标本采集、运送标准操作程序

临床微生物标本采集、运送标准操作程序2009年6月21日微生物检查的标本收集原则1.及时采集微生物标本作病原学检查。

2.采样时严格执行无菌操作，将污染情形降至最低。

3.在感染的急性期、使用抗生素前或伤口局部治疗前收集样本。

4.收集真正感染的病灶处的样本，且避免邻近区域常居菌群的污染。

5.采用专用无菌容器收集标本。

6.选择正确的解剖部位，并以适当的技术、方法与容器收集足量的样本，尽量不要以棉花拭子收集样本。

7.采样后立即送检，最好在2h内。

如不能及时送检，应将标本置于适当的储存环境待送，但存放一般不能超过24h。

8.混有正常菌群的标本，不可置肉汤培养。

9.每份标本都应贴上标签并标明必要信息，在检验申请单上填写足够的有关临床资料。

（要标明病区、病人姓名、住院号、标本来源、采集部位、采集时间等）细菌室对微生物标本拒收的标准与处理方法各类标本储存的环境细菌室项目检验周期表周日下午、）常规培养请送急诊化验室。

2．各类血清学检测周一至周五做；支原体、衣原体检查周一至周六上午做，其余时间标本一律不接收。

3．空气培养、物表监测周六、周日不做，于周一至周五打电话给细菌室告之数量。

标本采集、运送的标准操作程序【目的】规范标本采集，保证实验室检测前标本质量。

【范围】微生物实验室所有标本。

【职责】采集、运送微生物标本的临床各科室工作人员。

【标准操作程序】1.血液、骨髓标本：1.1采集指征：对可疑血流感染患者未进行抗菌药物治疗前，应及时进行血液培养。

可疑血流感染患者出现以下一项或几项体征时应及时采集血培养：1）发热（≥38℃）或低温（≤36℃）.2）寒战。

3）白细胞增多（计数大于10,000×109/L，特别有“核左移”未成熟的或带状的白细胞）。

4）粒细胞减少（成熟时我多核白细胞小于1000×109/L）。

5）血小板减少。

6）皮肤黏膜出血。

7）昏迷.8）多器官衰竭9）血压降低10）呼吸加快11）降钙素原升高（PCT）12）C反应蛋白升高（CRP）在评估可疑新生儿败血症时，除发热或低烧外，很少培养出细菌，应该补充尿液和脑脊液培养。

肺炎链球菌与流感嗜血杆菌菌血症的患儿（特别是2岁或以下的幼儿）一般出现于门诊，常伴有明显的发热（≥38.5℃）和白细胞增多（总数≥20,000×109/L）。

老年菌血症患者，可能不发热或低体温，如伴有身体不适，肌痛或中风可能是感染心内膜炎的重要信号。

1.2血培养次数和采血时间：采血应尽量在使用抗菌药之前进行，推荐同时采集2～3套（不同部位）血培养，以助于提高阳性检出率，区别病原菌与污染菌。

（一套血培养为一瓶需氧培养加一瓶厌氧培养。

一次静脉采血只能注入到1套培养瓶中）。

尽可能选用可中和或吸附抗菌药物的培养基。

临床对可疑菌血症患者应立即采集血培养标本，对间歇性寒战或发热可在寒战时或体温高峰到来之前0.5～1h进行采血。

除特殊情况之外（如怀疑细菌性心内膜炎），采集血培养后的2至5天内，无需重复采集血培养。

1.3特殊的全身性和局部感染患者采集血培养的建议：1.3.1急性心内膜炎：对于可能的心内膜炎患者，必须在经验使用抗菌药物前30min之内抽取血培养，起始采集3套血培养，如果在24h内仍报告为阴性，则继续采集2套血培养，全部培养一共为5套。

1.3.2亚急性心内膜炎：需在24h之内连续从不同部位抽取3套血培养，间隔时间30-60min。

如24h内为阴性，则继续采集2套血培养，全部培养一共为5套。

1.3.3对于亚急性心内膜炎的评估，皮肤消毒尤为重要，因为其主要的病原菌为皮肤定植菌如凝固酶阴性葡萄球菌。

因此，血培养必须取自外周静脉而非留置的静脉导管。

取自导管的血培养会伴有很高的污染风险从而导致错误的心内膜炎的结论。

建议采用正确的皮肤消毒，从不同的外周静脉部位分别采集血培养，不能从留置的导管采血。

1.3.4急性脓毒症：10min内从不同的部位采集2～3套血培养。

1.3.5可疑菌血症但血培养持续阴性，应改变血培养方法，如延长培养时间或增加特殊培养基，以获得罕见的或苛养的微生物（真菌，结核菌等）。

1.3.6不明原因发热，如隐性脓肿、伤寒热和波浪热，从不同体位先采集2～3 套血标本，24～36h后估计体温升高之前（通常下午）再采集2套以上。

1.4皮肤消毒程序：1.4.1推荐使用碘酊、次氯酸和洗必太或碘伏。

1.4.2碘酊、次氯酸和洗必太的消毒效果要优于碘伏。

1.4.3消毒剂需要有足够的时间以保证消毒效果（碘酊作用30s；碘伏作用1.5～2min）。

1.4.4洗必泰的作用时间和碘酊一样，但是没有过敏反应，因此不必擦去，但不能用于小于2个月的婴儿。

1.5 静脉穿刺点皮肤消毒程序：1.5.1 70%酒精消毒皮肤（以采血点为中心，螺旋式用力有内到外直径5cm以上），作用60秒；1.5.2 用碘伏消毒皮肤（以采血点为中心，螺旋式用力有内到外直径5cm以上），作用1.5~2min；或用碘酊消毒皮肤，作用30秒；1.5.3 再用70%酒精脱碘（以采血点为中心，螺旋式用力有内到外直径5cm以上）；1.5.4 静脉穿刺采血。

注：血培养必须特别注意消毒，因许多微生物，尤其葡萄球菌属通常存在皮肤表面或近表层处，易污染血培养标本。

1.6培养瓶消毒程序：用70%酒精擦拭血培养瓶橡皮塞（不能用含碘消毒剂），作用60s。

用无菌纱布或无菌棉签清除橡皮塞表面残余液体，然后注入血液。

1.7采血量：成年患者推荐的采血量为每套不少于10ml，每瓶不少于5ml。

婴幼儿患者推荐的采血量，每瓶不少于2ml。

1.8培养瓶推荐使用商品化的培养基。

1.9静脉穿刺和培养瓶接种程序：●穿刺前或穿刺期间，为防止静脉滑动，可戴乳胶手套固定静脉，不可接触刺点。

●骨髓标本采取对穿刺一侧准备同外科切口。

●用注射器无菌穿刺取血或骨髓后，直接注入血培养瓶，勿换针头（如果行第二次穿刺，应换针头），或严格按厂商推荐的方法采血。

●血标本接种到血培养瓶后，轻轻颠倒混匀以防血液凝固，立即送检。

1.10血培养瓶标识标识内容应包括病人姓名、病员号、标本种类、采集时间。

注：病人标识不可覆盖在血液培养瓶的条形码上。

1.11标本的运送血培养标本应按要求尽快送往实验室，不能超过2h。

如无法及时送检，血标本需室温（20-25度）保存，切勿冷藏。

1.12 生物安全防护参见《HS-JY-GL-XJ-302生物防护的安全程序》。

2.尿液标本2.1采集指征：1）有典型的尿道刺激症状2）肉眼脓尿或血尿3）尿常规检查表现为白细胞或亚硝酸盐阳性（几个+号）4）不明原因的发热，无其他局部症状5）留置导尿管时间超过48h的患者出现发热6）膀胱排空功能受损7）泌尿系统疾病手术前。

2.2采集方法：标本采集应力争在末使用抗菌药物之前，注意避免消毒剂污染标本。

●清洁中段尿：最好留取早晨清洁中段尿标本，嘱咐患者睡前少饮水，清晨起床后到医院，由专业人员指导下采集中段尿标本。

尿标本消毒采集程序：◆女性中段尿的采集方法：1）用肥皂水完全清洗尿道区域，用湿纱布垫漂洗。

2）分开阴唇，开始排泄。

3）排除前段尿后，不停止尿流，采集中段尿。

◆男性中段尿的采集方法：1) 用肥皂水完全清洗阴茎头，用湿纱布垫漂洗。

2) 回缩包皮，开始排泄。

3) 排除前段尿后，不停止尿流，采集中段尿。

●耻骨上膀胱穿刺：使用无菌注射器直接从耻骨上经皮肤消毒穿刺入膀胱吸取尿液。

●直接导尿：按导尿消毒程序消毒后，用导尿管直接经尿道插入膀胱，获取尿掖。

●留置导尿管收集尿液：利用留置采集标本时，应先夹住导尿管1-2小时后，以75﹪酒精消毒导尿管外部，按无菌操作方法用注射器穿刺导尿管吸取尿液。

注意不能从尿液收集袋中采集尿液。

2.3 采集量5～10ml。

2.4 容器无菌、带螺旋盖、透明塑料容器。

2.5 标本容器标识标识内容应包括病人姓名、病员号、标本种类。

2.6 标本运送标本采集后立即盖紧防止泄漏或容器外部留有残留物。

及时送检，室温保存下不得超过2小时，否则应置于4℃冰箱保存，保存时间不得超过24h。

2.7 注直接导尿可能导致尿道菌落进入膀胱，增加医源性感染的危险。

2.8生物安全防护参见《HS-JY-GL-XJ-302生物防护的安全程序》。

⒊脑脊液标本3.1采集指征不明原因引起的头痛，脑膜刺激征象，颈部僵直，脑神经病理征象，发热，体温过低，易受刺激等临床症状。

此外，其它实验室检查有发现：脑脊液白细胞增加，蛋白质增加且葡萄糖减少等。

3.2采集时间怀疑中枢神经系统感染感染时，应立即采集标本，最好在抗菌药物使用之前。

3.3采集方法按脊椎穿刺操作规程，采集约3-5ml脑脊液于3支无菌试管，每支试管至少1-2ml，立即将第2管（或第1管）送至实验室（建议床边直接接种血培养瓶，包括需氧培养瓶和厌氧培养瓶，增菌培养）。

做脑脊液培养时，建议同时做血培养。

3.4采集量至少1-2 ml。

如进行抗酸染色，至少2ml。

3.5运送容器无菌加盖螺口试管。

3.6标本容器标识应包括病人姓名，病员号，标本种类，检验项目，采集时间。

3.7标本运送采集后立即加盖防止泄漏或容器外部留有残留物。

常温立即送检，实验室收到标本后应立即接种。

脑脊液标本的最佳送检时间为15min内; 送检时间超过1h，则会影响结果，须向主任或医疗主管汇报，由医疗主管或主任向临床医生联系，并说明由于标本延时结果可能受到影响。

在报告结果时，在备注处注明此情况。

3.8 注某些细菌具有自溶酶，放置时间过长易自溶而死亡，因此标本应立即送检，并且保温（禁止放冰箱，因脑膜炎奈瑟菌遇冷易死亡）。

3.9生物安全防护参见《HS-JY-GL-XJ-302生物防护的安全程序》。

⒋穿刺液标本4.1采集指征：4.1.1 胆汁：急性胆囊炎，急性重症胆管炎，伴有腹痛，黄疸，墨菲征阳性，伴有恶心，呕吐和发热，尿少且黄，中毒或休克等症状。

4.1.2胸水：结核性胸膜炎，细菌性肺炎引起的胸膜炎伴有胸痛，发热，胸腔积液浑浊，乳糜性，血性或脓性。

4.1.3腹水：原发性，继发性腹膜炎伴有腹痛，呕吐，腹肌紧张，肠鸣音减弱或消失。

4.1.4心包液：结核性，风湿性，化脓性，细菌性心包炎。

4.1.5关节液：化脓性关节炎，关节肿胀，关节周围肌肉发生保护性痉挛。

4.2采集时间：怀疑感染存在，应尽早采集标本，一般在患者使用抗菌药物之前或停用药物后1——2日采集。

4.3采集方法：4.3.1胆汁：胆汁的采集方法有十二指肠引流法（以”B”管——来自胆囊，做细菌培养意义较大）、胆囊穿刺法及手术采取三种方法。

由临床医生采集，约2ml左右放入无菌密封容立即送检。

4.3.2其它穿刺液：按穿刺消毒规范，消毒皮肤后，由临床医生穿刺采取标本（2ml左右），装入无菌密封容器立即送检。

4.4采集容器：无菌加盖螺口试管。

4.5采集量：1～5ml(慢性非卧床腹膜透析有关的腹膜炎时，采集至少50ml的量可以提高检出率)。