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1.目的描述 Waters 高效液相色谱仪标准操作规程。
2.适用范围化验室3.责任者化验员应严格遵照该操作规程 , QC 主管负责监督本规程的实施。
4.定义HPLC High Performance Liquid Chromatography , 高效液相色谱仪。
5.安全注意事项5.1有机溶媒有害健康，各溶剂瓶口应封严。
5.2注意检查废液桶中废液应避光，防止废液桶满外溢。
6.规程6.1.Waters HPLC的组成：贮液器输液泵自动进样器分离柱 (柱温箱 )紫外检测器控制及数据处理系统 (Millennium 32化学工作站 )。
6.2. HPLC系统的打开及关闭顺序6.2.1打开顺序•对于分体式：请按泵、进样器、柱温箱、检测器的顺序打开开关，待各部分分别显示初始化完毕后，最后打开M i l l e nn i um32化学工作站。
泵与色谱工作站的连接：对于 510 泵，因为此泵与色谱工作站是单向联系，如要使泵在 Remote 状态下由工作站控制，首先要在泵的键盘上按 Menu 键，待显示屏切换至 Mode 状态下，其状态是Loca ，按 Edit/Enter 键，在 Local 的L 前有闪动的光标显示，按键，Local 转换成Rem，再按Edit/Enter 键，此命令已输入进去, 最后按Stop/Run 键，使泵处于Run 状态这时泵和工作站的连接即告成功。
泵的任何动作都可由工作站来控制。
还应注意这一步工作在每次开机时都要进行。
对于 Alliance 2690 系统：先打开 Alliance 2690 主机、检测器电源开关，待初始化完毕后，再进入 Millennium 32化学工作站。
对于流动相的要求：对于液体试剂应尽量采用色谱纯试剂；对于所用到的固体试剂应采用分析纯试剂；对于水，应采用经纯水机处理过的超纯水；流动相在使用前一定要经 0.45m 的滤膜（滤膜分为水相膜与有机相膜，确保使用正确的滤膜，参见附表 ) 过滤、超声真空脱气方可使用，严禁含盐的流动相未经过滤直接使用。
液相色谱质谱操作步骤开机1.将废气管放入窗外；2.将氮气罐拧开（氮气总压不能低于2MPa）,氮气时候足够，注意氮气分压表压力大概在0.6MP左右；3.打开电脑，进行自检；4.打开液相自动进样器，自检后绿灯亮即可完成自检；5.打开泵电源6.接着打开质谱，自检3分钟，听见两次声响后自检成功；7.打开masslynx软件后，抽真空4小时左右，直到真空值为e-5次方，即可使用；调谐1.抽好真空后，准备调谐；2.建立个人“Project”：在Masslynx 界面点File-Project wizard点yes，输入名称，选择建立新的Project；3.进行质谱调谐。
在TQ Detector软件中单击API加氮气，然后调源温度（参考80），去溶剂温度（参考300），点击软件右下角I图标加电压。
等到温度升到设定值后，在Fluidics中设定参数，调谐前，FLOW STATE 先选择waste对管路进行清洗（单击purge the Fluidics system）；清洗完毕后，FLOW STATE 中选择infusion，在Analyser中设定参数：如果选择单MS则参数为15，15，1，Entrance 50，Collision 2，Exit50，并在软件右侧选择母离子扫描，点击start进行调谐，改变cone的电压值，使选择的峰信号达到最高，即达到最优值；若果选择MS-MS扫描，要先打开氩气，参数为13，13，0.5，Entrance -2，Collision-2，Exit 2，点击start进行调谐，点status infusion出现信号，选择子离子扫描，固定corn的电压值，改变collision，使目标峰达到最高即达到最优值。
达到最优值后进行采集，改变DATA 和MASSES参数打开一个色谱图，点小闹钟，在出现的色谱图上点鼠标左键水平向右拖动鼠标，可得到采集母离子或者子离子信息。
要进行下次采集时先关闭上次采集。
第一部分：仪器准备1. 确保waters超高效液相色谱仪处于正常工作状态，检查仪器是否连接电源，是否有故障指示灯显示。
2. 打开色谱仪软件，检查仪器参数设置是否符合实验要求，包括流速、温度、检测波长等。
3. 准备所需的色谱柱、色谱柱连接器、进样器以及其他实验所需的耗材。
第二部分：样品准备1. 准备实验所需的样品，确保样品已经滤过或者处理过以去除杂质。
2. 根据实验要求，将样品溶解在适当的溶剂中，并进行稀释或者稀释。
第三部分：超高效液相色谱仪操作步骤1. 开始操作前，先进行系统平衡。
具体操作步骤为：将色谱柱连接至色谱柱连接器上，然后连接至色谱仪，用洗脱液平衡色谱柱。
2. 设置色谱仪的操作参数，包括流速、温度、检测波长等。
3. 进行样品进样，具体操作步骤为：将进样器连接至色谱仪，将稀释好的样品注入进样器中，设置好进样量。
4. 开始进行实验，监控色谱图谱的变化，记录实验数据。
5. 实验结束后，对色谱柱和色谱仪进行清洗和维护，确保仪器干净、整洁。
第四部分：数据处理和分析1. 对实验获得的数据进行处理和分析，比对标准曲线，计算样品中所含物质的浓度或者纯度。
2. 对实验结果进行统计分析，进行数据呈现，如绘制色谱图谱、制作数据统计图表等。
3. 通过数据处理和分析，得出实验结论，对实验结果进行解释和讨论。
第五部分：实验安全及注意事项1. 在操作过程中，注意个人安全，避免发生化学品溅泼或者接触有害物质。
2. 操作过程中需严格按照实验要求和操作规程进行，如有疑问请及时向实验指导老师或专业人士请教。
3. 实验结束后，及时清理实验台面和仪器设备，妥善存放试剂和耗材。
通过以上步骤的操作，可以保证在使用waters超高效液相色谱仪进行实验时，能够得到准确、可靠的实验结果，为科研工作和学术研究提供有力支持。
第六部分：精密控制与调试1. 在进行实验操作前，要确保色谱仪的各项参数已经精确调试完毕。
这包括流速、温度、压力、检测波长等参数的精准控制。
液相色谱质谱操作步骤1.样品准备首先，根据研究或分析的目的，选择样品和合适的溶剂进行样品准备。
样品应基于研究目的明确的科学假设或问题，并明确提出相关的研究目的。
然后，样品需要被溶解或粉碎，以获得可溶性的化合物。
最后，使用适当的稀释方法来调整样品的浓度，以使其适合于进一步的液相色谱质谱分析。
2.准备液相色谱系统为了获取良好的色谱分离和色谱峰形，必须正确设置液相色谱系统。
这包括选择合适的柱子、进样器和检测器，以及调整测定条件，如流动相组成、流速和泵的压力等。
此外，必须保证连续的供液系统（自动进样器）或手工进样器的准确性和稳定性。
3.样品进样选择正确的进样方式是液相色谱质谱操作的关键。
可以使用自动进样器或手工进样器来引入样品。
在样品进入液相色谱柱之前，通常需要使用进样器进行预处理，如过滤、稀释或多步进样等。
4.进行色谱分离调整流动相的组成和流速，以实现理想的色谱分离。
液相色谱分离是根据样品分子的亲水性、分子量和极性等特性进行的。
时间与色谱分离的效果密切相关，通常可以从柱的后端得到我们感兴趣化合物的纯化物。
5.进行质谱分析在液相色谱分析完成后，将柱出口连接到质谱仪。
质谱仪可以使用电喷雾离子源（ESI）或大气压化学电离源（APCI）来产生离子。
样品分子进入质谱仪后，会发生断裂、离子化和质谱分析过程。
质谱仪的类型和相关参数的选择将根据分析目的和领域的不同而有所不同。
6.数据处理质谱仪通过检测和记录离子信号来产生质谱图。
从质谱图中，可以通过质荷比、离子峰强度和质量/荷比分析找到目标化合物。
此外，还可以使用数据分析软件处理和解释分析结果，例如鉴定目标化合物、量化分析、结构确认等。
7.结果分析和解释根据实验目的，对液相色谱质谱结果进行结果分析和解释。
可以使用质谱库进行结构鉴定，并与已知标准物质进行对照，以确定目标化合物的存在和含量。
总之，液相色谱质谱操作涉及样品准备、液相色谱系统准备、样品进样、色谱分离、质谱分析、数据处理和结果分析等步骤。
waters液质联用色谱仪操作流程下载温馨提示:该文档是我店铺精心编制而成，希望大家下载以后，能够帮助大家解决实际的问题。
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Waters ACQUITY UPLC H-Class_XEVO TQD超高效液相质谱联用仪操作规程一、目的：为了安全、规范、正确使用超高效液相质谱联用仪，特制订本操作规程。
二、范围：仅适用于沃特世超高效液相质谱联用仪。
三、环境要求：温度20 ～25℃，相对湿度低于65% ，最好是恒温、恒湿，远离高电干扰、高振动设备。
四、操作步骤：1.完整开机顺序：开氩气、氮气→开电脑主机→自动进样器→泵→柱温箱→检测器→质谱（注：开电脑主机后等待2～3分钟，开自动进样器后需要开机自检通过后再打开其他模块，质谱开启后需要等待3～5分钟使得自检通过）2.抽真空：桌面上双击Masslynx图标，打开Masslynx软件，点击Mass Tune ，选择Vacuum项下pump开始抽真空。
（注：观察Diagnostics 界面下Turbo Speed 抽真空速度要达到80%以上，压力在1.30-e-5左右。
抽真空的状态至少4小时以上。
）3.日常开机顺序：液相：灌注流动相和洗针液质谱：开气（开氮气）、电（开高压 operate）、流动相（设置流动相流速和比例）五、软件操作规范流程：工作软件操作流程概述：5.1调用已有项目选择C:\Mass Data\*****.PRO项目5.2准备液相一般流程为：准备流动相>准备样品>灌注二元泵>灌注自动进样器>建立液相方法>平衡系统5.3准备质谱一般流程为：计算化合物单同位素质量数>用Intellistart开始调谐>查看Intellistart中自动生成的质谱方法5.4建立液相方法在液相方法编辑窗口（Inlet Method），单击Inlet，编辑参数，单击OK, 选择File > Save As 保存方法。
单击 Load Method ，平衡液相系统。
5.5建立样品列表5.5.1. 在Masslynx 主窗口，选择 File > New 建立一个空白的样品表Sample list或打开一个已有的SAMPLE LIST。
1．适用范围本设备配备ACQUITY UPLC液相色谱仪、TQS MS/MS 质谱仪，适用于食品、药品中各种有机物的定性、定量分析，是一种具有高灵敏度的检测仪器，仪器由主机、计算机和数据处理软件等组成。
2. 职责2.1操作人员按照本规程操作仪器，认真填写实验使用记录。
2.2保管人员负责对仪器进行定期维护和保养。
2.3 科室负责人负责监督检查规程的执行。
3．操作程序日常操作步骤：准备UPLC —→设置样品表—→运行样品—→定量—→打印报告。
注：如果一个星期内不运行样品请不要关质谱仪，使其保持真空。
建立新方法和project的操作步骤：准备UPLC —→建立新的project —→用标准品调谐—→编辑质谱方法—→编辑UPLC方法—→设置样品表—→运行样品—→定量—→打印报告。
3.1开机：3.1.1 彻底开机顺序（仪器已关闭）确定MS及其它仪器电源电缆已连接，开氮气发生器、开氩气，小表<0.1mpa。
打开计算机电源 > 等待windows正常启动 >电脑界面右下角网络图标红叉。
打开UPLC自动进样器电源，等到电脑界面右下角网络图标出现感叹号！。
打开UPLC泵电源，等约30s或者是有响声。
打开质谱电源，等待5min，离子源透视镜里面亮。
打开Masslynx软件，masslynx主界面 -----左侧instrument----Mass tune---界面菜单栏vacuum---pump 同样界面左侧偏上diagnostics---vacuum---analyser MS1 turbo speed[%]要在5分钟内升到80。
至少抽真空4个小时 > 查看真空状态主界面mass console---界面左侧xevo tq ms detector加号展开---ms display > 碰撞室真空度 >达到 7.x e-5mbar 。
3.1.2 日常开机顺序（仪器未关闭）开氮气发生器、开氩气，小表<0.1mpa，打开Masslynx软件，进入工作站。
启动仪器仪器系统控制台做系统的启动Unifi欢迎界面，点击My Work选择Instrument System标签，双击仪器系统进入仪器系统控制台，左边System 菜单选仪器系统,Me 勾选Prime Seal Wash, Run time 设3min.,Menu 选 System Startup. 右边Prime Solvents-Binary Solvent Ma ent Manager 勾选要灌注的管路,右边Prime Solvents-Sample Manager FTN勾选Prime wame wash solvent for:15s,勾选Prime purge solvent for:5 cycles.右边Prime Solvents-Xevo TQs 选择流路为waste,同时质同时质谱保持待机standby 状态(高压不开)右边Equilibrate to Method-Binary Solvent Manager设置设置灌注后的流速和比例.右边Equilibrate to Method-Sample Manager FTN设置设置样品室温度和柱温.状态(开高压)那么系统完成启动后,质谱仪将开氮气,转到操作operate右边Equilibrate to Method-XevoTQ-s设置流路状态.那么右上角点击Start.系统正在做system startup.等待……启动仪器,调谐(手动,自动) 仪器系统控制台做质谱调谐Unifi欢迎界面，点击My Work选择Instrument System标签，双击仪器系统进入仪器系统控制台，左边System菜单选仪器系统,Menu选Setup, Setup选Manual Tuning. 右边是质谱的调谐窗口,可以调整和查看状态.例如,开关高压;开关氮气,碰撞气;选择电离模式,四极杆工作模式;源参数设置及反馈值等等.实时显示最多四个离子质量范围出峰.样品调谐XevoTQs质谱源一般性参数设定:Capillary=3, Sample cone=30, Source offset=60, Source Temperature=150, Desolvation temperature=450, Cone gas flow=150, Desolvation gas flow=1000, Nebulizer gas pressure=7.0, Collision=4, Collision gas flow=0.15点击Fluidcs,可以进行质谱流路设置.建议调谐液用目标化合物标准溶液,浓度不高于100ng/mL,放入A/B/C其中一个流路.先选择Reservoir-Wash(质谱清洗液,用1:1 ACN:Water),purge2次,然后Reservior选择调谐液流路,如A/B/C,purge1次.Flow path选Combined,流动相选择LCMS实验使用的A/B路,一般比例为1:1,流速设0.3ml/min(或LCMS实验用流速),Infusion flow rate设为10ul/min.点击Startinfusion.下方,调整质谱峰观察窗口,仅打开一个峰窗口如Plot1,MS1 scan监测目标母离子,span用10.质谱采集模式用MS,关碰撞气.结合Source标签下的参数,主要调整毛细管电压, 锥孔电压,脱溶剂温度,气流量,将母离子信号调整到最高;母离子质量数精确到小数点后一位,在下方的监测窗口使用Daughter scan,span设大,确保范围包括50Da到母离子质量数,质谱采集模式用MS/MS,开碰撞气.结合Source标签下的参数,主要调整碰撞能量.确定主要碎片,之后改变span为10,确定该主要碎片对应的最佳碰撞能量.全部调整好后点击保存按钮,保存调谐界面参数.如果调谐标准品纯度高,目标母离子峰附近无干扰峰,强度足够,信号稳定,也可以使用自动调谐,做compound optimization.左边质谱仪的Setup里选Compound Optimization.右边点Create,输入化合物名称,单同位素准确分子量(精确到小数点后一位)或分子式,完成后点OK之后,点Settings,输入最小碎片,碎片数目,锥孔电压和碰撞能量优化的范围,完成后点OK点击Start开始,在Optimization对话框输入毛细管电压优化范围,推荐手动设定值,锥孔电压和碰撞能量在一定的范围优化,Sample Reservoir 选择实际调谐液位,最后点击OK等待.优化完成后,结果如图勾选要导出的MRM,并点击Export.在导出结果对话框,输出报告名称,描述,位置.一定勾选Export to,选择一个库.最后点击OK.那么导出到库的化合物方法便可在以后的Analysis method里调用了.运行样品-建Analysis Method（仪器方法）新建一个含仪器方法的Analysis MethodUnifi欢迎界面,点击左上角图标,Create-Analysis Method选Generate an acquire and process method填入Analysis Method名称,描述,文件夹,点Next选择MRM Assay for Regulated Bioanalysis(Small Molecule),点Next选择仪器系统,点NextAnalysis Method总结,点Finish等待Purpose标签,点Manage ComponentsManage Componets部分,可以手动输入组分名,母离子,碎片等信息;更多情况下,点击Import,导入库优化好的组分信息. 初次实验,保留时间可以先不填写,液相方法固定后,再修改保留时间信息.库搜索界面,选择库,点击Search,执行搜索.选中结果表中的组分,点击ImportAnalysis Method界面选Instrument左边选Column Chemistry,右边点Select Column,设置色谱柱,点OK左边选Method Instrument,右边勾选仪器;完成后左边左边选Instrument Method Configuration左边选Binary Solvent Manager,右边设置流动相流路相流路,勾选seal wash,时间间隔设1min,编辑梯度表左边选Sample Manager FTN,右边设置柱温,样品室温室温,洗针液左边选XevoTQs,右边Settings标签设置质谱分辨率,参数可以手动输入,或点击右上角Tools>Update using ,源及能量参数.其中,校正用Instrument代表调用仪器控制台使using manual tuning,即可加载仪器控制台上的参数.制台使用的校正文件;源及能量左边选XevoTQs,右边Experiment标签设置质谱方法,自动添加MRM方法(前提,在Purpose标签设定时,必须调,可以点击Add,手动添加一个MRM方法;或者点击右上角Tools>S 必须调用了库里的component).选中某个Function MRM方法,点击ols>Select from components,点击Modify可以修改方法MRM方法修改界面,start time和end time是该组分的质为电离极性;Ionization type是电离模式;如果勾选了能量电压值;Product输入子离子;建议勾选Auto dwell选Sample List标签左边选Sample List Setup,右边设置初始进样列表格式.你可以点击Add/remove columns,改变列内容,点OK.最后点右上角保存.点OK运行样品-编辑Analysis(处理方法)在Analysis的Review界面可编辑Analysis method Review界面,点击Edit-Analysis methodPurpose标签,选择Manage Components,右边输入正确的保留时间.内标法分析时,内标物需要勾选Internal standard,Use internal standard选择相应内标物组分名称.Purpose标签,选择Default Amounts,右边输入标准品中各组分的浓度水平,点Add可以添加样品类型.内标法分析时,内标物浓度留空Processing标签,选择Smooth,右边平滑方法选Mean,宽度2,次数1,如果峰形差,毛刺多,次数可增加.Processing标签,选择Integrate,右边点Add,可输入积分窗口,点OK. 注意在 Peak rejection 部分, 可以设定最小峰高或面积以避免所选积分区域内不需要的小峰的积分.下一步是Targeted Screen Settings, 可以用蓝色箭头倒退,或选择Home找到回到Home 界面, 点击 Targeted Screen Settings (Target by Retention Time) > Components (components default). 在该窗口可以设定目标峰的积分方式,如closest, 时间单位如 minutes,限定范围如 0.1.在 Target by Mass, 将 0.1改成0.3Da. 该值是MRM通道查找的质量数窗口.点击蓝色返回箭头回到Home界面 (Processing), 选择 Quantitation Settings (Quantify) > Components (Component default). 选择Area作为相应值, (如果需要可以选其它选项).如图Quantitation Settings (Calibrate), 选择合适的参数.点击更新,保存Analysis内部的Analysis method修改,注意,该Analysis method并不会改变原先保存的方法版本.点OK.回到Analysis-Review界面,点Process选Full application processing on all samples那么Analysis-Review显示处理后的数据.可顺序察看Component和Injections的处理结果.如做了标准曲线,结果图如下。
Waters液相色谱仪操作规程1、开机：打开脱气机、泵、检测器和电脑开关（如需控制温度，还要打开柱温箱开关）2、脱气：点击Setup键，—clirect键进入isocratic窗口，拔掉废液出口堵头，接上废液杯，打开排气阀，设定流速5ml/min，调流动相比例，按光标键“▲”至光标出现在A%（甲醇）下方，按数字键，输入输入数字如80，按Enter键，光标出现在B%（水）的下方，按数字键，输入数字如20，按Enter键继续按Enter键，一直到使光标出现在左下角的OFF为止，进行排气（若气泡太多，短时间内排不完就用针管抽气：将旋钮旋至DRAW位，抽气至气泡没有为止，然后将旋钮旋至RUN位），排完气泡后，将流速调至0，关闭排气阀，然后将流速设置为1ml/min。
3、双击桌面上的Empower图标，输入用户名和密码①创建新项目：双击“配置系统”—新项目（选择菜单“文件—新建—项目）—选择父项目（选”项目”文件夹）—“下一步”—表空间100，不选“支持，全面审计追踪”—“下一步”—“下一步”（接受默认选项）—“下一步”（接受默认选项）—“下一步”（接受默认选项）—输入项目名—“完成”②运行样品双击“运行样品”—选“项目名***”—“确定”输入样品名：***功能：方法组：样品瓶：进样体积：进样时间：点击“创建方法组”—“新建”（出现仪器方法编辑器）点击“W600”图标—“流量”—泵模式：等度；流量比例设定—“事件”—启用事件监视—点击“W2998”图标，—点“通用”—启用3D数据设定“采样速度1—2”—“2D通道”—选“通道1”设定波长（编辑完成后保存）击“文件”—“另存为”—输入仪器方法名称—“保存”关闭“仪器方法编辑器”窗口选中所要的“仪器方法”—单击“下一步”—“下一步”—完成在“运行样品”页选中刚建立的“仪器方法”—点“监视器”（观察基线平滑无毛刺）待系统平衡后，即基线平滑无毛刺时，单击“终止监测”图标，（此时屏幕下边显示”系统空闲”),点击“进样图标”，屏幕下部出现“正在设置”—“等待进样”—这是扳动进样阀可以进样—进样后屏幕下边出现“正在运行”③数据处理A 双击“浏览项目”—项目—“确定”B在“通道”中查看，选中要处理的数据C选择“工具”—“查看”—打开（出现“查看”主窗口）D单击菜单中“文件”—“新建”—“处理方法”（出现新处理方法对话框）选使用处理方法向导—“确定”（出现“积分—峰检测1”）—设定“峰宽”—“下一步”（出现“积分—峰检测2”）—设定“阈值”（50）—“下一步”（出现“积分—积分区域”），输入保留时间：“开始时间—结束时间”—“下一步”（出现“积分—剔除峰”）—设定最小面积，最小高度，（或不做任何改动）—“下一步”—“下一步”，选择“否”，在“名称”栏中输入组分的名称（或不改动）—“下一步”—“下一步”输入“方法名”—”完成“。
1．适用范围本设备配备ACQUITY UPLC液相色谱仪、TQS MS/MS 质谱仪，适用于食品、药品中各种有机物的定性、定量分析，是一种具有高灵敏度的检测仪器，仪器由主机、计算机和数据处理软件等组成。
2. 职责2.1操作人员按照本规程操作仪器，认真填写实验使用记录。
2.2保管人员负责对仪器进行定期维护和保养。
2.3 科室负责人负责监督检查规程的执行。
3．操作程序日常操作步骤：准备UPLC —→设置样品表—→运行样品—→定量—→打印报告。
注：如果一个星期内不运行样品请不要关质谱仪，使其保持真空。
建立新方法和project的操作步骤：准备UPLC —→建立新的project —→用标准品调谐—→编辑质谱方法—→编辑UPLC方法—→设置样品表—→运行样品—→定量—→打印报告。
3.1开机：3.1.1 彻底开机顺序（仪器已关闭）确定MS及其它仪器电源电缆已连接，开氮气发生器、开氩气，小表<0.1mpa。
打开计算机电源 > 等待windows正常启动 >电脑界面右下角网络图标红叉。
打开UPLC自动进样器电源，等到电脑界面右下角网络图标出现感叹号！。
打开UPLC泵电源，等约30s或者是有响声。
打开质谱电源，等待5min，离子源透视镜里面亮。
打开Masslynx软件，masslynx主界面 -----左侧instrument----Mass tune---界面菜单栏vacuum---pump 同样界面左侧偏上diagnostics---vacuum---analyser MS1 turbo speed[%]要在5分钟内升到80。
至少抽真空4个小时 > 查看真空状态主界面mass console---界面左侧xevo tq ms detector加号展开---ms display > 碰撞室真空度 >达到 7.x e-5mbar 。
3.1.2 日常开机顺序（仪器未关闭）开氮气发生器、开氩气，小表<0.1mpa，打开Masslynx软件，进入工作站。
液相色谱-质谱联用仪操作规程(Waters Alliance 2695/Quattro Micro)一、准备流动相：配制所需流动相，并且放入超声波中脱气10分钟以上。
标准或样品：按要求对样品进行前处理，配制好标准。
检查：检查氮气压力，气源压力不低于6-7bar(相当于0.6-0.7Mpa)。
检查质谱后机械泵中的泵油不得低于最低线。
检查电源是否连接好。
二、开机打开液相色谱（仪器左侧右上角）和质谱电源（仪器底部）开关。
打开计算机。
仪器完成自检后，双击计算机屏幕上MassLynx图标。
液相部分1. 换上所需流动相：管路A：可换为无机盐溶液或水；管路B：请保持为甲醇；管路C：可换为乙腈；管路D：其他有机溶剂。
2. 控制面板上显示Idle，进入面板控制模式。
按Menu/Status键，进入主显示屏“Status（1）”界面。
3.通过方向键，把主显示屏上的亮白条移到“Degasser”的“Mode”“Off”按“Enter”键，选为“On”，再按“Enter”，打开脱气开关。
4.把亮白条移到“Composition”，设定所用其中一个流动相（例如A）的比例为100％，“Enter”回车后，再按右下角“Direct Functions”键，出现另一对话框，选择“Wet P rime”，设定流速和时间（5mL/min，3min即可），按“O K”键，排出管路气泡。
结束后，在“Composition”中移动亮白条，依次设定所用的其他流动相B、C、D为100％，重复上述操作。
5. 同样，在主显示屏上设定流动相A百分比为100％，进入“Direct Functions”对话框，选择“Purge Injector”，按“Ok”。
之后依次设定流动相B、C、D，重复此操作。
6. 设定流动相比例：把亮白条移到“Composition”，依次设定所用流动相A、B、C、D的百分比，按“Enter”。
7.将柱温箱打开，换上所用色谱柱（注意色谱柱流向），将二极管阵列检测器（PDA）的“out”出口接废液瓶；如未使用PDA，可直接将柱子流出端的PEEK管接废液瓶。
Waters Xevo TQ-S液相色谱/质谱联用仪(三重串连四级杆质谱)操作指南1.适用范围：本使用规范适用于有机室所备有的Waters Xevo TQ-S液相色谱/质谱联用仪(三重串连四级杆质谱)。
2.仪器设备的主要技术指标：1) 梯度性能：保留时间标准偏差（SD）≤0.047min。
2) ESI正离子灵敏度和精密度：测试样品：磺胺二甲基哒嗪(Sulfadimethoxine)，浓度：0.1pg/μl指标要求：平均信噪比（S/N）≥3000:1；平均峰面积≥60000；峰面积相对标准偏差（%RSD）≤3.0%；保留时间标准偏差（SD）≤0.047min测试结果：信噪比（S/N）:4500psi；峰面积：；峰面积相对标准偏差（%RSD）：2.5%；保留时间标准偏差（SD）：0.00min，均符合指标要求。
3) ESI负离子灵敏度和精密度：测试样品：氯霉素(chloramphenicol)，浓度：0.05pg/μl指标要求：平均信噪比（S/N）≥400:1；平均峰面积≥1000；峰面积相对标准偏差（%RSD）≤3.0%；保留时间标准偏差（SD）≤0.047min测试结果：信噪比（S/N）:520psi；峰面积：1500；峰面积相对标准偏差（%RSD）：2.8%；保留时间标准偏差（SD）：0.00min，均符合指标要求。
4) 系统精密度（TUV/PDA）：峰面积相对标准偏差（%RSD）≤0.5%；峰高相对标准偏差（%RSD）≤0.9%。
5) NanoFlow正离子灵敏度指标要求：峰强（m/z =785.8）≥1×107，测试样品：Glu-Fibrinopeptide B，浓度：100fmol/μl测试结果：峰强度（m/z =785.8）：1.48×107；符合指标要求。
6) T RIZAIC正离子模式MS说明：测试样品：ADH T19, PHO T33, ENL T4, BSA T59, ENL T43, ADH T17, BSA T10, PHO T88指标要求：保留时间标准偏差：≤0.25%测试结果：ADH T19：标准偏差为0.02% (23.77min)；PHO T33：标准偏差为0.03% (25.12min)；ENL T4：标准偏差为0.02% (21.83min)；BSA T59：标准偏差为0.01% (21.58min)；ENL T43：标准偏差为0.04% (22.33min)；ADH T17：标准偏差为0.03% (23.31min)；BSA T10：标准偏差为0.02% (24.41min)；PHO T88：标准偏差为0.03% (24.81min)7) 系统性能测试一维系统精密度测试：测试样品17α-OHP。
文件类型研究所作业指导书化学所文件编号 NIM-ZY-HX-0000-YJ-117第1页共6页Waters Xevo TQ-S 液相色谱 /质谱联用仪(三重串连四级杆质谱 )操作指南1.适用范围：本使用规范适用于有机室所备有的Waters Xevo TQ-S 液相色谱 /质谱联用仪 (三重串连四级杆质谱 )。
2.仪器设备的主要技术指标：1)梯度性能：保留时间标准偏差（ SD）≤ 0.047min。
2)ESI 正离子灵敏度和精密度：测试样品：磺胺二甲基哒嗪(Sulfadimethoxine)，浓度： 0.1pg/ μl指标要求：平均信噪比（ S/N）≥3000:1；平均峰面积≥60000；峰面积相对标准偏差（ %RSD）≤3.0%；保留时间标准偏差（ SD）≤0.047min 测试结果：信噪比（ S/N）:4500psi；峰面积： 120000；峰面积相对标准偏差（ %RSD）：2.5%；保留时间标准偏差（ SD）： 0.00min，均符合指标要求。
3)ESI 负离子灵敏度和精密度：测试样品：氯霉素 (chloramphenicol)，浓度： 0.05pg/ μl指标要求：平均信噪比（ S/N）≥400:1；平均峰面积≥1000；峰面积相对标准偏差（ %RSD）≤3.0%；保留时间标准偏差（ SD）≤0.047min测试结果：信噪比（S/N） :520psi；峰面积： 1500；峰面积相对标准偏差（ %RSD）：2.8%；保留时间标准偏差（ SD）： 0.00min，均符合指标要求。
4)系统精密度（ TUV/PDA ）：峰面积相对标准偏差（%RSD）≤0.5%；峰高相对标准偏差（ %RSD）≤0.9%。
5)NanoFlow 正离子灵敏度7指标要求：峰强（ m/z =785.8）≥ 1× 10，测试样品：Glu-Fibrinopeptide B ，浓度： 100fmol/ μl测试结果：峰强度（ m/z =785.8）： 1.48 ×107；符合指标要求。
沃特世液相色谱仪操作流程1.打开沃特世液相色谱仪电源开关。
Turn on the power switch of the Waters liquid chromatography system.2.启动色谱软件，并进行系统自检。
Start the chromatography software and perform systemself-checks.3.检查色谱柱和连接管路是否安装正确并紧固。
Check if the chromatographic column and connecting tubing are installed correctly and tightened.4.调节废液瓶和溶剂瓶的位置，确保连接管路畅通。
Adjust the position of the waste bottle and solventbottle to ensure smooth connection of the tubing.5.打开废液瓶和溶剂瓶的盖子，检查液位是否充足。
Open the lids of the waste bottle and solvent bottle to check if the liquid levels are sufficient.6.设置色谱条件，包括流速、温度、检测波长等参数。
Set chromatographic conditions, including flow rate, temperature, detection wavelength, and other parameters.7.进行系统平衡，使溶剂流动稳定。
Perform system equilibration to stabilize solvent flow.8.进行样品前处理，如进样、样品预处理等步骤。
Prepare samples, such as injection, sample pretreatment, and other steps.9.开始色谱分离实验，记录实时数据。
1.目的描述 Waters 高效液相色谱仪标准操作规程。
2.适用范围化验室3.责任者化验员应严格遵照该操作规程 , QC 主管负责监督本规程的实施。
4.定义HPLC High Performance Liquid Chromatography , 高效液相色谱仪。
5.安全注意事项5.1有机溶媒有害健康，各溶剂瓶口应封严。
5.2注意检查废液桶中废液应避光，防止废液桶满外溢。
6.规程6.1.Waters HPLC的组成：贮液器输液泵自动进样器分离柱 (柱温箱 )紫外检测器控制及数据处理系统 (Millennium 32化学工作站 )。
6.2. HPLC系统的打开及关闭顺序6.2.1打开顺序•对于分体式：请按泵、进样器、柱温箱、检测器的顺序打开开关，待各部分分别显示初始化完毕后，最后打开M i l l e nn i um32化学工作站。
泵与色谱工作站的连接：对于 510 泵，因为此泵与色谱工作站是单向联系，如要使泵在 Remote 状态下由工作站控制，首先要在泵的键盘上按 Menu 键，待显示屏切换至 Mode 状态下，其状态是Loca ，按 Edit/Enter 键，在 Local 的L 前有闪动的光标显示，按键，Local 转换成Rem，再按Edit/Enter 键，此命令已输入进去, 最后按Stop/Run 键，使泵处于Run 状态这时泵和工作站的连接即告成功。
泵的任何动作都可由工作站来控制。
还应注意这一步工作在每次开机时都要进行。
对于 Alliance 2690 系统：先打开 Alliance 2690 主机、检测器电源开关，待初始化完毕后，再进入 Millennium 32化学工作站。
对于流动相的要求：对于液体试剂应尽量采用色谱纯试剂；对于所用到的固体试剂应采用分析纯试剂；对于水，应采用经纯水机处理过的超纯水；流动相在使用前一定要经 0.45m 的滤膜（滤膜分为水相膜与有机相膜，确保使用正确的滤膜，参见附表 ) 过滤、超声真空脱气方可使用，严禁含盐的流动相未经过滤直接使用。
Waters ACQUITY UPLC H-Class_XEVO TQD超高效液相质谱联用仪操作规程一、目的：为了安全、规范、正确使用超高效液相质谱联用仪，特制订本操作规程。
二、范围：仅适用于沃特世超高效液相质谱联用仪。
三、环境要求：温度20 ～25℃，相对湿度低于65% ，最好是恒温、恒湿，远离高电干扰、高振动设备。
四、操作步骤：1.完整开机顺序：开氩气、氮气→开电脑主机→自动进样器→泵→柱温箱→检测器→质谱（注：开电脑主机后等待2～3分钟，开自动进样器后需要开机自检通过后再打开其他模块，质谱开启后需要等待3～5分钟使得自检通过）2.抽真空：桌面上双击Masslynx图标，打开Masslynx软件，点击Mass Tune ，选择Vacuum项下pump开始抽真空。
（注：观察Diagnostics 界面下Turbo Speed 抽真空速度要达到80%以上，压力在1.30-e-5左右。
抽真空的状态至少4小时以上。
）3.日常开机顺序：液相：灌注流动相和洗针液质谱：开气（开氮气）、电（开高压 operate）、流动相（设置流动相流速和比例）五、软件操作规范流程：工作软件操作流程概述：5.1调用已有项目选择C:\Mass Data\*****.PRO项目5.2准备液相一般流程为：准备流动相>准备样品>灌注二元泵>灌注自动进样器>建立液相方法>平衡系统5.3准备质谱一般流程为：计算化合物单同位素质量数>用Intellistart开始调谐>查看Intellistart中自动生成的质谱方法5.4建立液相方法在液相方法编辑窗口（Inlet Method），单击Inlet，编辑参数，单击OK, 选择File > Save As 保存方法。
单击 Load Method ，平衡液相系统。
5.5建立样品列表5.5.1. 在Masslynx 主窗口，选择 File > New 建立一个空白的样品表Sample list或打开一个已有的SAMPLE LIST。
Waters Xevo TQ-S液相色谱/质谱联用仪(三重串连四级杆质谱)操作指南1.适用范围：本使用规范适用于有机室所备有的Waters Xevo TQ-S液相色谱/质谱联用仪(三重串连四级杆质谱)。
2.仪器设备的主要技术指标：1) 梯度性能：保留时间标准偏差（SD）≤0.047min。
2) ESI正离子灵敏度和精密度：测试样品：磺胺二甲基哒嗪(Sulfadimethoxine)，浓度：0.1pg/μl指标要求：平均信噪比（S/N）≥3000:1；平均峰面积≥60000；峰面积相对标准偏差（%RSD）≤3.0%；保留时间标准偏差（SD）≤0.047min测试结果：信噪比（S/N）:4500psi；峰面积：120000；峰面积相对标准偏差（%RSD）：2.5%；保留时间标准偏差（SD）：0.00min，均符合指标要求。
3) ESI负离子灵敏度和精密度：测试样品：氯霉素(chloramphenicol)，浓度：0.05pg/μl指标要求：平均信噪比（S/N）≥400:1；平均峰面积≥1000；峰面积相对标准偏差（%RSD）≤3.0%；保留时间标准偏差（SD）≤0.047min测试结果：信噪比（S/N）:520psi；峰面积：1500；峰面积相对标准偏差（%RSD）：2.8%；保留时间标准偏差（SD）：0.00min，均符合指标要求。
4) 系统精密度（TUV/PDA）：峰面积相对标准偏差（%RSD）≤0.5%；峰高相对标准偏差（%RSD）≤0.9%。
5) NanoFlow正离子灵敏度指标要求：峰强（m/z =785.8）≥1×107，测试样品：Glu-Fibrinopeptide B，浓度：100fmol/μl测试结果：峰强度（m/z =785.8）：1.48×107；符合指标要求。
6) T RIZAIC正离子模式MS说明：测试样品：ADH T19, PHO T33, ENL T4, BSA T59, ENL T43, ADH T17, BSAT10, PHO T88指标要求：保留时间标准偏差：≤0.25%测试结果：ADH T19：标准偏差为0.02% (23.77min)；PHO T33：标准偏差为0.03% (25.12min)；ENL T4：标准偏差为0.02% (21.83min)；BSA T59：标准偏差为0.01% (21.58min)；ENL T43：标准偏差为0.04% (22.33min)；ADH T17：标准偏差为0.03% (23.31min)；BSA T10：标准偏差为0.02% (24.41min)；PHO T88：标准偏差为0.03% (24.81min)7) 系统性能测试一维系统精密度测试：测试样品17α-OHP。
一维保留时间重复性(PDA)指标：保留时间标准偏差(SD): ≤1.0s；一维峰面积重复性(PDA)指标：峰面积相对标准偏差(%RSD): ≤0.5%；一维峰高重复性(PDA)指标：峰高相对标准偏差(%RSD): ≤0.9%；二维系统精密度测试：测试样品17α-OHP。
二维保留时间重复性(PDA)指标：保留时间标准偏差(SD): ≤1.0s；二维峰面积重复性(PDA)指标：峰面积相对标准偏差(%RSD): ≤0.5%；二维峰高重复性(PDA)指标：峰高相对标准偏差(%RSD): ≤0.9%；所有检测方式的回收率指标：≥90.0%3. 仪器设备的使用环境要求：1) 电力要求：仪器室电源要求相对稳定，电压变化要小，最好配备不间断稳压电源，防止意外停电。
2) 工作温度：19-22度，不要超过25℃，保持恒温。
3) 相对湿度：50%-70%4. 操作程序：4.1 开机4.1.1 打开电脑，首先打开自动进样器电源，再逐一打开质谱电源和UPLC各电源，各部件通过自检后，双击工作站图标进入Masslynx工作站。
4.1.2 选择Instrument＞MS Tune进入调谐界面。
从调谐界面选择Vacuun＞pump，打开真空泵，开始抽真空。
机械泵和涡轮分子泵开始工作。
4.1.3 质谱上的真空灯开始闪烁，当系统达到真空状态，灯变为绿色，不再闪烁，同时观察调谐界面Diagnostics→Turbo Speed 泵转速达到100%即可，达到实验状态大约要抽真空4小时（注意：真空规，测量工具，无异常状况通常无需打开，尤其在刚开始抽真空时不要打开。
）4.1.4 气源压力设置：氮气：90-100psi。
氩气：0.05Mpa，不超过0.1Mpa（实验前确认氩气瓶压力，低于1Mpa时需更换氩气。
）4.2 准备UPLC系统4.2.1准备流动相：用0.22μm的膜过滤缓冲液，所有的缓冲液和超纯水都要新配制，超纯水和缓冲液使用不得超过二天。
缓冲盐一定要可挥发的，而且浓度在2mM-5mM之间，不要超过10mM（注：若流动相含有缓冲盐，用完需使用大比例水相长时间冲洗系统和色谱柱，若流动相含有酸，必须为挥发性酸，浓度范围为0.01%-0.1%，进样器高压密封垫要求PH≥2，不能使用三氟乙酸、七氟丁酸等离子对试剂）。
有机相要使用原装进口的色谱纯。
（2）SW+Purge（弱洗：10%ACN+90%纯水或者与流动相梯度初始比例相同）用于清洗泵头和密封清洗；Wash（强洗：90%ACN+10%纯水）；（3）准备样品：所有样品最好都要用流动相初始梯度比例的溶剂来溶解，并用0.22μm的膜过滤。
4.2.2初始化UPLC泵：在Masslynx主页面上点击MS Console，进入系统控制界面，点击左边Quaternary Solvent Manager选择CONTROL＞Prime A/B/C/D solvent，选择A/B/C/D输入1min，如果更换了流动相则输入3min，按start。
4.2.3初始化UPLC自动进样器：UPLC控制台上选择Sample Manager，选择Control＞Prime syrings，灌注进样器和洗针系统。
选择Sample syringe and syringes，Number of cycles 一般选1，但在更换洗针溶液后选3。
完成后，UPLC自动进样器准备好。
4.2.4灌注完泵和自动进样器后UPLC准备好。
4.3 建立一个Project如果在已有的Project下进行试验，此步可以不做。
从Masslynx主窗口选择File＞Project Wizard，出现对话窗口，点击Yes，输入Project Name，选择Create using existing project as template.点击Browse选择project的模板。
4.4 准备质谱如果在已有的Project下进行试验，此步可以不做。
4.4.1 MS Tune，首先打开氮气，再开高压（红色表示高压已关，绿色表示高压已开）。
（注：一定要打开氮气和高压才能开流动相，关闭流动相后才能关高压和氮气）。
4.4.2点击ES+ Source. 输入以下各参数: Capillary (kV): 3；Cone (V): 30；DesolvationTemp (℃): 550；Desolvation(L/hr): 800；Cone (L/Hr): 50；以下参数最好直接使用intellistart自动校正仪器质量数时自动生的参数：LM Resolution 1: 3；HM Resolution 1: 15；Ion Energy 1: 0.5；LM Resolution 2: 3；HM Resolution 2: 15；Ion Energy 2: 0.5；Collision: 2。
4.5 ESI调谐调出目标化合物的最佳质谱参数。
4.5.1把调谐液放入A/B/C号位（注：浓度在0.1-1ppm之间，根据实际的灵敏度调整样品浓度）。
4.5.2把流动相的流速设为0.2ml/min，有机相和水相比例为1:1。
点击Tune 界面下的Fluidics，点击Purge syringe 灌注注射器。
设置Infusion 流速5uL/min，根据灵敏度可适当调整。
设置Flow State模式（Infusion:直接进样；Combined:液相和样品混合进样；LC:液相进样；Waste:废液）。
4.5.3选择Xevo TQ-S MS Detector下面的IntelliStart：Sample Tune and Develop Method 点击Start，调出界面，输入各参数，系统开始自动优化目标化合物的质谱参数。
4.6建立质谱的MRM方法。
选择Instrument＞MS Method进入质谱方法编辑界面。
打开新建质谱方法窗口，再点击MRM，按调谐结果输入下列参数：离子模式、化合物名称、母离子质量数、子离子质量数、离子驻留时间、锥孔电压、碰撞能量和MRM运行时间等。
4.7建立UPLC方法。
选择Instrument＞Inlet Method进入UPLC方法编辑界面。
逐一编辑泵的方法、自动进样器的方法和紫外检测器的方法等。
最后把UPLC的方法命名保存。
4.8建立样品运行序列表，运行采集数据。
在Masslynx主界面上点击File＞New，新建序列表，输入文件名、注释、质谱方法、液相方法、瓶号、进样体积等参数，最后把编辑好的序列表命名保存。
4.9处理数据。
4.10 关机一般质谱仪部分不需要关机，不用时只要保持在Standby状态下即可。
但如果长时间不用，或是对仪器进行清洗和维修时需要关机。
4.10.1 首先停止液相色谱流速，如果还需要冲洗色谱柱，可以将液相色谱管路从质谱移开到废液瓶。
4.10.2 点击MS Tune进入调谐窗口，点击Standby，关闭高压，让MS进入待机状态时，指示灯会由绿色变成红色。
4.10.3 等脱溶剂气温度降到常温，关闭氮气。
4.10.4 选择Option＞Vent，这时质谱开始泄真空，待机械泵停止运行，同时观察调谐界面Diagnostics→Turbo Speed 泵转速为0时即可关闭质谱电源。
5. 仪器基本维护与使用注意事项：5.1仪器室要保持整洁、干净、无尘；配套设施布局合理。
5.2 开高压之前一定要先开氮气，关氮气之前一定要先关高压。
5.3 溶剂和流动相的要求，所有的流动相都要用0.22μm的滤膜过滤，水相要用前新配，并不得超过两天。
样品必须使用0.22μm的滤膜过滤。
5.4 ESI离子化与溶剂密切相关，在使用某些溶剂和添加物需要注意以下几个方面：三氟乙酸（TFA）多用于蛋白质和多肽分析，但对ESI离子化有抑制效应：三乙胺（TEA）在m/z 102处有较强的[M+H]+峰，有可能会抑制某些碱性化合物在正离子ESI条件下的离子化，也有可能会增强某些碱性化合物在负离子ESI 条件下的响应。
