WB技术服务报告模板

实验三：免疫印迹1 原理免疫印迹又称Western印迹(Western blotting)，与DNA的Southern印迹技术相对应，两种技术均把电泳分离的组分从凝胶转移至一种固相载体(通常为NC膜)，然后用探针检测特异性组分。

不同的是，Western blotting所检测的是抗原类蛋白质成分，所用的探针是抗体，它与附着于固相载体的靶蛋白所呈现的抗原表位发生特异性反应。

该技术结合了凝胶电泳分辨力高和固相免疫测定特异敏感等诸多优点，具有从复杂混合物中对特定抗原进行鉴别和定量检测，以及从多克隆抗体中检测出单克隆抗体的优越性。

该技术的灵敏度能达到标准的固相放射免疫分析的水平而无需对靶蛋白进行放射性标记。

目前，Western blotting广泛用于蛋白质研究、基础研究和临床医学的研究。

免疫印迹可分成两个步骤：蛋白质由凝胶转移至固相基质；特异性抗体检测。

蛋白质转移通常由电泳实现，现常用的方法有二：1 半干法：将凝胶和固相基质似三明治样夹在缓冲液湿润的滤纸中间，通电10-30分钟可完成转移；2 湿法：将凝胶和固相基质夹在滤纸中间，浸在转移装置的缓冲液中，通电45分钟或过夜课完成转移。

本试验采用湿法转移。

免疫印迹用膜通常有硝酸纤维素膜和尼龙膜两种。

大多数应用前者。

本实验也用硝酸纤维素膜进行转移。

转移结束后，蛋白质的检测可分成三个步骤进行：首先，将膜同特异性抗体孵育数小时或过夜，然后将膜同可特异性识别上述抗体（一抗）的第二抗体（二抗）孵育，通常二抗连接有如辣根过氧化物酶等标记物。

目的蛋白可由该酶催化的显色反应在膜上形成有色产物加以检测。

本实验用的是酶标抗IgG，故不加一抗。

2 试剂与仪器2.1 试剂（所有试剂均供两组用）2.1.1 转移缓冲液Tris 3.025g甘氨酸14.413g甲醇20mL加蒸馏水约800mL，调pH至8.3，定容1000mL2.1.2 Tris缓冲盐溶液(TBS)Tris 2.42gNaCl 27.750g加蒸馏水约800mL，调pH至7.5，定容1000mL2.1.3 TTBSTBS 800mLTween-20 400μl2.1.4 封闭液及抗体稀释液脱脂奶粉0.3gTBS 100mL2.1.5 底物溶液二氨基联苯胺（DAB） 5.0mgTBS 18mLH2O220μl 临用前配2.1.6 丽春红总蛋白质染色液丽春红1g4%乙酸100mL2.1.7 5%小牛血清生理盐水小牛血清7.5mL0.85%生理盐水定容至150mL2.1.8 酶标抗IgG（1：1500）酶标抗IgG 0.1mL5%小牛血清生理盐水定容至150mL2.2 仪器夹心式电泳槽，电泳仪，硝酸纤维素膜，直径9cm培养皿，剪刀，镊子，刀片，微量移液枪，普通滤纸3 试验步骤3.1 SDS-PAGE电泳分离所需试剂、仪器以及分离步骤完全与实验六相同，故此处从略。

Western-blotting 技术鉴定人血清免疫球蛋白lgG摘要：本实验利用Western-blotting 技术鉴定人血清免疫球蛋白lgG，主要包括利用SDS-PAGE进行蛋白质分离之后，将其转移至NC膜上进行蛋白免疫印迹并进行检测，实验中我们用了正常人血清蛋白，肺炎患者，白血病人患者三种血清，使用彩虹Marker，并用其作出标准曲线，以此求出其余IgG的分子质量，并根据不同样本条带颜色，面积等简要判断不同样本LgG含量的多少并给予解释。

关键词：免疫印迹技术；免疫球蛋白；SDS-PAGE引言：蛋白质免疫印迹技术,是1979年斯坦福大学乔治.斯塔克发明的蛋白质印迹法,继southern-blotting 之后起名 Western-blotting,是分子生物学、生物化学和免疫遗传学中常用的一种实验方法,广泛应用于基因在蛋白水平的表达研究,抗体活性检测和疾病早期诊断等多个方面，是一种将高分辨率凝胶电泳和免疫化学分析技术相结合的杂交技术，其分析容量大，敏感度高，特异性强，是检测蛋白质性质、表达与分布的一种最常用的方法。

聚丙烯酰胺凝胶电泳是网状结构，具有分子筛效应，蛋白在其中依三种因素分开：蛋白大小，形状和电荷。

SDS是阴离子去污剂，作为变性剂和助溶试剂，它能断裂分子内和分子间的氢键，使其去折叠。

聚丙稀酰胺是由丙稀酰胺和N,N’-亚甲基双丙稀酰胺经共聚合而成。

此聚合过程是由四甲基乙二胺和过硫酸胺激发的。

被激活的单体和未被激活的单体开始了多聚链的延伸，正在延伸的多聚链也可以随机地接上双丙稀酰胺，使多聚链交叉互连成为网状立体结构，最终多聚链聚合成凝胶状。

人血清中含有人类免疫球蛋白，根据其重链稳定区的分子结构和抗原特异性的不同，分为五类: lgG、lgA、lgM、lgD、lgE、lgG 是血清的主要抗体成分，占血清免疫球蛋白总量的70%~75%。

在电泳之后，利用抗原抗体结合的特异性，进行蛋白免疫印迹。

1.目的与要求a)掌握SDS-PAGE电源分离蛋白的实验技术和操作；并绘制蛋白质标准曲线,求目的蛋白分子量的方法；b)垂直板电泳装置的安装及灌胶；电泳所用试剂的配制；c)了解电泳过程中常见问题的原因及处理办法，不连续电泳系统分离蛋白质的原理以及垂直板电泳装置的安装和灌胶。

wb实验报告结果WB实验报告结果一、实验目的和背景WB实验是一种常见的实验方法，用于检测和分析蛋白质的表达水平和相对分子量。

通过电泳分离蛋白质样品，再利用特定的抗体与目标蛋白结合，最后通过化学反应显色，可以得出蛋白质的表达情况。

二、实验设计和步骤本次实验旨在探究某种蛋白质在不同条件下的表达情况。

实验设计如下：1. 实验组和对照组的设置：将实验组和对照组分别处理不同的条件，以观察其对蛋白质表达的影响。

2. 细胞培养和处理：将细胞分成实验组和对照组，分别在不同培养基中培养，并添加相应的刺激物。

3. 蛋白提取和电泳：将培养的细胞收集，进行蛋白质提取，并进行电泳分离。

4. 转膜和抗体结合：将电泳分离后的蛋白转移到膜上，并与特定的抗体结合。

5. 显色和成像：利用化学反应显色，观察蛋白质的表达情况，并进行成像。

三、实验结果和分析通过实验的步骤，我们得到了以下结果：1. 实验组和对照组的蛋白质表达情况有明显差异。

在实验组中，某种蛋白质的表达水平较高，而在对照组中较低。

2. 不同刺激物对蛋白质表达的影响不同。

在实验组中，添加A刺激物后，蛋白质的表达水平显著增加；而添加B刺激物后，蛋白质的表达水平几乎没有变化。

3. 蛋白质的相对分子量也存在差异。

在实验组中，蛋白质的相对分子量较大，而在对照组中较小。

通过对实验结果的分析，我们可以得出以下结论：1. 实验组中的某种蛋白质在特定条件下表达水平较高，这可能与刺激物的作用机制有关。

2. 不同刺激物对蛋白质表达的影响不同，这可能是由于刺激物的不同性质和作用方式导致的。

3. 蛋白质的相对分子量差异可能与其结构和功能有关，进一步研究可以揭示这种差异的原因。

四、实验的局限性和改进方向本次实验虽然取得了一定的结果，但仍存在一些局限性：1. 样本数量较少：由于实验条件的限制，我们只能使用有限的样本进行实验。

进一步扩大样本数量可以提高结果的可靠性。

2. 实验条件的控制：虽然我们尽力控制实验条件的一致性，但仍可能存在一些未知因素的干扰。

焊接工艺流程SOP设计与编写综述一．焊接工艺的先进技术与标准工艺流程（SOP）焊接工艺是指焊接过程中的一整套技术规定。

包括焊接方法、焊前准备、焊接材料、焊接设备、焊接顺序、焊接操作、工艺参数以及焊后热处理等。

不同的焊接方法有不同的焊接工艺。

焊接工艺主要根据被焊工件的材质、牌号、化学成分，焊件结构类型，焊接性能要求来确定。

首先要确定焊接方法，如手弧焊、埋弧焊、钨极氩弧焊、熔化极气体保护焊等等，焊接方法的种类非常多，只能根据具体情况选择。

确定焊接方法后，再制定焊接工艺参数，焊接工艺参数的种类各不相同，如手弧焊主要包括：焊条型号（或牌号）、直径、电流、电压、焊接电源种类、极性接法、焊接层数、道数、检验方法等等。

随着数字化高科技的发展，焊接工艺也是天翻地覆的向前改革，现在的焊接正向着逆变化、数字化、智能化、自动化迈进。

从焊接方式上全新的交流短路过渡焊接法令人耳目一新，而精确控制下的短路过渡技术更是层出不穷，多丝焊接技术处处可见。

显然，焊机的焊接工艺性能成为电焊机行业新的技术竞争焦点，自动化焊接系统的运用大幅提高。

比如说兴起的激光焊接机器人不仅保证了焊接柔性化，更提高了焊接点的精度。

电伺服点焊钳的应用前景良好，焊接自动化专机向标准化模块化发展，自动焊接小车、送丝机、焊枪等基础件研究越来越得到重视。

SOP（standard operation proceducres）标准作业程序：SOP是以人为工作对象，对实施和完成作业中的每项工作或操作而制定的标准而详细的书面规程，它要求在建立过程中充分依据作业的特点，要说明的事项清晰而准确，尽量避免不必要的差错，从而制定出格式统一、操作性强的SOP。

SOP的基本格式：包括SOP 的名称、编号和版本、拟订人、审核人、批准人(签名和日期) 、颁发和生效日期、适用范围、规程及参考文献等。

SOP的编码：所有SOP文件必须有系统的编码及修订号,以便于识别、控制及追踪,同时可避免使用或发放过时的SOP。

免疫印迹技术实验报告一、引言免疫印迹技术（Western Blotting）是一种用于检测特定蛋白质的定性和定量分析方法。

它基于免疫学原理，通过将待测蛋白质进行电泳分离，并利用抗体与目标蛋白质特异性结合的原理，最终实现对目标蛋白质的检测和定量分析。

本实验旨在通过免疫印迹技术检测目标蛋白质在不同样本中的表达水平，并观察其变化情况，以深入了解该蛋白质的功能和作用机制。

二、实验步骤1. 样本制备首先，我们需要准备样本。

样本可以是细胞或组织。

在实验中，我们选择了A 细胞和B细胞作为样本，分别进行后续实验。

2. 蛋白质提取将A细胞和B细胞分别加入适量的细胞裂解缓冲液，通过离心等操作将细胞裂解并获取蛋白质提取物。

3. SDS-PAGE电泳分离将蛋白质提取物加入SDS-PAGE凝胶中，进行电泳分离。

电泳时间和电压根据实验需要来确定。

4. 转膜将电泳分离后的蛋白质从凝胶中转移到聚丙烯酰胺膜上。

转膜可以通过湿法或半湿法等方法实现。

5. 阻断将转膜后的聚丙烯酰胺膜放入阻断液中，在室温下进行阻断。

阻断的目的是防止非特异性结合。

6. 一抗处理将目标蛋白质的一抗加入到含有阻断液的培养皿中，将转膜的聚丙烯酰胺膜放置在一抗液中，进行一抗处理。

一抗的选择根据目标蛋白质的特异性来确定。

7. 洗涤将转膜的聚丙烯酰胺膜从一抗液中取出，进行洗涤。

洗涤的目的是去除非特异性结合的抗体。

8. 二抗处理将与目标蛋白质一抗结合的二抗加入到含有阻断液的培养皿中，将转膜的聚丙烯酰胺膜放置在二抗液中，进行二抗处理。

9. 洗涤将转膜的聚丙烯酰胺膜从二抗液中取出，再次进行洗涤，确保清洗干净。

10. 显色将合适的显色剂加入到含有阻断液的培养皿中，将转膜的聚丙烯酰胺膜放置在显色剂中，进行显色反应。

显色剂的选择根据实验需要和目标蛋白质的特性来确定。

11. 照相观察显色结果，并使用相机拍摄转膜的聚丙烯酰胺膜，记录实验结果。

三、结果与讨论根据实验步骤，我们成功地使用免疫印迹技术检测了A细胞和B细胞中目标蛋白质的表达情况。

Western Blotting本次试验的目的是使同学们掌握Western Blotting法鉴定目标蛋白的原理和熟悉Western Blotting的方法，并了解抗原抗体结合反应的影响因素。

Western Blotting的blotting译为印迹法，是指将样品转移到固相载体上，而后利用相应的探测反应来检测样品的一种方法。

1975年，Southern建立了将DNA转移到硝酸纤维素膜（NC膜）上，并利用DNA－RNA杂交检测特定的DNA片段的方法，称为Southern印迹法。

而后人们用类似的方法，对RNA和蛋白质进行印迹分析，对RNA的印迹分析称为Northern印迹法，对单向电泳后的蛋白质分子的印迹分析称为Western印迹法，对双向电泳后蛋白质分子的印迹分析称为Eastern印迹法。

Western既可以定性，又可以半定量，是初步鉴定蛋白质最方便也是最通用的方法。

它通常分为两种方法：同时Western又具有多种识别蛋白质的显色方法，主要有以下几种：i. 放射自显影ii. 底物化学发光ECL iii. 底物荧光ECF iv. 底物DAB呈色现常用的有底物化学发光ECL和底物DAB呈色。

一、实验原理Western Blotting（蛋白质免疫印迹法）是将经聚丙烯酰胺凝胶电泳奋力的蛋白质样品，转移到固相载体（例如硝酸纤维素薄膜）上，固相载体以非共价键形式吸附蛋白质，且能保持电泳分离的多肽类型及其生物学活性不变。

以固相载体上的蛋白质为抗原，与之对应的第一抗体发生免疫结合反应，一抗再与酶或同位素标记的第二抗体发生免疫结合反应，经过底物显色活放射自显影以检查电泳分离的提议目的蛋白成分。

蛋白质印迹技术结合了凝胶电泳分辨力高和固相免疫测定特异性高、敏感等诸多优点，能从复杂混合物中对特定抗原进行鉴别和定量检测。

聚丙烯酰胺凝胶是由单体丙烯酰胺(Acr)、N,N-甲叉双丙烯酰胺(Bis)和催化剂(AP)、加速剂(TEMED聚合成的三维网孔结构(凝胶）。

免疫印迹实验报告免疫印迹实验报告免疫印迹（Western blot）是一种常用的生物学实验技术，用于检测特定蛋白质在细胞或组织中的表达水平，以及研究其功能和相互作用。

本实验旨在通过免疫印迹技术，探究细胞中特定蛋白质的表达情况，为进一步的研究提供基础数据。

实验材料与方法：材料：1. 细胞或组织样本2. 细胞裂解液3. 蛋白质电泳样品缓冲液4. 聚丙烯酰胺凝胶5. 转印膜6. 蛋白质标记物7. 抗体8. 酶联免疫检测试剂盒方法：1. 提取细胞或组织中的蛋白质，制备细胞裂解液。

2. 将蛋白质样品与电泳样品缓冲液混合，进行电泳分离。

3. 将分离后的蛋白质转移到转印膜上。

4. 在转印膜上进行阻断，以防止非特异性结合。

5. 添加特异性抗体，与目标蛋白质结合。

6. 使用酶联免疫检测试剂盒，检测抗体与蛋白质结合的信号。

7. 分析实验结果，得出结论。

实验结果与讨论：通过免疫印迹实验，我们成功检测到目标蛋白质在细胞或组织中的表达情况。

实验结果显示，在细胞裂解液中，目标蛋白质呈现出明显的条带，证明其在细胞中存在且可被提取。

进一步分析实验结果，我们可以得出以下结论：1. 目标蛋白质在不同组织中的表达水平存在差异。

通过比较不同组织样本中目标蛋白质的表达情况，我们发现其表达水平在不同组织中存在差异。

这可能与细胞功能的差异以及组织特异性基因的调控有关。

2. 目标蛋白质在细胞发育过程中的变化。

通过对细胞或组织样本在不同发育阶段进行免疫印迹实验，我们可以观察到目标蛋白质在细胞发育过程中的表达变化。

这些变化可能与细胞分化、增殖以及功能转变等过程密切相关。

3. 目标蛋白质与其他蛋白质的相互作用。

通过免疫印迹实验，我们可以进一步研究目标蛋白质与其他蛋白质的相互作用。

通过添加不同抗体，我们可以检测到目标蛋白质与其他蛋白质的结合情况，揭示其在细胞信号传导和调控网络中的功能。

总结：免疫印迹实验是一种非常有用的生物学实验技术，可以用于检测特定蛋白质的表达水平以及研究其功能和相互作用。

Western Blot 实验技术手册Western Blot 是通过聚丙烯酰胺凝胶电泳将蛋白根据分子量大小分开，然后转移到固相载体（杂交膜）上，然后通过抗原抗体反应检测杂交膜上的靶蛋白是否存在，从而检测到靶蛋白在待检测样本中的表达情况。

目前 Western Blot 已经是蛋白检测的最常用和成熟的技术之一 .一、 Western Blot 基本操作流程图细胞 / 组织蛋白提取↓ 蛋白定量、蛋白变性上样、电泳↓一转膜↓封闭↓孵育一抗↓洗膜孵育二抗↓洗膜底物孵育↓曝光或显色二. Western Blot 操作步骤1.蛋白提取、处理蛋白提取的质量直接决定着WB 结果的好坏，因此，根据样本类型和检测类型选择合适的蛋白制备方法是至关重要的。

使用适当的裂解液裂解贴壁细胞、悬浮细胞或者组织样品.对于贴壁培养的细胞，经预冷的PBS 漂洗 2 次，裂解液中加入蛋白酶和磷酸酶抑制剂，然后吸净 PBS，加入预冷的裂解液，最后用细胞刮子刮取贴壁细胞，将细胞及裂解液温和地转移至预冷的微量离心管中，4℃离心 12,000 rpm ，20 min（根椐细胞种类不同调整离心力），轻轻吸取上清，转移至新预冷的微量离心管中置于冰上，即为蛋白样本，弃沉淀.对于组织样品，用灭菌的预冷的工具分离目的组织，尽量置于冰上以防蛋白酶水解，将组织块放在圆底的微量离心管或Eppendorf 管中，加入液氮冻结组织于冰上均质研磨，长期可保存于 -80 °C，每约 5 mg 加入约 300 μl预冷的裂解液lysis buffer ，冰浴匀浆后置于4℃摇动 2 小时，裂解液体积与组织样本量有适当比例，（最终的蛋白浓度至少达到0.1 mg/ml,理想的蛋白浓度应为 1-5 mg/ml). ，4℃离心 12,000 rpm ， 20 min ，轻轻吸取上清，转移至新预冷的微量离心管中置于冰上，即为蛋白样本，弃沉淀提取蛋白后进行蛋白的定量，蛋白的快速定量方法主要蛋白本身的发色基团，或者与其他显色剂反应产生的紫外吸收来进行定量.目前常用的主要有直接紫外吸收法，Bradford 法、和 Lorry 法或 BCA 法，一般推荐用 BCA 法 .BCA 测定方法如下:A ．酶标板操作1.标准曲线的绘制：取一块酶标板，按照下表加入试剂孔号 1 2 3 4 5 6 7 8蛋白标准溶液（μL）0 1 2 4 8 12 16 20去离子水（μL）20 19 18 16 12 8 4 0对应蛋白含量（μg）0 0.5 1.0 2.0 4.0 6.0 8.0 10.02、根据样品数量，按 50 体积 BCA 试剂 A 加 1 体积 BCA 试剂 B（ 50:1）配制适量 BCA 工作液，充分混匀；3、各孔加入 200 μ L BCA工作液；4、把酶标板放在振荡器上振荡30sec，37℃放置 30 分钟，然后在 562nm 下比色测定。

蛋白质二维电泳对外技术服务说明一、样品要求：1、样品新鲜。

说明：组织样本及细胞采样后应立即放入液氮中速冻或加入样品稳定剂，运输过程中血液、血清样品4℃保存，其它样品-20℃保存，不超过48小时（若外地邮寄，除血液、血清及细胞外请用干冰）。

2、样品蛋白的总量不少于1mg。

说明：组织样本每份约250-500mg；细胞样品每份5*107细胞数以上；血液、血清等样品大于5mL，且不能溶血；蛋白提取物要求蛋白浓度大于5mg/mL，总量不少于1mg，且均匀无沉淀，样品中无盐成分；植物或真菌样品量湿重不少于2g；富含杂质或蛋白质含量低的样品量湿重不少于3g。

3、其它要求及说明：（1）蛋白溶液中不得含有SDS等离子型去污剂，缓冲液成分为说明：为保证实验效果，请尽量告知缓冲液成分。

（2）样品中应不含核酸、脂类、多糖等影响电泳分离效果的成分。

如样品较特殊（富含核酸，盐分，脂类，色素，多糖等影响双向电泳而需去除的杂质或需浓缩样品），请预先说明：（3）样品PI值说明：如目的蛋白等电点偏碱，不能保证分离效果，因而通常情况下不收PI值大于8.0的碱性蛋白。

（4）此说明中样品量适用于考染，如需银染，请另行咨询。

（5）样品如有特殊要求，请说明：二、收样确认：1、公司收到客户样品后，将会对样品外观及包装进行初步检验，若是邮寄过程中出现的问题我公司将不承担责任，确认样品无问题后，我公司会按客户要求正确保存样品；2、公司在样品提取过程中将对样品的状态（如气味、颜色等）进行检验，，若是由于邮寄等原因造成样品变质，我公司将不承担责任；3、客户提供样品若为组织或细胞，我公司将根据样品的特点，选择适当的蛋白提取方法提取纯化蛋白，并按Bradford法测定样品蛋白的总浓度，如浓度不合格，公司将与客户协商后确定下一步方案；4、客户提供样品若为蛋白样品，客户应将其溶解在裂解液中,-20℃保存，并保证蛋白浓度大于5mg/mL，蛋白总量不小于1mg，收到样品后我公司将按Bradford法再检测浓度，若不合格，将退回样品；5、进行正式实验前，我公司将和客户协商上样量等问题；6、若样品不符合上述样品收取规定，我公司将和客户协商决定重新送样或退样。

western印迹实验报告
Western印迹实验报告
Western印迹是一种用于检测蛋白质的实验方法，通过这种方法可以确定蛋白
质在混合物中的存在和浓度。

在这篇报告中，我们将介绍一项关于Western印
迹实验的研究。

首先，我们收集了一些细胞样本，并提取了其中的蛋白质。

接着，我们使用聚
丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）将这些蛋白质分离开来。

然后，我们将这些蛋白质转移到一块聚丙烯酰胺膜上，并用特定的抗体将目标蛋白质标记出来。

在Western印迹实验中，我们使用了一种叫做免疫印迹的技术，通过这种技术
可以检测特定的蛋白质。

我们将膜与特定的抗体结合，然后使用一种叫做辣根
过氧化物酶的酶来标记这些抗体。

最后，我们使用化学发光或荧光等方法来检
测这些标记物，从而确定目标蛋白质的存在和浓度。

通过这项实验，我们成功地检测到了我们感兴趣的蛋白质，并确定了它们在样
本中的浓度。

这项研究为我们提供了关于细胞样本中蛋白质的重要信息，有助
于我们更好地理解细胞的功能和生物学过程。

总之，Western印迹实验是一种非常有用的方法，可以帮助科研人员确定蛋白
质的存在和浓度。

通过这项实验，我们可以更深入地了解细胞样本中的蛋白质，为生物学研究提供重要的数据支持。

Western印迹实验的结果对于理解细胞的
功能和疾病机制具有重要意义。

细胞培养实验和Western Blot实验报告姓名：张人龙学号：YX16100508115 专业：中医骨伤科学实验一：细胞培养1.实验目的初步掌握哺乳动物细胞的原代培养与传代培养的基本操作过程，为生物工程在医学上的应用打下基础。

2.实验原理从生物体中取出某种组织或细胞，模拟体内生理条件，在人工培养条件下使其生存、生长、繁殖或传代，这一过程称为细胞培养。

细胞培养技术的最大优点是使我们得以直接观察活细胞，并在有控制的环境条件下进行实验，避免了体内实验时的许多复杂因素，还可以与体内实验互为补充，可同时提供大量生物性状相同的细胞作为研究对象，耗费少，比较经济，因此成为生物学研究的重要手段。

近年来，在体细胞遗传、分化、胚胎发生、肿瘤发生、免疫学、细胞工程、放射生物学以及老年学等一系列的研究领域中得到广泛的应用，并取得了丰硕的成果。

细胞培养可分为原代培养和传代(继代)培养。

直接从体内获取的组织细胞进行首次培养为原代培养；当原代培养的细胞增殖达到一定密度后，则需要做再培养，即将培养的细胞分散后，从一个容器以1：2或其他比率转移到另一个或几个容器中扩大培养，为传代培养，传代培养的累积次数就是细胞的代数。

细胞培养是一种程序复杂、要求条件多而严格的实验性工作。

所有离体细胞的生长都受温度、渗透压、pH值、无机盐影响，消毒、配液等均有严格的规范和要求，特别是无菌操作是细胞培养成败的关键。

3.实验用品3.1 材料和标本乳兔、HeLa细胞(人宫颈癌细胞)3.2 器材和仪器手术器械、平皿、培养瓶、吸管、离心管(灭菌后备用)、酒精灯、烧杯、超净工作台、二氧化碳培养箱、倒置显微镜。

2.3 试剂含有5％小牛血清的MEM培养液、0.01mol／L PBS，0.25％胰蛋白酶一0.02％EDTA混合消化液、75％乙醇。

4.实验方法4.1 原代细胞培养4.1.1 原理细胞培养(Cell culture)是模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。

WB工作总结
经过一段时间的努力工作，我想对我的工作进行一次总结。

在这段时间里，我
深刻地体会到了工作的重要性和价值，也收获了许多宝贵的经验和教训。

首先，我要感谢我的团队成员们，他们在工作中给予了我很大的帮助和支持。

在工作中，我们相互合作，共同努力，为实现公司的目标而不懈奋斗。

我们之间的团队精神和合作意识让我们在工作中取得了不俗的成绩。

其次，我要反思自己在工作中的不足之处。

在这段时间里，我发现自己在沟通
能力和解决问题的能力上还有很大的提升空间。

我会在今后的工作中更加努力地克服这些问题，提高自己的综合素质。

另外，我还要对公司的领导和同事们表示感谢。

他们在工作中给予了我很多指
导和支持，让我能够更好地适应工作环境，提高工作效率。

在今后的工作中，我会更加努力地学习和提高自己，为公司的发展贡献自己的力量。

总的来说，这段时间的工作让我受益匪浅，也让我更加深刻地认识到了工作的
重要性。

我会在今后的工作中更加努力地提高自己的能力，为公司的发展贡献自己的力量。

希望在未来的工作中能够取得更好的成绩，为公司的发展做出更大的贡献。

摘要我们试验中对目的基因AKP进行了克隆和表达，并分析了表达产物的活性。

我们利用PCR方法扩增目的基因并提取大肠杆菌质粒，对扩增产物和质粒进行琼脂糖凝胶电泳分析，琼脂糖凝胶电泳结果显示PCR扩增产物和质粒纯度符合实验要求；对质粒DNA和目的基因AKP进行双酶切后用琼脂糖凝胶电泳分析结果，并回收酶切产物以及连接载体和AKP，Ca2+诱导法将连接产物转化到感受态细胞；利用菌落特征和琼脂糖凝胶电泳分析结果筛选重组子；对确定正确的重组子用Ca2+诱导法转化，提取表达产物；对表达产物（AKP）进行酶活性检测，结果显示表达产物活性显著高于对照组；SDS-PAGE检测和蛋白印迹显示目的基因AKP成功表达。

关键词：目的基因AKP，表达产物In our test, we cloned and expressed the gene of AKP, and analysis the activity of the product of expression, We make use of the polymerase chain reaction (PCR) to product purpose gene and extract the E·coli of plasmid, using agarose gel electrophoresis analysis the product of PCR and plasmid, the results show that the purity of the product of PCR and plasmid comply with the requirements; using enzyme cut the plasmid DNA and purpose gene(AKP),then, analysis the results of enzyme cut with agarose gel electrophoresis and recycling enzyme products, after that ,we connect the carrier and the AKP, using Ca2+put the products of connect into the feeling state cells; we screening recon with the features of colonies and the results of agarose gel electrophoresis; we transform the right recon into the feeling state cells with Ca2+, then, we collect the products of expression; we test the AKP on the activity enzyme, the results show us that the activity of enzyme is significantly higher than the control group; the test of SDS-PAGE and Western-blot show that the gene of AKP express successes.KEY WOEDS: purpose gene of AKP, the products of expression一、引言1 PCR技术原理1.1 聚合酶链式反应（polymerase chain reaction）：简称PCR技术，是80年代中期发展起来的体外核酸扩增技术。

wb实验心得总结1.引言1.1 概述概述本篇长文旨在总结和归纳我在进行WB实验过程中所获得的经验和体会。

通过本次实验，我有机会深入了解和运用WB技术，并通过实际操作来验证其效果和应用价值。

本文将首先介绍WB实验的背景和相关理论知识，然后详细介绍实验的具体过程和操作步骤。

在实验过程中，我通过调整不同的参数和方法，成功改善了图像的白平衡效果，并增强了图像的色彩准确性和视觉效果。

实验结果表明，WB 技术具有实际应用的潜力，在各种场景下都能有效解决因光照条件不同而导致的图像色彩失真问题。

通过本次实验，我不仅掌握了WB技术的基本原理和实现方法，还学习了如何正确地选择和校准白平衡参考物，以及如何灵活运用WB算法来满足不同场景的需求。

同时，我也意识到了WB技术在图像处理和计算机视觉领域的重要性，它对于提高图像质量以及提供更真实、准确的视觉感受有着至关重要的作用。

在整个实验过程中，我遇到了一些困难和挑战。

通过实践和不断的探索，我逐渐掌握了解决这些问题的技巧和方法。

同时，我也认识到了自身的不足之处，比如对于不同光照条件下的图像处理策略还需要进一步的学习和研究。

综上所述，本文将围绕WB实验展开，详细介绍实验的背景、过程和结果，并总结我在实验中的心得体会。

通过这次实验，我对于WB技术有了更深入的理解和认识，并获得了宝贵的经验和知识。

希望本文能够对读者们对于WB技术的学习和应用提供一定的参考和帮助。

1.2文章结构1.2 文章结构本文主要通过以下几个部分来总结wb实验的心得体会。

首先，将会进行背景介绍，介绍wb实验的相关背景知识和研究领域的前沿进展。

然后，详细描述实验的整个过程，包括实验设计、数据收集和分析方法等。

接着，针对实验结果进行总结，分析实验结果的意义和可行性，并提出实验中的不足之处以及改进的建议。

最后，对整个实验过程进行反思，总结实验带来的心得和体会，探讨实验对个人学习和研究的意义和价值。

为了更好地阐释wb实验的心得和体会，本文在正文的基础上结合实际的实验数据和结果进行分析和讨论。

GWB实验报告一、实验原理SDS-PAGE对蛋白质样品进行分离，然后转移到固相载体（例如NC膜）上，固相载体以非共价键形式吸附蛋白质，且能保持电泳分离的多肽类型及其生物学活性不变。

转移后的NC膜就称为一个印迹（blot），用于对蛋白质的进一步检测。

用蛋白溶液（如5%的BSA或脱脂奶粉溶液）处理以封闭NC膜上剩余的疏水结合位点，而后用所要研究的蛋白质的抗体（一抗）处理，印迹中只有待研究的蛋白质与一抗特异结合形成抗原抗体复合物，而其它的蛋白质不能与一抗结合，这样清洗除去未结合的一抗后，印迹中只有待研究的蛋白质的位置上结合着一抗。

处理过的印迹进一步用适当标记的二抗处理，二抗是指一抗的抗体，如一抗是从鼠中获得的，则二抗就是抗鼠IgG的抗体。

处理后，带有标记的二抗与一抗结合形成抗体复合物可以指示一抗的位置，即是待研究的蛋白质的位置。

目前有结合各种标记物的抗特定IgG的抗体可以直接购买作为二抗，最常用的一种是酶连的二抗，印迹用酶连二抗处理后，再用适当的底物溶液处理，当酶催化底物生成有颜色的产物时，就会产生可见的区带，指示所要研究的蛋白质位置。

该技术广泛应用于检测蛋白水平的表达。

二、实验步骤1、收集蛋白样品蛋白提取的质量直接决定着WB结果的好坏，因此，根据标本类型和检测类型选择合适的蛋白制备方法是至关重要的。

使用Western及IP细胞裂解液裂解贴壁细胞、悬浮细胞或组织样品，为了防止蛋白的降解，或保证磷酸化或乙酰化蛋白的稳定，需要额外添加蛋白酶抑制剂/蛋白酶抑制剂、磷酸酶抑制剂等蛋白抑制剂、或者乙酰化酶抑制剂混合物。

对于某些特定的亚细胞组份蛋白，例如细胞核蛋白的细胞核蛋白提取试剂盒、细胞浆蛋白细胞膜蛋白与细胞浆蛋白提取试剂盒、线粒体蛋白等，可以参考相关文献提取这些亚细胞组分蛋白，也可使用商业化的试剂盒进行提取。

收集完蛋白样品后，为确保每个蛋白样品的上样量一致，需要测定每个蛋白样品的蛋白浓度。

根据所使用的裂解液的不同，需要采用适当的蛋白浓度测定方法。