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铁皮石斛种苗组培实施方案铁皮石斛（Dendrobium）是一种重要的兰科植物，具有多种药用价值，被广泛用于中药材生产和养生保健。
其种苗组培是一种快速繁殖的方法，可以大大提高植物的繁殖效率和质量。
下面将介绍铁皮石斛种苗组培的实施方案。
一、材料准备1. 无菌种子：选择外观完整、无病害的铁皮石斛种子。
2. 培养基：配制适合铁皮石斛生长的培养基，包括营养物质、植物生长调节物质等。
3. 器具：培养瓶、无菌操作台、无菌手套、无菌培养室等。
二、种子消毒1. 将铁皮石斛种子浸泡于75%酒精中消毒5分钟，然后用无菌水冲洗3次。
2. 将种子浸泡于含有0.1%过氧化氢的无菌水中消毒20分钟，然后用无菌水冲洗3次。
3. 最后将种子浸泡于含有0.1%漂白粉的无菌水中消毒15分钟，然后用无菌水冲洗3次。
三、组培操作1. 在无菌操作台上进行操作，先将培养瓶中的培养基加热至121摄氏度，压力15磅，持续20分钟，使其无菌化。
2. 将消毒处理好的种子移入无菌培养瓶中，每瓶放入适量的种子。
3. 将培养瓶密封，放入无菌培养室中，温度控制在25-28摄氏度，光照强度控制在3000-5000勒克斯，光照时间为12小时。
四、生长管理1. 定期观察种苗生长情况，发现有病虫害立即进行处理。
2. 每隔一周更换一次培养基，保持培养基的新鲜和养分充足。
3. 控制培养室的温度、湿度和光照，提供良好的生长环境。
五、移栽1. 当种苗长到一定高度时，可以进行移栽。
将种苗移入含有适量营养物质的培养基中，继续进行培养。
2. 移栽后继续进行生长管理，直至种苗长成成熟植株。
通过以上实施方案，可以实现铁皮石斛种苗的组培繁殖，提高植物繁殖效率，为铁皮石斛的种植生产提供了可行的技术方案。
希望这些内容对您有所帮助。
石斛组织培养与繁殖0. 引言石斛( Dendrobium) 为多年生附生性草本植物，常附生于密林树干或岩石上，并常与苔藓植物伴生，是我国最常用传统药材与中成药的原料药。
本实验选取铁皮石斛茎段进行组织培养，提出了一套快速繁殖程序。
利用组织培养技术，对药用铁皮石斛进行快速繁殖，是目前解决生产种苗问题的有效方法。
1.材料及方法1.1实验材料铁皮石斛为采自山区野生原种。
2009 年移栽至室内。
1.2试验方法1.2.1外植体的选取及预处理取2009 年的新生枝条作为外植体。
剪取新生枝条长约3 cm，修剪枝叶，清洗附带泥土，然后用洗洁精沾海绵轻轻擦洗枝条外表，再用自来水冲洗干净。
在无菌条件下用70%酒精浸泡数秒，之后浸泡在0. 1% Hgcl 溶液消毒处理10 min ，取出后用无菌水冲洗干净备用。
1.2.2接种在培养基中保持无菌条件，去掉处理好的枝条顶芽，茎段保留 1 cm长。
并且每一小段必须保存有一茎节(芽) ，处理完后接种在不同激素浓度的培养基中。
其中诱导分化培养基包括以下几种(1)MS + 6BA0. 5 〜1. 0 mg/L +NAA 0. 25 mg/L; (2)MS + 6BA 0. 5 〜1. 0 mg/L +2, 4 - D 0. 2 mg/L; ( 3)MS + 6BA 2 mg/L +NAA0.4mg/L。
诱导生根培养基: 1 /2MS +NAA 0. 2 〜0. 5 mg/L 。
1.2.3组织培养室的条件接种后在全光照条件下培养，每天光照时间保持在10 h ，光照强度为1200 LX温度20 ± 2 Co1.2.4诱导生根枝条经过继代培养，小苗长到约2 cm 高时，基部会生出不定根，这时可把生根切割移栽，没有生根诱导生根，具体做法是枝条经修剪后接种到1/2MS+NAA 0. 2〜0. 5mg/L 培养基中，生根苗28 d 左右即可移栽到混合基质( 珍珠岩、树皮、泥碳等) 中炼苗。
铁皮石斛的组织培养作者：黄子聪来源：《农家科技下旬刊》2014年第09期摘要：铁皮石斛是兰科石斛属多年生附生草本植物，为传统名贵中药。
由于对生境要求十分苛刻，加之人为过分采收，现已濒临灭绝，已被列为“濒危珍稀植物”。
对铁皮石斛的组织培养及人工栽培进行研究，实现保护野生铁皮石斛资源的同时满足人们的消费需求，具有重要的现实意义。
关键词：铁皮石斛；组培快繁一、铁皮石斛组培培养（一）材料与方法1.供试材料供试材料：果荚：从浙江省购买回来的组培苗，栽种于温室大棚中，选择品质纯正的、生长健壮的铁皮石斛单株进行授粉，获得果荚。
茎段：从浙江省购买回来的组培苗，栽种于温室大棚中，选择品质纯正的、生长健壮的、二年生的、具有20厘米以上的铁皮石斛，自上而下剪下15厘米左右，带回实验室，备用。
2.方法（1）消毒方法果荚的消毒方法：将生长了5个月的果荚用消毒的剪刀从植株上剪下，带到超净工作台下，用75%的酒精浸泡2分钟，然后用灭菌去离子水清洗两次，放在灭菌的空瓶中。
播种前，将要切开的部位及花朵着生位置在酒精灯下稍微过火，然后再将基切开，播种。
（2）种子无菌播种将灭菌的果荚在果荚蒂附近的位置上用灭菌的手术刀切开一个约1.5厘米的切口，然后直接将种子均匀地撒在培养基上。
放在培养架上进行光照培养。
培养基配方：Z0：MS+NAA0.1mg/L+土豆汁100g/L（3）原球茎的增殖及分化将转绿的原球茎转接到增殖分化培养基上，每瓶接种6个点，每个点5个原球茎，5瓶一个重复，设3次重复。
茎段的消毒方法：选取茎段特征明显的铁皮石斛单株，用消毒的剪刀从节间靠下的位置将优选单株剪下，然后将叶片摘除，在自来水下将表面的灰尘洗去。
接下来将茎段上的叶鞘撕掉，特别是底部与节相连接的位置要去干净，同时注意不要伤到休眠芽，再用洗洁精进行表面清洗，在自来水下将洗洁精清洗干净，带到超净工作台下，用75%酒精浸泡两分钟，期间不断地搅拌，再用灭菌去离子水清洗2两，切成每段3-5节，用0.1%升汞（加吐温20 2滴）浸泡9分钟，期间不断地搅拌，倒去升汞溶液，再用灭菌去离子水清洗6次，每次2分钟。
铁皮石斛的组织培植简介铁皮石斛（Dendrobium officinale）是一种珍贵的中药材，被公认为具有滋补养生的功效。
由于其野生资源减少，组织培植成为了其繁殖的重要途径。
本文将介绍铁皮石斛的组织培植方法，用于指导相关研究和实践。
材料与方法1. 无菌实验室条件：培养室温度为25℃，相对湿度为60%-70%，光照强度为3000-4000lx。
2. 培养基配方：- MS培养基：含有葡萄糖（30g/L）、琼脂（8g/L）、pH值调整到5.8。
- 添加生长调节剂：添加6-苄氨基酸（0.1mg/L）和吲哚-3-乙酸（0.5mg/L）。
过程1. 选取健康无病的铁皮石斛茎段作为外植体，将其进行消毒处理。
使用70%酒精浸泡2分钟，随后用0.1%高锰酸钾溶液浸泡10分钟，最后用无菌蒸馏水冲洗3次。
2. 切取消毒后的茎段偏上部位的小芽组织，每个芽组织含有1-2个小芽。
3. 将切取的芽组织置于含有MS培养基和生长调节剂的培养瓶中。
4. 培养瓶密封并置于培养室中，进行组织培养。
每周移植一次，移至新的含有培养基的培养瓶中。
结果与讨论经过适当的组织培养时间，铁皮石斛的小芽可以快速生长并分化出根系。
在合适的培养条件下，每个芽组织可以发育成为整株植物，从而实现大规模繁殖。
值得注意的是，在铁皮石斛的组织培植过程中，应加强对培养基和环境条件的控制。
培养基中添加的生长调节剂和孕育液质量对结果有重要影响。
同时，无菌操作的严格执行也是保证培植过程成功的关键。
结论铁皮石斛的组织培植方法是一种有效的繁殖途径，能够满足市场需求，并促进可持续发展。
通过合理控制培养基配方和环境条件，可以实现铁皮石斛的大规模繁殖与种植，为相关产业的发展提供有力保障。
这一研究对于进一步深入了解铁皮石斛的生物学特性和开发利用具有重要意义。
铁皮石斛的组织培养技术简介铁皮石斛（Scientific name: Dendrobium officinale），是一种珍贵的药用植物，在中医药中有着悠久的历史和广泛应用。
铁皮石斛的组织培养技术是指利用无菌培养方法，通过细胞分裂和再生，培育大量优质的植株，以满足人们对铁皮石斛的需求。
本文将介绍铁皮石斛的组织培养技术的基本步骤和注意事项。
步骤1. 选择合适的外植体材料：铁皮石斛的外植体材料通常选取新鲜的茎段、叶片或花轴，并确保这些材料来自无病虫害的植株。
2. 表面消毒处理：将收集到的外植体材料进行表面消毒处理，常用的消毒剂包括漂白粉和酒精。
消毒时间和浓度应根据不同的外植体材料进行调整。
3. 建立无菌培养基：制备含有适当激素和营养物质的无菌培养基。
常用的基本培养基是MS培养基和B5培养基。
可以根据实验需要调整培养基的成分和浓度。
4. 培养和增殖：将表面消毒后的外植体材料放入含有适当培养基的培养瓶中，并置于暗室或恒温箱中进行培养。
光照和温度是影响铁皮石斛组织培养的重要因素，应根据植物的生长性进行调控。
5. 分化和再生：通过植物激素的投入和适当调控培养条件，促使外植体材料分化和再生成优质的铁皮石斛植株。
这一步骤往往需要持续几个月到数年的时间。
注意事项1. 保持无菌条件：组织培养需要在无菌条件下进行，以避免外源病原微生物的污染。
实验器具、培养基和操作环境必须经过严格的消毒和无菌处理。
2. 控制培养基成分和浓度：培养基的成分和浓度对植物的生长和分化起着重要的影响，需要根据不同的外植体材料和培养阶段进行合理的调整。
3. 确保适当的光照和温度：铁皮石斛对光照和温度有一定的要求，光照不足或温度过高都会影响植物的生长和分化。
应根据植物的生理特性，设置合适的光照和温度条件。
4. 定期检查和处理：组织培养过程中，应定期检查植株的生长状态和培养基的污染情况，并采取适当的措施处理。
需要及时除去培养瓶内的污染物，以保证植株的健康生长。
铁皮石斛种植技术培训一、种植场地环境条件1、场地海拨700～1500米之间，适宜种植区域在900～1300米之间。
适宜生长气温在22℃～30℃之间。
2、种植场地要有水源，水质要干净，酸碱度在5.5～7.0为宜;3、地势要相对平缓，便于搭棚和管理;4、场地不要在太低洼地带，要有排水排涝措施，以避免出现水灾、泥石流、积水和通风不畅。
二、种植大棚设施条件1、钢架单体棚（1）棚高3米左右；棚宽6米左右；棚长度根据场地条件灵活确定，一般长度在25米～35米之间。
（2）大棚包括：棚架、内外双层遮阳网、塑料薄膜、苗床、浇水等设施。
外遮阳网可为固定式，遮光度70%左右；外遮阳网距离棚顶25～50cm，有利于大棚通风、降温。
内遮阳网为活动式，遮光度50%左右，内遮阳网可人工收放。
（3）棚四周要建排水沟。
单体棚适于在平坦、缓坡场地使用。
单体棚成本较低、使用寿命长，优先推荐使用。
2、简易棚（1）棚高3米左右；棚宽4～6米左右；棚长度根据场地条件灵活确定，长度不超过30米。
棚四周要建排水沟。
（2）大棚包括：棚架、内外双层遮阳网、塑料薄膜、苗床、浇水等设施。
外遮阳网可为固定式，遮光度70%左右；内遮阳网为活动式，遮光度50%左右可人工收放遮阳网。
（3）简易棚适于在房前屋后、较小地带场地使用。
简易棚成本低，但使用寿命相对较短，2～3年后便要逐步修缮、修补。
3、连栋大棚（1）棚高4.5米左右；单拱宽8米左右，每棚3～4栋；棚长度根据场地条件灵活确定，一般长度在40米～50米之间。
（2）大棚包括：棚架、内外双层遮阳网、塑料薄膜、苗床、浇水等设施。
外遮阳网可为固定式，遮光度70%左右；内遮阳网为活动式，遮光度50%左右可人工收放遮阳网。
（3）连栋大棚适于在较平、宽阔场地使用；棚四周要建排水沟。
（4）连栋大棚成本较高、使用寿命长、通风降温效果好。
4、浇水设施（1）可通过挖井水，引入山泉水、河水、自来水等方式解决水源问题；但水质要保持干净，不能用脏水浇苗。
1，种子萌发培养室温度24-26℃，空气相对湿度60%。
光照要求1000x，每天光照12小时。
2原球茎增值Ms+12%土豆汁+0.5g/mlNAA 培养室温度24-26℃, 空气相对湿度60%,光照要求2000x, 每天光照14小时。
分化分类原球茎3类原球茎分化成完整植株Ms+10%香蕉汁+0.5mg/LNAA ,培养室温度24-26℃, 空气相对湿度60%,光照要求2000x,每天光照16小时4生根壮苗Ms+10%香蕉汁+1.0mg/LNAA.培养室温度24-26℃, 空气相对湿度60%,光照要求3000x,每天光照18小时5，炼苗瓶苗打开盖子放在定植环境中，盖上90目遮阳网，温度25-30℃，空气相对湿度60%七天之后定植，种苗出瓶温度要在15℃以上，在清水中把培养基洗干净然后放入80%代森锰锌可湿性粉剂500倍液中浸泡15分钟，再放在吸水性好的材料上，散射光下晾干，5-7小时后晾干根变成白色柔软不易受到伤害。
移到基质中培养，6移栽后用50%多菌灵可湿性粉剂1000倍液进行叶面喷施消毒，一周内空气湿度要求在90%左右，用90目遮阳网。
移栽三天后用85%磷酸二氢钾可湿性粉剂1500倍液增加小苗活力促进生根发芽。
一周后进入幼苗管理期，7，幼苗管理移栽7-15天，注意遮阳保湿，保证高存活率，用80目遮阳网。
移栽15-30天，用70目遮阳网每周喷施叶面肥一次氮磷钾含量为20%复合肥按1:1500溶于水中喷施，空气相对湿度保持在70-80%。
8成苗夏季管理在基质表面放一层苔藓，防止水分蒸发（目前来说我们的基质不需要，保湿很好）用双层80目遮阳网。
达到30-35℃，可强制通风，或每小时喷水一次降低温度，这个时期可喷施叶面肥，氮磷钾含量为20%复合肥按1:1500溶于水中喷施.20天一次9 秋季管理昼夜温差大，80目遮阳网灵活使用，上午10-下午15时阳光较强烈是用双层遮阳网，15时候可用单层。
温度较高时可以适当喷施，2-4给基质和页面施一次水。
铁皮石斛组培方案铁皮石斛组织培养方案报告一、实验目的了解铁皮石斛培养的方法和步骤，熟练掌握外植体的取材、消毒、接种、初代培养的操作过程。
二、实验器材超净工作台、高压灭菌锅、电磁炉、长镊子、培养皿、酒精灯、接种工具、烧杯、玻璃棒、移液管、培养箱、剪刀、培养瓶等。
三、实验步骤配方：根据不同阶段，培养基配方有所差异。
如表110%香蕉（w/w）+MS +3%蔗糖（w/w）+0.8%琼脂（w/w）+2.0mg/L NAA1）量取800ml蒸馏水于洁净的大烧杯中，加热至沸腾；2）准确称量100g香蕉果肉，切成碎片状，并倒入上述烧杯中，加热煮沸5min，其间搅拌使之充分溶解；3）按照大量、微量、Fe2+盐、有机Ⅰ、有机Ⅱ顺序，量取MS各种母液于盛有50ml蒸馏水的烧杯，混合均匀；4）将2）和3）的溶液混合，然后加入30g蔗糖，并移取2ml NAA（0.1mg/ml），混合均匀；5）加热至沸腾，加入8g琼脂并煮沸5min，其间不断搅拌使之充分溶解；6）冷却至50±5℃时，调pH至5.4—5.6。
分装于培养瓶内，33.3ml/瓶。
注意事项：①溶解香蕉的蒸馏水尽可能多，以确保香蕉各种成分完全溶解；②各种母液混合时，要按照大量、微量、Fe2+盐、有机Ⅰ、有机Ⅱ的顺序；③煮沸时，小心溶液溢出；④分装时不要污染培养瓶瓶口。
灭菌：1）检查灭菌锅的水位、电源、排气阀、排气管、安全阀以及压力表，确保灭菌锅各指标和功能的正常，以防事故发生；2）把带灭菌的培养基装入锅内，盖上锅盖，对称而均匀地扭紧螺丝；3）打开电源和排气阀，调节电压至220V；4）待排气阀排除水蒸气30s—1min后，关闭排气阀；5）当温度上升到121℃后，调节电压至135V，保持20min；6）关闭电源，使之自动降温至0℃。
10min后，打开排气阀和锅盖；7）5—10min后，取出培养基放于试验台上冷却，待用。
表2 灭菌时间统计注意事项：①启动灭菌前，应检查水位、电源、排气阀、安全阀、排气管等，确保正常；②灭菌锅底部应铺垫一层报纸，以防培养瓶机械破损；③灭菌电压不宜超过220V，否则灭菌锅会剧烈摇晃，造成不必要的损害和安全隐患；④当温度达到121℃后，调节电压至135V，并且时不时注意温度的变化，确保温度介于121-122℃之间；⑤气压降至0后，不宜立即揭盖；最好在5-10min后揭盖，这样才能缓和内外“气压和温度差”；⑥揭盖5-10min后，再转移锅内培养基，以免烫伤。
⑦每锅只能灭菌18瓶转接转接前准备1）培养皿、镊子、剪刀等转接用具的灭菌（可以在培养基灭菌时附带）；2）检查超净台内各种用具，及时补充酒精灯的酒精，确保用具齐全；3）放置待转接材料和待接入培养基，以“方便操作为宜”而陈列；转接1）揭去防尘膜，打开电源、通风和紫外灯，灭菌15—20min；2）关掉紫外，打开白炽灯，用75%酒精仔细擦拭手指、指甲、材料瓶瓶盖及盖边缘、工作区等处，确保“消毒”彻底；3）点燃酒精灯，用无菌镊子把材料夹取于无菌培养皿内，挑选生命力旺盛的植株用于转接；4）用无菌剪刀修去多余的根系，“双镊子”法将材料转接于新的培养基中；5）标注相关日期和品系，转至培养室培养。
注意事项①操作时，所有用具均不能从“核心工作区”和开启的培养瓶上面晃过，防止细菌落入而导致污染；②在打开材料瓶和培养瓶后，其盖均在酒精灯外焰灼烧3-5s，瓶口灼烧5-10s；盖瓶盖时，亦如此操作；③转接时，确保手一直在超净台内，以免带入外界细菌。
培养：培养条件：白炽灯12h/黑暗12h＋20℃PDA培养基的配制方法，培养基的湿热灭菌操作一、目的要求1．学习并掌握配制培养基的一般方法和步骤。
2．学习并掌握棉塞的制作方法。
二、培养基的配制原理培养基是人工配制的各种营养物质供微生物生长繁殖的基质，用以培养、分离、鉴定、保存各种微生物或积累代谢产物。
在自然界中，微生物种类繁多，营养类型多样，加上实训和研究的目的不同，所以培养基的种类很多，但不论是何种培养基，均应含有水分、碳源、氮源、能源、无机盐等。
不同微生物对pH值要求不一样，所以配制培养基时，还应根据不同微生物对pH值的要求，将培养基调到合适的pH值范围。
三、实训材料和用具琼脂，可溶性淀粉，葡萄糖， 10﹪NaOH，10﹪HCl，1mol／L NaOH，lmol／L HCl，KNO3，NaCl，K2HPO4·3H20，MgSO4·7H20，FeSO4·7H2O；试管，三角瓶，烧杯，量筒，玻璃棒，天平，牛角匙，PH试纸，棉花，牛皮纸，记号笔，纱布，四、操作方法与步骤(一) 培养基的配制PDA培养基的配制其配方如下：土豆200g，葡萄糖20g，琼脂15～20g，水1000mL，pH值自然。
(1)称量和熬煮药品实际用量计算后，按培养基配方逐一称取去皮土豆。
土豆切成小块放入锅中，加水1000ml，在加热器上加热至沸腾，维持20－30min，用可用2层纱布趁热在量杯上过滤，滤渣弃取。
滤液补充水分到1000ml。
(2)加热溶解把滤液放入锅中，加入葡萄糖20g，琼脂15～20g（提前搞碎），然后放在石棉网上，小火加热，并用玻棒不断搅拌，以防琼脂糊底或溢出，待琼脂完全溶解后，再补充水分至所需量。
(3)分装按实训要求，将配制的培养基分装入试管或500ml三角瓶内。
分装时可用三角漏斗以免使培养基沾在管口或瓶口上造成污染。
分装量：固体培养基约为试管高度的1／5，灭菌后制成斜面，分装入三角瓶内以不超过其容积的一半为宜；半固体培养基以试管高度的1／3为宜，灭菌后垂直待凝。
(4) 加棉塞培养基分装完毕后，在试管口或三角烧瓶口上塞上棉塞(或泡沫塑料塞或试管帽等)，以阻止外界微生物进入培养基内造成污染，并保证有良好的通气性能。
(5)包扎加塞后，将全部试管用麻绳或橡皮筋捆好，再在棉塞外包一层牛皮纸，以防止灭菌时冷凝水润湿棉塞，其外再用一道线绳或橡皮筋扎好，用记号笔注明培养基名称、组别、配制日期。
(二) 棉塞的制作棉塞的作用有二：一是防止杂菌污染；二是可过滤空气，保证通气良好，并可减缓培养基水分的蒸发，所以正确地制备棉塞是培养基制备中重要的一环。
正确的棉塞是形状、大小，松紧应与试管口(或三角烧瓶)完全适合。
过紧则妨碍空气流通，操作不便；过松时，空气会毫无障碍地进入试管(或三角烧瓶)中，达不到灭菌的目的。
棉塞过小往往易掉进试管内，因此棉塞质量的优劣对实训的结果有很大的影响。
正确的棉塞头较大，加塞时，应使棉塞长度的1／3留在试管口外，2／3在试管口内（见实训图6-4）。
目前，有条件的实训室已使用坚固的塑料试管帽、金属试管帽、硅胶泡沫塞替代棉塞，制作棉塞要选纤维较长的棉花，一般不选用脱脂棉。
因为它容易吸水变湿，造成污染，而且价格也贵。
棉塞制作方法见图6-5实图6-4棉塞实图6-5 棉塞的制作方法（三）斜面与平板培养基的制作斜面与平面培养基是常用的琼脂固体培养基。
将熬制好的琼脂培养基趁热装入试管灭菌后摆鞋面，凝固后即成斜面培养基。
斜面培养基常用于菌种培养、菌种保藏等工作。
将灭菌后的琼脂培养基倾注于无菌培养皿中，凝固后即成平板培养基。
平板培养基常用于分离菌种、菌落计数、菌落形态观察及菌种鉴定等。
斜面与平板培养基的制作过程大致为：溶解原料、融化琼脂、调PH、分装、灭菌和制斜面或平板。
1、溶解原料为加速原料的溶解，最好用热水。
先将原料依次加入到占配制量一半的水中，待全部溶解后在加足水量。
如配方中有马铃薯、麸皮、胡罗卜、豆芽等天然原料，需将其熬制约30min，取出定量滤液，在将所需的其他原料加入滤液中。
2、融化琼脂琼脂的用量可灵活掌握。
用作保藏菌种的培养基，琼脂用量可提高至2.5%，以增加持水性。
冬季的气温低，琼脂用量可适当减少。
琼脂用前可剪成小段，以利于融化。
待溶液煮沸是再加入，不断搅拌至完全无琼脂块状物时再停止加热。
3、调整PH用洁净干燥的玻璃棒沾一点培养基滴在试纸上，立即与比色板比较。
一般用10%NaOH或HCl调节。
4、分装将培养基趁热倒入垫有纱布的漏斗中，使培养基直接滤至试管或三角瓶中，试管装量一般为管高的1/4左右，三角瓶的装量约为其容量的一半。
勿使培养基玷污容器口部。
口部塞有棉塞，试管每7或9 支扎一捆，棉塞外面包牛皮纸，以防在灭菌过程中被水汽打湿。
5、灭菌分装后的培养基应随即灭菌。
除特殊情况外，一般培养基均用高压蒸汽灭菌，在104kPa压力下，灭菌20-30min 。
6、制作斜面或平板将灭菌后的试管趁热斜置于棍条上，倾斜度以试管中的培养基约占试管长度的1/2为宜，凝固后即成斜面培养基。
待灭菌后三角瓶内的培养基冷却至45~50时，以无菌操作法向无菌培养皿中倒入培养基，装置以刚覆盖整个培养皿底部为宜（约15ml）,凝固后即成平板培养基。
五、高压蒸汽灭菌法该法使用高压灭菌锅，在121℃，O．105MPa压力下灭菌15～30min。
微生物实训所需的一切器皿、器具、培养基(不耐高温者除外)、无菌水、工作服等物品都可用此法灭菌。
高压蒸汽灭菌锅是能耐一定压力的密闭金属锅，有立式或卧式(实图8-1、2 )两种。
灭菌锅上附有压力表、排气阀、安全阀、加水口、排水口等。
卧式灭菌锅还附有温度计。
有的还有蒸汽人口。
灭菌锅的加热源有电、煤气和蒸汽三种。
高压蒸汽灭菌的操作过程(1) 加水将灭菌锅内层灭菌桶取出，再向外层锅内加入适量的水，以水面与三角架相平为宜。
立式锅是直接加水至锅内底部隔板以下1／3处。
有加水口者由加水口加入至止水线处。
(2) 装料将装料桶放回锅内，装入待灭菌的物品。
放置装有培养基的容器时要防止液体溢出，瓶塞不要紧贴桶壁，以防冷凝水沾湿棉塞。
(3) 加盖摆正锅盖，对齐螺口，然后以同时旋紧相对的两个螺栓的方式拧紧所有螺栓，打开排气阀。
(4) 排气用电炉或煤气加热，待水煮沸后，水蒸气和空气一起从排气孔排出。
一般认为，当排气流很强并有嘘声时，表明锅内空气已排净(沸后约5min)。
(5) 升压当锅内空气排净时，即可关闭排气阀，压力开始上升。
实图7-1 立式灭菌锅实图7-2 卧式灭菌锅1．安全阀 2．压力表 3．放气阀4．软管 5．紧固螺栓 6．灭菌桶7．筛架8．水(6)保压当压力表指针达到所需压力刻度时，控制热源，开始计时并维持压力至所需时间。
本实训用121℃、20rnin灭菌。
(7)降压达到所需灭菌时间后，关闭热源，让压力自然下降到零后，打开排气阀。
放净余下的蒸汽后，再打开锅盖，取出灭菌物品，排掉锅内剩余水。
(8)无菌检查将已灭菌培养基冷却后置于37℃恒温箱内培养24h，若无菌生长，则放人冰箱或阴凉处保存备用。
4．化学药品灭菌化学药品消毒灭菌法是用能抑制或杀死微生物的化学制剂进行消毒灭菌的方法。
能破坏细菌代谢机能并有致死作用的化学药剂为杀菌剂，如重金属离子等；仅阻抑细菌代谢机能，使细菌不能增殖的化学药剂为抑菌剂，如磺胺类及大多抗生素等。
