钠钾ATP酶的临床研究进展_刘晶

专利名称：家蚕钠钾ATP酶及其基因和应用专利类型：发明专利
发明人：赵萍,衣启营,王鑫,夏庆友,宋倩茹申请号：CN201410555339.8
申请日：20141016
公开号：CN104312993A
公开日：
20150128
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明公开了一种家蚕钠钾ATP酶及其基因和应用，家蚕钠钾ATP酶的氨基酸序列如SEQ ID NO.8所示或SEQ ID NO.8所示氨基酸序列经取代、缺失或添加至少一个氨基酸且来源于家蚕的具有钠钾ATP酶功能的酶，该酶具有四个钠、钾离子及ATP结合的保守的氨基酸位点，属于典型的P-type钠钾ATP酶，编码该酶的基因在家蚕五龄第3天的各个组织中均有表达，但钠钾ATP酶只在家蚕五龄三天的头部和表皮中有表达，经体外真核表达后发现钠钾ATP酶具有水解ATP酶活性，由于家蚕丝腺腔内金属离子交换是影响家蚕丝蛋白构象转换的重要影响因素，因此家蚕钠钾ATP酶功能研究对今后改良家蚕丝纤维具有重要的意义。

申请人：西南大学
地址：400715 重庆市北碚区天生路2号
国籍：CN
代理机构：北京同恒源知识产权代理有限公司
代理人：王贵君
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㊀基金项目:国家自然科学基金青年基金项目(Ｎｏ.８１７０３５６２)㊀作者简介:张叶ꎬ女ꎬ研究方向:肿瘤免疫药理学ꎬＥ－ｍａｉｌ:ｊｏｙｅｚｈａｎｇ３１３＠１６３.ｃｏｍ㊀通信作者:杨勇ꎬ男ꎬ博士研究生ꎬ教授ꎬ博士生导师ꎬ研究方向:肿瘤免疫药理学ꎬTel:139****3047ꎬE －ｍａｉｌ:ｙｙ＠ｃｐｕ.ｅｄｕ.ｃｎ钠钾ＡＴＰ酶与肿瘤研究进展张叶１ꎬ李娴静１ꎬ杨勇２(１.中国药科大学新药安全评价研究中心ꎬ江苏南京２１１１９８ꎻ２.中国药科大学基础医学与临床药学学院ꎬ江苏南京２１１１９８)摘要:钠钾三磷酸腺苷酶(Ｎａ＋/Ｋ＋－ＡＴＰａｓｅꎬＮＫＡ)是一种跨质膜转运钠钾离子的离子泵ꎬ对维持细胞内外渗透压平衡至关重要ꎮ钠钾三磷酸腺苷酶是由α亚基(亚基α１~α４)和β亚基(亚基β１~β３)及调节亚基组成的多聚体ꎮ已发现钠钾三磷酸腺苷酶参与调节与肿瘤细胞存活相关多种信号通路ꎬ抑制肿瘤细胞增殖ꎮ钠钾三磷酸腺苷酶抑制剂可通过诱导肿瘤细胞自噬凋亡ꎬ阻滞细胞周期等发挥抗肿瘤作用ꎮ本文旨在综述钠钾三磷酸腺苷酶在肿瘤发展转移中的作用ꎬ提高对钠钾三磷酸腺苷酶作为肿瘤治疗的潜在靶标的认识ꎮ关键词:钠钾三磷酸腺苷酶ꎻ肿瘤ꎻ强心苷中图分类号:Ｒ７３０.２３１㊀文献标识码:Ａ㊀文章编号:２０９５－５３７５(２０２１)１１－０７６０－００５ｄｏｉ:１０.１３５０６/ｊ.ｃｎｋｉ.ｊｐｒ.２０２１.１１.０１３ＲｅｓｅａｒｃｈｐｒｏｇｒｅｓｓｏｆＮａ＋/Ｋ＋－ＡＴＰａｓｅａｎｄｔｕｍｏｒＺＨＡＮＧＹｅ１ꎬＬＩＸｉａｎｊｉｎｇ１ꎬＹＡＮＧＹｏｎｇ２(１.ＣｅｎｔｅｒｆｏｒＮｅｗＤｒｕｇＳａｆｅｔｙＥｖａｌｕａｔｉｏｎａｎｄＲｅｓｅａｒｃｈꎬＣｈｉｎａＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙꎬＮａｎｊｉｎｇ２１１１９８ꎬＣｈｉｎａꎻ２.ＳｃｈｏｏｌｏｆＢａｓｉｃＭｅｄｉｃｉｎｅａｎｄＣｌｉｎｉｃａｌＰｈａｒｍａｃｙꎬＣｈｉｎａＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙꎬＮａｎｊｉｎｇ２１１１９８ꎬＣｈｉｎａ)Ａｂｓｔｒａｃｔ:Ｎａ＋/Ｋ＋－ＡＴＰａｓｅｉｓａｎｉｏｎｐｕｍｐｔｈａｔｔｒａｎｓｐｏｒｔｓｓｏｄｉｕｍａｎｄｐｏｔａｓｓｉｕｍｉｏｎｓａｃｒｏｓｓｔｈｅｐｌａｓｍａｍｅｍｂｒａｎｅꎬｗｈｉｃｈｉｓｅｓｓｅｎｔｉａｌｆｏｒｍａｉｎｔａｉｎｉｎｇｔｈｅｂａｌａｎｃｅｏｆｏｓｍｏｔｉｃｐｒｅｓｓｕｒｅｉｎｓｉｄｅａｎｄｏｕｔｓｉｄｅｔｈｅｃｅｌｌ.Ｎａ＋/Ｋ＋－ＡＴＰａｓｅｉｓａｐｏｌｙｍｅｒｃｏｍｐｏｓｅｄｏｆαｓｕｂｕｎｉｔｓ(ｓｕｂｕｎｉｔｓα１~α４)ꎬβｓｕｂｕｎｉｔｓ(ｓｕｂｕｎｉｔｓβ１~β３)ａｎｄｒｅｇｕｌａｔｏｒｙｓｕｂｕｎｉｔｓ.ＩｔｈａｓｂｅｅｎｆｏｕｎｄｔｈａｔＮａ＋/Ｋ＋－ＡＴＰａｓｅｐａｒｔｉｃｉｐａｔｅｓｉｎｔｈｅｒｅｇｕｌａｔｉｏｎｏｆｍｕｌｔｉｐｌｅｓｉｇＮａｌｐａｔｈｗａｙｓｒｅｌａｔｅｄｔｏｔｕｍｏｒｃｅｌｌｓｕｒｖｉｖａｌꎬｔｈｅｒｅｂｙｉｎｈｉｂｉｔｉｎｇｔｕｍｏｒｃｅｌｌｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ.Ｎａ＋/Ｋ＋－ＡＴＰａｓｅｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓｃａｎｅｘｅｒｔａｎｔｉ－ｔｕｍｏｒｅｆｆｅｃｔｓｂｙｉｎｄｕｃｉｎｇａｕｔｏｐｈａｇｙａｎｄａｐｏｐｔｏｓｉｓｏｆｔｕｍｏｒｃｅｌｌｓａｎｄｂｌｏｃｋｉｎｇｃｅｌｌｃｙｃｌｅ.ＴｈｉｓａｒｔｉｃｌｅａｉｍｅｄｔｏｒｅｖｉｅｗｔｈｅｒｏｌｅｏｆＮａ＋/Ｋ＋－ＡＴＰａｓｅｉｎｔｕｍｏｒｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｎｄｍｅ￣ｔａｓｔａｓｉｓꎬａｎｄｔｏｉｍｐｒｏｖｅｔｈｅｕｎｄｅｒｓｔａｎｄｉｎｇｏｆＮａ＋/Ｋ＋－ＡＴＰａｓｅａｓａｐｏｔｅｎｔｉａｌｔａｒｇｅｔｆｏｒｔｕｍｏｒｔｈｅｒａｐｙ.Ｋｅｙｗｏｒｄｓ:Ｎａ＋/Ｋ＋－ＡＴＰａｓｅꎻＴｕｍｏｒꎻＣａｒｄｉａｃｇｌｙｃｏｓｉｄｅｓ㊀㊀对钠钾三磷酸腺苷酶(Ｎａ＋/Ｋ＋－ＡＴＰａｓｅ)的研究始于１９５７年ꎬＳｋｏｕ教授发现Ｎａ＋/Ｋ＋－ＡＴＰａｓｅ是调节离子进出细胞的一种方式ꎬ且该酶需要在钠离子和钾离子存在下发挥活性[１]ꎮ基于这一发现ꎬＳｋｏｕ教授荣获了１９９７年的诺贝尔化学奖ꎮ作为一种重要的离子泵ꎬＮａ＋/Ｋ＋－ＡＴＰａｓｅ最重要的作用就是介导跨膜活性离子的转运[２]ꎮ作为Ｐ型ＡＴＰａｓｅ家族(也被称为Ｅ１－Ｅ２ＡＴＰａｓｅ)的一员ꎬＮａ＋/Ｋ＋－ＡＴＰａｓｅ能利用ＡＴＰ水解产生的磷酸基团进行α基团上天冬氨酸残基的磷酸化和去磷酸化反应ꎬ从而将特定离子转运进出细胞[３]ꎮＰ型ＡＴＰａｓｅ按照保守序列可分为５个亚家族(ＰＩ~Ｖ)ꎬ其中ＰＩＩＡＴＰ酶亚家族包括Ｎａ＋/Ｋ＋－ＡＴＰａｓｅꎬ肌浆网Ｃａ２＋泵ꎬ胃内Ｈ＋/Ｋ＋－ＡＴＰａｓｅ[４]ꎮ其中Ｎａ＋/Ｋ＋－ＡＴＰａｓｅ和Ｈ＋/Ｋ＋－ＡＴＰａｓｅ是唯一以逆向转运方式起作用的Ｐ型ＡＴＰａｓｅꎮＮａ＋/Ｋ＋－ＡＴ￣Ｐａｓｅ作为主要的膜整合蛋白之一ꎬ能同时将３个Ｎａ＋泵出细胞并将两个Ｋ＋泵入细胞ꎬ维持细胞膜内外的钠钾离子浓度差ꎬ可调节跨膜电化学梯度ꎬ促进膜静息电位的形成ꎬ对质膜上其他反应的发生至关重要[５]ꎮ除了广为人知的离子泵的作用外ꎬＮａ＋/Ｋ＋－ＡＴＰａｓｅ与其他膜蛋白及胞质蛋白的动态相互作用的报道越来越多ꎬ这种相互作用在细胞生物活动中至少发挥两种重要作用:①早期研究重点关注的Ｎａ＋/Ｋ＋－ＡＴＰａｓｅ对胞内外离子浓度动态调节ꎬ包括Ｎａ＋㊁Ｋ＋㊁Ｃａ２＋ꎻ②通过与信号蛋白的直接相互作用ꎬ在细胞信号转导中发挥重要作用ꎬ或作为信号整合剂将特定膜组织区域内的影响因子和效应器侨联在一起ꎮ过去二十年的研究表明ꎬＮａ＋/Ｋ＋－ＡＴＰａｓｅ的信号转导功能的改变参与了许多临床疾病如肥胖㊁高血压㊁肿瘤等的进展[６]ꎮＮａ＋/Ｋ＋－ＡＴＰａｓｅ还被证明作为治疗尿毒症心肌病和组织纤维化的治疗靶标[７－８]ꎮ最近研究发现ꎬＮａ＋/Ｋ＋－ＡＴＰａｓｅ在肿瘤中异常表达ꎬ且能通过调节各种与细胞存活和死亡相关途径在肿瘤的发生ꎬ增殖和转移中发挥作用[９－１３]ꎮ强心苷是动植物来源的天然化合物ꎬ如洋地黄毒苷㊁地高辛㊁毒毛旋花子苷Ｋꎮ强心苷类药物作为Ｎａ＋/Ｋ＋－ＡＴＰａｓｅ的天然抑制剂能抑制Ｎａ＋/Ｋ＋－ＡＴＰａｓｅ的活性ꎮ该类药物临床一直用于心力衰竭和心律不齐等心血管类疾病的治疗ꎮ但最近研究发现ꎬ强心苷通过抑制Ｎａ＋/Ｋ＋－ＡＴＰａｓｅ活性和其他机制发挥抗肿瘤活性ꎬ本文对Ｎａ＋/Ｋ＋－ＡＴＰａｓｅ的抗肿瘤作用的研究进展ꎬＮａ＋/Ｋ＋－ＡＴＰａｓｅ抑制剂(强心苷类药物等)作为肿瘤潜在治疗策略进行了报道ꎮ１㊀Ｎａ＋/Ｋ＋－ＡＴＰａｓｅ的结构和功能特征Ｎａ＋/Ｋ＋－ＡＴＰａｓｅ是由α和β亚基以及属于ＦＸＹＤ(苯丙氨酸－Ｘ－酪氨酸－天冬氨酸ꎬ简写Ｆ－Ｘ－Ｙ－Ｄ)蛋白家族的调节亚基组成的异源寡聚体ꎮ通过分解ＡＴＰ获得能量ꎬ进行Ｎａ＋㊁Ｋ＋逆浓度梯度的主动转运ꎬ即能把Ｎａ＋从细胞内转运到细胞外ꎬ把Ｋ＋从细胞外转运入细胞内ꎬ维持细胞膜内外的Ｋ＋㊁Ｎａ＋浓度差以及细胞内外液的渗透压稳定ꎮα亚基作为催化亚基由１０个跨膜螺旋(Ｍ１~Ｍ１０)组成ꎬ这些螺旋上有Ｎａ＋和Ｋ＋和其他配体的结合位点ꎬ包括３个胞质结构域:催化功能域(Ａ)ꎬ核苷酸结合域(Ｎ)和参与ＡＴＰ水解磷酸化结构域(Ｐ)[１４－１６]ꎮ其中ＡＴＰ分子能与α亚基的Ｎ结构域结合ꎬＡＴＰ发生水解产生的磷酸基团能与Ｐ结构上的天冬氨酸残基结合[１７]ꎮ在人类中ꎬＮａ＋/Ｋ＋－ＡＴＰａｓｅ的α亚基有四种不同的亚型:α１㊁α２㊁α３和α４ꎬ分别由α１多肽(ＡＴＰ１Ａ１)㊁α２多肽(ＡＴＰ１Ａ２)㊁α３多肽(ＡＴＰ１Ａ３)和α４多肽(ＡＴＰ１Ａ４)的４种不同的基因编码而成[１８]ꎮＡＴＰ１Ａ１几乎在所有细胞中均等表达ꎬ而ＡＴＰ１Ａ２主要在骨骼㊁心脏㊁平滑肌㊁脑(主要在星形胶质细胞)㊁肺和脂肪组织中表达ꎮＡＴＰ１Ａ３主要在神经元和心脏中表达ꎮＡＴＰ１Ａ４仅在精子细胞中检测到ꎬ对于精子的活动性和男性生育能力至关重要[１９]ꎮβ亚基是一种小型糖蛋白ꎬ最初被认为作为分子伴侣发挥作用ꎮＮａ＋/Ｋ＋－ＡＴＰａｓｅ的β亚基不参与任何催化反应ꎬ它能与α亚基的Ｍ７和Ｍ１０螺旋相互作用ꎬ调节α亚基中的离子运输ꎮβ亚基还可以帮助维持上皮细胞的极化和细胞的运动ꎮ抑制β亚基功能会导致促进细胞运动的紧密连接丧失ꎬ最终导致癌症转移[１６]ꎮβ亚基包含３种不同的亚型ꎬ分别由β１多肽(ＡＴＰ１Ｂ１)㊁β２多肽(ＡＴＰ１Ｂ２)和β３多肽(ＡＴＰ１Ｂ３)编码得到ꎮＡＴＰ１Ｂ１存在于大多数组织中ꎬ与α亚基一起形成组织内最广泛表达的Ｎａ＋/Ｋ＋－ＡＴＰａｓｅ亚型－α１β１复合体ꎮβ２存在于神经元ꎬ松果体ꎬ骨骼肌中ꎬ介导神经元与神经胶质细胞的相互作用ꎬ促进神经突触生长ꎮβ３在睾丸ꎬ肝脏ꎬ肺脏ꎬ肾脏中表达[２０]ꎮγ亚基又被称为ＦＸＹＤ２ꎬ是由６６~６８个氨基酸组成的小分子多肽ꎮＦＸＹＤ２是ＦＸＹＤ蛋白家族一员ꎬ该家族蛋白被证明可以调节催化亚基的活性ꎮ其中ＦＸＹＤ２被证明与离子通道的开放有关[２１]ꎮ此外ꎬ还有文献报道ＦＸＹＤ２能调节α亚基配体的亲和力[２２]ꎮ尽管ＦＸＹＤ２具有某些调节作用ꎬ但已发现Ｎａ＋/Ｋ＋－ＡＴＰａｓｅ在没有γ亚基存在下也能正常工作[１７]ꎮ如上文所说ꎬＮａ＋/Ｋ＋－ＡＴＰａｓｅ除了进行Ｎａ＋㊁Ｋ＋的运输ꎬ参与和维持细胞膜内外的电化学梯度外ꎬ还能与邻近的膜蛋白相互作用形成信号复合体ꎬ进行细胞内的级联信号反应ꎬ传递信息ꎮ其中ＮＫＡ/Ｓｒｃ/ＲＯＳ信号通路的激活导致氧化应激失衡ꎬ加剧肿瘤㊁动脉粥样硬化㊁糖尿病㊁慢性肾病等疾病发展[２３－２５]ꎮ此外越来越多的证据表明作为一种多功能蛋白ꎬＮａ＋/Ｋ＋－ＡＴＰａｓｅ在细胞黏附复合物形成和维持中发挥的关键作用ꎮＮａ＋/Ｋ＋－ＡＴＰａｓｅ能与许多信号分子和肌动蛋白细胞骨架结合ꎬ形成多蛋白复合物ꎬ促进细胞间紧密连接和独立连接的形成[２６]ꎮ有学者解释称在细胞膜上存在两种Ｎａ＋/Ｋ＋－ＡＴＰａｓｅ:一种是作为能量转换离子泵的经典酶池ꎬ另一种是局限于小窝的发挥信号传导功能的酶池[２７]ꎮ在不同的细胞和组织中ꎬ这种信号体的组成以及结合的蛋白质可能是不同的ꎬ这就导致该信号体在不同组织中尤其是在正常和病理状态下ꎬ如癌症中发挥不同功能ꎮ２㊀Ｎａ＋/Ｋ＋－ＡＴＰａｓｅ作为肿瘤治疗的潜在靶点与相应正常组织相比ꎬ在人类癌症中Ｎａ＋/Ｋ＋－ＡＴＰａｓｅ各亚型表达水平发生改变[２６]ꎬ许多有关Ｎａ＋/Ｋ＋－ＡＴＰａｓｅ促癌作用的报道已证明与Ｎａ＋/Ｋ＋－ＡＴＰａｓｅ的α和β亚基的差异表达相关ꎬ但与γ亚基没有关系ꎮ如α１亚基在包括非小细胞肺癌[２８]㊁肾细胞癌[２９]㊁胶质细胞瘤[３０]和黑色素瘤[３１]中表达上调ꎬ而α３亚基在结肠癌中表达上调[３２]ꎮ相反的是ꎬα１亚基据报道在前列腺癌中表达下调[３３]ꎬ因此ꎬＮａ＋/Ｋ＋－ＡＴＰａｓｅ的α亚基代表了一些与不良预后相关的癌症类型的潜在新靶点ꎮ人Ａ５４９非小细胞肺癌细胞中α１亚基的特异性敲除显著降低了它们的迁移和增殖ꎬ进一步表明α１亚基作为这种肿瘤的治疗靶标的潜在用途[２８]ꎮ此外ꎬβ亚基不仅在Ｎａ＋/Ｋ＋－ＡＴＰａｓｅ本身的调控中发挥重要作用ꎬ而且在抑制癌症转移和肿瘤发生的抗肿瘤作用中扮演重要角色ꎬ这一点现在被越来越多的人所了解ꎮβ亚基的表达量在肿瘤中也发生了变化ꎬ已经有许多报道证实Ｎａ＋/Ｋ＋－ＡＴＰａｓｅ的β１亚基在人上皮癌细胞中表达下调ꎮＥｓｐｉｎｅｄａ等[３４]指出ꎬ当肿瘤细胞下调β１表达时ꎬ会显著减少钙粘蛋白表达ꎬ这促使肿瘤细胞彼此相互分离ꎬ有利于它们的迁移和转移ꎮ因此ꎬβ１亚基的下调似乎是许多上皮癌细胞变得独立侵袭的必要条件ꎮ此外ꎬ有研究报道β亚基的表观遗传调控ꎬ即ＡＴＰ１Ｂ１甲基化下调β亚基的表达能促进肾癌细胞的生长ꎬ强心苷类药物由于能抑制Ｎａ＋/Ｋ＋－ＡＴＰａｓｅ活性而被证明对癌细胞具有抗增殖作用ꎮ除了已发表文章外ꎬ也有许多专利强调了Ｎａ＋/Ｋ＋－ＡＴＰａｓｅ作为未来抗肿瘤靶点的可能性ꎬＲａｊａｓｅｋａｒａｎ报告发现ꎬ膀胱癌早期阶段Ｎａ＋/Ｋ＋－ＡＴＰａｓｅ蛋白的总体表达水平较低ꎬ随着肿瘤的进展ꎬ表达水平会增加ꎮα亚基高表达和β亚基低表达的患者有早期复发的高风险ꎻ而具有低表达α亚基和高表达β亚基的患者具有较长的无复发时间ꎬ这表明Ｎａ＋/Ｋ＋－ＡＴＰａｓｅ的α和β亚基表达水平是膀胱癌患者复发时间的有效预测因子[３５]ꎮ类似的ꎬ研究人员报道ꎬ在肾透明细胞癌中β亚基表达降低可能与肾透明细胞癌的侵袭性有关[３６]ꎮ相比之下ꎬＶｅｎｔａＮａＭｅｄｉｃａｌＳｙｓｔｅｍｓ发现宫颈组织中Ｎａ＋/Ｋ＋－ＡＴＰａｓｅβ１亚基表达的增加与宫颈从低度到高度发育不良直到宫颈癌的发病进展相关ꎬ可作为宫颈癌发病的生物标志物[３７]ꎮ总之ꎬＮａ＋/Ｋ＋－ＡＴＰａｓｅ的表达在大多数癌组织中发生改变似乎是非常明显的ꎬ因此可以作为一种有用的新的生物标志物和治疗靶点ꎮ３㊀Ｎａ＋/Ｋ＋－ＡＴＰａｓｅ对肿瘤的促进作用由于存在结构上的突变以及酶活性的波动ꎬＮａ＋/Ｋ＋－ＡＴＰａｓｅ参与一些疾病如糖尿病ꎬ阿尔茨海默病的发病机制[１７]ꎬ最近ꎬ逐渐有报道发现Ｎａ＋/Ｋ＋－ＡＴＰａｓｅ也参与促进肿瘤生长的部分机制ꎬ影响包括上皮间质细胞转化(ＥＭＴ)㊁丝裂原活化蛋白激酶(ＭＡＰＫ)级联过程㊁磷酸肌醇３激酶(ＰＩ３Ｋ)/蛋白激酶Ｂ(Ａｋｔ)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(ｍＴＯＲ)信号通路㊁胆固醇稳态等细胞过程和途径ꎮ上皮间质转化是肿瘤发展和侵袭的关键过程ꎬＮａ＋/Ｋ＋－ＡＴＰａｓｅ的β亚基已被证明有助于调节特定细胞上皮极化的完整性ꎬ相邻的β亚基之间形成二聚体ꎬ通过β－β桥增强细胞间的黏附ꎮ当β亚基的表达增高时ꎬ钙黏蛋白(Ｅ－ｃａｄ￣ｈｅｒｉｎ)的活性降低ꎬ从而导致ＥＭＴ和癌症的侵袭和转移[３８]ꎮＭＡＰＫ家族与细胞周期ꎬ增殖凋亡相关ꎬ研究发现ꎬ强心苷类药物Ｇ毒毛旋花苷能通过抑制ｖ－ｓｒｃ禽肉瘤Ｎａ＋/Ｋ＋－ＡＴＰａｓｅ活性活化ｐ３８ＭＡＰＫꎬ从而上调ｐ５３等转录因子的表达[３９]ꎬ此外ꎬＭＡＰＫ信号通路的激活还能促进核因子－κＢ(ＮＦ－κＢ)表达ꎬ从而激发Ｆａｓ介导的细胞凋亡[４０]ꎮＰＩ３Ｋ/Ａｋｔ/ｍＴＯＲ通路参与调节细胞增殖ꎬ凋亡和自噬ꎬＢａｒｗｅ等[４１]发现ＰＩ３Ｋ的激活与Ｎａ＋/Ｋ＋－ＡＴＰａｓｅ的α亚基的表达增加有关ꎬ即调节亚基ｐ８５结合到α亚基上富脯氨酸结构域从而促进ＰＩ３Ｋ活性上调ꎬ从而调节细胞自噬ꎬ促进肿瘤细胞存活ꎮ胆固醇也能与催化亚基－α亚基结合ꎬ两者的相互作用已被证明可以调节胆固醇的运输㊁合成和代谢ꎮα亚基能与小窝蛋白－１的Ｎ端结构域相互作用从而调节细胞膜上小窝蛋白－１和胆固醇的含量ꎬ钠钾泵表达降低破坏了对质膜上胆固醇运输和合成的调节ꎬＮａ＋/Ｋ＋－ＡＴＰａｓｅ作为胆固醇代谢调节剂的作用可能是肿瘤生长如乳腺癌的关键因素[４２－４３]ꎮ此外ꎬ也有文献报道抑制Ｎａ＋/Ｋ＋－ＡＴＰａｓｅ后影响细胞钙稳态ꎬ从而诱导肿瘤细胞的程序性死亡[４４]ꎮ在耐药的胶质母细胞瘤细胞中ꎬ当Ｇ毒毛旋花苷上调ＡＴＰ１Ａ２和ＡＴＰ１Ａ３表达时ꎬ可使肿瘤细胞对化疗药物敏感ꎬ并诱导细胞坏死[４５]ꎮ４㊀Ｎａ＋/Ｋ＋－ＡＴＰａｓｅ抑制剂作为新型抗肿瘤药物的临床前研究４.１㊀强心苷类药物结构特征㊀强心苷类化合物包括强心甾和蟾蜍二烯内酯ꎬ是一类１７位有内酯结构的甾体核结构ꎮ由于甾核骨架和１７位内酯结构上取代基以及空间立体结构具有多样性ꎬ强心苷类药物具有多种类型[４６]ꎬ其中最广为人知的有地高辛ꎬ洋地黄毒苷ꎬＧ毒毛旋花苷ꎬ夹竹桃苷等ꎮ自从１７８５年ＳｉｒＷｉｌｌｉａｍＷｉｔｈｅｒｉｎｇ出版«关于毛地黄的记述»开始ꎬ临床医生就使用洋地黄制剂来治疗水肿㊁心律不齐和慢性心力衰竭ꎮ强心苷类药物ꎬ尤其是洋地黄现在仍广泛用于治疗充血性心力衰竭和心律失常的正性肌力药物[４７]ꎮ目前人们普遍认为强心苷类药物介导的效应主要是由该类药物与Ｎａ＋/Ｋ＋－ＡＴＰａｓｅ相互作用并抑制Ｎａ＋/Ｋ＋－ＡＴＰａｓｅ活性产生的[４８]ꎮ４.２㊀强心苷类药物的抗肿瘤作用㊀近些年有关强心苷类药物抗肿瘤作用的报道显著增加ꎬ除了对肿瘤细胞有效的抗增殖作用之外ꎬ令人感兴趣的是它们在对正常细胞和肿瘤细胞表现出不同的作用ꎮ对于正常细胞ꎬ强心苷类药物是没有活性的ꎬ甚至表现出促增殖作用ꎬ但却能选择性诱导肿瘤细胞凋亡[２６]ꎮＪｉａｎｇ等[４９]发现强心苷蟾毒灵能通过抑制ｐ３８ＭＡＰＫ信号通路在非小细胞肺癌细胞中展示出抗增殖活性ꎮ原海葱苷Ａ是另一种强心苷ꎬ已被证明可以抑制胶质母细胞瘤增殖和诱导其凋亡ꎬ同时提高小鼠的存活率[５０]ꎮ强心苷还能通过不同机制对乳腺癌的生长具有抑制作用ꎬＫｏｍｅｔｉａｎｉ等[５１]发现Ｇ毒毛旋花苷通过抑制Ｎａ＋/Ｋ＋－ＡＴＰａｓｅ介导的表皮生长因子受体(Ｓｒｃ/ＥＧＦＲ)和ｐ４２/４４丝裂原活化蛋白激酶的激活ꎬ调节ｐ２１Ｃｉｐ介导的通路ꎬ导致雌激素受体阴性的人乳腺癌细胞系ＭＤＡ－ＭＢ－４３５的细胞周期阻滞ꎬ抑制细胞生长ꎮ４.３㊀新型Ｎａ＋/Ｋ＋－ＡＴＰａｓｅ抑制剂的研究进展㊀除了大量关于新的潜在抗肿瘤强心苷的分离和鉴定的科学文献外ꎬ在强心苷结构基础上ꎬ设计优化新的Ｎａ＋/Ｋ＋－ＡＴＰａｓｅ抑制剂和配体作为潜在抗肿瘤药物的报道也显著增加ꎮ在分析了Ｎａ＋/Ｋ＋－ＡＴＰａｓｅ的结合口袋和具代表性的强心苷药物的结构特点后ꎬ有文献确定了导致抗肿瘤活性的关键Ｎａ＋/Ｋ＋－ＡＴＰａｓｅ抑制剂结构特征:需有１０位的醛基(－ＣＯＨ)ꎻ１４位的－羟基(氢键供体基团)ꎬ环Ｃ和环Ｄ的顺式构型ꎻ和位于１７位的强心甾或蟾蜍二烯内酯基团ꎬ这些是Ｎａ＋/Ｋ＋－ＡＴＰａｓｅ抑制剂对肿瘤生长具有高抑制作用所必需的[２６ꎬ５２]ꎮ如Ｌｅｆｒａｎｃ等[５３]发现ＵＮＢＳ１４５０(一种新型的强心苷类药物)能显著降低胶质瘤细胞内ＡＴＰ浓度ꎬ扰乱肌动蛋白细胞骨架ꎬ导致胶质瘤细胞自噬死亡ꎮＰＢＩ－０５２０４作为一种夹竹桃苷的结构改造物ꎬ在与吉西他滨联合治疗后ꎬ不仅降低了夹竹桃苷的细胞毒性作用ꎬ还提高了吉西他滨的抗肿瘤活性[５４]ꎮ５㊀讨论与展望Ｎａ＋/Ｋ＋－ＡＴＰａｓｅ作为一种遍布全身的重要酶类ꎬ当结构功能发生改变时ꎬ会引起肿瘤等疾病ꎮＮａ＋/Ｋ＋－ＡＴＰａｓｅ最初被定义为细胞渗透压调节器ꎬ但越来越多的研究证明它还能参与细胞内各种信号传导途径并调节它们的功能ꎮ近些年来逐渐有报道将其作为治疗癌症的潜在药物靶点ꎮ尽管Ｎａ＋/Ｋ＋－ＡＴＰａｓｅ的整体表达被认为是癌症复发潜在风险预测因子ꎬ但预测方式具体还是表现在不同亚基的表达水平ꎮ如高表达α亚基低表达β亚基被认为是肿瘤复发的高风险因素ꎬ低α表达水平高β表达水平的患者肿瘤复发风险低ꎮα亚基作为信号传导元件ꎬ能调控影响肿瘤细胞生存和生长多种通路ꎬ越来越受到人们的关注ꎮ但有关β亚基在肿瘤调控中发挥的作用的研究较少ꎬβ亚基在抑制肿瘤细胞黏附和肿瘤发展中的作用也尚未清楚ꎬ未来对β亚基与肿瘤的关系的研究可能会揭示其与不同肿瘤的相关性ꎬ进一步揭示Ｎａ＋/Ｋ＋－ＡＴＰａｓｅ在肿瘤进展中发挥的整体作用ꎮ尽管作为天然存在的Ｎａ＋/Ｋ＋－ＡＴＰａｓｅ的抑制剂ꎬ强心苷类药物已经被用于治疗心功能不全很长一段时间了ꎬ但是它们在肿瘤治疗中的作用也是不可忽视的ꎮ了解强心苷在癌症发展和生长过程中的作用可以帮助我们进一步了解如何治疗癌症ꎮ最新研究认为强心苷类药物通过改变细胞内外的离子浓度来抑制Ｎａ＋/Ｋ＋－ＡＴＰａｓｅ的功能ꎬ也许只是其众多抑制肿瘤生长的机制之一ꎮ研究发现ꎬ强心苷可通过内源性和外源性途径以及自噬途径触发癌细胞凋亡ꎬ可作为另一种抗肿瘤机制ꎮ有关强心苷类药物的抗肿瘤活性机制还需进一步研究ꎮ迄今为止ꎬ关于使用强心苷作为抗癌药物的所有公开临床数据都限于实体瘤ꎮ这些临床研究大多样本量较小ꎬ并且没有随机对照ꎬ因此ꎬ数据需进一步证实ꎮ系统药理学的方法能在分子和细胞水平上更好地理解强心苷如何杀死肿瘤细胞ꎬ这可能有助于确定强心苷干预的主要靶点和信号通路ꎮ参考文献:[１]㊀ＬÓＰＥＺ－ＭＡＲＱＵÉＳＲＬꎬＰＯＵＬＳＥＮＬＲꎬＢＡＩＬＬＹＡꎬｅｔａｌ.ＳｔｒｕｃｔｕｒｅａｎｄｍｅｃｈａｎｉｓｍｏｆＡＴＰ－ｄｅｐｅｎｄｅｎｔｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐｉｄｔｒａｎｓ￣ｐｏｒｔｅｒｓ[Ｊ].ＢｉｏｃｈｉｍＢｉｏｐｈｙｓＡｃｔａꎬ２０１５ꎬ１８５０(３):４６１－４７５. [２]ＣＵＩＸＹꎬＸＩＥＺＪ.ＰｒｏｔｅｉｎＩｎｔｅｒａｃｔｉｏｎａｎｄＮａ/Ｋ－ＡＴＰａｓｅ－ＭｅｄｉａｔｅｄＳｉｇｎａｌＴｒａｎｓｄｕｃｔｉｏｎ[Ｊ].Ｍｏｌｅｃｕｌｅｓꎬ２０１７ꎬ２２(６):９９０. [３]ＧＩＡＣＯＭＥＬＬＯＭꎬＤＥＭＡＲＩＯＡꎬＳＣＡＲＬＡＴＴＩＣꎬｅｔａｌ.ＰｌａｓｍａｍｅｍｂｒａｎｅｃａｌｃｉｕｍＡＴＰａｓｅｓａｎｄｒｅｌａｔｅｄｄｉｓｏｒｄｅｒｓ[Ｊ].ＩｎｔＪＢｉｏｃｈｅｍＣｅｌｌＢｉｏｌꎬ２０１３ꎬ４５(３):７５３－７６２.[４]ＰＡＬＭＧＲＥＮＭＧꎬＮＩＳＳＥＮＰ.Ｐ－ｔｙｐｅＡＴＰａｓｅｓ[Ｊ].ＡｎｎｕＲｅｖＢｉｏｐｈｙｓꎬ２０１１(４０):２４３－２６６.[５]ＶＥＤＯＶＡＴＯＮꎬＧＡＤＳＢＹＤＣ.ＲｏｕｔｅꎬｍｅｃｈａｎｉｓｍꎬａｎｄｉｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓｏｆｐｒｏｔｏｎｉｍｐｏｒｔｄｕｒｉｎｇＮａ＋/Ｋ＋ｅｘｃｈａｎｇｅｂｙＮａｔｉｖｅＮａ＋/Ｋ＋－ＡＴＰａｓｅｐｕｍｐｓ[Ｊ].ＪＧｅｎＰｈｙｓｉｏｌꎬ２０１４ꎬ１４３(４):４４９－４６４.[６]ＳＲＩＫＡＮＴＨＡＮＫꎬＳＨＡＰＩＲＯＪＩꎬＳＯＤＨＩＫ.ＴｈｅＲｏｌｅｏｆＮａ/Ｋ－ＡＴＰａｓｅＳｉｇｎａｌｉｎｇｉｎＯｘｉｄａｔｉｖｅＳｔｒｅｓｓＲｅｌａｔｅｄｔｏＯｂｅｓｉｔｙａｎｄＣａｒ￣ｄｉｏｖａｓｃｕｌａｒＤｉｓｅａｓｅ[Ｊ].Ｍｏｌｅｃｕｌｅｓꎬ２０１６ꎬ２１(９):１１７２. [７]ＷＡＮＧＸꎬＬＩＵＪꎬＤＲＵＭＭＯＮＤＣＡꎬｅｔａｌ.Ｓｏｄｉｕｍｐｏｔａｓｓｉｕｍａ￣ｄｅｎｏｓｉｎｅｔｒｉｐｈｏｓｐｈａｔａｓｅ(Ｎａ/Ｋ－ＡＴＰａｓｅ)ａｓａｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｔａｒｇｅｔｆｏｒｕｒｅｍｉｃｃａｒｄｉｏｍｙｏｐａｔｈｙ[Ｊ].ＥｘｐｅｒｔＯｐｉｎＴｈｅｒＴａｒｇｅｔｓꎬ２０１７ꎬ２１(５):５３１－５４１.[８]ＯＲＬＯＶＳＮꎬＬＡＪꎬＳＭＯＬＹＡＮＩＮＯＶＡＬＶꎬｅｔａｌ.Ｎａ＋ꎬＫ＋－ＡＴＰａｓｅａｓａＴａｒｇｅｔｆｏｒＴｒｅａｔｍｅｎｔｏｆＴｉｓｓｕｅＦｉｂｒｏｓｉｓ[Ｊ].ＣｕｒｒＭｅｄＣｈｅｍꎬ２０１９ꎬ２６(３):５６４－５７５.[９]ＢＡＢＵＬＡＰꎬＭＡＳＡＲＩＫＭꎬＡＤＡＭＶꎬｅｔａｌ.ＦｒｏｍＮａ＋/Ｋ＋－ＡＴＰａｓｅａｎｄｃａｒｄｉａｃｇｌｙｃｏｓｉｄｅｓｔｏｃｙｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙａｎｄｃａｎｃｅｒｔｒｅａｔｍｅｎｔ[Ｊ].ＡｎｔｉｃａｎｃｅｒＡｇｅｎｔｓＭｅｄＣｈｅｍꎬ２０１３ꎬ１３(７):１０６９－１０８７. [１０]ＳＯＮＧＹꎬＬＥＥＳＹꎬＫＩＭＳꎬｅｔａｌ.ＩｎｈｉｂｉｔｏｒｓｏｆＮａ＋/Ｋ＋ＡＴＰａｓｅｅｘ￣ｈｉｂｉｔａｎｔｉｔｕｍｏｒｅｆｆｅｃｔｓｏｎｍｕｌｔｉｃｅｌｌｕｌａｒｔｕｍｏｒｓｐｈｅｒｏｉｄｓｏｆｈｅｐａｔｏ￣ｃｅｌｌｕｌａｒｃａｒｃｉｎｏｍａ[Ｊ].ＳｃｉＲｅｐꎬ２０２０ꎬ１０(１):５３１８.[１１]ＪＵＮＧＪꎬＲＹＵＳꎬＫＩＩＡꎬｅｔａｌ.ＳｏｍｅＢｉｏｌｏｇｉｃａｌＣｏｎｓｅｑｕｅｎｃｅｓｏｆｔｈｅＩｎｈｉｂｉｔｉｏｎｏｆＮａꎬＫ－ＡＴＰａｓｅｂｙＴｒａｎｓｌａｔｉｏｎａｌｌｙＣｏｎｔｒｏｌｌｅｄＴｕｍｏｒＰｒｏｔｅｉｎ(ＴＣＴＰ)[Ｊ].ＩｎｔＪＭｏｌＳｃｉꎬ２０１８ꎬ１９(６):１６５７. [１２]ＣＨＡＫＫＯＵＲＭꎬＫＲＥＹＤＩＹＹＥＨＳ.ＦＴＹ７２０ＰＵｐｒｅｇｕｌａｔｅｓｔｈｅＮａ＋/Ｋ＋ＡＴＰａｓｅｉｎＨｅｐＧ２ＣｅｌｌｓｂｙＡｃｔｉｖａｔｉｎｇＳ１ＰＲ３ａｎｄＩｎｄｕｃｉｎｇＰＧＥ２Ｒｅｌｅａｓｅ[Ｊ].ＣｅｌｌＰｈｙｓｉｏｌＢｉｏｃｈｅｍꎬ２０１９ꎬ５３(３):５１８－５３１.[１３]ＢＡＮＥＲＪＥＥＭꎬＣＵＩＸꎬＬＩＺꎬｅｔａｌ.Ｎａ/Ｋ－ＡＴＰａｓｅＹ２６０Ｐｈｏｓｐｈｏ￣ｒｙｌａｔｉｏｎ－ｍｅｄｉａｔｅｄＳｒｃＲｅｇｕｌａｔｉｏｎｉｎＣｏｎｔｒｏｌｏｆＡｅｒｏｂｉｃＧｌｙｃｏｌｙｓｉｓａｎｄＴｕｍｏｒＧｒｏｗｔｈ[Ｊ].ＳｃｉＲｅｐꎬ２０１８ꎬ８(１):１２３２２.[１４]ＭＯＲＴＨＪＰꎬＰＥＤＥＲＳＥＮＢＰꎬＴＯＵＳＴＲＵＰ－ＪＥＮＳＥＮＭＳꎬｅｔａｌ.Ｃｒｙｓｔａｌｓｔｒｕｃｔｕｒｅｏｆｔｈｅｓｏｄｉｕｍ－ｐｏｔａｓｓｉｕｍｐｕｍｐ[Ｊ].Ｎａｔｕｒｅꎬ２００７ꎬ４５０(７１７２):１０４３－１０４９.[１５]ＭＯＲＴＨＪＰꎬＰＯＵＬＳＥＮＨꎬＴＯＵＳＴＲＵＰ－ＪＥＮＳＥＮＭＳꎬｅｔａｌ.ＴｈｅｓｔｒｕｃｔｕｒｅｏｆｔｈｅＮａ＋ꎬＫ＋－ＡＴＰａｓｅａｎｄｍａｐｐｉｎｇｏｆｉｓｏｆｏｒｍｄｉｆｆｅｒ￣ｅｎｃｅｓａｎｄｄｉｓｅａｓｅ－ｒｅｌａｔｅｄｍｕｔａｔｉｏｎｓ[Ｊ].ＰｈｉｌｏｓＴｒａｎｓＲＳｏｃＬｏｎｄＢＢｉｏｌＳｃｉꎬ２００９ꎬ３６４(１５１４):２１７－２２７.[１６]ＫＡＮａＩＲꎬＯＧＡＷＡＨꎬＶＩＬＳＥＮＢꎬｅｔａｌ.ＣｒｙｓｔａｌｓｔｒｕｃｔｕｒｅｏｆａＮａ＋－ｂｏｕｎｄＮａ＋ꎬＫ＋－ＡＴＰａｓｅｐｒｅｃｅｄｉｎｇｔｈｅＥ１Ｐｓｔａｔｅ[Ｊ].Ｎａｔｕｒｅꎬ２０１３ꎬ５０２(７４７０):２０１－２０６.[１７]ＤＵＲＬＡＣＨＥＲＣＴꎬＣＨＯＷＫꎬＣＨＥＮＸＷꎬｅｔａｌ.ＴａｒｇｅｔｉｎｇＮａ＋/Ｋ＋－ｔｒａｎｓｌｏｃａｔｉｎｇａｄｅｎｏｓｉｎｅｔｒｉｐｈｏｓｐｈａｔａｓｅｉｎｃａｎｃｅｒｔｒｅａｔｍｅｎｔ[Ｊ].ＣｌｉｎＥｘｐＰｈａｒｍａｃｏｌＰｈｙｓｉｏｌꎬ２０１５ꎬ４２(５):４２７－４４３.[１８]ＳＨＩＮＯＤＡＴꎬＯＧＡＷＡＨꎬＣＯＲＮＥＬＩＵＳＦꎬｅｔａｌ.Ｃｒｙｓｔａｌｓｔｒｕｃｔｕｒｅｏｆｔｈｅｓｏｄｉｕｍ－ｐｏｔａｓｓｉｕｍｐｕｍｐａｔ２.４Ａｒｅｓｏｌｕｔｉｏｎ[Ｊ].Ｎａｔｕｒｅꎬ２００９ꎬ４５９(７２４５):４４６－４５０.[１９]ＫＡＰＬＡＮＪＨ.ＢｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙｏｆＮａꎬＫ－ＡＴＰａｓｅ[Ｊ].ＡｎｎｕＲｅｖＢｉｏ￣ｃｈｅｍꎬ２００２(７１):５１１－５３５.[２０]ＪＩＭＥＮＥＺＴꎬＭＣＤＥＲＭＯＴＴＪＰꎬＳÁＮＣＨＥＺＧꎬｅｔａｌ.ＮａꎬＫ－ＡＴＰａｓｅａｌｐｈａ４ｉｓｏｆｏｒｍｉｓｅｓｓｅｎｔｉａｌｆｏｒｓｐｅｒｍｆｅｒｔｉｌｉｔｙ[Ｊ].ＰｒｏｃＮａｔｌＡｃａｄＳｃｉＵＳＡꎬ２０１１ꎬ１０８(２):６４４－６４９.[２１]ＣＨＥＵＮＧＪＹꎬＺＨＡＮＧＸＱꎬＳＯＮＧＪꎬｅｔａｌ.ＣｏｏｒｄｉＮａｔｅｄｒｅｇｕｌａｔｉｏｎｏｆｃａｒｄｉａｃＮａ＋/Ｃａ２＋ｅｘｃｈａｎｇｅｒａｎｄＮａ＋－Ｋ＋－ＡＴＰａｓｅｂｙｐｈｏｓｐｈｏｌｅｍｍａｎ(ＦＸＹＤ１)[Ｊ].ＡｄｖＥｘｐＭｅｄＢｉｏｌꎬ２０１３(９６１):１７５－１９０.[２２]ＧＥＥＲＩＮＧＫ.ＦｕｎｃｔｉｏｎｏｆＦＸＹＤｐｒｏｔｅｉｎｓꎬｒｅｇｕｌａｔｏｒｓｏｆＮａꎬＫ－ＡＴ￣Ｐａｓｅ[Ｊ].ＪＢｉｏｅｎｅｒｇＢｉｏｍｅｍｂｒꎬ２００５ꎬ３７(６):３８７－３９２.[２３]ＭＡＲＣＵＳＥＡꎬＴＯＫＨＴＡＥＶＡＥꎬＪＩＭＥＮＥＺＪＬꎬｅｔａｌ.Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒｐｙｌｏｒｉｉｎｆｅｃｔｉｏｎｉｍｐａｉｒｓｃｈａｐｅｒｏｎｅ－ａｓｓｉｓｔｅｄｍａｔｕｒａｔｉｏｎｏｆＮａ－Ｋ－ＡＴＰａｓｅｉｎｇａｓｔｒｉｃｅｐｉｔｈｅｌｉｕｍ[Ｊ].ＡｍＪＰｈｙｓｉｏｌＧａｓｔｒｏｉｎｔｅｓｔＬｉｖｅｒＰｈｙｓｉｏｌꎬ２０２０ꎬ３１８(５):Ｇ９３１－Ｇ９４５.[２４]ＢＡＲＴＬＥＴＴＤＥꎬＭＩＬＬＥＲＲＢꎬＴＨＩＥＳＦＥＬＤＴＳꎬｅｔａｌ.ＴｈｅＲｏｌｅｏｆＮａ/Ｋ－ＡＴＰａｓｅＳｉｇｎａｌｉｎｇｉｎＯｘｉｄａｔｉｖｅＳｔｒｅｓｓＲｅｌａｔｅｄｔｏＡｇｉｎｇ:Ｉｍ￣ｐｌｉｃａｔｉｏｎｓｉｎＯｂｅｓｉｔｙａｎｄＣａｒｄｉｏｖａｓｃｕｌａｒＤｉｓｅａｓｅ[Ｊ].ＩｎｔＪＭｏｌＳｃｉꎬ２０１８ꎬ１９(７):２１３９.[２５]ＭＡＸＷＥＬＬＫＤꎬＣＨＵＡＮＧＪꎬＣＨＡＵＤＨＲＹＭꎬｅｔａｌ.ＴｈｅｐｏｔｅｎｔｉａｌｒｏｌｅｏｆＮａ－Ｋ－ＡＴＰａｓｅａｎｄｉｔｓｓｉｇｎａｌｉｎｇｉｎｔｈｅｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔｏｆａｎｅ￣ｍｉａｉｎｃｈｒｏｎｉｃｋｉｄｎｅｙｄｉｓｅａｓｅ[Ｊ].ＡｍＪＰｈｙｓｉｏｌＲｅＮａｌＰｈｙｓｉｏｌꎬ２０２１ꎬ３２０(２):Ｆ２３４－Ｆ２４２.[２６]ＭＩＪＡＴＯＶＩＣＴꎬＩＮＧＲＡＳＳＩＡＬꎬＦＡＣＣＨＩＮＩＶꎬｅｔａｌ.Ｎａ＋/Ｋ＋－ＡＴ￣Ｐａｓｅａｌｐｈａｓｕｂｕｎｉｔｓａｓｎｅｗｔａｒｇｅｔｓｉｎａｎｔｉｃａｎｃｅｒｔｈｅｒａｐｙ[Ｊ].ＥｘｐｅｒｔＯｐｉｎＴｈｅｒＴａｒｇｅｔｓꎬ２００８ꎬ１２(１１):１４０３－１４１７.[２７]ＧＡＢＬＥＭＥꎬＡＢＤＡＬＬＡＨＳＬꎬＮａＪＪＡＲＳＭꎬｅｔａｌ.Ｄｉｇｉｔａｌｉｓ－ｉｎ￣ｄｕｃｅｄｃｅｌｌｓｉｇＮａｌｉｎｇｂｙｔｈｅｓｏｄｉｕｍｐｕｍｐ:ｏｎｔｈｅｒｅｌａｔｉｏｎｏｆＳｒｃｔｏＮａ＋/Ｋ＋－ＡＴＰａｓｅ[Ｊ].ＢｉｏｃｈｅｍＢｉｏｐｈｙｓＲｅｓＣｏｍｍｕｎꎬ２０１４ꎬ４４６(４):１１５１－１１５４.[２８]ＭＩＪＡＴＯＶＩＣＴꎬＲＯＬＡＮＤＩꎬＶＡＮＱＵＡＱＵＥＢＥＫＥＥꎬｅｔａｌ.Ｔｈｅａｌ￣ｐｈａ１ｓｕｂｕｎｉｔｏｆｔｈｅｓｏｄｉｕｍｐｕｍｐｃｏｕｌｄｒｅｐｒｅｓｅｎｔａｎｏｖｅｌｔａｒｇｅｔｔｏｃｏｍｂａｔｎｏｎ－ｓｍａｌｌｃｅｌｌｌｕｎｇｃａｎｃｅｒｓ[Ｊ].ＪＰａｔｈｏｌꎬ２００７ꎬ２１２(２):１７０－１７９.[２９]ＳＥＬＩＧＳＯＮＤＢꎬＲＡＪＡＳＥＫＡＲＡＮＳＡꎬＹＵＨꎬｅｔａｌ.ＮａꎬＫ－ａｄｅｎｏ￣ｓｉｎｅｔｒｉｐｈｏｓｐｈａｔａｓｅａｌｐｈａ１－ｓｕｂｕｎｉｔｐｒｅｄｉｃｔｓｓｕｒｖｉｖａｌｏｆｒｅＮａｌｃｌｅａｒｃｅｌｌｃａｒｃｉｎｏｍａ[Ｊ].ＪＵｒｏｌꎬ２００８ꎬ１７９(１):３３８－３４５.[３０]ＬＥＦＲＡＮＣＦꎬＭＩＪＡＴＯＶＩＣＴꎬＫＯＮＤＯＹꎬｅｔａｌ.Ｔａｒｇｅｔｉｎｇｔｈｅａｌｐｈａ１ｓｕｂｕｎｉｔｏｆｔｈｅｓｏｄｉｕｍｐｕｍｐｔｏｃｏｍｂａｔｇｌｉｏｂｌａｓｔｏｍａｃｅｌｌｓ[Ｊ].Ｎｅｕｒｏｓｕｒｇｅｒｙꎬ２００８ꎬ６２(１):２１１－２２１.[３１]ＭＡＴＨＩＥＵＶꎬＰＩＲＫＥＲＣꎬＭＡＲＴＩＮＤＥＬＡＳＳＡＬＬＥＥꎬｅｔａｌ.Ｔｈｅｓｏｄｉｕｍｐｕｍｐａｌｐｈａ１ｓｕｂ－ｕｎｉｔ:ａｄｉｓｅａｓｅｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎ－ｒｅｌａｔｅｄｔａｒｇｅｔｆｏｒｍｅｔａｓｔａｔｉｃｍｅｌａｎｏｍａｔｒｅａｔｍｅｎｔ[Ｊ].ＪＣｅｌｌＭｏｌＭｅｄꎬ２００９ꎬ１３(９ｂ):３９６０－３９７２.[３２]ＳＡＫＡＩＨꎬＳＵＺＵＫＩＴꎬＭＡＥＤＡＭꎬｅｔａｌ.Ｕｐ－ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎｏｆＮａ＋ꎬＫ＋－ＡＴＰａｓｅａｌｐｈａ３－ｉｓｏｆｏｒｍａｎｄｄｏｗｎ－ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎｏｆｔｈｅａｌｐｈａ１－ｉｓｏ￣ｆｏｒｍｉｎｈｕｍａｎｃｏｌｏｒｅｃｔａｌｃａｎｃｅｒ[Ｊ].ＦＥＢＳＬｅｔｔꎬ２００４ꎬ５６３(１/２/３):１５１－１５４.[３３]ＬＩＺꎬＺＨＡＮＧＺꎬＸＩＥＪＸꎬｅｔａｌ.Ｎａ/Ｋ－ＡＴＰａｓｅｍｉｍｅｔｉｃｐＮａＫｔｉｄｅｐｅｐｔｉｄｅｉｎｈｉｂｉｔｓｔｈｅｇｒｏｗｔｈｏｆｈｕｍａｎｃａｎｃｅｒｃｅｌｌｓ[Ｊ].ＪＢｉｏｌＣｈｅｍꎬ２０１１ꎬ２８６(３７):３２３９４－３２４０３.[３４]ＥＳＰＩＮＥＤＡＣＥꎬＣＨＡＮＧＪＨꎬＴＷＩＳＳＪꎬｅｔａｌ.ＲｅｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＮａꎬＫ－ＡＴＰａｓｅｂｅｔａ１－ｓｕｂｕｎｉｔｂｙｔｈｅｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎｆａｃｔｏｒｓＮａｉｌｉｎｃａｒｃｉ￣ｎｏｍａ[Ｊ].ＭｏｌＢｉｏｌＣｅｌｌꎬ２００４ꎬ１５(３):１３６４－１３７３.[３５]ＲＡＪＡＳＥＫＡＲＡＮＡＫꎬＲＡＪＡＳＥＫＡＲＡＮＳＡ.ＵｓｅｏｆＮａꎬＫ－ＡＴＰａｓｅＡ－ａｎｄＢ－ｓｕｂｕｎｉｔｓｉｎｂｌａｄｄｅｒｃａｎｃｅｒｄｅｔｅｃｔｉｏｎａｎｄｄｒｕｇｓｃｒｅｅｎｉｎｇ:ＥＰ２００３０７４６６７０[Ｐ].２００５－０９－１４.[３６]ＲＡＪＡＳＥＫＡＲＡＮＡＫꎬＲＡＪＡＳＥＫＡＲＡＮＳＡꎬＢＡＮＤＥＲＮＨꎬｅｔａｌ.Ｄｉａｇｎｏｓｉｓｏｆｃｌｅａｒｃｅｌｌｔｙｐｅｒｅｎａｌｃａｒｃｉｎｏｍａ:ＷＯ１９９９００９２０５[Ｐ].１９９９－０２－２５.[３７]ＮＩＴＴＡＨꎬＧＲＯＧＡＮＴＭꎬＭＩＬＬＥＲＰ.Ｎａ＋ꎬＫ＋－ＡＴＰａｓｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｉｎｃｅｒｖｉｃａｌｄｙｓｐｌａｓｉａａｎｄｃａｎｃｅｒ:ＵＳ７８５１１４５[Ｐ/ＯＬ].２０１０－１２－１４].[３８]ＬＡＭＯＵＩＬＬＥＳꎬＸＵＪꎬＤＥＲＹＮＣＫＲ.Ｍｏｌｅｃｕｌａｒｍｅｃｈａｎｉｓｍｓｏｆｅｐ￣ｉｔｈｅｌｉａｌ－ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌｔｒａｎｓｉｔｉｏｎ[Ｊ].ＮａｔＲｅｖＭｏｌＣｅｌｌＢｉｏｌꎬ２０１４ꎬ１５(３):１７８－１９６.[３９]ＹＥＱꎬＬＡＩＦꎬＢＡＮＥＲＪＥＥＭꎬｅｔａｌ.Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｍｕｔａｎｔα１Ｎａ/Ｋ－ＡＴＰａｓｅｄｅｆｅｃｔｉｖｅｉｎｃｏｎｆｏｒｍａｔｉｏｎａｌｔｒａｎｓｉｔｉｏｎａｔｔｅｎｕａｔｅｓＳｒｃ－ｍｅ￣ｄｉａｔｅｄｓｉｇＮａｌｔｒａｎｓｄｕｃｔｉｏｎ[Ｊ].ＪＢｉｏｌＣｈｅｍꎬ２０１３ꎬ２８８(８):５８０３－５８１４.[４０]ＬＩＵＬꎬＺＨＡＯＸꎬＰＩＥＲＲＥＳＶꎬｅｔａｌ.ＡｓｓｏｃｉａｔｉｏｎｏｆＰＩ３Ｋ－Ａｋｔｓｉｇ￣ｎａｌｉｎｇｐａｔｈｗａｙｗｉｔｈｄｉｇｉｔａｌｉｓ－ｉｎｄｕｃｅｄｈｙｐｅｒｔｒｏｐｈｙｏｆｃａｒｄｉａｃｍｙｏ￣ｃｙｔｅｓ[Ｊ].ＡｍＪＰｈｙｓｉｏｌＣｅｌｌＰｈｙｓｉｏｌꎬ２００７ꎬ２９３(５):Ｃ１４８９－Ｃ１４９７.[４１]ＢＡＲＷＥＳＰꎬＡＮＩＬＫＵＭＡＲＧꎬＭＯＯＮＳＹꎬｅｔａｌ.ＮｏｖｅｌｒｏｌｅｆｏｒＮａꎬＫ－ＡＴＰａｓｅｉｎｐｈｏｓｐｈａｔｉｄｙｌｉｎｏｓｉｔｏｌ３－ｋｉｎａｓｅｓｉｇｎａｌｉｎｇａｎｄｓｕｐｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｃｅｌｌｍｏｔｉｌｉｔｙ[Ｊ].ＭｏｌＢｉｏｌＣｅｌｌꎬ２００５ꎬ１６(３):１０８２－１０９４.[４２]ＣＨＥＮＹꎬＣＡＩＴꎬＷＡＮＧＨꎬｅｔａｌ.Ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎｏｆｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｃｈｏ￣ｌｅｓｔｅｒｏｌｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎｂｙＮａ/Ｋ－ＡＴＰａｓｅ[Ｊ].ＪＢｉｏｌＣｈｅｍꎬ２００９ꎬ２８４(２２):１４８８１－１４８９０.[４３]ＣＨＥＮＹꎬＬＩＸꎬＹＥＱꎬｅｔａｌ.Ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎｏｆａｌｐｈａ１Ｎａ/Ｋ－ＡＴＰａｓｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｂｙｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌ[Ｊ].ＪＢｉｏｌＣｈｅｍꎬ２０１１ꎬ２８６(１７):１５５１７－１５５２４.[４４]ＳＩＬＶＡＥꎬＳＯＡＲＥＳ－ＤＡ－ＳＩＬＶＡＰ.ＮｅｗｉｎｓｉｇｈｔｓｉｎｔｏｔｈｅｒｅｇｕｌａｔｉｏｎｏｆＮａ＋ꎬＫ＋－ＡＴＰａｓｅｂｙｏｕａｂａｉｎ[Ｊ].ＩｎｔＲｅｖＣｅｌｌＭｏｌＢｉｏｌꎬ２０１２(２９４):９９－１３２.[４５]ＣＨＥＮＤꎬＳＯＮＧＭꎬＭＯＨＡＭＡＤＯꎬｅｔａｌ.ＩｎｈｉｂｉｔｉｏｎｏｆＮａ＋/Ｋ＋－ＡＴＰａｓｅｉｎｄｕｃｅｓｈｙｂｒｉｄｃｅｌｌｄｅａｔｈａｎｄｅｎｈａｎｃｅｄｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙｔｏｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙｉｎｈｕｍａｎｇｌｉｏｂｌａｓｔｏｍａｃｅｌｌｓ[Ｊ].ＢＭＣＣａｎｃｅｒꎬ２０１４(１４):７１６.[４６]ＭＩＪＡＴＯＶＩＣＴꎬＶＡＮＱＵＡＱＵＥＢＥＫＥＥꎬＤＥＬＥＳＴＢꎬｅｔａｌ.Ｃａｒｄｉｏ￣ｔｏｎｉｃｓｔｅｒｏｉｄｓｏｎｔｈｅｒｏａｄｔｏａｎｔｉ－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全能抗体！膜蛋白内参抗体-钠钾ATP酶免疫印迹是确定样品（如组织匀浆，提取物）中特定蛋白质水平的常用方法。

内参抗体是指示在各个孔中的样品具有相等载量的重要参照。

内参抗体同样还可以指示免疫印迹过程中转膜的效率。

作为广大科研工作者接触最多的实验类型，WB，大家都知道全细胞裂解液，核蛋白，线粒体等等样品应该用什么做内参。

但是说到膜蛋白，似乎很多人都表示不清楚~
膜蛋白应该用什么做内参？
钠钾ATP酶（Sodium Potassium ATPase），钠钾泵（sodium potassium pump）又称钠泵或钠钾ATP酶，它会使细胞外的Na+浓度高于细胞内，当Na+顺着浓度差进入细胞时，会经由本体蛋白质的运载体将不易通过细胞膜的物质以共同运输的方式带入细胞。

此蛋白广泛存在于各类细胞的细胞膜上，被广泛用作为膜蛋白的内参。

目前市面上能提供的钠钾ATP酶抗体有国产分装或原产的，国产分装的钠钾ATP酶抗体在质量稳定性上有不足，并且经过分装以后，其效价也有损失。

而原产于国内实验室的钠钾ATP酶抗体有些具有较好的检测活性，在批次之间的稳定性上较难控制，而国内仅有的少量原产抗体也是多克隆抗体。

至于原装进口供应钠钾ATP酶抗体的进口品牌并不多，仅Abcam、Sigma等等几个品牌能够提供钠钾ATP酶抗体，但是其在性价比上远远不够。

与Abcam一样，Abbkine的钠钾ATP酶抗体的免疫原是钠钾ATP酶蛋白S16位点周围的多肽段免疫而来，经过不断筛选和优化，最终获得此成品，适用于大多数哺乳动物的钠钾ATP酶蛋白。

其价格低廉，其质量也经受过市场检验。

该抗体可以用于WB、IHC、IF、Elisa。

钠钾ATP酶的生物学功能与调节钠钾ATP酶（Na+/K+-ATPase）是所有哺乳动物体内都存在的一种重要膜蛋白质，在其调节下运输的离子包括钠、钾、贝类阳离子和负离子，这种酶的生物学功能和调节功不可忽视。

本文将探讨该酶的功能和调节。

一、酶的功能钠钾ATP酶是一种消耗ATP的离子泵，用于维持细胞内和细胞外的离子浓度差异。

这种差异对于细胞生长、代谢、传递信号以及神经细胞、心肌细胞的正常功能等至关重要。

钠钾ATP酶由两种亚单位组成，α和β。

α亚单位为具有催化活性作用的蛋白质，是跨越细胞膜的导体。

β亚单位则参与调节酶的活性。

在细胞膜上，该酶的α亚单位存在于细胞的外层，β亚单位则位于细胞内的一端。

在酶的催化下，钠离子从细胞内向细胞外被转运，而钾离子则被转运到细胞内。

这种转运是为了维持正常的细胞内外钠离子和钾离子的浓度差异。

这种浓度差异对于神经细胞和心肌细胞的表现极为重要。

例如，当细胞的钠离子浓度高于正常时，人体的神经细胞和心肌细胞将被高度兴奋，这会导致人体出现抽搐和心律失常等症状。

二、调节酶的功能如前所述，钠钾ATP酶的β亚单位参与调节酶的活性。

这种调节包括上调或下调酶的活性。

1.下调酶的活性下行调节是酶被磷酸化所致。

β亚单位被ATP激酶磷酸化后，细胞的α亚单位结构发生了变化，这就导致了酶的活性下降。

这种下调作用被认为是神经系统抑制细胞兴奋性的机制。

2.上调酶的活性在一些情况下，钠钾ATP酶的活性可以被上调。

这种上调作用是通过β亚单位的解离效应所实现。

β亚单位与α亚单位结合，从而可以增加酶的活性。

这种上调作用被认为对于神经系统兴奋性的刺激是必要的控制机制。

三、控制酶活性的因素很多因素可以影响钠钾ATP酶的活性。

这些因素包括：1. 温度：该酶在一定的温度下具有最佳活性。

当温度过低或过高时，该酶的活性会受到影响。

2. pH值：环境的pH值对酶的活性有直接影响。

当pH值过高或过低时，该酶的活性会受到影响。

3. 离子浓度：离子的浓度对酶的活性也有影响。