发酵工艺综合实习指导书

第一部分、实验部分实验一、酸乳的制作一、实验目的1、掌握酸乳的制作方法、基本原理；2、了解发酵剂制备过程中的操作要点；3、对最终产品进行感官评定及理化检测，并进行品质比较。

二、基本原理酸乳也成为酸牛奶，是人们喜欢的饮用发酵乳。

所谓发酵乳、鲜乳或乳制品等主要原料添加乳酸菌，发酵以后形成的具有特殊风味的乳制品。

乳经过发酵制成发酵乳以后营养价值提高，发酵乳中的蛋白质、钙盐容易消化吸收，具有消化、抑制肠道内异常的发酵和杀死肠道中的有害菌的作用。

酸奶是以牛奶为原料经过均质、消毒、发酵等过程加工而成的。

酸乳的品种很多，根据发酵工艺的不同，可以分为凝固型酸乳和搅拌型酸乳两大类。

凝固型酸乳在接种发酵菌株后，立即进行包装，并在包装容器内发酵、成熟。

搅拌型酸乳先在发酵罐中接种、发酵，发酵结束后在进行无菌灌装并后熟。

其基本原理就是通过乳酸菌发酵牛奶中的乳糖产生乳酸，乳酸使牛奶中酪蛋白（约占全乳的2.9%，占乳蛋白的85%）变性凝固而使整个奶液呈凝乳状态。

同时，通过发酵还可以形成酸奶特有的香味和风味，本实验主要学习凝固型酸奶的制作方法。

三、实验材料1、材料：纯牛奶、白糖、酸牛奶2、仪器：电炉、水浴锅、电子天平、恒温培养箱、相关玻璃器皿四、实验步骤1、取2000ml纯牛奶放入锅中加热；2、当达到一定温度后，按照8%的比例加入160g白糖，搅拌溶解3、将牛奶加热到90℃；4、小组分装，每个三角瓶中加入50ml的牛奶，5、将分装好的牛奶放到95℃的水浴锅中，灭菌5min；6、冷却到45℃，在酒精灯下，接种适量的酸牛奶（一勺），并搅拌均匀，封好口；7、在37℃的温箱中保温培养2-4h，8、转入0-4℃冰箱中冷藏保存；9、品质鉴定五、实验结果品质鉴定：1.色泽：色泽均匀一致，呈乳白色。

2. 气味：具有与种子酸奶同样的香味，无酒精发酵味，无霉味或其他不良味道。

3.状态：凝块均匀，无气泡，没有乳清析出。

4.口感：口感就好，与种子酸奶味道一致，清香，顺滑，没有颗粒状物质。

第1篇一、实验目的1. 了解发酵工程的基本原理和操作方法；2. 掌握微生物的培养、分离、鉴定及发酵条件优化等实验技术；3. 提高实验操作能力和数据分析能力。

二、实验原理发酵工程是一门研究微生物发酵过程及其应用的科学。

通过发酵工程，可以利用微生物的代谢活动生产出各种有用的产品，如食品、医药、化工产品等。

本实验主要涉及微生物的培养、分离、鉴定及发酵条件优化等实验技术。

三、实验材料与仪器1. 材料：土壤样品、牛肉膏蛋白胨培养基、葡萄糖、酵母提取物、氯化钠、硫酸铵、磷酸二氢钾、硫酸镁、琼脂等；2. 仪器：高压蒸汽灭菌器、恒温培养箱、显微镜、电子天平、pH计、发酵罐、酒精灯、试管、培养皿等。

四、实验方法1. 微生物分离与纯化（1）土壤样品的采集与处理：在校园内采集土壤样品，将土壤样品过筛，去除杂质，备用；（2）牛肉膏蛋白胨培养基的制备：按照实验要求，称取牛肉膏、蛋白胨、葡萄糖、氯化钠、硫酸铵、磷酸二氢钾、硫酸镁等试剂，加入适量的水，搅拌均匀，煮沸10分钟，待冷却后加入琼脂，搅拌均匀，倒入培养皿中，待凝固；（3）土壤样品的接种：将处理好的土壤样品稀释，取适量涂布在牛肉膏蛋白胨培养基上，置于恒温培养箱中培养；（4）分离纯化：观察菌落特征，挑选单菌落进行纯化，重复以上步骤，直至获得纯化菌株。

2. 微生物鉴定（1）观察菌落特征：观察纯化菌株在牛肉膏蛋白胨培养基上的菌落特征，如菌落大小、形状、颜色、边缘等；（2）显微镜观察：将纯化菌株进行涂片、染色，在显微镜下观察菌体形态、染色特性等；（3）生化试验：进行糖发酵试验、氧化酶试验、淀粉酶试验等，鉴定菌株的生理生化特性。

3. 发酵条件优化（1）发酵培养基的制备：根据实验要求，称取葡萄糖、酵母提取物、氯化钠、硫酸铵、磷酸二氢钾、硫酸镁等试剂，加入适量的水，搅拌均匀，煮沸10分钟，待冷却后加入琼脂，搅拌均匀，倒入发酵罐中；（2）发酵条件优化：通过改变发酵温度、pH值、接种量、发酵时间等条件，观察发酵产物的产量和品质，确定最佳发酵条件。

饲料生产发酵工岗位作业指导书1、根据生产要求提前10分钟到岗准备，认真参加班前会，理解并接受本班次的生产任务。

2、严格遵守“安全生产，预防为主”的方针，规范操作，正确配戴好安全防护用品。

3、按规定检查螺式配件，特别是发酵仓内紧固件是否可靠，并予以确认，清理仓杂质，检查清理杂物及结块料。

主轴与压辐加注润滑油。

4、开启至最低转速，选择进行机外排料，检查原料色泽，及混合是否均匀。

5、打开阀门，微调节喂料电机转速，待喂料电机与加入量逐渐调至合适的程度，要求单手握紧一把粒料时即成团，松手后粒团即能散开为宜，然后进行进料。

6、交替调整喂料器转速，使主电机工作电流逐渐达到额定电流。

7、调整温度，保持在°C-°C之间。

8、如换料必须对进行清理，用一定的物料进行“冲洗”，严防交叉污染，检查规格是否符合产品技术要求。

9、发酵过程中，不断检查饲料色泽、气味、目数、含水量等。

10、生产时主轴应每班加油一次，压辗每2-3小时加油一次，加油时注意观察加油量以压辗压盖轻微冒油为宜，过多浪费，各润滑点必须定期加油。

11、在保证发酵质量的前提下，提高出料速度。

负责压棍，环模更换工作，定期清理制粒机，喂料器，搅拌罐内的积垢和缠绕物，并对发酵系统进行有效的维护保养。

下班前搅拌罐内料仓物料必须全部走完，排尽，防止变质感染。

12、爱护，保养工器具，工器具定置摆放，专用工具锁入工具柜；认真打扫工作场地，及卫生责任区, 做一次下班前的例行全面检查。

13、工作认真负责，不做与本工作无关的事情，不串岗，不脱岗，不睡岗并且做到勤动手，勤观察，勤动脑，不断提高操作技能，对本工序的产品质量和作业质量，以及机器保养，环境卫生，工具管理负责，并纳入工资考核，积极完成上级领导临时安排的各项事务。

一、实习背景为了进一步了解发酵工艺的实际应用，提高自己的实践能力，我于2023年6月1日至7月15日在某知名发酵厂进行了为期一个月的实习。

本次实习让我对发酵工艺有了更深入的了解，也让我认识到理论知识与实践操作的紧密结合。

二、实习内容1. 发酵车间参观实习期间，我首先参观了发酵车间，了解了发酵车间的整体布局、设备设施以及发酵过程。

发酵车间分为原料处理区、发酵区、离心分离区、精制区等，各个区域功能明确，设备先进。

2. 发酵工艺学习在实习过程中，我重点学习了以下发酵工艺：（1）原料处理：包括原料的筛选、清洗、粉碎、混合等环节。

（2）发酵：将预处理后的原料进行发酵，利用微生物将原料转化为目标产物。

（3）离心分离：将发酵液中的固体物质与液体分离。

（4）精制：对分离后的液体进行精制，去除杂质，提高产品质量。

3. 实践操作在实习期间，我参与了以下实践操作：（1）原料处理：学习了原料筛选、清洗、粉碎等操作，掌握了原料处理的基本技能。

（2）发酵：参与了发酵液的接种、搅拌、控制温度等操作，了解了发酵过程中的注意事项。

（3）离心分离：学习了离心分离的原理和操作方法，掌握了离心分离的基本技能。

（4）精制：参与了精制过程中的过滤、浓缩、结晶等操作，了解了精制工艺的基本流程。

三、实习收获1. 提高了对发酵工艺的认识：通过实习，我对发酵工艺有了更深入的了解，认识到发酵工艺在食品、医药、化工等行业的重要作用。

2. 增强了实践能力：在实习过程中，我积极参与实践操作，提高了自己的动手能力和实际操作技能。

3. 培养了团队协作精神：在实习过程中，我与同事们共同完成了各项任务，培养了团队协作精神。

4. 了解了企业文化和价值观：通过实习，我了解了企业的文化、价值观和发展方向，为今后的就业和发展奠定了基础。

四、总结本次发酵厂实习让我受益匪浅，不仅提高了自己的实践能力，还对发酵工艺有了更深入的了解。

在今后的学习和工作中，我将继续努力，将所学知识运用到实际工作中，为企业的发展贡献自己的力量。

2013-2014第一学期发酵工艺学实验指导书第一篇：2013-2014第一学期发酵工艺学实验指导书实验一酸奶的制作一、实验目的1.通过酸奶的制作，了解乳酸发酵的基本原理。

2.掌握酸奶的制作技术。

二、实验原理酸奶是鲜奶经过乳酸菌发酵而制成的乳制品，具备鲜奶的全部营养成分。

酸奶含有人体必需的蛋白质、脂肪、维生素、矿物质、乳糖酶和活性乳酸菌等。

酸奶是采用优质纯鲜牛奶加入白糖均质,经超高温灭菌后接入乳酸菌发酵后制成的一种发酵型乳制品。

在发酵过程中,鲜牛奶中的酪蛋白遇酸凝固,成为有弹性的凝块,颜色乳白、气味清香、酸甜可口,别具一番风味。

乳酸菌具有把奶类中的乳糖，分解成乳酸的功能，称为乳酸发酵。

在形成乳酸的同时也产生其他一些酸类物质，从而导致了PH 值的下降，当达到乳类蛋白质的等电点时（如牛奶蛋白质的等电点约在PH4.5 左右），引起蛋白质的沉淀，使原来流动性较大的乳类，因凝固作用而变成类似果冻的胶状物，称之为“凝乳”。

三、实验试剂与器皿1.菌种：嗜热乳酸链球菌、保加利亚乳酸杆菌，乳酸菌种也可以从市场销售的各种新鲜酸乳或酸乳饮料中分离；2.培养基：脱脂乳粉或全脂乳粉、鲜牛奶、蔗糖；3.恒温水溶锅、酸度计、高压蒸汽灭菌锅、超净工作台、培养箱、酸乳瓶(200～280mL)、培养皿、试管、300mL三角瓶。

四、实验方法与步骤1．酸奶的制作1.1将1%-2% 脱脂乳于80～85℃ 灭菌10～5min，同时加入5%--6%蔗糖，充分混合，然后冷却至35～40℃，作为制作饮料的培养基质。

1.2将纯种嗜热乳酸链球菌、保加利亚乳酸杆菌及两种菌的等量混合菌液作为发酵剂，均以2%～5%的接种量分别接入以上培养基质中即为饮料发酵液，亦可以市售鲜酸乳为发酵剂。

接种后摇匀，分装到已灭菌的酸乳瓶中，随后将瓶盖拧紧密封。

1.3把接种后的酸乳瓶置于40--42℃恒温箱中培养3～4h。

培养时注意观察，在出现凝乳后停止培养。

然后转入4～5℃的低温下冷藏24h以上。

实验一腐乳制作一、实验目的1.理解和掌握腐乳的加工原理。

2.掌握腐乳的酿造过程和工艺要点。

二、实验原理豆腐乳是我国独特的传统发酵食品，是用豆腐发酵制成。

民间老法生产豆腐乳均为自然发酵，现代酿造厂多采用蛋白酶活性高的鲁氏毛霉或根霉发酵。

豆腐坯上接种毛霉，经过培养繁殖，分泌蛋白酶、淀粉酶、谷氨酰胺酶等复杂酶系，将豆腐中的有效物质分解，同时在长时间后发酵中与添加的辅料一起形成腐乳特有的色、香、位、体。

三、实验材料与设备1. 菌种：毛霉斜面菌种2.实验材料：马铃薯葡萄糖琼脂培养基（PDA），葡萄糖，纱布，无菌水，豆腐坯，红曲米，面曲，甜酒酿，白酒，黄酒，食盐等。

3.仪器和器具250mL三角瓶，接种针，小笼格，喷枪，小刀，带盖广口玻瓶，恒温培养箱，。

四、实验方法与步骤1.工艺流程毛霉斜面菌种→扩大培养→孢子悬浮液→豆腐坯→接种→培养→晾花→加盐→腌坯→装瓶→后熟→成品2.操作要点2.1孢子悬液制备（1）毛霉菌种的扩培：将毛霉菌种接入PDA斜面培养基，于25℃培养2-3d进行活化；将斜面菌种转接到盛有种子培养基的三角瓶中，于20-25℃培养6-7d，要求菌丝饱满、粗壮，孢子生长旺盛，备用。

种子培养基：取大豆粉与大米粉质量比为1:1混合，装入三角瓶中，料层厚度为1-2cm，加入5%水。

加纱布包口，0.1MPa灭菌30min。

（2）孢子悬液制备：于上述三角瓶中加入无菌水100mL，充分震摇，用无菌双层纱布过滤，滤渣倒回三角瓶，再加100mL无菌水洗涤1次，合并滤液于第一次滤液中，装入喷枪贮液瓶中供接种使用。

2.2 接种孢子用刀将豆腐坯划成4.1cm×4.1cm×1.6cm的块，将笼格经蒸汽消毒、冷却，用孢子悬液喷洒笼格内壁，然后把划块的豆腐坯均匀竖放在笼格内，块与块之间间隔2cm。

再用喷枪向豆腐块上喷洒孢子悬液，使每块豆腐周身沾上孢子悬液。

2.3培养与晾花将放有接种豆腐坯的笼格放入培养箱中，于20-25℃下培养，最高不能超过28℃。

《食品发酵工艺学实验》综合性创新实践教学方案设计教学内容活动一大家一起踢纸球活动二剪纸小作坊活动三纸桥承重教学目的：1、通过教学，使学生认识剪纸，了解纸在日常生活中的广泛应用。

2、通过设计制作纸桥、纸球、剪纸等一系列活动锻炼身体学生的动手能力创新能力。

3、通过教学，使学生了解掌握更多剪纸的技法和技巧。

教学重点及难点：1、通过教学，激发学生对生活的热爱，了解纸在日常是生活中的广泛应用，掌握更多的剪纸技法和技巧。

2、通过积极开展一系列的活动，培育学生的动手能力、创新能力。

教学具准备：彩色纸张、剪刀、胶水、视频展示台等。

课时安排：3课时第一课时大家一起踢纸球教学目的：1、通过教学，使学生了解足球的结构及质地还有运动员对足球的要求。

2、通过教学，并使学生能够利用纸制作球，介绍制作过程及建议。

3、了解纸在日常生活中的广泛应用，培养学生的动手能力和创新能力。

教学重点及难点：1、学会制作纸球2、怎样才能使球更稳固，不能贫。

教学准备：彩色纸张，剪刀，足球，视频展示台。

教学过程：一、研究足球1、师出示足球，生观察、了解足球的结构、质地。

2、恳请班上几个嗜好足球的男生上来踢足球，谈论体会。

二、制作纸球1、对怎样搞纸球展开探讨。

2、确定做纸球的步骤思索：怎样才能使纸球更稳固、不能贫呢？三、试做纸球（视频展示台）大家先行打纸球，谈论感觉。

不足之处：太重、打不远弹性不足，落地后起不来。

……四、改进纸球分析纸球存有的问题，采取相应的改良措施。

活动目标：1、独立自主自学找出围裙的制作方法，在此基础上小组合作顺利完成围裙的制作。

2、尝试在活动中培养学生主动发现问题能用适当的方法解决问题的能力。

3、唤起学生创作兴趣，体验合作探究的快感，体会围裙创作的奥妙。

重点难点：重点：掌控围裙制作的方法和技巧，提高制作经验。

难点：在设计制作中能发现问题积极想办法解决问题。

活动准备工作：教师准备：课件ppt、示范作品、制作的材料。

学生准备工作：布袋若干、剪刀、笔。

发酵车间作业指导书发酵岗位1．岗位设备以及工艺流程1.1设备流程1.2工艺流程1.3岗位设备一览表2．车间操作控制程序2.1配料操作一、配料操作1、配料前将配料缸清洗干净，并目测检查当天所需各种原辅料的品质和是否备齐。

2、严禁使用污染变质或规格不合的原辅料，以及用浑浊的水源配料。

3、在配料桶内注入适量的工艺水，种子罐注入0.15m3，发酵罐注入0.45m3，通入蒸汽，开启搅拌器，将水加热至60℃左右，投入称量好的原料。

按白糖、豆饼粉、玉米浆、硫酸镁、磷酸二氢钾、泡敌的顺序依次将称量好的原料在搅拌状态下加入配料缸。

每加一种原料需完全溶解或分散均匀后方可再加入另一种原料。

无机盐及泡敌应在最后用少量水分别溶解或分散后加入。

4、待配料缸内的物料安全充分搅拌均匀后，用12N盐酸或12N氢氧化钠将料液的PH值调至6.0±0.1。

5、将混匀的物料在搅拌状态下，用泵打入种子罐或发酵罐，然后用工艺水清洗干净配料缸后定容。

6、认真填写配料记录，以备核查。

2.2空消操作规程1、灭菌前的准备：(1)、灭菌前应将罐清洗干净，并认真检查罐内各附件是否松动脱落，各种管道、阀门、压力表、温度表有无漏气，失灵或堵塞情况。

如有异常，应及时修复。

(2)、灭菌前必须逐段排尽蒸气管内的冷凝水。

(3)、灭菌前通知锅炉房保持供汽量，并保证车间分汽缸上的蒸汽压力大于0.3 Mpa。

(4)、通知空压机房启动空压机，发酵工段用空气压力不小于0.25Mpa，同时循环水也要及时到位。

2、空罐灭菌(1)、灭菌前，应将手孔或人孔盖好，加垫圈并紧固螺栓。

(2)、打开进汽阀门及各排汽阀，同时打开底阀排尽冷凝水，并严格执行空消条件：发酵罐0.15mPa．60min 29±1℃，种子罐0.12Mpa，60min，125±1℃。

(3)、在空罐灭菌的同时，要进行接种等有关管道的灭菌。

(4)、灭菌结束后，为避免罐压急速下降造成负压，不可立即通入冷却水冷却，否则罐内压力骤降，形成强烈负压危及罐体安全，而应当通过排汽阀门均匀缓慢排汽降压，直至掉零，待温度降至70℃左右时方可打开料孔投料。

发酵⼯艺学实验指导实验⼀、酿酒葡萄成熟度的控制以及⼊罐发酵⼀、⽬的与要求成熟度是决定葡萄酒质量的重要因素。

通过测定浆果的成熟度，来了解原料的成熟质量，确定各品种的最佳⼯艺成熟度，并以此决定葡萄酒类型和相应的⼯艺条件。

同时简单了解葡萄酒酿制的⼯艺原理。

⼆、试剂与仪器1.pH计、⼿持糖量计、托盘天平、量筒、⽔浴锅、电炉、移液管、锥形瓶、容量瓶、5L玻璃瓶。

2.斐林试剂A、B液，1%次甲基兰，0.1mol/L氢氧化钠溶液、1%酚酞指⽰剂、邻苯⼆甲酸氢钾，95%酒精，盐酸等。

三、⽅法与步骤1.采样：从转⾊期开始每隔5-7天采样⼀次，对于⼤⾯积园，采⽤250株取样法：每株随机取1-2粒果实，并取300—400粒；⾯积较⼩的品种。

可随机取5 - l0穗果实，装⼊塑料袋于冰壶中，迅速带回实验室分析。

简单的成熟度的测定可⽤⼿持糖量计测定，如果是精确的测定可在实验室中采⽤斐林试剂测定。

2.百粒重与百粒体积，随机取100粒果实，称重，然后将其放⼊250ml(或500ml)量筒中，加⼊⼀定体积的⽔，⾄完全淹没果实．读取量筒⽔⾯的读数，减去加⼊时的⽔量，即为百粒体积。

3.出汁率的测定；取100g分选较好的葡萄果粒，⽤纱布挤汁，放⼊⼩烧杯中，⽴即称量；出汁率=葡萄汁重量/葡萄果实重量。

⼲红葡萄酒的发酵⼯艺过程图计算：在发酵结束后还需要再进⾏出汁率的测定。

⾃流汁率(％)=W1/W2 x 100总出汁率(％)=(W1+W2)/ Ws x 100式中W1——葡萄浆⾃流汁的重量，(g)；Ws——试样重量，(g)；W2——经压榨流出的葡萄汁重量，(g)。

4.可溶性固形物与pH值；⽤⼿持糖量计测定葡萄汁的可溶性固形物(％)，取20ml汁测pH值。

5.还原糖与总酸：⽤斐林试剂法测定还原糖，⽤碱滴定法测定总酸。

6.果⽪⾊价测定：取20粒果实，洗净擦⼲，撕下果⽪并⽤吸⽔纸擦净⽪上所带果⾁及果汁，然后剪碎，称取0.2克果⽪⽤盐酸⼄醇溶液(1 mol/L盐酸: 95％⼄醇= 15：85)50ml浸泡，浸泡20⼩时左右，然后测定540nm下的吸光度，计算果⽪⾊价(X A x 10)/W (X A——吸光度，W——果⽪重量g)。

生物制药技术专业制药实训指导书一、实训目的通过仿真软件的模拟演练和药物生产的实操训练，使学生综合运用以前所学的全部知识，进行药物生产及加工的具体实践，使学生具有独立的操作能力，是培养学生综合运用所学知识的过程，是知识转化为能力和能力转化为工程素质的重要阶段。

待学生走上工作岗位后既能担负起企业技术改造的任务，也能适应生物药品生产企业和医疗单位对药学人才的需求。

二、实训时间每班一周，食品生物技术（生物制药方向）1030113班第7周，食品生物技术（生物制药方向）103014班第8周三、实训地点仿真实训室、设备及制剂生产实训室、分离纯化实训室、图书馆。

四、实训指导教师赵德胜、韩文请、张锐五、实训具体安排：（一）实训要求：1、学生实训前要认真学习青霉素生产工艺过程，熟悉青霉素仿真软件的使用及药物生产相关设备的结构和使用，禁止学生现学现用和不规范操作设备；2、学生分组进行实训，但要求每位同学均动手操作；3、实训期间学生必须遵守实训室的一切规章制度，违者按相关规章制度进行处罚；4、在企业参观时严格遵守企业的相关规定；5、学生必须做好实训期间的生产纪录。

（二）实训内容：1、青霉素发酵及提取仿真软件的使用；2、制药生产设备的认识与实操；（三）实训生产记录：要求实训中要有生产记录，如实记录生产过程的控制情况。

1、每台仪器、设备的结构及准确操作。

2、生产期间的管理：要求有项目、有时间、有数据、有措施。

（四）总结：1、对本次生产过程及结果做出分析；2、就本次实训过程中的收获及不足做出客观的评价；3、对实训中存在的不足及要改进的地方做出建议。

（五）论文：1、每位学生在实训结束后要交一份有关实训内容的报告。

2、实训报告应包括如下内容：①封面②目录③任务书④正式报告⑤工艺流程图⑥小组工作分工记录表3、实训报告正式报告按论文格式编写，应包括一下几方面：①引言（或绪论）②正文③结论④参考文献六、考核：1、按照实训内容认真做好实训笔记，整理收集相关资料；实训完成后，整理书写成实训总结报告。

发酵工程技术实验指导书适用课程：发酵工程技术目录实验一酵母菌的分离和纯化 (1)实验二果酒制作及酒精度测定 (3)实验三乳酸菌的分离和鉴别 (6)实验四酸奶制作以及感官鉴评 (9)实验五土壤中产醋酸菌种的分离筛选 (11)实验六发酵型虾酱的生产实验及氨基酸态氮的测定 (13)2实验一酵母菌的分离和纯化一、实验目的应用酵母的生理生化和生态学特点，从自然环境中分离酵母菌，并掌握微生物分离纯化的基本方法。

二、实验原理大多数酵母菌为腐生，其生长最适pH为4.5～6，常见于含糖分较高的环境中，例如果园土、菜地土及果皮等植物表面。

酵母菌生长迅速，易于分离培养，在液体培养基中，酵母菌比霉菌生长得快。

利用酵母菌喜欢酸性环境的特点（酸性条件则可以抑制细菌的生长），常用酸性液体培养基获得酵母菌的培养液，然后在固体培养基上用划线法分离纯化。

三、实验材料及试剂1、成熟葡萄或苹果等果皮2、马铃薯葡萄糖琼脂培养基：原料：马铃薯（200 g）、葡萄糖（20 g）、琼脂（20 g）、蒸馏水（1000ml），分装三角瓶。

配制方法：（1）先将马铃薯去皮，切片，称200 g并加蒸馏水1000ml，煮沸半小时，用纱布过滤，补足蒸馏水量至1000ml，制成20%的马铃薯汁。

（2）在20%的马铃薯汁中加入琼脂，煮沸溶化，加入葡萄糖，搅拌均匀，制成的马铃薯葡萄糖琼脂培养基，补足水分。

（3）在115℃条件下高压灭菌20分种。

3、乳酸马铃薯葡萄糖培养液：原料：马铃薯（200 g）、葡萄糖（20 g）、乳酸（5mL）、pH5.5、蒸馏水（1000mL），分装三角瓶。

4、0.1%美蓝染液：0.1g美蓝溶于100mL蒸馏水中。

5、生理盐水四、主要仪器设备高压蒸汽灭菌器、天平、恒温培养箱、显微镜、酒精灯、电炉、1ml的无菌吸管、18*180mm试管、培养皿、接种针、载玻片、盖玻片、牛皮纸（报纸）、绳线、菜刀、案板、纱布、烧杯、玻璃棒、超净工作台等。

五、实验方法l、接种：取一小块果皮（不需冲洗），加入到盛装100mL无菌生理盐水的三角瓶中，充分搅拌后，用无菌移液管吸取1mL接入到9mL乳酸马铃薯葡萄糖培养液试管中，置28～30℃，培养24小时。

《发酵⼯程》实验指导书范⽂微⽣物发酵⼯程实验指导王⾦华实验规则1、实验前必须预习实验指导书。

若经提问发现没有预习者，须在教师指定的时间内预习完毕，⽅得参加实验。

2、实验前须认真检查仪器、试剂、⽤具及实验材料。

如有破损、短缺应⽴即报告指导教师，经同意后⽅可调换和补充。

对玻璃器⽫须做好清洗⼯作。

3、实验过程中不得随便挪动外组的仪器、⽤具和实验材料。

不得随意拨动仪器开关或电源开关，须按实验要求进⾏。

4、实验材料、药品的使⽤，应在不影响实验结果的前提下注意节约，杜绝浪费。

5、实验室应保持肃静，不得谈笑喧哗，不许搞其他动作，以免影响他⼈实验。

6、清洗仪器、⽤具、材料时，须将固形物倒⼊指定容器内，不得直接倒⼊⽔槽，以免造成⽔管堵塞。

7、实验过程中，须按操作规程仔细操作，注意观察试验结果，应及时记录。

不得抄写他⼈的实验实习记录，否则，须重做。

如有疑问，应向指导教师询问清楚后⽅可进⾏。

8、实验完毕后，须将玻璃仪器、⽤具等清洗⼲净，按原来的位置摆设放置。

如有破损须报告指导教师，并填写仪器损坏登记簿。

9、在进⾏实验过程中，不得随意⾷⽤原料和加⼯品。

10、实验结束后，由值⽇⽣负责打扫实验室，保持室内整洁，注意关上⽔、电、窗、门。

第- 1 - 页共14 页实验⼀培养基的配制及灭菌⼀、实验⽬的要求掌握不同类型微⽣物培养基的配⽅及其制备⽅法。

⼆、仪器设备及原材料⾼压灭菌锅，250ml三⾓瓶，纱布，⽜⽪纸，琼脂，其他化学药品三、常⽤培养基的配⽅及制备1、细菌常⽤培养基（1）LB培养基蛋⽩胨 1.0%酵母膏 0.5%NaCl 1.0%可溶性淀粉 0.5%琼脂 2.0%pH 7.0 121.3℃灭菌20min。

（2）MRS（乳酸菌分离）⽜⾁膏0.5%酵母膏0.5%蛋⽩胨1%葡萄糖1%乳糖0.5%NaCl 0.5% 琼脂2% pH6.8固体培养基加琼脂2%；半固体培养基加琼脂0.75%2、酵母菌常⽤培养基（1）麦芽糖培养基蛋⽩胨1%麦芽糖2%酵母膏0.5%琼脂2%⾃然pH 121.3℃灭菌20min。

发酵工程技术实验指导书适用课程：发酵工程技术目录发酵工程技术实验指导书 (1)实验一酵母菌的分离和纯化 (1)实验二果酒制作及酒精度测定 (4)实验三乳酸菌的分离和辨别 (8)实验四酸奶制作和感官鉴评 (13)实验五土壤中产醋酸菌种的分离挑选 (16)实验六发酵型虾酱的生产实验及氨基酸态氮的测定 (19)实验一酵母菌的分离和纯化一、实验目的应用酵母的生理生化和生态学特点，从自然环境中分离酵母菌，并掌握微生物分离纯化的大体方式。

二、实验原理大多数酵母菌为腐生，其生长最适pH为4.5～6，常见于含糖分较高的环境中，例若是园土、菜地土及果皮等植物表面。

酵母菌生长迅速，易于分离培育，在液体培育基中，酵母菌比霉菌生长得快。

利用酵母菌喜欢酸性环境的特点（酸性条件则可以抑制细菌的生长），常常利用酸性液体培育基取得酵母菌的培育液，然后在固体培育基上用划线法分离纯化。

三、实验材料及试剂1、成熟葡萄或苹果等果皮2、马铃薯葡萄糖琼脂培育基：原料：马铃薯（200 g）、葡萄糖（20 g）、琼脂（20 g）、蒸馏水（1000ml），分装三角瓶。

配制方式：（1）先将马铃薯去皮，切片，称200 g并加蒸馏水1000ml，煮沸半小时，用纱布过滤，补足蒸馏水量至1000ml，制成20%的马铃薯汁。

（2）在20%的马铃薯汁中加入琼脂，煮沸溶化，加入葡萄糖，搅拌均匀，制成的马铃薯葡萄糖琼脂培育基，补足水分。

（3）在115℃条件下高压灭菌20分种。

3、乳酸马铃薯葡萄糖培育液：原料：马铃薯（200 g）、葡萄糖（20 g）、乳酸（5mL）、pH5.5、蒸馏水（1000mL），分装三角瓶。

4、0.1%美蓝染液：0.1g美蓝溶于100mL蒸馏水中。

5、生理盐水四、主要仪器设备高压蒸汽灭菌器、天平、恒温培育箱、显微镜、酒精灯、电炉、1ml的无菌吸管、18*180mm试管、培育皿、接种针、载玻片、盖玻片、牛皮纸（报纸）、绳线、菜刀、案板、纱布、烧杯、玻璃棒、超净工作台等。

发酵工程实验指导书（2014版）宁波大学海洋学院2014.09发酵工程实验指导书目录实验一乳酸菌的分离与初步筛选实验实验二乳酸菌的初步鉴定实验实验三乳酸菌菌种保藏实验实验四乳酸菌的培养与发酵实验实验五乳酸菌发酵产物的分析与测定实验六发酵罐操作训练发酵工程实验指导书（2014版）３实验一 乳酸菌的分离与初步筛选实验一、 实验目的及要求1、 掌握从环境样品中分离所需微生物的一般操作2、 掌握平板划线分离菌种的原理和操作方法3、 掌握利用透明圈法获得单菌落菌株的原理。

二、 实验原理自然样品中存在混杂的微生物，通过选择性培养基及样品稀释使形成细胞分散液，再通过固体培养基在合适的培养条件下培养形成单菌落，由此得到分离的纯培养菌株。

乳酸菌最基本的代谢特性是发酵产酸，待分离样品在合适的培养基和培养条件下，乳酸菌在特定设计的培养基中由于生长产酸产生溶钙形象，从而在培养基中产生透明圈，透明圈直径大小可反映菌落生长产酸量的大小，而不是乳酸菌或不产生酸积累的细菌不能产生透明圈。

三、 实验器材1、 待用分离样品（腌菜，各种泡菜，酸奶，植物汁液，等）；2、 培养基：MRS 培养基或改良乳酸菌分离培养基；无菌水；3、 器皿与设备：培养皿、移液管、试管、三角瓶、接种环、涂布棒、超净工作台、天平、采样瓶，培养箱，等。

四、 方法和步骤 1、 分离样品的采集 采样须知：结合乳酸菌菌种特性（文献资料查阅），获取乳酸菌在自然界或相关产品等的分布规律，设计样品采集范围。

采集样品经适当保存或立即处理。

2、 菌种的分离称取样品5g 或5ml →加到45ml 无菌水的三角瓶中（30℃恒温处理20分为佳）→充分震荡后（含玻璃珠）使其自然沉淀→用1ml 移液管吸取上清菌悬液1ml 至9ml 无菌水试管中→依次进行10倍稀释至10-4~10-5→用移液管吸取1mL 菌悬液至含碳酸钙的MRS 培养基平板中，涂布均匀→30℃恒温培养2~3天→观察菌落，分别挑取生长良好的含透明圈的可疑乳酸菌单菌落，分别移接至普通乳酸菌培养基的斜面试管，菌种编号，30℃恒温培养1~2天，长菌后在4℃冰箱保存待用。

附件2.发酵工程实训大纲：基础层次实验旨在培养学生的基本实验技能，掌握基本实验方法，为进一步的实验打下基础。

本实验从点青霉菌孢子悬浮液开始，经过紫外诱变后，分离、纯化、发酵，最终用杯碟法测出经诱变后的各菌种的效价与原菌种相比，检验本实验所用诱变剂量对菌种效价提高的影响。

本实验共分五次进行，每周一次。

通过本实验可以掌握菌种紫外诱变的全程操作，以及相关的实验技术。

1.1 青霉素的发现1928年，英国细菌学家Fleming发现污染在培养葡萄球菌的双蝶上的一株霉菌能杀死周围的葡萄球菌。

他将此霉菌分离纯化后得到的菌株经鉴定为点青霉，并将这菌所产生的抗生物质命名为青霉素。

1940年，英国Florey和Chain进一步研究此菌，并从培养液中制出了干燥的青霉素制品。

经实验和临床试验证明，它毒性很小，并对一些革兰氏阳性菌所引起的许多疾病有卓越的疗效。

1.2青霉素分类及分子结构青霉素是6－氨基青霉烷酸（6-aminopenicillanic acid, 6-APA）苯乙酰衍生物。

侧链基团不同，形成不同的青霉素，主要是青霉素G。

工业上应用的有钠、钾、普鲁卡因、二苄基乙二胺盐。

青霉素发酵液中含有5种以上天然青霉素（如青霉素F、G、X、K、F和V 等），它们的差别仅在于侧链R基团的结构不同，其中青霉素G在医疗中用得最多，它的钠或钾盐为治疗革兰氏阳性菌的首选药物，对革兰氏阴性菌也有强大的抑制作用。

青霉素的结构通式可表示为1.3青霉素的单位目前国际上青霉素活性单位表示方法有两种：一是指定单位（unit）；二是活性质量（μg），最早为青霉素规定的指定单位是：50mL肉汤培养基中恰能抑制标准金葡萄菌生长的青霉素量为一个青霉素单位。

在以后，证明了一个青霉素单位相当于0.6μg青霉素钠。

因此青霉素的质量单位为: 0.6μg青霉素钠等于1个青霉素单位。

由此，1mg青霉素钠等于1670个青霉素单位(unit)。

1.4作用机理已有的研究认为，青霉素的抗菌作用与抑制细胞壁的合成有关。