醋酸纤维薄膜电泳分离血清蛋白质
一、实验目的：
掌握电泳的一般原理和醋酸纤维薄膜电泳的操作技术；
二、实验原理：
1、电泳：带电粒子在电场中向着与其电荷相反的方向泳动。
2、分类：按支持介质、电场强度、技术特点等分类。支持介质：自由界面
电泳；区带电泳：滤纸、醋纤薄膜、凝胶等。
3、基本原理---电荷效应：
F=Eq，f=6лrηv。匀强电场中，F=f，v=Eq/6лrη。在同一电泳条件下，混
合物中不同组分将因其r和q的差异而具有不同的移动速度。因此，电泳一定的
时间（t），就可以互相分离。通常使用“迁移率”（m）表示不同物质具有不同移
动速度的特性。m=V/E指在单位电场强度下带电颗粒的移动速度。
4、影响电泳的因素：
内在因素：样品本身所带净电荷、分子大小和形状。
外界因素：电场强度、缓冲液、支持介质。
5、血清蛋白的分离：
血清蛋白各组分pI≤7.5，缓冲液pH=8.6，净电荷为负电荷，向正极泳动。
由于各蛋白质成分的pI不同，所带电荷量q不同，加上分子半径大小r和形状
的差别，依V=Eq／6πrη 可知，不同蛋白质成分向正极泳动的速度不同，电泳
一定时间就可相互分离(Δd=Δv·t)。分离后的蛋白质须经显色才能检测鉴定，
通常用氨基黑10B 将血清蛋白质显色。
三、实验步骤：
1.泡膜 洗净手，戴乳胶手套，取薄膜，于毛面距一端1.5 cm 处用铅笔轻
画一直线。小心将膜浮于巴比妥缓冲液上，待下面湿润后再将膜完全浸入，浸泡
1小时 。
2.仪器准备 检查电源，接好电线（不通电），注意正负极。加巴比妥缓冲液
于电泳槽内，调整水平。
3.点样 取出泡好的薄膜，用滤纸吸去多余的缓冲液。毛面向上，于毛面膜的一端画线处点样，注意点样量适当。待样品渗入膜内后，将点样面翻转朝向下
方（以防电泳时薄膜表面蒸发干燥），置于电泳槽的支架上，点样端放在负极。
4.电泳 盖上电泳槽盖平衡5 分钟。然后检查电源正负极无误后通电，E=
血清蛋白质醋酸纤维素薄膜电泳实验结果讨论及注意事项
血清蛋白质醋酸纤维素薄膜电泳实验是一种常见的蛋白质分离和分析方法。这种方法基于蛋白质在电场中的迁移速度差异，可以实现对蛋白质的定性和定量分析。在进行这种实验时，需要注意一些实验操作步骤和技巧，以确保实验结果的准确性和可靠性。
实验步骤
1.准备样品：从血清中提取要分析的蛋白质样品。可使用丙酮、醋酸等溶液进行样品的处理和稀释。
2.制备凝胶：将醋酸纤维素膜在磁盘上进行切割，将膜放入电泳槽中，加入足够的电泳缓冲液。
3.电泳条件：确定好电泳槽内电泳缓冲液的pH值和离子浓度，根据蛋白质的性质确定最佳的电泳条件，如电场强度、电泳时间等。
4.上样：在预定位置上样，可使用微量注射器将样品滴于凝胶表面。 5.打开电源：连接电极，通电进行电泳。电泳时间根据分析的需要进行调整。
6.固定凝胶：停止电泳后，将凝胶取出，固定和染色。
7.分析：在透明胶支架上对凝胶进行扫描，记录下蛋白质的电泳迁移图像。
实验结果讨论：
1.蛋白质的分离：根据电泳上样区域蛋白质的迁移速率和位置，可以对样品中的蛋白质进行定性和定量分析。根据蛋白质之间的迁移时间差异，可以推测出它们在电场中的相对电荷、分子大小和电泳迁移速率等信息。
2.蛋白质的鉴定：可以通过与已知蛋白质标准品的电泳迁移对照来鉴定样品中蛋白质的种类和含量。也可以通过进一步的染色技术，如银染、荧光染色等，增强或显示蛋白质带的清晰度，从而更准确地分析样品中蛋白质的种类和富集。
3.实验重复性和稳定性：为了保证实验结果的可靠性，一般需要对实验进行多次重复操作，计算其平均值和标准差。同时也需要控制实验条件的稳定性，包括电泳缓冲液的配制、电场强度的控制、电泳时间的准确计时等。确保实验操作的一致性可以降低测定误差。
注意事项：
1.实验操作：操作时需佩戴手套，避免样品受到外界污染，减少实验误差。仔细熟悉实验步骤和操作要求，确保操作正确。
生物化学实验
醋酸纤维素薄膜电泳法分离血清蛋白质
一、实验目的
掌握醋酸纤维薄膜电泳法分离蛋白质的原理和方法
二、实验原理
蛋白质是两性电解质。在pH值小于其等电点的溶液中，蛋白质为正离子，在电场中向阴极移动；在pH值大于其等电点的溶液中，蛋白质为负离子，在电场中向阳极移动。血清中含有数种蛋白质，它们所具有的可解离基团不同，在同一pH的溶液中，所带净电荷不同，故可利用电泳法将它们分离。
血清中含有白蛋白、α-球蛋白、β-球蛋白、γ-球蛋白等，各种蛋白质由于氨基酸祖坟、立体构象、相对分子质量、等电点及形状不同，在电场中迁移速度不同。由表可知，血清中5种蛋白质的等电点大部分低于pH值7.0，所以在pH8.6的缓冲液中，它们都电离成负离子，在电场中向阳极移动。
蛋白质名称 等电点 相对分子质量
白蛋白 4.88 69000
α1-球蛋白 5.06 200000
α2-球蛋白 5.06 300000
β-球蛋白 5.12 90000~150000
γ-球蛋白 6.85~7.50 156000~300000
在一定范围内，蛋白质的含量与结合的燃染料量成正比，故可将蛋白质区带剪下，分别用0.4mol/L NaOH溶液浸洗下来，进行比色，测定其相对含量。也可以将染色后的薄膜直接用光密度计扫描，测定其相对含量。
肾病、弥漫性肝损害、肝硬化、原发性肝癌、多发性骨髓瘤、慢性炎症、妊娠等都可以使白蛋白下降。肾病时α1、α2、β球蛋白升高，γ-球蛋白降低。肝硬化时α2、β-球蛋白降低，而α1、γ-球蛋白升高。
三、实验器材
1、醋酸纤维薄膜（2cm*8cm，厚度120μm）
2、人血清；
3、烧杯及培养皿 数只；
4、点样器；
5、竹镊子；
6、玻璃棒；
7、电吹风；
8、试管 六只；
9、恒温水浴锅；
10、电泳槽；
11、直流稳压电泳仪；
12、7220型分光光度计；
13、剪刀
四、实验试剂
1、巴比妥-巴比妥钠缓冲液：取两个大烧杯，分别称取巴比妥钠和巴比妥溶解于500ml蒸馏水中；
醋酸纤维素薄膜电泳分离血清蛋白原理和实验方法
一、原理
醋酸纤维薄膜电泳是用醋酸纤维素薄膜作为支持物的电泳方法。带电颗粒在电场力作用下，向着与其电性相反的电极移动的现象称为电泳。由于各种蛋白质都有特定的等电点，如将蛋白质置于pH值低于其等电点的溶液中，则蛋白质将带正电荷而向负极移动。反之，则向正极移动。因为蛋白质分子在电场中移动的速度与其带电量、分子的形状及大小有关，所以，可用电泳法将不同的蛋白质分离开来。血清中含有多种蛋白质，它们的等电点都在pH 7.5以下。将血清放于pH 8.6的缓冲液电泳时，所有的血清蛋白都带有负电荷，在电场中将向正极移动。由于各种血清蛋白在相同pH时所带电荷数量不等，分子颗粒大小不一，因而泳动速度不同，经电泳被分离开来。血清蛋白质的等电点和分子量见下表。
本实验以醋酸纤维素薄膜（简称CAM）为支持物分离血清中的不同蛋白质。它是一种良好的呈均一泡沫状疏松薄膜，厚约120μm具有一定的吸水性。
二、实验材料、仪器及试剂
1．材料：健康人血清或鸡血清
2．仪器：电泳仪 电泳槽
3．试剂：
（1）醋酸纤维素薄膜；
（2）pH8.6 巴比妥缓冲液（离子强度0.06～0.07）：取巴比妥0.83克，巴比妥钠6.38克，加蒸馏水加热溶解后，定容至500ml。
（3）染色液：取氨基黑10 B 0.5克，溶于50ml甲醇中，再加冰醋酸10ml，蒸馏水40ml混匀。
（4）漂洗液：95%乙醇4.5ml，冰醋酸 5ml，蒸馏水50ml混合。
（5）透明液：95%乙醇80ml，冰醋酸20ml混合。
三、实验方法
1．准备薄膜：将切割整齐的 2.5×6cm的薄膜条，浸入巴比妥缓冲液中浸透后，取出，用吸水纸吸去多余缓冲液。
2．点样：仔细辩认薄膜的粗糙面与光滑面，在粗糙面距离薄膜一端1.5cm处，用铅笔轻轻划一条直线。用玻棒蘸上血清样品，涂于盖玻片边缘处（边缘长度应比膜条宽度窄），将此边缘按压在直线上。注意：样品应点在薄膜的粗糙面一侧。待血清完全渗入薄膜后，将膜面翻转，点样面（粗糙面）朝下，置电泳槽中，薄膜点样端放于负极一侧。
