(优选)间充质干细胞的临床应用心得

有关骨髓间充质干细胞的临床应用崔潇　杨莹　周晓霞【摘要】　骨髓间充质干细胞具有高度的自我更新和多相分化潜能。

由于取材容易、培养简便及应用前景广泛等特点成为干细胞中研究的热点,在医学各个领域都具有研究和应用价值,目前已应用于多种临床治疗当中。

骨髓间充质干细胞(bone marr ow mesenchy mal ste m cell, MSC)是存在于骨髓中的具有高度自我更新能力和多相分化潜能的成体干细胞,又称骨髓基质干细胞、间充质祖细胞。

1　MSC的生物学特性M SC具有高度自我更新能力和多相分化潜能,体外培养的M S C有快速黏附和克隆能力,可以在体外培养20～25代而没有形态、生长曲线和免疫表型的明显改变,且保持着细胞的染色体核型和端粒活性。

MSC在体外诱导培养条件下,能够向不同谱系的细胞分化,如成骨细胞、软骨细胞、脂肪细胞、肌腱细胞、星形胶质细胞等[1]。

2　MSC的免疫学特性由于MSC不表达主要组织相容性复合体(MHC)Ⅱ分子、CD40、CD80、C D86等共刺激分子,不表达或极低水平表达MHCⅠ分子, MSC不易被宿主T细胞识别,并能逃脱宿主免疫系统的排斥,因此认为MSC具有低免疫原性[2]。

3　MSC在临床医学中的应用311　MSCs用于心血管疾病的治疗机制　当M SCs移植到损伤的心肌局部后,M S Cs能分化为心肌细胞系,表达心肌特异性蛋白质,包括:α2actinin,tr oponin2T,tr opomyosin,myosin heav2 y chain2MHC,phos phola mban,和其他的心肌特异性蛋白质[3]。

更重要的是,在MSCs移植后的心肌组织中检测到了connex2 in243,该种蛋白质反映的是细胞之间的连接以及细胞与细胞之间的电偶联[4]。

31111　M SCs促进缺血或梗死部位血管再生　由于新生血管的生成,增加了梗死部位心肌的血供,通过挽救冬眠的心肌、减少肥大的心肌细胞的凋亡、帮助恢复损伤的基质来减少心室的扩张和改善心功能[5]。

2003年8月，为给大家提供一个网上交流干细胞研究经验的平台，我们干细胞版设立了骨髓间充质干细胞培养讨论区，经过近三个月的讨论学习，我们既学习丰富了自己的知识体系，也对间充质干细胞尤其是分离培养方面有了更为翔实的认识，为了大家阅读的方便，我们决定把本版中的相关内容，同时参考部分书目和文献，做一总结。

一、骨髓间充质干细胞的分离目前常用的分离MSC的方法有全骨髓法和密度梯度离心法，全骨髓法即根据干细胞贴壁特性，定期换液除去不贴壁细胞，从而达到纯化MSC的目的。

密度梯度离心法即根据骨髓中细胞成分比重的不同，提取单核细胞进行贴壁培养。

随着对MSC表面抗原认识的深入，有人利用免疫方法如流式细胞仪法、免疫磁珠法等对其进行分离纯化，但经过流式或磁珠分选后的细胞出现了增殖缓慢等一些问题，加之耗费较大和技术的难度，在某种程度上限制了这些方法的广泛应用。

1. 直接培养法（全骨髓培养法）1987年，Friedenstein等发现在塑料培养皿中培养的贴壁的骨髓单个核细胞在一定条件下可分化为成骨细胞、成软骨细胞、脂肪细胞和成肌细胞，而且这些细胞扩增2 0-30代后仍能保持其多向分化潜能，这类细胞即为骨髓间充质干细胞（BMSC），其工作对今后MSC的研究具有重要意义，不仅证实了骨髓MSC的存在，而且创建了一种体外分离和培养MSC的简便可行的方法，得到了广泛的应用。

culture-spirit采用直接贴壁法，24-36小时首次换液，换液时用PBS洗两次，7 -10天传第一代，以后2-3天传代。

培养基采用Hyclone的DMEM/F-12（1:1），血清是天津TBD的FBS（顶级），得到了较好的培养结果。

布兰卡根据自己培养大鼠MSC的经验，详细介绍了实验步骤：（1）接种后60-80分钟，换液去除悬浮细胞（2）原代培养24h,48h各换液一次（3）观察细胞情况，在原代培养7天左右时，如观察到成片的典型形态的细胞，在瓶底用Marker笔标记，0.25%胰酶消化，镜下观察控制，约5-10分钟（室温太低时应放置到孵箱中），加入全培养基终止消化，瓶体朝上，吸管轻轻吹打4-8分钟，尤其是标记部位。

临床研究用人间充质干细胞质量评价一、引言人间充质干细胞（MSCs）由于其多向分化潜能、免疫调节特性以及易于体外培养等特点，被广泛用于临床研究。

在众多疾病的治疗中，MSCs 都展现出了巨大的潜力。

然而，要确保其在临床研究中的有效性，首先需要对MSCs的质量进行严格控制和评价。

本文将探讨如何评价临床研究用MSCs的质量。

二、MSCs的质量评价标准1、细胞的纯度和活性：这是MSCs质量评价的核心指标。

纯度是指MSCs中目标细胞的比例，而活性则是指MSCs的增殖能力和分化能力。

2、细胞的遗传稳定性：通过基因测序等方法，可以检测MSCs是否存在基因突变，以及是否存在潜在的致癌风险。

3、细胞的免疫调节特性：MSCs具有免疫调节特性，可以通过抑制免疫反应来降低排斥反应的风险。

因此，评价MSCs的免疫调节特性也是非常重要的。

4、细胞的来源和生产过程：MSCs的来源和生产过程也会对其质量产生影响。

例如，来自患者的自身MSCs可能比来自捐献者的MSCs更适合用于治疗。

同时，生产过程中的质量控制，如无菌操作、细胞培养基的质量等，也会影响MSCs的质量。

三、MSCs质量评价的方法1、细胞形态观察：通过观察MSCs的形态，可以初步判断其是否具有正常的形态学特征。

2、生长曲线测定：通过绘制MSCs的生长曲线，可以评估其增殖能力。

3、细胞表面标志物检测：通过检测细胞表面标志物，可以确定MSCs 的纯度和活性。

4、染色体核型分析：通过染色体核型分析，可以评估MSCs的遗传稳定性。

5、免疫调节特性检测：通过检测MSCs对免疫反应的调节作用，可以评估其免疫调节特性。

6、生产过程质量控制：通过监控生产过程中的关键控制点，可以确保MSCs的生产过程符合质量标准。

四、结论人间充质干细胞（MSCs）在临床研究中的应用前景广阔，但其质量评价是关键环节。

通过对MSCs的纯度、活性、遗传稳定性、免疫调节特性以及生产过程的质量控制等多方面的评价，可以确保其满足临床研究的需求。

临床研究用人间充质干细胞质量评价规范（讨论稿）前言人间充质干细胞(human MSCs, hMSCs)是一类具有一定的自我复制更新和多向分化潜能的成体干细胞，广泛存在于胎儿和成人各组织中，如骨髓、脂肪、皮肤、牙髓、肌腱，以及新生儿附属组织，如脐带、胎盘、羊膜等等组织。

除一定程度的分化潜能外，hMSCs还具有独特的免疫调控和组织再生功能，参与调控异常免疫反应、维护免疫平衡，帮助机体形成有利于病损组织细胞修复或再生的微环境，以促进损伤组织细胞的修复或再生。

hMSCs独特的生物学功能决定了其应具有广泛的临床适应症，并使其成为近十年来细胞治疗领域中发展最为广泛、最为迅速的干细胞类型。

过去10年来所积累的大量临床前及临床研究数据显示，不同组织来源的hMSCs均具有不同程度，针对不同临床适应症的治疗效果。

目前在登记的各种自体或异体组织来源的hMSCs临床适应症类型或疾病亚型已有上百种，其中常见的临床适应症类型包括骨关节疾病、心血管疾病、器官功能衰竭、神经退行性疾病、移植物抗宿主病、多发性硬化、脊髓损伤、炎性结肠炎、脊髓侧索硬化、系统性红斑狼疮，等等。

然而，无论是临床前或临床研究阶段，现有的研究结果仍都存在不同程度的问题，而所有问题又都不同程度地汇聚到hMSCs的质量问题上。

其中临床前研究所表现的问题是，不同研发者所使用的hMSCs来源、培养体系、制备工艺、质量标准、评价技术等存在很大差异，也存在质量评价内容和技术的合理性等问题，因此导致不同研究者间的研究结果很难具有可比性，或结果难以重复，因此也很难形成相对统一的质量标准。

而临床研究中所存在的问题是，绝大多数临床研究还处在早期阶段，所观察的病例数还很有限，临床研究中细胞质量的标准化和细胞使用的规范性仍存在巨大差异，所有这些尚不足以完全支持hMSCs的安全性和/或疗效。

除此以外，因hMSCs临床前研究还远不够完善，对其临床研究的指导作用还不强，或者临床前研究与临床研究存在严重脱节现象，临床研究阶段细胞质量的稳定性研究欠缺，细胞质量评价和受试者评估体系尚未建立，等等。

间充质干细胞输注期的观察和护理目的经验总结间充质干细胞输注期的观察和护理要点，更好地指导临床护理工作。

方法从输注环境的准备、成体干细胞的准备、输注器具的选择、静脉通路的选择、输注速度的要求、输注期的观察重点和对应的护理对策六个方面进行总结。

结果23例患者顺利输注，相关并发症能及时发现，得到相应的治疗和护理。

结论对间充质干细胞进行相应的环境准备和物品准备，合理调节输注速度，做好常见并发症的观察和护理，是保证配合医疗新技术、提高护理质量的关键。

标签：间充质干细胞；输注期；观察；护理近年来，随着细胞生物实验技术的快速发展，干细胞的研究和应用成为生命科学的研究热点。

对于干细胞的临床优势，国内外学者普遍达成共识：干细胞是具有自我更新、高度增殖和多向分化潜能的细胞群体[1，2]，同时还具有支持造血及免疫调节等功能[3]，被医学界称为”万用细胞”。

间充质干细胞（mesenchymal stem cells，MSCs）根据取材来源不同可以分为两种：脐血间充质干细胞（umbilical cord blood mesenchymal stem cells，UCB-MSCs）和脐带间充质干细胞（umbilical cord mesenchymal-derived stem cells，UCMSCs），MSCs移植是近几年新兴的治疗多系统疾病的方法。

1临床资料23例患者中男1例，女22例，年龄13～59岁，中位年龄37.1岁，其中系统性红斑狼疮19例，类风湿关节炎1例，硬皮病1例，重型再生障碍性贫血1例，骨髓增生异常综合征1例）。

脐带间充质干细胞的来源由江苏省干细胞库提供，细胞数6×107，细胞活率>85%。

2护理2.1护理人员的准备参与输注间充质干细胞的护理人员，在操作前均应接受相关知识培训，包括间充质干细胞的特性、适应人群、保存与输注的要求、输注中和输注后的观察、并发症的处理等。

2.2环境的准备对环境无特殊要求，在输注当日按无菌原则的要求，病室内减少人员走动，床头柜洁净无物，便于操作。