标准曲线
Ve
log M
凝胶过滤层析的特点
优点：
操作条件温和，样品回收率可接近100％，并且重复性高。
作为脱盐手段，与透析法相比速度快、精度高；与超滤法相比，蛋白 活性收率高；
分离机理简单，操作参数少，容易规模放大
缺点：
分辨率不高，对于分子量相差不多的物质难以达到很好的分离
料液处理量小，并且样品粘度不宜太高
内水体积(Vi)是指凝胶颗粒中孔穴的体积。 基质体积(Vg)是指凝胶颗粒实际骨架体积。 柱床体积(Vt)就是指凝胶柱所能容纳的总体积。 洗脱体积(Ve)是指将样品中某一组分洗脱下来所需洗脱液的体积
凝胶层析柱各种体积示意图（阴影部分）
葡聚糖凝胶
➢ 葡聚糖凝胶（Sephadex）具有 良好的化学稳定性，是目前生 化产品制备中最常用的凝胶。
Sephadex G系列凝胶的分级范围 G10 <700 D G15 <1,500 G25 1,000 ~ 5,000 G-50 1,500~30,000 G-75 3,000~70,000 G100 4,000 ~150,000 G150 5,000 ~400,000 G200 5,000 ~800,000
这样，经过层析柱，混合物中的各物 质按其分子大小不同而被分离。
固定相（凝胶）
三维空间网状结构
分子筛效应： 按分子大小不同,在凝胶受到的阻滞
作用有差异,从而造成各组分在凝胶柱 中的迁移速度不同得到分离。
小分子
固 定 相
样品
流 动 相
大分子
小分子 被延滯
较快流出
基本概念
外水体积(Vo)是指凝胶柱中凝胶颗粒周围空间的体积，也就是凝胶颗粒 间液体流动相的体积。
样品的浓度：样品浓度以不大于4 ％为宜，样品浓度过大往往导致粘 度增大。如果样品浑浊，应先过滤 或离心除去颗粒后上柱
