谷丙转氨酶活性检测-课件PP讲义T(演示稿)
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血清转氨酶的活性测定PPT课件
4
急性传染性肝炎、血清性肝炎、慢性肝炎活动 期、肝硬变代偿期、阻塞性黄疸、心肌梗死； 急性胰腺炎、胆囊炎、风湿活动性心脏病及一 些对肝脏有毒害的药物如安眠药、麻醉药、锑 剂、砷剂等均可使转氨酶活性升高。 转氨酶升高原因 肝细胞受损伤，使细胞内 酶泄露，进入血液，从而引起酶活性升高。 (转氨酶水平在0—40之间是正常的。)
7
实验操作步骤
1、绘制标准曲线 取5支试管，如下表加入试剂，绘制标
准曲线
8
试剂，mL 对照 丙酮酸标准液 0
1 0.15
2
3
4
0.3
0.45 0.6
ALT底物液 0.6
0.45
0.30 0.10 0
0.1mol/L磷酸盐缓冲液
0.1
0.1
0.1
0.1 0.1
丙酮酸毫克 1
丙氨酸转移酶活力单位/dl=
ALT底物
0.6
0
37 ℃水浴30min （酶促反应）
2，4 －二硝基苯肼 1.0
1.0
ALT底物 0
0.6
水浴20分钟后加入再加入0.4MNaOH溶液2 mL，混匀，10
min/室温，于500nm处测量光吸收值。根据标准曲线查出样品的 ALT活力单位
10
实验操作步骤
3、结果分析计算 按照标准曲线查出样品的酶活力单位数
-------------2.5
*
---0.1
*
100
加入上述试剂后，37 ℃水浴5min ,各管在加入2，4 －二硝基苯肼
溶液0.5 mL，混匀，水浴20min，再加入0.4MNaOH溶液2 mL，混匀， 于500nm处测量光吸收值。
9
实验操作步骤
2、血清ALT测定
急性传染性肝炎、血清性肝炎、慢性肝炎活动 期、肝硬变代偿期、阻塞性黄疸、心肌梗死； 急性胰腺炎、胆囊炎、风湿活动性心脏病及一 些对肝脏有毒害的药物如安眠药、麻醉药、锑 剂、砷剂等均可使转氨酶活性升高。 转氨酶升高原因 肝细胞受损伤，使细胞内 酶泄露，进入血液，从而引起酶活性升高。 (转氨酶水平在0—40之间是正常的。)
7
实验操作步骤
1、绘制标准曲线 取5支试管，如下表加入试剂，绘制标
准曲线
8
试剂，mL 对照 丙酮酸标准液 0
1 0.15
2
3
4
0.3
0.45 0.6
ALT底物液 0.6
0.45
0.30 0.10 0
0.1mol/L磷酸盐缓冲液
0.1
0.1
0.1
0.1 0.1
丙酮酸毫克 1
丙氨酸转移酶活力单位/dl=
ALT底物
0.6
0
37 ℃水浴30min （酶促反应）
2，4 －二硝基苯肼 1.0
1.0
ALT底物 0
0.6
水浴20分钟后加入再加入0.4MNaOH溶液2 mL，混匀，10
min/室温，于500nm处测量光吸收值。根据标准曲线查出样品的 ALT活力单位
10
实验操作步骤
3、结果分析计算 按照标准曲线查出样品的酶活力单位数
-------------2.5
*
---0.1
*
100
加入上述试剂后，37 ℃水浴5min ,各管在加入2，4 －二硝基苯肼
溶液0.5 mL，混匀，水浴20min，再加入0.4MNaOH溶液2 mL，混匀， 于500nm处测量光吸收值。
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实验操作步骤
2、血清ALT测定
医学检验·检查项目：血清谷丙转氨酶_课件模板
医学检验·各论：血清谷丙转氨酶 >>>
临床意义：
转为慢性肝炎。若黄疸加重，ATL反而降 低，即所谓的“胆酶分离”现象，常是肝 坏死的先兆。 (2)慢性肝炎、肝硬化、肝 癌等ALT活性轻度升高。 (3)胆道疾病、 心肌和骨骼肌损伤也可引起ALT升高。
医学检验·各论：血清谷丙转氨酶 >>>
正常值： (1)比色法测定：5～25卡门单位。
医学检验·各论 血清谷丙转氨酶
内容课件模板
医学检验·各论：血清谷丙转氨酶 >>>
别名： 丙氨酸氨基转移酶-ALT。
医学检验·各论：血清谷丙转氨酶 >>>
ห้องสมุดไป่ตู้简介：
丙氨酸氨基转移酶(ALT)是通常所称 谷丙转氨酶(CPT)，存在于各组织细胞， 以肝脏含量最多，其次是心肌细胞内，血 清中酶活性很低。当这些组织病变，细胞 坏死或通透性增强时，细胞内酶释放入血， 使血清中ALT活性增高。血清ALT测定主要 用于肝脏病的诊断。
医学检验·各论：血清谷丙转氨酶 >>>
临床意义：
ALT测定对肝炎的诊断、疗效观察和 预后估计均具有重要价值。 (1)急性肝炎 显著升高，尤其对无黄疸、无症状肝炎的 早期诊断更有帮助，其阳性率高，阳性出 现时间较其他试验早，其活性的高低随肝 病的进展和恢复而升降，据此可观察病情 及预后。ALT持续处于高水平或反复波动， 表示病变仍在进行或
(2)连续监测法：成人5～40U/L(基质中含 P-5’-P时为8～50U/L)。
医学检验·各论：血清谷丙转氨酶 >>>
相关检查： 色氨酸耐量试验、乳酸脱氢酶同工酶、血 清天冬氨酶氨基转移酶同工酶、总蛋白 (TP)、血氨、丙氨酸氨基转移酶(ALT）。
血清谷丙转氨酶alt的测定ppt演示课件
意义】
肝细胞中含ALT最丰富，因此当肝脏疾病致肝细 胞受损伤时，ALT即大量释放入血液，致使血清 中ALT活性增高。测定ALT是检查肝功能的重要 指标之一。ALT显著增高见于各种急性肝炎及药 物中毒性肝细胞坏死，中等程度增高见于肝癌、 肝硬化、慢性肝炎及心肌梗塞，轻度增高则见于 阻塞性黄疸及胆道炎等疾病。骨骼肌损伤、多发 性肌炎亦可引起转氨酶活性升高。
血清谷—丙转氨酶活性的 测定（改良赖氏法）
1
【目的要求】 1.掌握血清谷丙转氨酶活性测定的基本原理。 2.熟悉血清谷丙转氨酶活性测定的具体操作
方法。 3.了解血清谷丙转氨酶活性测定的临床意义。
2
【实验原理】 血清中的谷-丙转氨酶（ALT），在37℃、
pH7.4的条件下，可催化基质（底物）液中 的丙氨酸与α-酮戊二酸生成谷氨酸和丙酮酸：
5
取干净试管12支，按下表所示标号，要求各S管和U管进行双管平行操 作。先做对照管和测定管，在30min保温期间再做空白管和标准管。
6
【实验结果】 1.赖氏法测定ALT的标准曲线(即计量反应曲线) 在
坐标纸上以上表中An－A 0之值为纵坐标，相应的 酶活性的卡门氏单位为横坐标作图，即得赖氏法 测定ALT的标准曲线 2.标本中ALT活性结果 ⑴查标准曲线 利用测定所得的吸光度结果(AU－ AB)，便可从标准曲线上查得标本的ALT结果 ⑵计算 将实验测得的AU－AB 、AS 代入下面计 算公式，即可算得标本中ALT活性
7
【方法评价 】 ALT活性测定主要有两类。一是卡门氏（Karman）
分光光度法，测定的是酶促反应速率。其原理如 下： 由于NADH在波长340nm处有特异吸收峰，因此 ALT的活性可通过NADH的减少量，亦即通过 340nm吸光度的减少量间接作出定量测定。这一 方法特异性、准确性高。但是此法除要加入待测 酶ALT的底物外，还需要加入指示酶LDH及其辅 酶NADH，又需用紫外分光光度计，因此不易为 一般临床化验室推广。
肝细胞中含ALT最丰富，因此当肝脏疾病致肝细 胞受损伤时，ALT即大量释放入血液，致使血清 中ALT活性增高。测定ALT是检查肝功能的重要 指标之一。ALT显著增高见于各种急性肝炎及药 物中毒性肝细胞坏死，中等程度增高见于肝癌、 肝硬化、慢性肝炎及心肌梗塞，轻度增高则见于 阻塞性黄疸及胆道炎等疾病。骨骼肌损伤、多发 性肌炎亦可引起转氨酶活性升高。
血清谷—丙转氨酶活性的 测定（改良赖氏法）
1
【目的要求】 1.掌握血清谷丙转氨酶活性测定的基本原理。 2.熟悉血清谷丙转氨酶活性测定的具体操作
方法。 3.了解血清谷丙转氨酶活性测定的临床意义。
2
【实验原理】 血清中的谷-丙转氨酶（ALT），在37℃、
pH7.4的条件下，可催化基质（底物）液中 的丙氨酸与α-酮戊二酸生成谷氨酸和丙酮酸：
5
取干净试管12支，按下表所示标号，要求各S管和U管进行双管平行操 作。先做对照管和测定管，在30min保温期间再做空白管和标准管。
6
【实验结果】 1.赖氏法测定ALT的标准曲线(即计量反应曲线) 在
坐标纸上以上表中An－A 0之值为纵坐标，相应的 酶活性的卡门氏单位为横坐标作图，即得赖氏法 测定ALT的标准曲线 2.标本中ALT活性结果 ⑴查标准曲线 利用测定所得的吸光度结果(AU－ AB)，便可从标准曲线上查得标本的ALT结果 ⑵计算 将实验测得的AU－AB 、AS 代入下面计 算公式，即可算得标本中ALT活性
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【方法评价 】 ALT活性测定主要有两类。一是卡门氏（Karman）
分光光度法，测定的是酶促反应速率。其原理如 下： 由于NADH在波长340nm处有特异吸收峰，因此 ALT的活性可通过NADH的减少量，亦即通过 340nm吸光度的减少量间接作出定量测定。这一 方法特异性、准确性高。但是此法除要加入待测 酶ALT的底物外，还需要加入指示酶LDH及其辅 酶NADH，又需用紫外分光光度计，因此不易为 一般临床化验室推广。
肝脏谷丙转氨酶活力测定
实验八 肝脏谷丙转氨酶活力测定实验类型：验证性实验相关知识1. 酶活力：2. 酶活力单位(即酶含量的多少)国际单位 习惯单位：谷丙转氨酶在37度与底物作用30min 后，能产生2.5ug 的丙酮酸者为一个谷丙转氨酶活力单位 3.转氨酶4 谷丙转氨酶一、 实验目的1． 了解转氨酶的性质及临床意义 2． 掌握谷丙转氨酶活力的测定方法二、实验原理丙氨酸及α－酮戊二酸作用为谷丙转氨酶的作用底物，利用内源性磷酸吡哆醛作辅酶，在一定条件下及时间作用后测定所生成的丙酮酸的量来确定酶活力。
丙酮酸能与2,4－二硝基苯肼结合，生成丙酸－2,4二硝基苯腙，后者在碱性溶液中呈现棕色，其吸收光谱的峰为439~530nm ，可用于测定丙酮酸的含量。
α－酮戊二酸也能与2,4－二硝基苯肼结合，生成相应的苯腙，但后者在碱性溶液中吸收光谱为与丙酸－2,4二硝基苯腙的吸光度有差别，在520nm 波长比色时，丙酸－2,4二硝基苯腙吸光度高出3倍。
在520nm 处吸光度增加的程度与反应体系中丙酮酸与α－酮戊二酸的摩尔比基本上呈线性关系，故可以测定谷丙转氨酶的活力。
三、实验器材、试剂、材料 1． 新鲜猪猪脏2． 722型分光光度计、剪刀、吸管3． 标准丙酮酸溶液；谷丙转氨酶底物；0.1mol/L 磷酸缓冲液（pH7.4）；0.02%2,4－二硝基苯肼；0.4mol/L NaOH 溶液2 ＋辅基为磷2 2 + + ‘ ‘四、实验操作步聚1.肝匀浆制备（1）将猪肝脏用生理盐水冲洗，滤纸吸干，称取肝脏0.25g，剪成小块，置于玻璃匀浆管内（或小研砵中），加入2.25ml预冷的pH7.40.1%mol/L磷酸缓冲液，制成10%肝匀浆。
（每四组1份）（2）吸取肝匀浆0.1ml于另一试管中，加入预冷的0.1mol/L磷酸缓冲液（pH7.4）4.9ml摇匀，为稀释肝匀浆（稀释50倍）（每四组1份）2.谷丙转氨酶活力测定（每组做1份）取试管4支按下表加液五、实验结果与讨论2.每毫升稀释肝匀浆谷丙转氨酶活力单位（谷丙转氨酶活力计算：规定酶在37度与底物作用30min后，能产生2.5ug的丙酮酸者为一个谷丙转氨酶活力单位）3.每克肝脏谷丙氨酶的活力单位。
谷丙转氨酶活性检测
3. ALT底物液(含α-酮戊二酸2μmol/ml及DL-丙氨酸200μmol/ml) 取α-酮戊二 酸29.2mg，DL-丙氨酸7g ,用试剂1溶成100ml，在稀释到刻度前，以1mol /L NaOH调pH至7.4（因为转氨酶在pH7.3以下或7.6以上的环境中酶活性下 降），加数滴氯仿防腐。此液于冰箱保存可使用4天。
4℃保存。 ⑶将0.1mol/L磷酸氢二钠溶液420ml和0.1mol/L磷酸二氢钾溶液80ml混和即
为0.1mol/L pH7.4的磷酸盐缓冲液。加氯仿数滴，4℃保存。
精品医学ppt
5
2. 标准丙酮酸（含丙酮酸2.0μmol/mL）
取标准丙酮酸钠10mg，用上述缓冲液准确定容为5批试剂的空白管吸光度上下波动不应超过0.015A，若有 超出，应仔细检查试剂与仪器方面的问题。
8.严重脂血、黄疸、溶血和糖尿病酮症酸中毒病人血清标本 可增加测定的吸光度，测定这类标本应做血清标本对照管
精品医学ppt
12
七、酶活性单位的定义
* 1个卡门氏单位的定义是：在温度25℃，pH7.4，波长340nm，光径1cm
30 min，每生成2.5微克丙酮酸为1单位。
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13
六、临床意义
化验介绍:
正常时，谷－丙转氨酶主要存在于组织细胞内，以肝细胞 含量最多，心肌细胞中含量其次，只有极少量释放血中。所 以血清中此酶活力很低。
当肝脏、心肌病变、细胞坏死或通透性增加时，细胞内各 种酶释放出来，使血清中此酶活性升高。所以测定血清中此 酶的含量可作为诊断、鉴别诊断及预后观察的依据。
的条件下，1ml血清使NADH的吸光度下降0.001的转氨酶活性。 * 国际单位：在最适温度（25℃）下，1分钟产生1μmol丙酮酸的酶量为1 个活性单位，即1IU=1umol/min。
4℃保存。 ⑶将0.1mol/L磷酸氢二钠溶液420ml和0.1mol/L磷酸二氢钾溶液80ml混和即
为0.1mol/L pH7.4的磷酸盐缓冲液。加氯仿数滴，4℃保存。
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2. 标准丙酮酸（含丙酮酸2.0μmol/mL）
取标准丙酮酸钠10mg，用上述缓冲液准确定容为5批试剂的空白管吸光度上下波动不应超过0.015A，若有 超出，应仔细检查试剂与仪器方面的问题。
8.严重脂血、黄疸、溶血和糖尿病酮症酸中毒病人血清标本 可增加测定的吸光度，测定这类标本应做血清标本对照管
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七、酶活性单位的定义
* 1个卡门氏单位的定义是：在温度25℃，pH7.4，波长340nm，光径1cm
30 min，每生成2.5微克丙酮酸为1单位。
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六、临床意义
化验介绍:
正常时，谷－丙转氨酶主要存在于组织细胞内，以肝细胞 含量最多，心肌细胞中含量其次，只有极少量释放血中。所 以血清中此酶活力很低。
当肝脏、心肌病变、细胞坏死或通透性增加时，细胞内各 种酶释放出来，使血清中此酶活性升高。所以测定血清中此 酶的含量可作为诊断、鉴别诊断及预后观察的依据。
的条件下，1ml血清使NADH的吸光度下降0.001的转氨酶活性。 * 国际单位：在最适温度（25℃）下，1分钟产生1μmol丙酮酸的酶量为1 个活性单位，即1IU=1umol/min。
实验十二谷丙转氨酶活性检测
○ 时间（min）
六、注意事项
1. 在测定SGPT时，应事先将底物、血清在37℃水浴中 保温，然后在血清管中加入底物，准确记时。
2. 标准曲线上数值在20~500U是准确可靠的，超过 500U时，需将样品稀释。
3. 转氨酶只能作用于α－L－氨基酸，对D－氨基酸无 作用。实验室多用α－DL－氨基酸（较L－氨基酸 价廉），若用L－氨基酸，则用量减半。
三、仪器与试 剂
* 仪器
1. 5×15cm试管、刻度吸量管。 2. 恒温水浴、离心机、721型分光光度计。
* 试剂
磷酸盐缓冲液 ⑴0.1mol/L磷酸氢二钠溶液：称取Na2HPO414.22g或Na2HPO4·2H2O17.8g溶
解于蒸馏水中，并稀释至1 000ml,4℃保存。 ⑵0.1mol/L磷酸二氢钾溶液：称KH2PO413.61g溶解dH2O中，稀释至1000ml,
（2）其他疾病：
心肌梗塞及心功能不全导致肝淤血可使 ALT明显升高。骨骼疾病、多发性肌炎、 肌 营 养 不 良 均 可 使 A LT 活 性 升 高 。 某 些 药物或毒物如异菸肼、鲁米娜、四氯化 碳等可引起ALT活性升高。
参考值: 速率法：0－30IU/L
血清中谷丙转氨酶的测 定有何临床意 义？
血清谷丙转氨 酶活性的测定
一、实验目的
掌握血清谷丙转氨酶活性测定的基本原
01
理。 熟悉血清谷丙转氨酶活性测定的具体操
02
作方法。
了解血清谷丙转氨酶活性测定的临床意
03
义。
二、基本原 理
血清中的谷-丙转氨酶（ALT），在37℃、pH7.4 的条件下，可催化基质（底物）液中的丙氨酸与α酮戊二酸反应生成谷氨酸和丙酮酸：
严重脂血、黄疸、溶血和糖尿病酮
六、注意事项
1. 在测定SGPT时，应事先将底物、血清在37℃水浴中 保温，然后在血清管中加入底物，准确记时。
2. 标准曲线上数值在20~500U是准确可靠的，超过 500U时，需将样品稀释。
3. 转氨酶只能作用于α－L－氨基酸，对D－氨基酸无 作用。实验室多用α－DL－氨基酸（较L－氨基酸 价廉），若用L－氨基酸，则用量减半。
三、仪器与试 剂
* 仪器
1. 5×15cm试管、刻度吸量管。 2. 恒温水浴、离心机、721型分光光度计。
* 试剂
磷酸盐缓冲液 ⑴0.1mol/L磷酸氢二钠溶液：称取Na2HPO414.22g或Na2HPO4·2H2O17.8g溶
解于蒸馏水中，并稀释至1 000ml,4℃保存。 ⑵0.1mol/L磷酸二氢钾溶液：称KH2PO413.61g溶解dH2O中，稀释至1000ml,
（2）其他疾病：
心肌梗塞及心功能不全导致肝淤血可使 ALT明显升高。骨骼疾病、多发性肌炎、 肌 营 养 不 良 均 可 使 A LT 活 性 升 高 。 某 些 药物或毒物如异菸肼、鲁米娜、四氯化 碳等可引起ALT活性升高。
参考值: 速率法：0－30IU/L
血清中谷丙转氨酶的测 定有何临床意 义？
血清谷丙转氨 酶活性的测定
一、实验目的
掌握血清谷丙转氨酶活性测定的基本原
01
理。 熟悉血清谷丙转氨酶活性测定的具体操
02
作方法。
了解血清谷丙转氨酶活性测定的临床意
03
义。
二、基本原 理
血清中的谷-丙转氨酶（ALT），在37℃、pH7.4 的条件下，可催化基质（底物）液中的丙氨酸与α酮戊二酸反应生成谷氨酸和丙酮酸：
严重脂血、黄疸、溶血和糖尿病酮
血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)活性测定(改良赖氏法)ppt课件
临床意义
ALT（GPT)广泛存在于机体各种组织中，但 在肝细胞中含量最多，当肝脏有病变，特别是 急性肝炎及肝细胞坏死是，血清中ALT活性显 著升高。在肝癌、肝硬变以及胆道疾病时，此 酶活性也可或轻度增高。另外，其他脏器或组 织的疾病，该酶活性也升高。
注意事项
1.不同血清对照管光密度基本相同，因此，同一批标本制作2~3个血清 对照管求其平均值即可，亦可用空白管代替对照管。对超过正常的标本 进行复查时，每份标本均应作对照管。 2.严重脂血症、黄疸或溶血的血清都能引起测定管OD值增加，因此，检 查此类标本时，应做血清对照管。 3.赖氏法标准曲线只到97卡门氏单位，其线性关系良好。超过此活力的 标本，应将血清稀释后再测定，结果乘以稀释倍数。 4.ALT底物液与2，4-二硝基苯肼液配置要准确，每次测定时空白管的 OD值上下波动不应超过0.015.如超出此范围应检查试剂及仪器等方面的 问题。 5.除了丙酮酸与2，4-二硝基苯肼再碱性溶液中能成腙外，α -酮戊酸亦 能与2，4-二硝基苯肼产生苯腙，两种苯腙的吸光度在520nm处有较大 差异，因此超过一定范围时，该方法所绘制的标准曲线呈抛物线。
血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)活 性测定(改良赖氏法)
关于丙氨酸氨基转移酶ALT
转氨基作用
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
指的是一种α-氨基酸的α-氨基转移到一种α-酮 酸上的过程。转氨基作用是氨基酸脱氨基作用 的一种途径。其实可以看成是氨基酸的氨基与 α-酮酸的酮基进行了交换。
谷丙转氨酶
谷丙转氨酶是临床上进行肝功能测试的一个标 准，来确定肝脏是否健康。它也被叫做血清谷 氨酸丙酮酸转氨酶（serum glutamate pyruvate transaminase，简称SGPT）或丙 氨酸转氨酶（alanine aminotransferase，简 称ALAT）。诊断上，基本上都是以“单位每 升”（U/L）为单位进行测量。
血清谷丙转氨酶活性的测定ppt课件
混匀，室温放置5min，在波长为505nm处比色，蒸馏水调“0”
【实验结果】
1.校正曲线的制备
以标准管各管的A值-“0”号管的A值,所得差 值与对应酶卡门氏单位作图,即成校正曲线。 2.测定管 测定管A值-对照管A值,根据所得差值，从校正
曲线查得标本中ALT的卡门氏单位。
参考值范围：5-25卡门单位
酸生成2,4-二硝基苯腙,在碱性条件下显红棕色,于波
长505nm处读取A值。 两种苯腙的吸收光谱曲线在500~520nm处差异最 大,丙酮酸苯腙的呈色强度是α-酮戊二酸苯腙的3倍,据 此可以计算出丙酮酸的生成量,后者与血清中的ALT的
活性浓度成正比。
【实验原理】
丙氨酸+ α-酮戊二酸
ALT
丙酮酸+谷氨酸
0.20 0.30
1.0mmol/L 2，4-二硝基苯肼溶液
0.5
0.5
0.5
0.5
0.5
混匀，37℃保温20min
0.4mol/L NaOH溶液 卡门单位
5.0
0
5.0
28
5.0
57
5.0
97
5.0
150
混匀，室温放置5min，在波长为505nm处比色，蒸馏水调“0”
取7支试管，按下表操作
卡门单位 加入物(ml) 血清 基质缓冲液 0.1mol/L磷酸盐缓冲液 2.0mmol/L丙酮酸标准液 基质缓冲液 1.0mmol/L 2，4-二硝基苯 肼溶液 基质缓冲液 0.5 0.5 混匀，37℃保温20min 0.4mol/L NaOH溶液 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 0.5 对照管 0.1 测定管 0.1 0.5 混匀，37℃水浴30min 0.1 0 0.50 0.5 0.1 0.05 0.45 0.5 0.1 0.10 0.40 0.5 0.1 0.15 0.35 0.5 0.1 0.20 0.30 0.5 0 0 28 1 57 2 97 3 150 4
肝脏谷丙转氨酶活力测定
实验教学教案首页肝脏谷丙转氨酶活力测定（验证性）相关知识１．酶的提纯基本操作程序及基本原则２．酶的活力单位（IU）的定义及酶活力的测定（酶的定量测定）３．测定酶活力一般经如下几个步骤①选择适宜的一定浓度的底物。
②确定酶促反应的条件。
优化条件③将一定量的酶液和底物溶液混合，确定反应时间（因要测定酶促反应初速度）。
④反应到一定时间后取出反应液终止反应。
⑤测定产物的生成量。
⑥计算酶活力、酶的比活力。
４．酶的比活力－－表示酶纯度的指标⏹每单位酶蛋白所含的活力单位数。
对固体酶：比活力＝活力单位/mg酶蛋白对液体酶：比活力＝活力单位/ml酶液⏹比活力越大，酶的活力越大，含酶量或有活性的酶量越多。
５．总活力、纯化倍数和回收率６．酶活力测定方法—不同酶选用不同的方法７．氨基酸转氨基作用、联合脱氨基作用８．谷丙转氨酶及临床意义: 查肝功为什么要抽血化验转氨酶指数呢？谷丙转氨酶（ALT）和谷草转氨酶（AST，GOT）是人体内糖和蛋白质互相转变所需的酶，人再生体内分布广泛。
ALT的分布以肝中最高，主要存在于肝细胞浆中，AST存在于肝细胞浆和线粒体内。
其次是肾、心、骨骼肌、脾等。
AST的分布则以心肌最高，其次为肝、骨骼肌、肾脏等。
①谷丙转氨酶为细胞内酶，血清中活性很低，各组织器官中以心和肝的活性最高。
当某种原因使细胞膜通过性↑，转氨酶可大量释放入血液，血清中转氨酶活性↑↑。
②抽血化验若转氨酶比正常水平偏高则有可能肝组织受损破裂，肝细胞的转氨酶进入血液。
（结合乙肝抗原等指标进一步确定是什么原因引起的）③常作为疾病诊断、观察疗效和预后的指标：急性肝炎：S-GPT↑↑、S-GOT↑心肌梗塞：S-GOT↑↑一、实验目的１．了解转氨酶的性质及临床意义 ２．掌握谷丙转氨酶活力的测定方法 二、实验原理联合脱氨基作用是大多数氨基酸的主要代谢方式，通过转氨基作用与谷氨酸氧化脱氨基作用偶联而完成。
丙氨酸及α－酮戊二酸为谷丙转氨酶的作用底物，利用内源性（肝细胞已有的）磷酸吡哆醛作辅酶，在一定条件下及时间作用后测定所生成的丙酮酸的量来确定酶活力。
谷丙转氨酶医学生生化学习PPT课件
连续监测法测定ALT
ALT测定中存在二个副反应 血清中存在的α-酮酸（如丙酮酸）能消耗 NADH。 血清中谷氨酸脱氢酶（GLDH）增高时，在有 氨存在条件下，亦能消耗NADH。 上述副反应都能消耗NADH，使测定结果偏高。 但在双试剂法，因温育期长，能有效消除干 扰反应。
赖氏法测定ALT
连续监测法测定AST
L-门冬氨酸+α-酮戊二酸 AST 草酰乙酸+L-谷氨 酸 草酰乙酸+NADH+ MOH L-苹果酸+NAD+ 340nm连续测定NADH被氧化为NAD+，从而计算出酶 的活力。 在AST双试剂测定中，首先使血清与缺少α-酮戊二 酸的底物溶液混合，37℃保温5分钟，将样品中所 含的α-酮酸消耗完，然后，加入α-酮戊二酸启动 ALT的催化反应，在波长340nm处连续监测吸光度的 下降速率，根据线性反应期吸光度的下降速率，本 计算ALT的活性浓度。
连续监测法测定AST
连续监测法测定AST的误差可来自内源性和 外源性，内源性干扰主要来源于血清中高浓 度丙酮酸和L-谷氨酸脱氢酶（GLDH）。外源 性干扰来自于试剂中污染的GLDH和AST。内 源性丙酮酸的干扰通过加入高活性的LDH在 温育期间将其迅速转变为乳酸而消除。血清 中的GLDH能催化α-酮戊二酸 和NH3生成谷 氨酸，同时使NADH氧化为NAD&#的肝脏损害，如心功能不全时， 肝淤血导致肝小叶中央带细胞的萎缩或坏死， 可使ALT、AST明显升高，某些化学药物如异 菸肼、氯丙嗪、苯巴比妥、四氯化碳、砷剂 等可不同程度的损害肝细胞，引起ALT的升 高。
连续监测法测定ALT
L-丙氨酸+α-酮戊二酸 ALT α-丙酮酸+L-谷氨酸 α-丙酮酸+NADH+ LD 乳酸+NAD+ 340nm连续测定NADH被氧化为NAD+，从而计算出酶 的活力。 在ALT双试剂测定中，首先使血清与缺少α-酮戊二 酸的底物溶液混合，37℃保温5分钟，将样品中所 含的α-酮酸消耗完，然后，加入α-酮戊二酸启动 ALT的催化反应，在波长340nm处连续监测吸光度的 下降速率，根据线性反应期吸光度的下降速率，本 计算ALT的活性浓度。