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1 / 7专题一 传统发酵技术的应用挑选葡冲洗:用清水冲洗葡萄1～2遍除去污物，注意不要反复多次冲洗，以酒精发果榨汁：对发酵瓶、纱布、榨汁机、盛葡萄汁的器皿等实验用具进行醋酸发果原理:酵母菌是兼性厌氧微生物，在有氧条件下，酵母菌进行有氧呼吸大量繁殖6H 12O 6+6O 2→62+6H 20在无氧条件下，酵母菌能进行酒精发酵，发酵条件:18℃一25℃。

在缺氧，呈酸性的发酵液中，酵母菌可以生长繁殖，绝大多数其他微生物都因无发酵装发酵时间10 —12d发酵检验：可以检验酒味、酒精的含量、进行酵母进气口：先通入氧气，酵母菌进行有氧呼吸大量繁殖；再密封，酵母菌能进行酒精出气口：及时排气，防止发酵瓶爆裂。

简易的发酵装置，如瓶子，每天要拧松瓶盖出料口：取样检原理：醋酸菌是-种好氧性细菌，只有当氧气充足时，才能进行旺盛的生理活动。

变酸的酒的表面观察到的菌膜就是醋酸菌在液面大量繁殖而形成的。

实验表明，醋酸菌对氧气的含量特别敏感，当进行深层发酵条件温度： 30－35℃ 空气：充足的发酵装发酵时间：7～8d 发酵检进气口：连接气泵，输入氧气（无菌出气口：排气出料口：取样制作流制作原理: 多种微生物参与了豆腐的发酵如青霉、酵母、曲霉、毛霉等。

其中起主要作用的是毛霉，毛霉是一种丝状真菌，具有发达让豆腐长出毛霉: 将豆腐块平放在笼屉内，将笼屉中的温度控制在15～18℃。

传统腐乳的生产中，豆腐块上生长的毛霉来自空气中的毛霉孢子，而现代的腐乳生产加盐腌制：分层加盐，并随层加高而增加盐量，在瓶口表面铺盐厚些。

加盐腌制的时间约为8天左右。

加盐可以析出豆腐中的水分，使豆腐块变硬，在后期的制作过加卤汤装瓶：将黄酒、米酒和各种香辛料，按口味不同而配制成卤汤。

酒精含量控制在12％左右。

加酒可以抑密封腌制制作原理：乳酸菌是异养厌氧型细菌，在无氧条件下，将葡萄糖分解制作流选择原料（新修整洗涤晾晒切分 称取食盐 配置盐水（比例泡菜盐水（煮沸消加调味料装坛（注发酵：将坛口水封，防止外界空气进入，进行乳成品测定亚实验注意事项①盐的浓度过低，不足以抑制微生物的生长，可能导致豆腐腐败变质；盐的浓度过高会影响腐乳的口味。

②卤汤中酒的含量应控制在12%左右。

酒精含量过高，腐乳成熟的时间将会延长；酒精含量过低，不足以抑制微生物的生长，可能导致豆腐腐败。

③用来腌制腐乳的玻璃瓶，洗刷干净后要用沸水消毒。

④装瓶时，操作要迅速小心。

整齐地摆放好豆腐、加入卤汤后，要用胶条将瓶口密封。

封瓶时，瓶口通过酒精灯的火焰，防止瓶口被污染。

亚硝酸盐为白色粉末，易溶于水。

当人体摄入的亚硝酸盐总量达到0.3～0.5g 时，会引起中毒，达3g 时会引起死亡。

比色法：在盐酸酸化条件下，专题2微生物培养与应用制备培养接种接种准培养基分物理状态: 液体培养基——扩大培养；功 能：鉴别培养基，选择培养基——微生组成成过程计算 称量溶化：连同称量纸一起放入烧杯。

加琼脂后搅拌防糊调：细菌培养基中性或偏碱性，霉菌培养基呈灭菌：高压蒸汽灭菌法，100、121℃维持15～30，将未接种的培养基在恒温箱中保温1～2天。

倒平板：平板倒置的目的是防止培养皿盖上的水珠滴灭菌，消毒：蛋白质凝固变性灭菌：灭菌则是指使用强烈的理化因素杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子。

灼烧灭菌法、干热灭菌法、高压蒸汽灭菌法(培养基等物体的灭菌)。

平板划线法：第一次划线（杀死接种环上原有的微生物，避免污染培养物）及每次划线（杀死上次划线后接种环上残留的菌种，使下次划线的菌种直接来源于上次划线的末端，使每次划线菌种数目减少）之前和划线结束（避免细菌污稀释涂布平板法（无菌技术）使聚集在一起的微生物分散成单个细胞，从而能在培养基表面形成单个的菌落，以便于纯化菌结果菌落形态：形状、大小、隆起程度和颜色。

根据菌落的特征可以判断是哪一种菌。

统计菌落数目：测定微生物数量的常用方法有稀释涂布平板法和显微镜直接计数培养基营养构成：一般都含有水、碳源（牛肉膏）、氮源（蛋分装无菌技术：获得纯净培养物的关键是防止外来杂菌的入侵，要注意以下几个方面：①对实验操作的空间、操作者的衣着和手，进行清洁和消毒。

②将用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基等器具进行灭菌。

③为避免周围环境中微生物的污染，实验操作应在酒精灯火焰附近进行。

④实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与周围的物品相接触。

菌落计数：当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。

通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。

为了保证结果准确，一般选择菌落数在30～300的平板进行计数。

统计的菌落数往往比活菌的实际数目低。

因为当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落。

为使结果接近真实值，原理实验设土壤取样：距地表3-8样品稀释接种培养：稀释涂布平板法挑选菌落鉴定原理实验设土壤取样富含纤维素的环境样品稀释接种培养将样品涂布于鉴别挑选菌落挑选产生透明圈的菌落发酵产酶实验选择培养用选择培养基培养，以增加纤维素分尿素分解菌分离的原理：配制选择培养基，把尿素作为培养基中的唯一氮源，原则上只有能够利用尿素的微生物才能够生长，其刚果红染色法筛选纤维素分解菌的原理:刚果红纤维素这样的多糖物质形成红色复合物，但并不和水解后的纤维二糖和葡萄糖发生这种反应。

当我们在含有纤维素的培养基中加入刚果红时，刚果3 / 7要设置重复组，取其平均值。

可将同一稀释度的样品接种到三个或三个以上的平板上，经涂布、培养计算出菌落平均数。

设置对照可排除实验组中非测试因素对实验结果的影响，提高实验结果的可信度。

专题三植物的组织培养技术课题1 菊花的组织培养原理(全能性)：具有某种生物全套遗传信息的任何一个活细胞，都具有发育成完整个体的能力。

脱分化：由高度分化的植物组织或细胞产生愈伤组织的过程，称为脱分化，又叫去分化。

再分化：脱分化产生的愈伤组织继续进行培养，又可以重新分化成根或芽的过程。

愈伤组织：愈伤组织是通过细胞分裂形成的，其细胞排列疏松而无规则，高度液泡化呈无定形状态的薄壁细胞。

外植体愈伤组织长出丛芽生根移栽成活影响因素配制培养基：1.配置各种母液（大量元素浓缩10倍，微量元素浓缩外植体消毒：流水冲洗后，放入装有清水的培养皿中，加入少许洗衣粉，用毛笔轻轻刷洗，后用流水冲洗20，无菌吸水纸吸干外植体表面水分，放入70%的酒精中，轻轻摇动2-3次，持续6-7s，外植体：植物的种类、材料的年龄和保存时间的长短等都会影响实验结果。

容易进行无性繁殖的植物容易进行组织培养。

选取生长旺盛嫩枝进行组培的原因是嫩枝生理状态好，容易诱导营养：常用的培养基是培养基，其中含有的大量元素是N、P、S、K、、，微量元素是、、B、、、、、、I、，有机物有甘氨酸、其他条件环境条件：，温度，光照。

过程激素：生长素和细胞分裂素是启动细胞分裂、脱分化和再分化的关键激素。

二者浓度、使用的先后顺序、用量的比例等都影响结果生长素／细胞分裂素比值与结果比值高时促根分化，使用顺序实验结果先生长素，有利于分裂但不分化5 / 7课题2月季花药培养一、原理 花粉发育被子植物的花粉的发育要经历 小孢子四分体时期，单核期和双核期等阶段。

在正常情况下，一个小孢子母细胞可以产生8个精子；在一枚花药中可以产生若干个花粉单倍体植株产生途径(取决于激素的种类和配比)二、影响因素影响花粉植株成功与否和成功率的主要因素：材料选择和培养基组成三、过程专题六 植物有效成分的提取天然香料的植物、动物。

不同植物的根、茎、叶、花、果实、种子都可以提取芳香油。

芳香油的提取方法：蒸馏（挥发性强化学性质稳定的芳香油）水中蒸馏、水上蒸馏、水汽蒸馏。

压榨：原料不适宜于水中蒸馏，如柑橘、柠檬等易焦糊，有效成分容易水解。

花粉花粉胚状体愈伤组织 从芽从芽生根移栽脱分化分化再分化诱导培养：菊花组培所需为5.8，温度为18-22℃，光照条件为每日用日光注意事接种移栽、栽无菌操作:用70％的酒精消毒工作台，点燃酒精灯。

注意所有接种工作都必须在酒精灯旁进行，器械方向:接种过程中插入外植体时形态学上端朝上材料选取：选择花药时一般通过镜检确定花粉发育时期，此时需要对外植体消毒：花蕾用为70%的酒精浸泡30秒，无菌水清洗，无菌吸水纸吸干花蕾表面的水分，放入质量分数为0.1%的氯化汞溶培养：（1）花药培养利用的培养基是培养基中添加2,4—D 、、的培养基，为 5.8 ，温度为25 ℃，幼苗形成之前不需要光照 （2）培养20－30d 后，花药开裂，长出愈伤组织或释放出胚状体。

接种（1）．剥取花药：消毒后的花蕾，要在无菌条件下除去花萼、花瓣。

在剥离花药时，要尽量不损伤花药，否则接种后易从受伤筛选鉴定：通过愈伤组织形成的植株，常常会出现染色体组的数目的材料选择 ：亲本植株的生理状况 和生长条件、材料的低温预处理及接种密度等对诱导成功率有影响。

①从花药来看，应当选择初花期的花药；②从花粉来看，应当选择单核期的培养基组成：（水）大量元素，微量元素，有机物，萃取：芳香油易溶于有机溶剂，溶剂挥发后得到芳香油。

有机溶剂中的杂质影响芳香油品质。

芳香油的性质：挥发性强，成分复杂，以萜类化合物及其衍生物为主。

(一) 玫瑰精油的提取玫瑰油的化学性质稳定，难溶于水，易溶于有机溶剂，能随水蒸气一同蒸馏。

蒸馏时间不能过短，温度不能过高。

(二)橘皮精油的提取柑橘、柠檬等易焦糊，有效成分容易水解，通常用压榨法(三) 胡萝卜素的提取Ⅰ、萃取剂的选择 水溶性的：乙醇、丙酮；水不溶性的：石油醚、乙酸乙酯、 乙醚、苯、四氯化碳等。

选择：具有较高的沸点，能够充分溶解胡萝卜素，并且不与水混溶。

Ⅱ、影响萃取的因素主要因素：萃取剂的性质和使用量 次要因素：原料颗粒的大小、紧密程度、含水量、萃取的温度和时间等。

一般来说，原料颗粒小，萃取温度高，时间长，需要提取的物质就能够充分溶解，萃取效果就好。

Ⅲ、胡萝卜素提取装置的设计：萃取过程应该避免明火加热，采用水浴加热，这是因为有机溶剂都是易燃物，直接使用明火加热容易引起燃烧爆炸。

为了防止加热时有机溶剂挥发，还要在加热瓶口安装回流冷凝装置。

萃取液的浓缩可直接使用蒸馏装置。

在浓缩之前，还要进行过滤，除去萃取液中的不溶物。

、鉴定：纸层析法基线：滤纸下端距底边2㎝处做一基线，在基线上取A 、B 、C 、D 四点。

点样：用最细的注射器针头（毛细吸管）吸取样品进行点样。

点样应该快速细致，在基线上形成直径２ｍｍ左右的圆点，每次点样后，可用吹水蒸气蒸馏：蒸馏瓶中加几粒沸石，防止液鲜玫瑰花+清水油水混合分离油层除水玫瑰油加入：促使油水混合物（乳浊液）中油和水的加入无水24：：吸收油层中的水分，然后过滤 石灰水浸泡：破坏细胞结构,分解果胶。

防止压榨时滑脱，提高出油率，再次过滤：将下层橘皮油用滤纸过滤，滤液与上层静置：将橘皮油在5～10℃冰箱中静置5～7d ，分离出上层澄清橘皮过滤：用布袋过滤，滤液再高速离心处理，分离出上层橘压榨：小苏打、硫酸钠：促进油和水的分离（用量分别为橘皮质量的漂洗橘皮油冷凝：促使油水混合物（乳浊液）中油和水的分离，分液漏斗分液7 / 7风机将溶剂吹干，注意保持滤纸干燥。