼀种或某⼀类微⽣物的特殊营养要求或对⼀些物理、化学抗性⽽设计的培养基。

利⽤这种培养基可以将所需要的微⽣物从混杂的微⽣物中分离出来⼀、⽜⾁膏蛋⽩胨培养基(培养细菌⽤)⽜⾁膏 3g；蛋⽩胨 10g；NaCl 5g；琼脂 15—20g；⽔ 1000ml；pH 7．0—7．2；1．05kg/cm2 ，121．3℃灭菌20分钟。

⼆、淀粉琼脂培养基(⾼⽒1号培养基，培养放线菌⽤)可溶性淀粉 20g；KNO3 1g；NaCl 0．5g；K2HPO4 0．5g；MgSO4 0.5g；FeSO4 0．01g琼脂 20g;⽔ 1000ml;pH 7．2—7．4配制时，先⽤少量冷⽔，将淀粉调成糊状，在⽕上加热，边搅拌边加⽔及其他成分，溶化后，补⾜⽔分⾄1000ml。

1．05kg/cm2 ，121．3℃灭菌20分钟。

三、查⽒培养基(培养霉菌⽤)NaNO3 2g；K2 HPO4 1g；KCl 0．5g；MgSO4 0．5g；FeSO4 0．01g；蔗糖 30g琼脂 15—20g；⽔ 1000ml；pH ⾃然；1．05kg/cm2 ，121．3℃灭菌20分钟。

四、马丁⽒(Martin)琼脂培养基(分离真菌⽤)葡萄糖 10g；蛋⽩胨 5g；KH2PO4 1g； MgSO4·7H2O 0．5g；1/3000孟加拉红溶液 100ml；琼脂 15—20g；pH ⾃然;蒸馏⽔ 800ml;0．56kg/cm2 (8磅/英⼨2 )，112．6℃灭菌30分钟。

临⽤前加⼊0．03%链霉素稀释液100ml，使每毫升培养基中含链霉素30µg。

五、马铃薯培养基 (实验16)马铃薯 200g；蔗糖(或葡萄糖) 20g；琼脂 15—20g；⽔ 1000ml；pH ⾃然马铃薯去⽪，切成块煮沸半⼩时，然后⽤纱布过滤，再加糖及琼脂，溶化后补⾜⽔⾄1000ml。

1．05kg/cm2 ，121．3℃灭菌20分钟。

高氏一号合成培养基的制备、土壤中放线菌的分离实验材料：培养基成分：可溶性淀粉、KNO3、NaCl、K2HPO4•3H2O、MgSO4•7H2O、FeSO4•7H2O、琼脂。

实验内容：高氏一号合成培养基是培养放线菌的培养基。

这种培养基是采用化学成分完全了解的纯试剂配制而成的培养基，高氏一号培养基：碳源为可溶性淀粉、氮源为KNO3 、NaCl 、K2HPO4•3H2O 、MgSO4•7H2O作为无机盐，FeSO4•7H2O作为微生物的微量元素，提供铁离子等组成。

放线菌是重要的抗生素产生菌，主要分布在土壤中，其数量仅次于细菌，一般在中性偏碱性、有机质丰富、通气性好的土壤中含量较多。

由于土壤中的微生物是各种不同种类微生物的混合体，为了研究某种微生物，就必须把它们从这些混杂的微生物群体中分离出来，从而获得某一菌株的纯培养。

分离放线菌常用稀释倒平板法。

根据放线菌的营养、酸碱度等条件要求，常选用合成培养基或有机氮培养基。

如果培养基成分改变，或土壤预先处理（120℃热处理1h），或加入某种抑制剂（如加数滴10%酚等），都可以使细菌，霉菌出现的数量大大减少，从而淘汰了其它杂菌。

再通过稀释法，使放线菌在固体培养基上形成单独菌落，并可得到纯菌株。

实验步骤：1.高氏一号合成培养基的制备先将可溶性淀粉称好，在小烧杯内用50~100ml水调成糊状，再在另一容器内加入900~950ml热水，将小烧杯内淀粉倒入混匀。

再分别称取其它药品，并加热搅拌使之溶解后，调pH至7.2~7.4，分装，0.1Mpa（15lb/in2）15~30min高压蒸汽灭菌。

2.土壤中放线菌的分离（1）取9套无菌平皿，在皿底贴上标签，注明土壤稀释液的稀释度（10-3、10-4、10-5）、组别、姓名、操作日期等。

每个稀释度做三个培养皿。

然后在每皿中倒入已溶化并冷至50℃左右的高氏一号培养基15~20ml左右，待冷凝成平板。

（2）将土样放入用酒精擦拭过的乳钵中，除去石块、草根、研磨压碎后，称取5g，放入盛有45ml无菌水的三角瓶中。

土壤中放线菌的分离
分离土壤中的放线菌的步骤如下：
1. 准备培养基：选择适合放线菌生长的培养基，常用的包括土壤提取物富集培养基、葡萄糖琼脂糖培养基、镜菌素琼脂糖培养基等。

2. 取样：在选择好的采样地点，使用消毒的工具（如消毒棉签或无菌铲子）采集土壤样品。

注意避免土壤样品的污染。

3. 预处理：将采集到的土壤样品放入无菌研钵中，加入合适的无菌生理盐水或者缓冲液，悬浮土壤样品，使放线菌被更好地释放出来。

可以对土壤样品进行稀释处理，以降低微生物密度。

4. 稀释平板法：将预处理好的土壤样品用无菌移液管分别
在培养基平板上均匀涂布。

然后放入恒温培养箱进行培养。

孵育时间一般为3-4周。

在培养箱内，放线菌会产生菌落
形成。

5. 单菌分离：在培养箱内观察到单个的放线菌菌落后，使
用消毒的工具将其分离到新的培养基上，形成纯种菌落。

这一步可以采用传统的传代分离法或微量分离法。

6. 纯种菌株保存：将得到的纯种菌株存储在适当的冻存管中，通过冻存进行长期保存。

需要注意的是，在进行上述步骤时，需要严格遵守无菌操
作的原则，避免样品或培养基的污染，以保证得到纯种的
放线菌菌株。

培养放线菌实施方案放线菌是一类重要的微生物资源，具有广泛的应用价值。

在生物制药、农业生产、环境保护等领域都有着重要的作用。

因此，培养放线菌的实施方案显得尤为重要。

本文将介绍一种较为全面的培养放线菌的实施方案，希望能够对相关领域的研究人员和生产工作者提供一定的参考价值。

首先，培养放线菌需要准备适当的培养基。

放线菌培养基的配方一般包括碳源、氮源、矿质盐和生长因子等。

在选择碳源和氮源时，应该根据不同放线菌的需求进行合理搭配，以提高培养效果。

同时，还可以添加一定的生长因子，如维生素、氨基酸等，以促进放线菌的生长和代谢。

其次，培养放线菌需要注意合适的培养条件。

放线菌一般喜欢在较为潮湿的环境中生长，因此在培养过程中需要保持适当的湿度。

同时，温度和氧气供应也是影响放线菌生长的重要因素，应该根据不同放线菌的生长特性进行合理控制。

另外，培养放线菌还需要进行合适的分离和筛选。

在培养过程中，可能会存在多种微生物混合生长的情况，因此需要进行分离和筛选，以获得纯种的放线菌。

这需要借助于一定的分离技术和筛选方法，如稀释平板法、筛选培养基等，以确保获得纯种的放线菌。

最后，对于某些特殊放线菌的培养，可能还需要进行一定的改良和优化。

有些放线菌在自然环境中生长缓慢，或者在传统培养条件下难以获得理想的培养效果，这就需要进行一定的改良和优化。

可以通过改变培养基的配方、调整培养条件、引入基因工程等手段，以提高放线菌的培养效率和产量。

总之，培养放线菌是一个复杂而又重要的工作，需要综合运用生物学、微生物学、生物工程学等多个学科的知识。

通过合理的培养实施方案，可以更好地利用放线菌资源，促进相关领域的发展和进步。

希望本文介绍的培养放线菌实施方案能够为相关研究和生产工作提供一定的帮助和指导。

牛肉膏蛋白胨培养基（培养细菌用）牛肉膏3g蛋白胨5g氯化10g钠琼脂15~20gpH 7.0~7.2水1000mL 121℃灭菌20min。

2、高氏（Gause）1号培养基（培养放线菌用）可溶性淀20g粉硝酸钾1g氯化0.5g钠磷酸氢二钾0.5g硫酸镁0.5g硫酸亚铁0.01g琼20g脂水1000mLpH7.2～7.4配制时，先用少量冷水将淀粉调成糊状，倒入煮沸的水中，在火上加热，边搅拌边加入其他成分，溶化后，补足水分至1000mL。

121℃灭菌20min。

3、查氏（Czapek）培养基（培养霉菌用）硝酸钠2g磷酸氢二钾1g氯化钾0.5g硫酸镁0.5g硫酸亚铁0.01g蔗糖30g琼脂15~20g水1000mLpH 自然121℃灭菌20min。

4、马丁氏（Martin）琼脂培养基（分离真菌用）葡萄糖10g蛋白胨5g磷酸二氢钾1g七水合硫酸镁0.5g1/3000孟加拉红100mL（rose bengal，玫瑰红水溶液）琼脂15—20gpH 自然蒸馏水800mL112℃灭菌30min。

临用前加入0.03%链霉素稀释液100mL，使每毫升培养基中含链霉素30μg。

5、马铃薯培养基（简称PDA）（培养真菌用）马铃薯200g蔗糖（或葡萄糖）20g琼脂15—20gpH 自然培养基的配制：马铃薯去皮，切成块煮沸30min，然后用纱布过滤，再加糖及琼脂，熔化后补足水至1000mL。

121℃灭菌30min。

6、麦芽汁琼脂培养基培养基的配制：(1)、取大麦或小麦若干，用水洗净，浸水6—12小时，至15℃阴暗处发芽，上面盖纱布一块，每日早、中、晚淋水一次，麦根伸长至麦粒的两倍时，即停止发芽，摊开晒干或烘干，贮存备用。

(2)、将干麦芽磨碎，一份麦芽加四份水，在65℃水浴中糖化3—4小时，糖化程度可用碘滴定之。

加水约20mL，调匀至生泡沫时为止，然后倒在糖化液中搅拌煮沸后再过滤。

(3)、将糖化液用4—6层纱布过滤，滤液如混浊不清，可用鸡蛋白澄清，方法是将一个鸡蛋白加水约20mL，调匀至生泡沫时为止，然后倒在糖化液中搅拌煮沸后再过滤。

放线菌培养基简介放线菌属于厌氧细菌，产生许多有用的生物活性物质，如抗生素、抗肿瘤剂等。

要培养放线菌，需要一种适合其生长和繁殖的培养基。

本文将介绍一种常用的放线菌培养基配方。

培养基配方放线菌培养基的配方主要包括基础培养基、辅助因子和添加剂等。

基础培养基常用的放线菌基础培养基是固体培养基，其配方包括：•荚膜水解物：10克•葡萄糖：5克•柠檬酸：1克•氯化钙：0.05克•Agar：15克•蒸馏水：1000毫升将荚膜水解物、葡萄糖和柠檬酸溶解在蒸馏水中，加热煮沸，再加入氯化钙和Agar，将混合溶液调节至pH 7.2-7.4，然后装入培养瓶中，高压灭菌20分钟即可。

辅助因子放线菌的生长需要一些特殊的辅助因子，常用的包括：•青霉素：50单位/毫升•氯霉素：50毫克/毫升•铁盐：0.1毫克/毫升将这些辅助因子加入到基础培养基中，使得放线菌在培养基中能够获得充足的营养和生长环境。

添加剂为了提高放线菌的生长和产生生物活性物质的能力，可以在基础培养基中添加一些添加剂，常用的包括：•酵母浸出物：3克/升•大豆粉：20克/升•鱼粉：10克/升这些添加剂可以提供额外的氮源和碳源，促进放线菌的生长和代谢。

使用方法使用这种放线菌培养基进行放线菌的培养，可以按照以下步骤进行：1.准备培养基：按照上述配方制备基础培养基并添加辅助因子和添加剂。

2.高压灭菌：装满培养基的烧瓶密封好，放入高压锅中进行高压灭菌，温度为121°C，压力为15PSI，时间为20分钟。

3.倒入培养皿：将高压灭菌后的培养基迅速倒入培养皿中，摇晃培养皿使培养基均匀分布。

4.接种菌株：将欲培养的放线菌菌株接种到培养皿中，可以使用菌液或菌落接种。

5.培养条件：将接种后的培养皿放入恒温培养箱中，温度一般为28°C，培养时间根据放线菌的生长速度而定。

6.观察和记录：在培养过程中观察放线菌的生长情况，记录形态和色素的变化。

结论通过合适的放线菌培养基的配方和正确的培养条件，可以有效地培养出放线菌，并获取其产生的有用生物活性物质。

放线菌的培养与观察摘要：对青色链霉菌（Streptomyces glaucus)和弗氏链霉菌(Streptomycesfradiae)进行有效的观察.实验利用高氏（Gause）一号培养基对放线菌在28℃下进行培养，并通过插片法，在普通光学显微镜下完成了对两种放线菌自然状态下的观察，观察到了基内菌丝以及孢子丝等结构。

关键词：放线菌插片法孢子丝链霉菌前言放线菌与人类的生产和生活关系极为密切，目前广泛应用的抗生素约70%是各种放线菌所产生。

一些种类的放线菌还能产生各种酶制剂，此外，放线菌还可用于甾体转化、烃类发酵、石油脱蜡和污水处理等方面。

而链霉菌属（Streptomyces）是最高等的放线菌，有发育良好的分枝菌丝。

已知放线菌所产抗生素的90％都由本属产生。

放线菌是属于一类具有分支状菌丝体的细菌，革兰染色为阳性。

大多数有发达的分枝菌丝。

菌丝纤细，宽度近于杆状细菌，约0.5～1微米。

可分为营养菌丝，气生菌丝，孢子丝三种，孢子丝的形状和排列方式因种而异。

孢子丝的形态、孢子的排列以及形状都是放线菌重要的分类学指标。

培养放线菌则使用的是高氏（Gause）一号培养基。

这种培养基属于合成培养基，对于其中的成分，我们能够精确地掌握。

实验中采用插片法来观察放线菌自然状态下的基内菌丝和孢子丝等结构。

本次试验就是将以这些为基础，培养和观察青色链霉菌（S. glaucus)与弗氏链霉菌(S. fradiae)，加深对放线菌的认识和理解。

1.材料与方法1.1 材料1.1.1 菌种青色链霉菌（S. glaucus)；弗氏链霉菌(S. fradiae)1.1.2 溶液与试剂可溶性淀粉；KNO3粉末；NaCl粉末；K2HPO4粉末；MgSO4粉末；FeSO4粉末；琼脂；水；1.1.3 仪器电子天平；烧杯；玻璃棒；药匙；加热器；10ml量筒；1ml移液管；高压蒸汽灭菌锅；培养皿；盖玻片；载玻片；酒精灯；接种环；镊子；试管；恒温箱；普通光学显微镜；300ml锥形瓶1.2 方法1.2.1 高氏一号培养基制备1.2.1.1 按照高氏一号培养基的配方称取各个成分，备下一步使用。

牛肉膏蛋白胨培养基（培养细菌用）121℃灭菌20min。

2、高氏（Gause）1号培养基（培养放线菌用）配制时，先用少量冷水将淀粉调成糊状，倒入煮沸的水中，在火上加热，边搅拌边加入其他成分，溶化后，补足水分至1000mL。

121℃灭菌20min。

3、查氏（Czapek）培养基（培养霉菌用）121℃灭菌20min。

4、马丁氏（Martin）琼脂培养基（分离真菌用）112℃灭菌30min。

临用前加入0.03%链霉素稀释液100mL，使每毫升培养基中含链霉素30μg。

5、马铃薯培养基（简称PDA）（培养真菌用）培养基的配制：马铃薯去皮，切成块煮沸30min，然后用纱布过滤，再加糖及琼脂，熔化后补足水至1000mL。

121℃灭菌30min。

6、麦芽汁琼脂培养基培养基的配制：(1)、取大麦或小麦若干，用水洗净，浸水6—12小时，至15℃阴暗处发芽，上面盖纱布一块，每日早、中、晚淋水一次，麦根伸长至麦粒的两倍时，即停止发芽，摊开晒干或烘干，贮存备用。

(2)、将干麦芽磨碎，一份麦芽加四份水，在65℃水浴中糖化3—4小时，糖化程度可用碘滴定之。

加水约20mL，调匀至生泡沫时为止，然后倒在糖化液中搅拌煮沸后再过滤。

(3)、将糖化液用4—6层纱布过滤，滤液如混浊不清，可用鸡蛋白澄清，方法是将一个鸡蛋白加水约20mL，调匀至生泡沫时为止，然后倒在糖化液中搅拌煮沸后再过滤。

(4)、将滤液稀释到5—6波美度，pH约6.4，加入2%琼脂即成。

121℃灭菌30min。

7、无氮培养基（自生固氮菌、钾细菌）113℃灭菌30min。

8、半固体肉膏蛋白胨培养基121℃灭菌20min。

9、合成培养基加12 mL0.04%的溴钾酚紫（pH5.2—6.8，颜色由黄变紫，作指示剂）。

121℃灭菌20min。

10、豆芽汁蔗糖（或葡萄糖）培养基培养基的配制：称新鲜豆芽100g，放入烧杯中，加入水1000mL，煮沸约30min，用纱布过滤。

用水补足原量，再加入蔗糖（或葡萄糖）50g，煮沸熔化。

（1）分离细菌时，在培养基中加入浓度为50U/ml制霉菌素，可以抑制霉菌和酵母菌的生长。

（2）分离放线菌时，在样品中加入0.05%十二烷基磺酸钠（SDS）不仅可以抑制细菌的生长，还能激活放线菌孢子的萌发。

加入氟哌酸（5mg/L）+制霉菌素（50mg/L）+青霉素（0.8mg/L）也可以有效地抑制细菌和真菌，而不影响放线菌的生长。

（3）分离霉菌和酵母菌时，在培养基中加入青霉素、链霉素和四环素各30U/ml，可以抑制细菌和放线菌生长。

（4）分离根霉和毛霉时，由于这些微生物的菌丝易蔓延成片，难以得到纯化的菌落，通常在培养基中添加0.1%去氧胆酸钠或山梨醇防止菌丝蔓延，使菌落长得小而紧密。

一般用于分离单一目的微生物的培养基中均含有抑制其他微生物的抑制剂，这些专用的抑制剂在小型实验室配制较麻烦，现已有成品供应，只要直接加入基础培养基即可。

如氨苄西林，主要用于分离亲水气单孢菌。

1、细菌培养基配方一牛肉膏琼脂培养基牛肉膏0.3克，蛋白胨1.0克，氯化钠0.5克，琼脂 1.5克，水1000毫升在烧杯内加水100毫升，放入牛肉膏、蛋白胨和氯化钠，用蜡笔在烧杯外作上记号后，放在火上加热。

待烧杯内各组分溶解后，加入琼脂，不断搅拌以免粘底。

等琼脂完全溶解后补足失水，用10%盐酸或10%的氢氧化钠调整pH值到7.2～7.6,分装在各个试管里，加棉花塞，用高压蒸汽灭菌30分钟。

配方二马铃薯培养基取新鲜牛心（除去脂肪和血管）250克，用刀细细剁成肉末后，加入500毫升蒸馏水和5克蛋白胨。

在烧杯上做好记号，煮沸，转用文火炖2小时。

过滤，滤出的肉末干燥处理，滤液pH值调到7.5左右。

每支试管内加入10毫升肉汤和少量碎末状的干牛心，灭菌，备用。

配方四根瘤菌培养基葡萄糖10克磷酸氢二钾0.5克碳酸钙3克硫酸镁0.2克酵母粉0.4克琼脂20克水1000毫升1%结晶紫溶液1毫升先把琼脂加水煮沸溶解，然后分别加入其他组分，搅拌使溶解后，分装，灭菌，备用。