高效液相色谱法测定头孢氨苄胶囊的含量
摘要：在医学领域当中，孢氨苄胶囊属于一种半合成的抗生素，在临床治疗过程中具有突出的疗效，由于其具有良好的稳定性，而且内部不含有过多的毒性成分，在治疗过程中，病人也不会有副作用产生，因此得到了广泛的应用，该药品蛋白结合率较低，可以稳定葡萄球菌产生的青霉素酶，同时可以忍受革兰氏阳性菌产生的内酰胺酶。
以往经常使用碘量法测量药品的成分，但该方法操作繁琐，而且费时费力，检验过程中容易受到外在因素的影响，因此在药品检测过程中很少使用这种方法，而是使用高效液相色谱法。
关键词：高效液相色谱法；头孢氨苄胶囊；药品检测
复方头孢氨苄胶囊主要有头孢氨苄和甲氧苄啶两种成分组成，由于该药品是通过化学加工过的方式制成，因此传统方法在检验的过程中会受到外在因素的影响。
头孢氨苄和甲氧苄啶共同使用可以起到断细菌在生长繁殖的作用而且可具有良好的抗菌作用，其抗菌性能要远远优于头孢氨苄。
为了能够了解该药品内部组成结构以及详细成分，本文采用高效液相色谱法，以乙酰苯胺为内标测定其含量，这种检测方法不仅操作便捷，检测结果的准确性能够得到保证，而且可以对其进行重复检测。
1仪器与试药
1.1仪器
由于该药品属于化学产物，仅仅依靠人力无法分辨其内部成分，因此必须使用相关的检测仪器才能够保证检测结果的准确性，常用的检测仪器有DIONEX P680AISO型高效液相色谱仪、UVD17OU型HPLC检测器、XS 225A分析天平。
除了检测仪器之外，还需要用到一些试剂以及药品，例如色谱纯，分析过程中用到的甲醇以及双蒸水，为了保证检测结果具有说服力，因此需要选取某些药物作为对照品，最后需要头孢氨苄胶囊，以上所述的药品以及检测器械其规格和质量必须与有关机构指定的标准相符合。
2方法与结果
2.1色谱条件与系统适应性实验
用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂水-甲醇-3.85%醋酸钠溶液-4%醋酸溶液（700：300：15：3）为流动相；检测波长为254nm；理论塔板数按头孢氨苄峰计算不低于1500；
2.2对照品储备液的制备
根据检测要求，选取适量的头孢氨苄对照液，记录其重量放置于专门的容器当中，向其中加入流动液体，达到稀释对照液的目的，摇匀，将稀释过后的对照液储存起来。
2.3供试品溶液的制备
根据检测流程，选取10个头孢氨苄胶囊，检查其质量，确认无误之后测放入天平之上测量其重量，并记录测量结果，将其研磨至粉碎，称取合适的药品粉末，放置于100ml容量器皿当中，选取适量的流动液体加入药品粉末当中，充分摇晃使粉末完全溶解于液体当中，再次向其中加入流动液体，使其完全稀释，并记录此时的刻度，之后利用检测仪器过滤药品溶液，称取过滤之后的药品溶液放置于器皿当中，再次摇匀，作为供试品溶液。
（1）阴性空白溶液的制备：
为保证药品检测结果的准确性，根据头孢氨苄胶囊的制备工艺制作缺少主药的模拟胶囊，根据供试品溶液的制作过程制作出的药品溶液作为阴性空白溶液。
（2）仪器精密度试验
在对照品储备液当中选取适量的溶液放置于检测器皿当中，向其中加入流动液体，直至
液体的高度与容器的刻度持平，即线性关系考察中第三个对照品溶液，将此过程重复进行五次，每次溶液的称量需要结合检测过程而定，以上述色谱条件为基础对药品溶液进行分析，
根据分析结果计算峰面积的RSD，要求RSD不能够超过2%。
（3）方法重复性实验
从主药粉末当中选取5份药品粉末在此称量，根据供试品溶液制备的流程再次制成5份
一模一样的药品溶液，根据药品测定方法对药品溶液进行测定，计算出头孢氮苄峰面积的RSD，要求RSD不能够超过2%。
（4）线性关系考察
依次精密量取对照品储备液0.2 ml、0.5 ml、1.0 ml、1.5 ml、2.0 ml分别置于10 ml容量
瓶中，加流动相至刻度，摇匀，各进样10μl，记录色谱图。
以进样浓度（μg/ml）为横坐标，以峰面积为纵坐标，绘制标准曲线。
以峰面积A对浓度C回归，得回归方程。
所得标准曲线
如下图：
结果表明，头孢氨苄浓度在20-200μg/mL范围内与峰面积有良好线性关系。
相关系数
r=0.9993，符合要求。
2.4加样回收率试验
采用加样回收法，精密称取9份已知含量的同批号头孢氨苄胶囊样品（约相当于头孢氨
苄0.05 g）置于10 ml容量瓶中，精密称定，再分别精密称取头孢氨苄对照品0.625 g，置25 ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，分别精密量取1 ml，2 ml，3 ml，各三份，加到上
述供试品中，按“供试品溶液的制备”项操作制备溶液，按上述色谱条件测定，记录色谱图，
按以下公式计算回收率：回收率%=（测定平均值-本底量）/加入量×100%其中本底量为加入
流动相的量，加入量为加入对照品和供试品的量。
3稳定性试验
取同一供试品溶液，分别于0，2，4，6，8 h进样，各进样10μl，记录色谱图，峰面积
若小于±1.0％，则样品溶液稳定性较好。
3.1方法耐用性考察
分别使用不同流动相组成、不同流动相pH值、不同厂牌或不同批号的同类型色谱柱、
不同柱温和不同流速等，对同一批样品进行测定，观察其结果是否一致。
3.2样品含量测定
分别取对照品溶液和供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，记录色谱图，以峰面积外标
法计算含量。
3.3讨论
（1）线性关系考察
本次实验配置5个浓度的对照品溶液，范围在20μg/ml～200μg/ml内。
测定各个浓度的峰面积，以浓度（μg·ml-1）为横坐标，以峰面积为纵坐标绘制标准曲线。
得回归方程
A=0.1539c+1.061，相关系数r=0.9993。
结果表明头孢氨苄浓度在20μg/mL~200μg/mL范围内与峰面积有良好线性关系。
（2）仪器精密度
本实验采用对照品溶液（线性关系中第三个溶液）重复进样5次，进行仪器精密度的考察。
实验结果显示，RSD值为1.13%，符合RSD小于2%的要求。
证明仪器精密度良好。
（3）重复性试验
本实验共制备5份供试品溶液，各吸取10μL连续进样进行重复性试验。
实验结果表明RSD值为8.44%，不符合RSD小于2%的要求，重复性实验较差。
说明在制备溶液过程中存在较大的操作偏差，而且在测定供试品色谱图时也存在操作不熟练或者不规范的现象以及进样误差等问题。
在以后的试验中应该加以改正。
4结语
利用高效液相色谱法测定孢氨苄胶囊的含量不仅可以在最短的时间内得出测量结果，同时测量过程中受影响因素较少，测量结果不仅准确而且具有说服力。
与以往使用的碘量法进行比较可以发现，两种方法得出的检测结果并无差异性。
高效液相色谱法重复检测的过程中RSD为1.7%，回收率实验RSD为0.95%，头孢氨苄与内标物质乙酰苯胺能实现良好的分离，所以样品中含有的其他物质并不会影响头孢氨苄含量的测定结果。
参考文献：
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