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紫外分光光度法测定酱油中苯甲酸含量的实验优化探究崔金娟;谢漫媛;赵丽冰【摘要】苯甲酸(钠)是酱油中的常用添加剂,国家标准对其使用量有严格限制.紫外分光光度法测定酱油中苯甲酸含量在实验影响因素探究和样品前处理方法优化方面还有很大的研究空间.实验对不同酸碱条件下苯甲酸溶液紫外吸收光谱、吸收峰波长及固定波长下的吸光度进行了实验探究,用不同前处理方法进行样品处理并进行了检测结果的对比和分析,从提高分析结果准确度和精密度的角度提出了224 nm 波长下测定的最佳酸碱性条件,以简化方法、节约资源、提高效率为目标提出了样品前处理优选方案并进行了回收率测定和精密度实验.%Benzoic acid is a commonly used additive in soy sauce.National standards have strict limits on its usage.For ultraviolet spectrophotometry determination of benzoic acid in soy sauce,the study on experimental influence factors and the optimization on pretreatment methods has a lot of research space.The ultraviolet absorption spectra and the absorption peak wavelength of benzoic acid in different add-alkaline conditions aredetermined.Absorbance at fixed wavelength is also determined.The comparison and analysis of the test results are carried out with different pretreatment methods.The optimum acid-alkaline conditions at 224 nm proposed from the purpose of improving accuracy and precision.In order to simplify the method,save resources and improve efficiency,put forward the sample pretreatment plan.The recovery test and precision experiment are carried out.【期刊名称】《中国调味品》【年(卷),期】2017(042)011【总页数】5页(P110-114)【关键词】紫外分光光度;酱油;苯甲酸【作者】崔金娟;谢漫媛;赵丽冰【作者单位】广东省城市建设技师学院,广州 510520;广东省城市建设技师学院,广州 510520;广东省城市建设技师学院,广州 510520【正文语种】中文【中图分类】TS264.21近年来，用紫外分光光度法进行酱油中苯甲酸含量的测定取得了一定的研究进展。
高效液相色谱法测定酱油和食醋中4种对羟基苯甲酸酯肖丽恒;吕任一;何学梅;谢启明【摘要】建立了高效液相色谱法测定酱油和食醋中4种对羟基苯甲酸酯(对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸乙酯、对羟基苯甲酸异丙酯、对羟基苯甲酸丙酯)含量的方法.紫外检测器254nm处测定.结果表明,4种对羟基苯甲酸酯在0.0 ～50.0mg/L范围内呈现良好线性关系,各组分的检出限分别为0.1 mg/kg、0.2mg/kg、0.25mg/kg、0.2mg/kg(S/N=3),不同剂量的加标回收率为86.3％～101.6％,相对标准偏差(RSDs)为0.7％～3.1％.该方法简便、快速、灵敏,准确度和重现性较好,可作为酱油和食醋中测定多种对羟基苯甲酸酯类添加剂的有效方法.【期刊名称】《楚雄师范学院学报》【年(卷),期】2013(028)006【总页数】6页(P44-49)【关键词】对羟基苯甲酸酯;酱油;食醋;高效液相色谱法【作者】肖丽恒;吕任一;何学梅;谢启明【作者单位】楚雄州质量技术监督综合检测中心,云南楚雄675000;楚雄州质量技术监督综合检测中心,云南楚雄675000;楚雄州质量技术监督综合检测中心,云南楚雄675000;楚雄师范学院化学与生命科学系,云南楚雄675000【正文语种】中文【中图分类】TS207.3对羟基苯甲酸酯类是一种广谱抑菌食品防腐剂，在食品生产、加工、储存等过程中广泛用于抑制微生物的繁殖，以防止食品腐败变质，延长食品保质期［1—2］。
但过量使用，会严重危害人的身体健康。
我国对对羟基苯甲酸酯类防腐剂的使用量和残留量上都有着十分严格的规定和要求，酱油、食醋中的最大使用量不超过0.25g/kg［3］。
因此，为了确保人类身体健康和安全，建立快速、高效、高选择性和高灵敏度的测定食品中对羟基苯甲酸酯类防腐剂的方法具有重要意义。
当前，对羟基苯甲酸酯类防腐剂的测定方法主要有高效液相色谱法［4—9］、薄层色谱法［10—11］、毛细管电泳法［12］、气相色谱法［13—17］、高效液相色谱串联质谱检测法［18—19］等。
高效液相色谱法测定酱油中苯甲酸含量摘要】本文提供一种高效液相色谱法测定酱油中苯甲酸含量的实验方法，通过实验分析：苯甲酸标准溶液在2.5mg/L～50mg/L内线性良好，其线性相关系数为0.9991，加标回收率为91.7%，测量结果的相对标准偏差（RSD）为2.77%，苯甲酸的检测限为0.90mg/kg。
该法简单，快速，具有良好的准确度和灵敏度，可用于酱油中苯甲酸的快速定量检测。
1 概述酱油是我国传统的、使用最广的调味品，它赋予食品以适当的色、香、味，具有调味之功用。
由于酱油营养丰富，适于微生物生长繁殖，为了防止酱油腐败变质，保持酱油的鲜度和良好的品质，达到其对保质期的要求，酱油中一般都会添加防腐剂苯甲酸。
因此在酱油的卫生检测中，苯甲酸是一个较为重要的指标。
苯甲酸作为防腐剂，由于它们都是人工合成的，过量摄入会对人体造成一定损害。
食品添加剂卫生标准《GB 2760-2014 食品安全国家标准食品添加剂使用标准》作为现行中华人民共和国国标，批准并允许在我国使用的食品防腐剂中最常见的是苯甲酸，并且规定在酱油中苯甲酸最大允许使用量为1.0g/kg。
因此，测定苯甲酸的含量，控制其生产使用量，把可能存在的任何风险降低到最低限度，科学保护消费者的利益和健康，是十分必要的，而且具有重要的现实意义。
2实验部分2.1 仪器与试剂（1）仪器：美国Agilent公司1100型高效液相色谱仪；昆山市超声仪器厂KQ-100TDB超声波清洗器；Millipore公司Milli-Q超纯水机。
（2）试剂：色谱纯甲醇；超纯水；色谱纯乙酸铵；10.6%亚铁氰化钾；22%乙酸锌；1.0mg/mL苯甲酸。
2.2 色谱条件色谱柱：Agillent C18柱（250mm×4.0mm×5μm）；柱温：30℃；紫外检测波长：230nm；流动相：甲醇：0.02mol/L乙酸铵（7∶93）；流速：1.0mL/min；进样体积：10μL。
(100mg/L)0.1μL、0.5μL、1μL、
注入高效液
(Y)
果
系
图1苯甲酸线性关系图
2.2精密度考察
精密吸取苯甲酸溶液10μL,注入超高效液相色谱仪,重复测定7次,结果RSD%为0.028%,表明精密度良好。
2.3稳定性试验
取同一份样品,分别在0、1、2、4、8、12h测定,计算苯甲酸含量的RSD%为0.016%,稳定性良好。
2.4空白试验
取不含苯甲酸的样品分别按照1.5.1,1.5.2项下方图2苯甲酸对照品色谱图
图3乙醚提取空白色谱图
图4固相萃取空白色谱图
图5乙醚提取样品色谱图
图6固相萃取样品色谱图
2.5重复性试验
精密称取同一样品共6份,分别按照1.5.1,1.5.2项下方法制备试样,测定并计算RSD%。
结果乙醚提取苯甲酸平均含量0.219mg/kg,RSD%=1.77%;固相萃取提取苯甲酸平均含量0.202mg/kg,RSD%=2.75%。
表1乙醚提取苯甲酸重复性实验测定结果2.
三品加酸
取样量(g)含量(g/kg)平均含量(g/kg)RSD%
2.0152.009 2.0132.004 2.0102.0050.2240
0.2175
0.2181
0.2224
0.2213
0.2134
0.219 1.77。
高效液相色谱法测定对乙酰氨基酚口服溶液中苯甲酸钠含量李玲;陈乃江;姜燕【摘要】Objective To determine the content of sodium benzoate in acetaminophen oral solution by HPLC. Methods The Phenomenex Gemini C18 column(250 mmí4. 6 mm, 5 μm) was used, and the mobile phase was acetonitrile -0. 05 mol/L ammonium acetate(15:85). The flow rate was 1. 0 mL/min and the detection wavelength was set at 230 nm. The column temperature was 30 ℃ and the injection volume was 20 μL. Results The linear range of sodium benzoate was 10. 04-100. 4 μg/mL ( r=0. 999 9 ) , the average recovery was 99. 83% and RSD was 0. 99%( n=9 ) , the limit of detection was 1. 3 ng. Conclusion The method is applicable to the quality control of sodium benzoate in acetaminophen oral solution, which can provide reference for the standard improvement.%目的：建立测定对乙酰氨基酚口服溶液中防腐剂苯甲酸钠含量的高效液相色谱法。
高效液相色谱法测定酱油中苯甲酸的含量摘要：本文采用高效液相色谱法测定酱油中防腐剂苯甲酸的含量。
根据苯甲酸的性质选择分离分离色谱柱为 C18(4.6mm×250mm,粒径5μm)柱，流动相为乙酸铵-甲醇（91：9），流速1mL/min，柱温30℃。
当波长为230 nm时测得苯甲酸标准溶液的浓度与峰面积的线性关系良好，线性回归方程为y=3063.46746x＋0.4971，r2 = 0.9998。
一般实验要求加标回收率为90％-110％，苯甲酸检出限量为1g/kg。
实验测得加标回收率为96％-98％，三个样品的苯甲酸含量分别为0.39g/kg、0.50g/kg、0.81g/kg，均符合食品安全国家标准。
本实验方法简单快捷，准确度，灵敏度也均达到国家相关分析要求，适用于测定酱油中苯甲酸的测定。
关键词：高效液相色谱；酱油；防腐剂；苯甲酸为了减少防腐剂对人类带来的负面影响，对防腐剂进行一定的分析研究是很有必要的。
针对同一防腐剂的检测，不同的检测技术其特异性和快速性等也各有不同。
国家食品检测标准GB/T5009.29-2003《食品中山梨酸、苯甲酸的测定》介绍了三种检测苯甲酸的方法，分别是气相色谱法、高效液相色谱法和薄层色谱法。
此外据网上报道，可用于检测酱油中苯甲酸含量的方法还有紫外分光光度法、毛细管电泳法等。
因高效液相色谱法精确度高、简单、快速，是现阶段测定苯甲酸含量的首选。
现重点介绍高效液相色谱法测定酱油中的苯甲酸。
实验主要试剂及设备：甲醇（GR）；乙酸铵（GR）；苯甲酸钠标准品（GR）；乙酸锌（AR）；亚铁氰化钾（AR）；氨水（≥99.0％）。
高效液相色谱仪（LC-20ADRF）；电子分析天平（BSM--120.4）；超声波清洗仪（SG5200HDT）；高速离心机（TGL-16G-A）。
色谱条件：以C18柱（4.6mm×250mm,粒径5μm）为色谱柱；以A相1.54mg/mL乙酸铵溶液+B相甲醇溶液（91:9）为流动相；柱温：30℃；进样量：10μL；流速：1.0 mL/min；检测波长为230nm；检测器为紫外吸收检测器。
谈酱油中防腐剂的液相色谱法检测摘要：近年来，食品安全越来越受到关注，尤其是在食品调味料中使用的酱油，近年来，众多工厂在酱油中添加化学物质，有效地防止了酱油在短时间内的变质，然而，如果添加太多的防腐剂，会对人体造成伤害。
因此，为了有效控制酱油中防腐剂的滥用，本文着重分析了利用高效液相色谱法检测酱油中防腐剂的含量。
关键词：酱油：液相色谱法：防腐剂前言食品防腐剂是杀灭微生物或抑制微生物增殖的物质，它们是重要的食品添加剂。
苯甲酸、山梨酸和对羟基苯甲酸是最常用的食品防腐剂，广泛用于调味品和饮料中。
少量防腐剂对人体是无害的，但是太多的防腐剂会对健康造成不利影响，导致过敏或内分泌紊乱等症状，可能会对人体健康构成潜在威胁。
因此，建立一种准确测定食品中防腐剂的方法是非常重要的。
食品防腐剂的主要检测方法有高效液相色谱法（HPLC）、液相色谱-质谱法（LCMS）、气相色谱法（GC）、气相色谱-质谱法（GC -ms）和毛细管电泳法（CE）。
其中GC法和GC -ms法需要有机溶剂的提取和脱水，其他预处理步骤相对复杂。
CE法虽然有很多优点，但在大多数实验室中还没有得到广泛的应用，而HPLC法和LCMS法目前用于更多的检测方法中。
由于苯甲酸、山梨酸和对羟基苯甲酸的极性差异，很少有文献报道同时用液相色谱法检测这些化合物。
1材料与方法1.1材料苯甲酸（BA）、山水酸（SA）溶液标准品（1.00mg/mL）、对羟基苯甲酸甲酯（MP）、对羟基苯甲酸乙酯（EP）、对羟基苯甲酸异丙酯（IPP）、对羟基苯甲酸乙酯（PP）、对羟基苯甲酸丁酯（IBP）、对羟基苯甲酸丁酯（BP）：标准品（纯度> 99%），中国计量科学研究院；乙腈：色谱纯度，德国默克公司。
甲酸、乙酸：色谱纯度，Sigma公司；色谱法：高效液相色谱法。
醋酸铵：分析纯，北京化工厂；实验用水：milliq纯水系统；15种酱油样品。
1.2仪器设备配备Dionexultimate阵列检测器的DionexUltimate3000超高效液相色谱仪：嗜热试剂，美国；XP205电子天平（精度：0.00001g），E20实验室pH计：瑞士梅特勒托莱多；Sigma3-18k离心机：Sartorius；德国；KQ-300VDV超声波清洗机：昆山超声仪器有限公司旋涡-genie2旋涡混合器：美国Scienti c cIndustries公司。
高效液相色谱法检测酱油中的苯甲酸钠1．原理酱油样品经酸化后，用乙醚提取苯甲酸，定容过滤后进高效液相色谱仪，经反相色谱分离后，根据保留时间定性和峰面积定量。
2．试剂2.1甲醇:分析纯，经滤膜（HF 0.5）过滤；2.2无水乙醚：分析纯；2.3无水乙醇：分析纯；2.46N盐酸：取36~38%的盐酸500ml，定容至1000ml；2.54%氯化钠溶液：称取40.0g氯化钠,定容至1000ml；2.60.02M乙酸铵溶液：1.54g乙酸铵定容至1000ml,溶解后经滤膜(HA 0.45)过滤；2.7苯甲酸标准储备液：称取苯甲酸0.1000g加2%碳酸氢钠溶液1ml,搅拌溶解,加水定容到100ml，苯甲酸浓度为1mg/ml；2.8苯甲酸标准使用液：取苯甲酸标准储备液10ml，放入100ml容量瓶中，定容至刻度，苯甲酸浓度为0.1mg/ml。
3．高效液相色谱条件3.1Spectra-Physics 高效液相色谱仪；3.2色谱柱：Spherisorb ODS1Ф4.6mm 200mm；3.3检测器：紫外检测器，波长230nm，灵敏度0.2 AUFS；3.4流动相：甲醇:0.02M乙酸铵（5：95）；3.5流速：1ml/min；3.6进样量：10l；3.7允许差：相对误差≤10%。
4．操作方法：4.1样品预处理：称取均匀的酱油样品5.0g放入125ml的分液漏斗中，加入6N盐酸1ml 酸化，用15﹑10ml无水乙醚萃取两次，合并乙醚放入125ml分液漏斗中，用4%的氯化钠溶液约10ml分别洗涤两次，将洗涤后的乙醚移入80ml蒸发皿中，温水浴挥干，分别用10ml无水乙醇洗涤蒸发皿两次，放入100ml容量瓶中，再用蒸馏水洗涤蒸发皿两次，并入上容量瓶中，用蒸馏水定容至刻度，用0.45（HA）滤膜过滤，供高效液相色谱测定用。
4.2测定操作：开机预热30min并对流动相进行脱气操作，待流动相流速恒定及检测器稳定后，用25l微量进样器吸取供试液进样，绘图积分，得供试样品的吸收峰面积，并进样测定苯甲酸标准吸收峰的面积，根据计算公式算出样品中苯甲酸的含量。
