下载文档原格式
银耳的菌种分离技术1. 引言银耳（Auricularia auricula-judae），又称黑木耳、银耳菇，是一种重要的食用真菌。
它具有丰富的营养价值和药用价值，在中国和东南亚地区广泛种植和消费。
银耳菌种分离技术是研究银耳的基础工作之一，通过菌种分离可以获得纯种菌株，为银耳的种植和研究提供基础数据。
本文将介绍银耳菌种分离技术的步骤和注意事项。
2. 菌种分离技术的原理银耳菌种分离技术基于真菌的生物学特性和培养条件的优化，通过分离和筛选，得到纯种菌株。
其基本原理包括以下几个步骤：2.1 菌丝分离首先，从银耳的菌丝体上采样，可以选择新鲜的银耳子实体或已培养的菌丝体作为样本。
将样本切碎，均匀地涂抹在培养基表面，并进行适当的培养条件，如温度、湿度等。
2.2 菌丝生长放置培养皿在适当的温度和湿度下，等待菌丝生长。
银耳菌丝具有较快的生长速度，通常几天后就可以观察到菌丝的生长。
2.3 菌丝筛选观察培养皿上的菌丝，筛选出生长良好、无污染、纯净的菌丝进行后续的操作。
可以根据菌丝的颜色、形态等特征进行筛选，有经验的研究人员可以凭借肉眼识别，也可以借助显微镜进行观察。
3. 菌种分离技术的步骤银耳菌种分离技术的步骤如下：3.1 准备工作准备培养基和培养设备，确保无菌条件。
常用的培养基包括马铃薯葡萄糖琼脂（PDA）、苹果蔗糖琼脂（AS）等。
同时，需要准备菌种采样工具、无菌操作箱、显微镜等设备。
3.2 菌丝分离从银耳的菌丝体上采样，取适量的样本均匀涂抹在培养基上。
注意避免污染，保证操作无菌。
3.3 培养菌丝将培养皿放置在恰当的培养条件下，如温度、光照和湿度等，并以适当的时间间隔观察菌丝的生长情况。
3.4 菌丝筛选观察培养皿上的菌丝，筛选生长良好、无污染、纯净的菌丝，并进行备份保存。
筛选的依据可以包括菌丝的颜色、形态、生长速度等特征。
3.5 目视鉴定将筛选出的菌丝进行目视观察和鉴定，以确定是否为所需的银耳菌株。
目视鉴定主要依据菌丝的形态特征、产孢器的形状和颜色等进行判断。
种植银耳的技术银耳也叫白木耳，它不仅是宴席上的珍品，而且具有重要的医疗保健作用。
那银耳怎么种植呢?下面是为你整理的，希望对您有用。
一、种植季节银耳属于中温型菌类，菌丝生长最适宜的温度为24～25℃，子实体发育适宜的温度为20～25℃。
种植季节以春、秋两季的自然气温最为适宜，也可以采取冬季种植房加温，夏季野外搭荫棚种植，使银耳一年四季都可以种植。
二、培养料的配制种植银耳的原料十分广泛，以棉籽壳最为理想，此外，杂木屑、玉米芯、甘蔗渣等也是常用的原料。
常用的培养料配方为：①棉籽壳85%，麦麸13%，石膏粉1.5%，蔗糖0.5%;②棉籽壳80%，麦麸15%，玉米粉3%;石膏粉1%，蔗糖1%;③杂木屑76%、麦麸20%、石膏粉2%、蔗糖1.3%、硫酸镁0.4%、尿素0.3%。
农户可以根据自己的实际情况，任选一种配方。
配制培养料时，先把木屑、棉籽壳、甘蔗渣等原料进行过筛，剔除混入的沙石、金属、木块等物质。
然后将棉籽壳或木屑倒入拌料场上，堆成山形，再把麦麸从山尖均匀地往下撒开，并把石膏粉均匀地撒向四周。
把上面的干料先搅拌均匀，然后把可溶性的添加物，如蔗糖、硫酸镁、尿素等溶于水中，再倒入干料中反复搅拌均匀。
每100千克干料加水100～130千克，使培养料的含水量在60%左右。
检测的办法是：手抓培养料握紧，如果手指缝间有水渗出，但不滴下，这时候最为适宜。
三、装袋、灭菌、接种1.装袋培养料拌匀后，要及时装入塑料袋内。
种植银耳用的塑料袋通常由高密度低压聚乙烯原料制成，半透明，柔而韧，抗寒、抗张力强，能耐100℃的高温。
种植袋长55厘米左右，直径8～10厘米，袋底密封良好。
规模化种植银耳通常采用装袋机装料，每小时可以装800～1000袋。
装料的方法是：把袋口张开，整袋套进装料机出料口的套筒上，双手托紧塑料袋。
当培养料从套筒源源输入袋内时，右手撑住袋头往内紧压，使培养料装紧装实。
当培养料装到离袋口5厘米左右的位置时，用棉纱线缠扎袋口3～4圈，再反折过来捆扎3～4圈，这样，袋口就密封好了。
银耳菌种分离方法获得银耳菌种的方法主要有担孢子弹射分离法、组织分离法和耳木分离法：1、孢子弹射法这是利用新鲜的、成熟的子实体自动弹射出担孢子来获得纯菌种的方法。
取朵大、色白、无病虫害的新鲜银耳作为种耳。
用无菌水漂洗银耳数次，再用无菌纱布或吸水纸，把银耳表面的水分吸干。
因为耳片表面若有薄水层，便会影响银耳担孢子的弹射，并容易污染上杂菌。
再把种耳切一小块，以放入三角瓶或放入试管中不会碰到瓶壁或管壁为度，随后用不锈钢小钩钩住小耳片，迅速悬挂在三角瓶或试管内，同时注意勿使种耳碰到培养基表面，以防污染杂菌，塞上棉塞，然后放在20-25℃条件下，经24小时，从耳片上弹射出来的担孢子，落在光滑的培养基表面上形成一个雾状的孢子印。
此时，在无菌箱或无菌室中，将悬于瓶内的耳片取出，再塞上棉塞，移到20-25℃的室中培养，经2-3天，培养基表面就会出现许多乳白色、糊状的小菌落。
此系银耳的酵母状分生孢子。
当培养基上出现酵母状分生孢子的菌落时，为了防止和减少污染，应尽快地进行提纯，即挑取少许没有杂菌的银耳酵母状分生孢子，移入新的试管中进行培养。
不管银耳担孢子或酵母状分生孢子都不容易萌发成菌丝，所以直接用于生产时有困难，目前已较少采用。
不过，为了获得银耳有性繁殖的后代，必须采用担孢子分离法，并使之萌发成单核菌丝，然后进行配对实验。
2、组织分离法和香菇、平菇不同，银耳组织分离法比较难操作，实用意义也不大。
因为耳片一旦胶质化之后，就不容易再长出菌丝，况且段木种植的或野生的银耳，暴露在外界的生长时间很长，耳片上必定会附着各种杂菌，组织分离时既不容易把附着的杂菌洗掉，又不容易用药品进行表面的灭菌处理，且容易导致银耳和条菌同归于尽。
只有位于树皮和木质部之间的肥厚的耳基比较容易进行组织分离，可以获得银耳的纯菌丝。
不过用耳基分离来的银耳纯菌丝常是鹅黄色的或橙黄色的，不是纯白的，菌丝生长的速度也比较慢，效果也不太理想。
3、耳木分离法利用长了银耳子实体的段木（简称耳木）来进行分离，是目前获得有实用价值的银耳菌种最主要的方法。
斜面培养基上，加棉塞后置22-24℃下恒温培养6-8天。
当银耳菌丝长至似绣球状如黄豆大小时，再连同香灰母种一起移入接种室（箱）里，按无菌操作用接种铲在距银耳纯菌丝团约2厘米处，接入一小块香灰菌丝母种，培养2天在接种块上便可见到白色菌丝，7天左右即形成白毛团而覆盖银耳纯菌丝团，12-15天在白毛团的上方可见到有红、黄色水珠即为成功。
需要指出，用银耳与香灰菌的斜面混合母种扩接原种时，应切去斜面的前后端，只取其绣球状的银耳纯白菌丝及附近黑灰色的香灰菌丝用于转接。
因此1支斜面母种只能接1瓶原种。
2、瓶装木屑原种混接法 如果没有银耳纯菌丝，将银耳孢子培养出芽孢母种，再接入瓶装木屑培养基制成的香灰菌母种，混合培养而成。
根据接种需要量，按1支香灰斜面母种扩接12-15瓶木屑培养基的比例，将香灰菌母种试管和经灭菌的瓶装木屑培养基，以及接种用的器具，一起放入接种箱里，按无菌操作，用接种铲挑取黄豆大小的香灰菌母种一块，接入木屑培养基瓶中。
接种完毕，移至24-26℃下培养，约经2天即可见到接种块上萌发白色菌丝。
此后要隔天检查，发现杂菌及时检出剔除。
一般培养11天左右，香灰菌丝可向培养基内延伸约3厘米，此时可观察到培养基表面有灰褐色或黑褐色的分泌物，这表明香灰菌丝生长旺盛，应及时接入银耳芽孢母种。
按1：12－15的比例，取银耳芽孢母种试管和培养好的木屑培养基香灰菌母种；一起放入接种室（箱）中，按无菌操作，用无菌接种刀划破香灰菌丝表层，再用无菌接种铲挑取少量银耳芽孢，接入香灰菌丝体中。
混合后将瓶移至23-25℃下培养，经10天左右即可见到银耳芽孢接种处生长浓白色菌丝。
再培养18天左右即出现红、黄色水珠，25天左右便可观察到有扭结状子实体原基，说明培养成功。
1瓶这样的木屑混合种可扩接30-40瓶原种（二级种）。
栽培种的生产 根据原种生长的好坏，耳基大小，银耳菌丝“吃料”的深度，来决定每瓶原种应扩接的瓶数。
为了保证质量，尽量控制在40-60瓶之内。
本技术提供一种银耳培养基，涉及食用菌栽培技术领域，本技术的银耳培养基由以下重量份的原料组成：板栗木816份、桑枝1015份、花生壳49份、杂木屑612份、石灰粉24份、木薯渣水解物615份和中药剩渣510份；本技术的银耳培养基采用基础培养料与木薯渣水解物和中药剩渣进行混合优化，通过发酵的处理使得培养基中的营养成分更容易被利用，各种养分的含量增高；其中的木薯渣水解物使其营养物质更加全面，中药剩渣能够抑制杂菌生长，从而提高银耳的产量和品质。
技术要求1.一种银耳培养基，其特征在于，所述银耳培养基由以下重量份的原料组成：板栗木8-16份、桑枝10-15份、花生壳4-9份、杂木屑6-12份、石灰粉2-4份、木薯渣水解物6-15份和中药剩渣5-10份。
2.根据权利要求1所述的一种银耳培养基，其特征在于，所述银耳培养基由以下重量份的原料组成：板栗木12份、桑枝12份、花生壳7份、杂木屑9份、石灰粉3份、木薯渣水解物10份和中药剩渣7份。
3.根据权利要求1所述的一种银耳培养基，其特征在于，所述木薯渣水解物通过以下方法得到：将木薯渣进行烘干并粉碎至60-80目筛，而后加入离子液体至木薯渣的质量浓度为3-8％，然后在温度为80-100℃、转速为85-110r/min的条件下，搅拌80-110min，得到木薯渣溶液，加入木薯渣溶液3-5倍体积的水，在温度为65-95℃、转速为120-140r/min的条件下搅拌处理30-60min，接着在3500-4500r/min下离心10-20min，收集沉淀，将沉淀在40-60℃真空干燥3-5h，得到再生木薯渣；将所得再生木薯渣加适量水充分混匀，再加入纤维素酶进行酶解后即可得到木薯渣水解物。
4.根据权利要求1所述的一种银耳培养基，其特征在于，所述中药剩渣是由枳实药渣、金银花药渣、白茅根药渣、罗汉果渣、余甘子药渣和栀子药渣按照质量比为1-2:1:2:3:1-2:1的比例混合得到。
怎样制作银耳菌种的母种？银耳菌种必须同时有银耳菌丝和香灰菌丝才能出耳，怎样制作银耳菌种的母种？下面来简单介绍一下。
在制作母种的过程中，可以选用耳木分离法和孢子分离法。
一、耳木分离法耳木分离出来的菌种，已有银耳菌丝和香灰菌丝。
其分离步骤如下。
第一步，当1~2批银耳生长时，选择银耳生长旺、朵大、色白、肉厚、开片正常、产量高、无病虫害的耳木，从长有子实体的部位锯下1~2厘米厚的一段，去掉耳基及树皮，用75%的酒精涂擦其表面，然后放入消毒的接种箱内。
第二步，把木块浸入0.1%升汞液中20~30秒钟，用无菌水冲洗残留的药液，再用无菌纱布揩干。
第三步，用消毒的小榔头和解剖刀先劈取耳基附近的木片（选有大理石花纹处），再把木片劈成如火柴杆粗的小木条（或用利刀削下粉末状的木屑）。
第四步，用消毒的镊子把一个木条（或小木屑）接入斜面培养基中。
第五步，把试管置23~25℃培养，当木条上（或木屑上）长出纤细的白色菌丝，并延伸至培养基上。
这时培养基的颜色变黄转黑，表面出现浅灰色斑纹，这就是香灰菌丝。
7天后，木条上出现短绒状菌丝，同时分泌白色或淡黄色水珠，这就是银耳菌丝。
生长过程中发现红、绿、黄、黑等孢子和螨类害虫要及时淘汰，但浅黄色的凸起糊状小菌落是芽孢，不是杂菌。
第六步，挑取少许银耳菌丝和香灰菌丝，接种于新的斜面培养基上，进行扩大，1周后菌丝长满试管，即成母种。
二、孢子分离法孢子分离的菌种萌发成芽孢子（银耳孢子在一般马铃薯洋菜培养基上易形成芽孢子）或银耳菌丝，可用于栽培种复壮或同香灰菌丝混合制成母种。
其步骤如下。
第一步，取数只50毫升三角瓶，每只装0.5厘米厚的培养基，灭菌备用。
第二步，选择朵大、肉厚、色白、开片正常、大小适中、无杂菌和病虫害、八九成熟的鲜耳作为种耳，移入消毒的接种箱中，用无菌水反复冲洗几次。
第三步，用消毒纱布或吸水纸，把耳片表面揩干。
第四步，用消毒的解剖刀割取一小片耳瓣，挂于消毒的金属钩子上，迅速移入三角瓶中，钩子另一端钩在三角瓶口上，使耳瓣距离培养基表面2~3厘米，塞上棉塞。
通江银耳菌种质量标准一、一级菌种（试管种）鉴定标准1、感观鉴定(1)优质纯银耳菌丝在马铃薯洋菜培养基上洁白、粗壮、短齐向上、周围有淡黄色水珠、长势旺盛。
(2)优质纯羽毛状菌丝（俗称香灰菌丝），在马铃薯洋菜培养基上生长迅速，菌丝平爬，状如羽毛，爬壁能力强，转色快，由初生白色转为草绿色，最后转为褐色。
(3)纯银耳菌丝与纯羽毛状菌丝配对要适时。
银耳菌丝在新培养基上生长七天，方可配对羽毛状菌丝。
(4)配对后的优质银耳一级种（试管种）应无明显拮抗线，以及黄、红、绿、黑等异常现象。
2、显微镜检查鉴定(1)挑取少量纯银耳菌丝，置于载玻片中央的无菌水滴上，用解剖针拨散，盖上玻片，放大1500倍观察，正常菌丝一般具有透明、分枝、有横隔和明显的锁状联合。
(2)挑取少量的纯羽毛状菌丝，置于载玻片中央无菌水滴上，用解剖针拨散菌丝，加碘酒或美蓝等染色后进行镜检，正常菌丝一般具有菌丝粗壮（状如羽毛）、分枝、锁状联合多而密，无其它异常现象。
(3)用无菌操作法，将纯银耳菌丝、纯羽毛状菌丝分别注入2毫升液体培养基，在25—28℃之间培养24—48小时，取滴镜检菌丝恢复情况和有无其它异常物的出现。
3、生理特点鉴定(1)纯银耳菌丝、纯羽毛状菌丝对冷反应：将培养7天的两种菌丝（或菌液）置于－196℃的液氮罐内7天后取出复苏，立即镜检其在视野下是否有活力？同时移入新鲜马铃薯洋菜培养基上，在25—28℃的条件下培养48小时，观察菌丝的恢复力强否。
(2)纯银耳菌丝、纯羽毛状菌丝对热反应：将培养7天后的两种菌丝分别置于35℃、38℃、40℃的温度下，观察多长时间活力消失。
(3)淡水生存：将培养好的菌液取1毫升，注入1000毫升的蒸溜水中，置于25℃的条件下24小时后，镜检其菌丝活力有无减弱。
(4)药物敏感试验鉴定银耳生产的整套工艺流程比较多，各环节所需杀菌、杀虫的药品各不相同，浓度也不相同。
因此，哪种药物、哪种浓度，对纯银耳菌丝、纯羽毛状菌丝接近临界死亡，菌种生产厂家应注明。
圆园21年3月第42卷第6期DOI ：10.12161/j.issn.1005-6521.2021.06.003基金项目：重庆市科技局鲁渝科技协作项目（cstc2019jscx-lyzxX0002）；重庆市技术创新与应用示范（社会民生类）项目（cstc2018jscx-msy -bX0209、cstc2018jscx-mszdX0046）作者简介：罗杨（1986—），女（汉），副研究员，硕士，研究方向：中药大健康产品与技术开发。
*通信作者：李娟（1990—），女，助理研究员，研究方向：中药大健康产品与技术开发。
桑枝、桔梗非药用部位培养基对银耳产量及营养安全性的影响罗杨1，2，陈岗1，范俊安3，吴振1，2，杨勇1，2，叶会琼1，李娟1*（1.重庆市中药研究院，重庆400065；2.中药健康学重庆市重点实验室，重庆400065；3.重庆市知识产权局，重庆400023）摘要：采用桑枝或桔梗非药用部位栽培银耳，以传统棉籽壳基料为对照，考察其对银耳产量、营养品质及安全性的影响。
结果表明：桑枝、桔梗培养银耳生长良好，其子实体鲜重、直径以及生物学效率与对照相近；桔梗培养基银耳总糖及多糖分别比对照组高16.67%和23.5%；桑枝培养基银耳粗纤维含量比对照高13.75%；桑枝、桔梗培养基组银耳氨基酸种类及总含量差异不显著，但必需氨基酸总含量均显著高于对照，分别高29.8%和12.8%；桑枝培养基组银耳的Ca 、Fe 、Mn 、Na 、Mg 、K 高于对照组，桔梗培养基组银耳的Mn 、Cu 、Na 、K 高于对照组。
桑枝、桔梗栽培银耳不存在棉酚问题，且其农残、重金属及米酵菌酸等卫生指标也远低于国家标准规定的限量值，说明桑枝或桔梗非药用部位栽培银耳切实可行。
关键词：银耳；桑枝；桔梗；营养成分；安全性Effects of Non-medicinal Part Culture Medium of Mulberry Branch and Platycodon Grandiflorum onYield and Nutritional Safety of TremellaLUO Yang 1，2，CHEN Gang 1，FAN Jun-an 3，WU Zhen 1，2，YANG Yong 1，2，YE Hui-qiong 1，LI Juan 1*（1.Chongqing Academy of Chinese Materia Medica ，Chongqing 400065，China ；2.Chongqing Key Laboratoryof Chinese Medicine &Health Science ，Chongqing 400065，China ；3.Chongqing Intellectual PropertyOffice ，Chongqing 400023，China ）Abstract ：Tremella was cultivated from non-medicinal parts of mulberry branch or platycodon grandiflorum ，and the effects on the yield ，nutritional quality and safety of tremella were investigated by using traditional cot -tonseed shell as control.The results showed that the growth of tremella was good ，and its fresh weight ，diameter and biological efficiency were similar to those of the control group.The total sugars and polysaccharides in mul -berry branch and platycodon grandiflorum medium were 16.67%and 23.5%higher than those in control group.The content of crude fiber in mulberry branch medium was 13.75%higher than that in control medium.There was no significant difference in the amino acid types and total contents of tremella in the medium group of mul -berry branch and platycodon grandiflorum ，but the total contents of essential amino acids were significantly higher than the control group ，29.8%higher and 12.8%higher respectively.The Ca ，Fe ，Mn ，Na ，Mg and K of tremella in the mulberry branch medium group were higher than those in the control group ，while the Mn ，Cu ，Na and K of tremella in the platycodon grandiflorum medium group were higher than those in the control group.There was no gossyphenol problem in the cultivation of tremella with mulberry branch and platycodon grandiflo -rum medium ，and the sanitary indexes of its pesticide residues ，heavy metals and bongkrekic acid were far low -er than the limit value stipulated by the national standards.The results showed that it was feasible to cultivatetremella japonica in non-medicinal parts of mulberry branch or platycodon grandiflorum.Key words ：tremella ；mulberry branch ；platycodon grandiflorum ；nutritional ；safety基础研究12圆园21年3月第42卷第6期引文格式：罗杨，陈岗，范俊安，等.桑枝、桔梗非药用部位培养基对银耳产量及营养安全性的影响[J].食品研究与开发，2021，42（6）：12-16.LUO Yang，CHEN Gang，FAN Junan，et al.Effects of Non-medicinal Part Culture Medium of Mulberry Branch and Platy原codon Grandiflorum on Yield and Nutritional Safety of Tremella[J].Food Research and Development，2021，42（6）：12-16.银耳（Tremella fuciformis），又名雪耳，是一种优质的药食两用菌类，含有多糖、多种氨基酸和微量元素等营养成分，素有“菌中之王”的美誉[1]，被列为“参、茸、燕、耳”四大珍品之一[2]。
