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04紫外-可见分光光度法2 (1)

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第二章 紫外-可见分光光度法(Ultraviolet and Visible ....

第二章 紫外-可见分光光度法(Ultraviolet and Visible ....

无机物分子能级跃迁
一些无机物也产生紫外 - 可见吸收光谱，其跃迁类型包 括 p-d 跃迁或称电荷转移跃迁以及 d-d, f-f 跃迁或称配场跃
迁。
1. 电荷转移跃迁 (Charge transfer transition) 一些同时具有电子予体(配位体)和受体(金属离子)的无机 分子，在吸收外来辐射时，电子从予体跃迁至受体所产生的 光谱。
1）共轭体系的存在----红移
如 CH2=CH2 的 -* 跃迁， max=165~200nm ；而 1,3- 丁二烯，
max=217nm
2）异构现象：使异构物光谱出现差异。
如 CH3CHO 含水化合物有两种可能的结构： CH3CHO-H2O 及
CH3CH(OH)2; 已烷中，max=290nm，表明有醛基存在，结构为前 者；而在水溶液中，此峰消失，结构为后者。
-胡罗卜素
咖啡因
几种有机化合物的 分子吸收光谱图。
阿斯匹林
丙酮
二、分子吸收光谱跃迁类型
有机分子能级跃迁
1. 可能的跃迁类型 有机分子包括:
成键轨道 、 ；
反键轨道 *、* 非键轨道 n
例如 H2O分子的轨道：
oo C O o o
= = o=n
各轨道能级高低顺序： n**（分子轨道理论计算结果）； 可能的跃迁类型：-*；-*；-*；n-*；-*；n-*
苯酚在酸性或中性水溶液中，有210.5nm及270nm两个吸
收带；而在碱性溶液中，则分别红移到235nm和 287nm（p-
共轭）.
6）溶剂效应：红移或蓝移 由n-*跃迁产生的吸收峰，随溶剂极性增加，形成 H 键
的能力增加，发生蓝移；由-*跃迁产生的吸收峰，随溶剂

《中国药典》2020年版四部通则 0401 紫外-可见分光光度法

《中国药典》2020年版四部通则 0401 紫外-可见分光光度法

《中国药典》2020年版四部通则0401 紫外-可见分
光光度法
《中国药典》2020年版四部通则0401紫外-可见分光光度法主要包括以下内容：
1.定义：紫外-可见分光光度法是一种通过测定物质在紫外-可见光区的吸收光谱，
对物质进行定性和定量分析的方法。

2.适用范围：适用于具有紫外-可见光吸收特性的物质的定性和定量分析。

该方法
广泛应用于药品、食品、环境等领域。

3.原理：基于物质吸收紫外-可见光后，其吸收光谱的波长和强度与物质的浓度和
种类有关，通过测量物质的吸收光谱，可以对其进行定性和定量分析。

4.操作方法：包括直接比较法、标准曲线法、差示光谱法、差示光谱比率法等。

根据不同情况选择合适的方法进行操作。

5.注意事项：
•在操作过程中应注意避免光的散射和干扰因素的影响。

•应注意控制实验条件，如温度、湿度、气压等，以确保实验结果的准确性和可靠性。

•对于某些特定物质，可能需要采用其他方法进行测定，如络合滴定法、离子交换法等。

总之，《中国药典》2020年版四部通则0401紫外-可见分光光度法为药品、食品、环境等领域提供了重要的分析手段，有助于保证分析结果的准确性和可靠性。

紫外-可见分光光度法测定

紫外-可见分光光度法测定

紫外-可见分光光度法测定1. 引言1.1 引言紫外-可见分光光度法是一种常用的分析化学方法，通常用于测定物质的浓度或测定物质的吸光度。

该方法利用紫外-可见光谱仪测量样品对紫外和可见光的吸收情况，从而推断样品中所含物质的浓度或结构。

在化学分析实验中，紫外-可见分光光度法具有灵敏度高、准确性高和简便易行的优点，因此被广泛应用于药物分析、环境监测、食品检测等领域。

本实验旨在通过该方法测定样品中目标物质的浓度，并探讨影响测定结果的因素。

通过对仪器原理、操作步骤、实验结果、数据分析和影响因素的详细讨论，我们将深入了解紫外-可见分光光度法的原理和应用，并为今后在相关领域的研究提供参考和借鉴。

希望本实验能够为我们提供更多关于分光光度法的实际操作经验，提升我们的实验技能和分析能力。

1.2 背景介绍紫外-可见分光光度法是一种广泛应用于化学分析领域的分析方法，通过测定物质在紫外-可见光区域的吸收特性，从而确定物质的浓度或者进行定性分析。

紫外-可见分光光度法具有操作简单、灵敏度高、选择性强的特点，被广泛应用于环境监测、食品安全检测、药品质量控制等领域。

随着科学技术的不断发展，紫外-可见分光光度法在实验室分析中扮演着越来越重要的角色。

通过测定物质在特定波长范围内的光吸收情况，我们可以获得关于物质性质的重要信息，如浓度、溶解度、稳定性等。

掌握紫外-可见分光光度法的原理和操作方法，对于提高实验准确性和效率具有重要意义。

在本文中，我们将介绍紫外-可见分光光度法的仪器原理、操作步骤、实验结果、数据分析和影响因素，希望能够为读者提供一份系统全面的紫外-可见分光光度法测定指南。

通过总结和展望，我们也希望能够进一步探讨该方法在化学分析领域的应用前景。

1.3 研究目的紫外-可见分光光度法是一种常用的分析化学技术，可以用于测定物质的吸光度，从而推断物质的浓度。

本实验的研究目的主要分为以下几点：1. 研究紫外-可见分光光度法在测定物质浓度方面的应用。

紫外-可见分光光度法

紫外-可见分光光度法

紫外-可见分光光度法2015年版《药典》四部通则0401紫外-可见分光光度法是在190～800nm波长范围内测定物质的吸光度，用于鉴别、杂质检查和定量测定的方法。

当光穿过被测物质溶液时，物质对光的吸收程度随光的波长不同而变化。

因此，通过测定物质在不同波长处的吸光度，并绘制其吸光度与波长的关系图即得被测物质的吸收光谱。

从吸收光谱中，可以确定最大吸收波长λmax 和最小吸收波长λmin。

物质的吸收光谱具有与其结构相关的特征性。

因此，可以通过特定波长范围内样品的光谱与对照光谱或对照品光谱的比较，或通过确定最大吸收波长，或通过测量两个特定波长处的吸收比值而鉴别物质。

用于定量时，在最大吸收波长处测量一定浓度样品溶液的吸光度，并与一定浓度的对照溶液的吸光度进行比较或采用吸收系数法求算出样品溶液的浓度。

仪器的校正和检定1.波长由于环境因素对机械部分的影响，仪器的波长经常会略有变动，因此除应定期对所用的仪器进行全面校正检定外，还应于测定前校正测定波长。

常用汞灯中的较强谱线237.83nm，253.65nm，275.28nm，296.73nm，313.16nm，334.15nm，365.02nm，404.66nm，435.83nm，546.07nm 与576.96mn；或用仪器中氘灯的486.02nm与656.10nm谱线进行校正；钬玻璃在波长279.4nm，287.5nm，333.7nm，360.9nm，418.5nm，460.0nm，484.5nm，536.2nm与637.5nm处有尖锐吸收峰，也可作波长校正用，但因来源不同或随着时间的推移会有微小的变化，使用时应注意；近年来，常使用高氯酸钬溶液校正双光束仪器，以10%高氯酸溶液为溶剂，配制含氧化钬（Ho203）4%的溶液，该溶液的吸收峰波长为241.13nm，278.10nm，287.18nm，333.44nm，345.47nm，361.31nm，416.28nm，451.30nm，485.29nm，536.64nm 和640.52nm。

紫外可见分光光度法2

紫外可见分光光度法2
度等间距条痕(600、1200、2400条/mm )。
光栅可根据光的衍射和干涉原理将复合光 色散为不同波长的单色光，然后再让所需 波长的光通过狭缝照射到吸收池上。其分 辨率比棱镜大，可用的波长范围也较宽。
3．吸收池
吸收池也称比色皿，用于盛放参比溶液或待测溶 液。它是由无色透明、耐腐蚀、化学性质相同、厚度 相等的玻璃制成的，按其厚度分为0.5 cm，1 cm，2 cm，3 cm和5 cm。在可见光区测量吸光度时使用玻璃 吸收池，紫外区则使用石英吸收池。使用比色皿时应 注意保持清洁、透明，避免磨损透光面。经常使用的 吸收池应于清洗后浸泡在蒸馏水中保存。
E分子 = E电子 + E振动 + E转动
振动能级
当一束光照射到某物质或某溶液时，组成该物质的分子、
原子或离子等粒子与吸光子作用，光子的能量发生转移，
使原子核外层电子由低能量轨道跃迁到高能量轨道，即由 基态转变为激发态。
M(基态) + h
M*(激发态)
这个过程即是物质对光的吸收。当用频率为的电磁波
溶液的颜色 ⑴溶液为什么会有颜色？
由于溶液中的质点选择性地吸收某种颜色的光所引起的。
⑵ 吸收光与溶液颜色的关系：
当白光通过某一均匀溶液时： ①如溶液对其全不吸收，光全透过，溶液为无色；
②如溶液对其全部吸收，无光透过，溶液呈黑色； ③如溶液对其部分吸收，其余光透过，溶液呈透过光的颜色。
CuSO4溶液：之所以呈蓝色，是因为吸收了白光中的黄光，透过 其黄光的互补光蓝光。
（4） 210-250 nm有强吸收峰，表明可能含有2个共轭双键 ；在260nm,300 nm,330 nm有强吸收峰，说明是3个或3个以 上双键的共轭体系。
（5)若吸收峰延伸至可见光区，则可能是长链共轭或稠环 化合物

紫外可见分光光度法

紫外可见分光光度法

得单色光聚焦至出射狭
缝； ⑤出射狭缝。
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3.样品室
样品室放置各种类型的吸收池 （比色皿）和相应的池架附件。 在紫外区须采用石英池，可见区一般用玻璃池。 注意：用作盛空白溶液的比色皿与盛试样溶液的比色皿应 互相匹配，即有相同的厚度与相同的透光性。为了减少反射损 失，比色皿的光学面必须完全垂直于光束方向。 不能用手指拿比色皿杯的光学面，用后要及时洗涤，可用 温水或稀盐酸，乙醇以至铬酸洗液（浓酸中浸泡不要超过 15分 钟），表面只能用柔软的绒布或拭镜头纸擦净。
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Hale Waihona Puke 20紫外可见分光光度的使用
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721分光光度计操作步骤
1.预热仪器。为使测定稳定，将电源开关打开，使仪器预热20min， 为了防止光电管疲劳，不要连续光照。预热仪器和不测定时应将比 色皿暗箱盖打开，使光路切断。 2.选定波长。根据实验要求，转动波长调节器，使指针指示所需要 的单色光波长。 3.固定灵敏度档。旋动灵敏度档，使其固定于某一档，在实验过程 中不再变动。一般测量固定在“1”档。 4.调节“0”点。轻轻旋动调“0”电位器，使读数表头指针恰好位于透 光度为“0”处（此时，比色皿暗箱盖是打开的，光路被切断，光电 管不受光照）。 5.调“0”和调“100％”。比色皿中装入参比溶液近4/5,放入比色皿座 架的第一格内，其它格内放入样品或标样，把比色皿暗箱盖子轻轻 盖上，用参比溶液重复调“0”和“100%”,至仪器稳定。 6.测定。轻轻拉动比色皿座架拉杆，使样品或标样溶液进入光路， 此时表头指针所示为该溶液的吸光度A。读数后，打开比色皿暗箱 盖。 7.关机。实验完毕，整理仪器，切断电源。将比色皿取出洗净，并 将比色皿座架及暗箱用软纸擦净。

第四章紫外-可见分光光度法

3. 红移和紫移：吸收带的最大吸收波长发生移动， 向长波方向移动称为红移，向短波方向移动称为 紫移。
（三）有机化合物的紫外、可见光谱
1. 饱和烃及其取代衍生物 σ→σ*、n→σ* 2. 不饱和烃及共轭烯烃 σ→σ*、π→π* 3. 羰基化合物 n→σ*、π→π*和n→π* 4. 苯及其衍生物 E1带、 E2带、 B带 5. 稠环和杂环
当l以cm，c以mol/L为单位时，k称为摩尔吸 光系数，用ε表示，它比a更为常用，ε的单位 为L mol-1 cm-1，即： A = ε c l
当l以cm，c以百分浓度g/100mL为单位时，k 称为比吸光系数，用A1cm1%表示 ε = 0.1 M A1cm1%
用比吸光系数的表示方法特别适用于摩尔质 量未知的化合物。
（二）配位场跃迁
1. f-f跃迁
镧系和铜系元素的离子对紫外和可见光的吸收是 基于内层f电子跃迁而产生的，其吸收光谱是由一些狭 窄的特征吸收峰组成，且这些吸收峰不易受金属离子 所处的配位环境的影响。
2. d-d跃迁
过渡金属离子的d轨道在受到配位体场的作用时 产生分裂。d电子在能级不同的d轨道间跃迁，吸收紫 外或可见光产生吸收光谱。这种光谱的吸收带比较 宽，吸收峰强烈地受配位环境的影响。
光。
3. 吸收池
功能：盛放分析试样（一般是液体）
4. 检测器 功能：检测光信号，测量单色光透过溶
液后光强度变化的一种装置。 5. 信号显示系统
6. 紫外一可见分光光度计的类型
(1) 单波长单光束分光光度计
缺点：测量结果受电源波动的影响较大， 误差较大。
(2) 单波长双光束分光光度计
一个环外双键
5nm
同环二烯 39nm 一个β烷基 12nm 三个γ+烷基 54nm

紫外可见分光光度法经典案例(2)

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➢ 影响吸收带位置的因素： 1．溶剂效应： ➢ 对λmax影响：
n -π*跃迁：溶剂极性↑，λmax↓蓝移 π-π*跃迁：溶剂极性↑，λmax↑红移
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➢ 影响吸收带位置的因素： 1．溶剂效应：
➢ 对吸收光谱精细结构影响： 溶剂极性↑，苯环精细结构消失
2．pH值的影响：影响物质存 在型体，影响吸收波长
（一）光学因素 （二）化学因素
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（一）光学因素
非单色光的影响： ✓ Beer定律应用的重要前提——入射光为单色光
• 照射物质的光经单色器分光后 并非真正单色光 • 其波长宽度由入射狭缝的宽度 和棱镜或光栅的分辨率决定 • 为了保证透过光对检测器的响 应，必须保证一定的狭缝宽度 • 这就使分离出来的光具一定的 谱带宽度
第四章 紫外-可见分光光度法
第一节 光学分析法概论
一、电磁辐射和电磁波谱 二、光学分析法及其分类 三、光谱法仪器-分光光度计
1
一、电磁辐射和电磁波谱
1．电磁辐射（电磁波，光） ：以巨大速度通过空间， 不需要任何物质作为传播媒介的一种能量。
2．电磁辐射的性质：具有波、粒二向性
波动性： c ， 1
粒子性E：h h c
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2. 共轭体系的判断
• 共轭体系会产生很强的K吸收带，通过绘制吸收光谱， 可以判断化合物是否存在共轭体系或共轭的程度。
• 如果一化合物在210nm以上无强吸收带，可以认定该化 合物不存在共轭体系；若在215～250nm区域有强吸收 带，则该化合物可能有两至三个双键的共轭体系。
• 如1－3丁二烯， 为217nm， 为21,000；若260～ 350nm区域有很强的吸收带，则可能有三至五个双键的 共轭体系，如癸五烯有五个共轭双键， 为335nm， 为118,000。

紫外-可见吸收光谱法精选全文完整版


溶剂极性增大
吸收峰呈规律性蓝移
3、溶剂效应
O
异丙叉丙酮（CH3-C-CH=C
CH3
CH3 ）的溶剂效应
吸收带
p → p*
正己烷
230nm
CH3Cl
238nm
CH3OH
237nm
H2 O
243nm
波长
红移
n→ p*
329nm
315nm
309nm

电子跃迁类型主要有四种：σ→σ*、n→σ*、π→π*和
n→π*，各种跃迁所需的能量大小不同，次序为：
σ→σ*> n→σ*≥ π→π* > n →π*，
因此，形成的吸收光谱谱带的位置也不相同。

σ→σ*跃迁：
需要能量最大， λ<200nm ，真空紫外区，εmax ＞ 104
饱和烃（远紫外区）；
C－H共价键，如CH4（ λmax 125nm）
(I) 顺式二苯乙烯 (II)反式二苯乙烯
2、跨环效应的影响
助色基团虽不共轭，但由于空间排列使电子
云相互影响，使 n→π*吸收峰长移。
O
CH3－C － CH3
O
C
S
lmax156，279 nm
lmax238nm
3、溶剂效应影响
溶剂的极性增大时，n p* 跃迁吸收带蓝移
p p* 跃迁吸收带红移
少，分析速度快。
2 灵敏度高。如在紫外区直接检测抗坏血酸时，其最低检出浓度可
达到10-6g/mL。
3 选择性好。通过适当的选择测量条件，一般可在多种组分共存的
体系中，对某一物质进行测定。
4 精密度和准确度较高。在仪器设备和其他测量条件较好的情况下，

第二章_紫外-可见分光光度法(2)教材


5.光导纤维探头式分光光度计
镀铝反射镜
§4. 分析条件的选择
一、仪器测量条件的选择
1. 的选择
A
选择原则：最大吸收原则
A
A'
A' A
max
选max

2.狭缝的选择
狭缝↑→光单色性↓→灵敏度↓
原则：以减小狭缝宽度时，试样的吸光度不再增加为准
狭缝宽度 1 半峰宽 10
A：0.15~1.00 T: 10%~70%
调节l
改变c
二、反应条件的选择
〈一〉显色反应
1.定义
使待测物ε增大的反应（包括络合反应和氧化还原反应等等）
M + nR
MRn
显色剂
P34 （表3.3）
2.对显色反应的要求
（1）生成物的要大 （2）R的选择性要好 （3）生成物组成恒定 （4）生成物稳定性好 （5）显色条件易于控制

k
2
(
A
A 2

A
B 2
)

k
1
(
A
A 1

A
B 1
)
由于
k
2
A
B 2

k
1A
B 1
A

k
2
A
A 2

k
1
A
A 1

k 2A2lCA
k1A1lCA

(k
2
A 2

k
1
A 1
)lCA
<四>示差分光光度法
示差分光光度法
高吸光度示差法 低吸光度示差法 （高含量组分） （低含量组分）
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：
dn R b d
分辨率与波长有关，长波的分辨率要比短波的 分辨率小，棱镜分离后的光谱属于非均排光谱。
例如：某光谱仪在30000nm附近的分辨率为 50000。
30000 0.6nm R 50000
表明两条谱线的波长差必须大于或等于 0.6nm，才能分辨清楚。
准直镜
使进入进口狭缝的发散光变成为平行光
线，又将色散后的平行单色光聚集于出口
狭缝。
3.吸收池 可见光区：玻璃或石英池 紫外光区：石英池
盛空白、样品的吸 收池，应有相同厚度和 透光性。 校正吸收池： A池装空白、B池装样品，测A；反过来， B池装空白，A池装样品，测A。两次测得的 A的差值应小于1%。
A 或C测 (mol / L) l
稀释
E已知
C测 求百分含量： i% 100% C样
还可以采取如下方法：
测标准品 A标， 求E 测样品A样， 求E


1% 1cm 标准品
1% 1cm 样
， 得：

（或查文献）
表观值
(E ) 被测组分% (E )
1% 1cm 样品 1% 1cm 标准品
（样品池和参比池），否则要进行校正。
表：铬酸钾溶液的吸光度 波长/nm 220 230 240 250 …… 490 500 吸光度 0.4559 0.1675 0.2933 0.4962 …… 0.0009 0.0000
吸收池的校正 使用一段时间后，磨损和污染会造成透 光性能差异，必要时进行检查和校正。要 求同一浓度的溶液在同一仪器上两次测量 的误差应小于1%
光栅
透射光栅，反射光栅； 光栅光谱的产生是光射到每一条槽上后被 衍射或散射后，又在一定方向干涉，形成的各 级衍射光谱。它可用于紫外、可见及红外光区， 而且在整个波长区具有良好的、几乎均匀一致 的分辨能力。
将反射光栅的线槽加工
成适当形状能使有效强度
集中在特定的衍射角上。
图所示反射光栅是由 与光栅表面成β角的小斜 面构成(闪耀光栅)，β角叫做闪耀角。 选择适宜的闪耀角，可以使90%的有效能量集 中在单独一级的衍射上。
个二极管，可在1/10秒内，每隔2nm测定一
次，可同时并行测得316个数据，1/10秒就
获得全光光谱。
二极管
1
2
3
……
316
820
测定λ（nm）190 192 194 ……
5. 讯号处理与显示器
10.3.2 分光光度计的类型和光学性能
几种光路类型 1.单光束分光光度计
结构与原理：
从光源到检测器只有一束光，用空白液
或解：
(E ) 被测组分% (E )
1% 1cm 样品 1% 1cm 标准品
100%
A测 C样 L 1% 100% (E1cm ) 标准品 0.507 3 2.50 10 1 100% 98.0% 207
2. 标准曲线法
前提：固定仪器和测定条件
A KC A C

棱镜的顶角越大或折射率越大，角色散率越 大，分开两条相邻谱线的能力越强。
b. 线色散率： 用dl /dλ表示，两条相邻谱线在焦面上被分 开的距离对波长的变化率； c. 倒线色散率：用dλ/dl 表示。
分辨率：相邻两条谱线分开程度的度量：
两条相邻谱线的平均波长； △λ：两条谱线的波长差； b ： 棱镜的底边长度； n ：棱镜介质材料的折射率。
醋酸泼尼松
醋酸氢化可的松
醋酸可的松
图 三种甾体激素的紫外吸收光谱（10μg/ml甲醇）
10.4.2 纯度检查
1.杂质检查
选某λ，此处被检物有吸收，杂质无吸收
被检物弱吸收，杂质较强吸收
2.杂质限量检查 选 λ 测， 药物无吸收， 杂质有吸收 配杂质最高限量液C限
测定A值，作为A限，若被检药物 A > A限，则该药品不合格。
长波长区校正：镨钕玻璃的吸收光谱
苯蒸气在紫外光区有很特征的吸收峰， 常用苯蒸气对波长进行校正。
在吸收池 内滴上一滴 液体苯，盖 上吸收池使 苯蒸气充满 吸收池，测 定其吸收光 谱，用所测 吸收光谱来 校正波长。
镨钕玻璃滤光片的吸收光谱
吸光度的校正
常用K2CrO4标准溶液来校正吸光度标度。
在进行吸光度测量时所用的吸收池要配对
中档仪器的光学性能 1、波长范围： 195～820nm 2、波长准确度： 仪器显示的波长与单色光的 实际波长之间的误差≤±0.5nm 3、波长的重现性：≤0.5nm 4、透光率测量范围：0～150%
5、吸光度测量范围：－0.1730 ～ +2.00
6、光度准确度：透光率满量程误差±≤0.5% 7、光度重复性：重复测定的透光率变动值
调 T %= 100% 和测定试样液，都在同一位
置，用同一束光先后进行。
特点：
结构简单，但对光源发光强度的稳定性要
求较高。
2.双光束分光光度计
3.光多道二极管阵列检测的分光光度计 由光源发出的光，经色差聚光镜聚焦后通过 样品池，再聚焦于多色仪的入口狭缝上。透 过光经全息栅表面色散并投射到二极管阵列 检测器。
4. 检测器
光 光电管
电转换器
光电池 光电倍增管 光二极管阵列检测器
光电池： 特点：光电池内阻小，电流难放大，用微电流
计直接测，适于单色光谱带宽S较大的低档
仪器；易“疲劳”。
硒光电池 硅光电池
光电管：
光束
阴极 抽真空
e
阳极丝（Ni） 直流放大
R
-
90V DC
+
光电倍增管
（photomultiplier tube, PMT）
石英套
栅极，Grill 阳极
1个光子产生106~107个电子
光束 屏蔽
光二级管阵列检测器：
构造与原理：
晶体硅上紧密排列一系列光二极管检 测器，光透过晶体硅时，二极管输出的电 信号与光强成正比。 二极管数目越多，分辨率越高 特点：能进行快速光谱采集
例：HP8452A型二极管阵列，在190nm～
820nm范围内，由316个二极管组成。每一
过程：配制标准系列 分别测定
固定条件
A C ~ A曲线样品 同上条件 测定 A 样 查得C样
或求解直线方程：A a b c
芦丁含量测定
分别移取0.200mg / mL 标样0 ~ 5mL 25mL 样品3.0mg 25mL
0.710mg/25mL
三种情况： 1．两组分吸收光谱不重叠（互不干扰）
两组分在各自 λmax 下不重叠→分别按单组分 定量
a a 过程：1 测定E1 ；A1
2 测定E ；A
b 2
a 1 a 1
b 2
a 1 a 1
A 由A E Ca Ca E
b A b 2 由A b E C C 2 2 b b b E2
c. 对比吸收光谱一致性 同样条件下，进行： 试样光谱曲线与对照品光谱曲线对照，或 与文献记载标准图谱对照。 紫外光谱作定性鉴别有其局限性，因光谱 只有一个或几个宽吸收带，特征性不强，形 状变化不大。
特别指出：
在相同条件下，具有相同吸收光谱的物
质，可能是同一物质。 若在相同条件下，吸收光谱不同，则肯 定不是同一物质。
3 4
A
10.4.3 单组分的定量方法
溶剂的选择
测定波长的选择
选灵敏度高，干扰少的地方测定
定量的方法 吸光系数法 标准曲线法 标准对照法
1. 吸光系数法（绝对法）
前提： 要求单色光
过程：W (g)样 / 含i C样 (g / mL ) 求A C测
A C测 ( g / 100mL) E l
定性鉴别方法：对比法 a. 对比吸收光谱特征数据是否一致
1% max， min ，sh，E1cm或
b. 对比吸光度比 1 A2
或
E 1 E2
药典规定VB12定性鉴别： 278 ， 361 ， 550三处最大吸收 A 361 A 361 1.70 ~ 1.88 ， 3.15 ~ 3.45 A 278 A 550
氢灯 钨灯
2.单色器
色散元件主要是棱镜、光栅和滤光片。 棱镜 色散原理是依据不同的波长光通过棱镜时 有不同的折射率而将不同波长的光分开。
棱镜的光学特性可用色散率和分辨率来表征； 色散率 a. 角色散率：用dθ/dλ表示，偏向角θ对波长 的变化率；
d d dn 2 2 d 1 n sin 2 2 2 sin
光栅的分辨率R 光栅的分辨率 R 等于光谱级次（n）与光 栅刻痕条数（N）的乘积：
R nN
光栅越宽、单位刻痕数越多、R 越大。
宽度50mm，N=1200条/mm，一级光谱的分 辨率： R=1×50×1200=6×104
狭缝 狭缝过宽，单色光不纯，造成偏离朗伯－比 耳定律。 狭缝过窄，光通量变小，降低了灵敏度。 狭缝两边的边缘应锐利且位于同一平面上。
10.4 紫外－可见分光光度分析方法 定性分析
定性鉴别 纯度检查和杂质限量测定
定量分析
单组分的定量方法 多组分的定量方法
10.4.1 定性鉴别
依据： 多数有机化合物具有紫外吸收光谱特征。 1.特征值：
max , min , sh , E 或
1% 1cm
A 1 A2
2. 吸收光谱形状 同一化合物，在相同条件下应具有相 同的吸收光谱（即吸收曲线）
解： 对照法
2.5 25.00 1000 0.508 Ci Ci 98.1g / mL 10 1000 0.518
Ci B12标示量% 100% 98.1% 标示量
10.4.4 多组分的定量方法－计算分光光度法 计算分光光度法可分：