墨旱莲提取物对小鼠免疫调节作用的研究

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本研究结果表明 , 乐新通胶囊给予小鼠连续灌 胃 30~ 35 天, 能促进小鼠的脾淋巴细胞转化增殖能 力 , 提高小鼠的抗体生成细胞数和血清溶血素水平 , 促进小鼠的迟发型变态反应, 提高小鼠的 NK 细胞 活性。由此可见 , 乐新通胶囊具有增强免疫力功能 作用。
[ 参考文献] [ 1] 薛 彬, 雷志明, 魏雪涛, 等 . 免疫毒理学实验技术[ M] . 北京: 北京医科大学, 中国协和医科大学联合出版社, 1995. 19- 65. [ 2] 赵 524. [ 3] 潘京一, 杨 377- 379. [ 4] 王文涛, 周金黄, 邢善田, 等 . 海藻硫酸多糖对正常小鼠 及免疫低下小鼠的免疫调节作用[ J] . 中国药理学与毒 理学杂志, 1994, 8( 3) : 199- 202.
收稿日期: 2008- 09- 03
剂量组 ( mg/ kg BW) 267 134 67 阴性对照
NK 细胞活性 转换值( X) 0. 959 0. 170 0. 661 0. 110 0. 612 0. 380 0. 067 0. 107
注 : 与阴性对照组比较
小鼠抗体生成细胞数和血清溶血素水平 , 促进小鼠 单核 - 巨噬细胞碳廓清作用 , 增强小鼠的单核- 腹 腔巨噬细胞吞噬能力, 提高小鼠 NK 细胞活性 [2 ]。枸 杞能促进抗体积数、 溶血空斑数明显升高, 耳廓肿胀 度、 淋巴细胞转化吸光度差值、 单核 - 巨噬细胞数的 吞噬指数、 NK 细胞活性显著增加 。海藻硫酸多糖 可增强正常小鼠体内外淋巴细胞增殖反应, 促进小 鼠体内淋巴细胞产生白介素 2、巨噬细胞产生白介 素 1, 对正常小鼠自然杀伤细胞活性和溶血素生成 等也有较好的促进作用 [4 ]。
应用预防医学 2008 年 12 月第 14 卷第 6 期
355 计算吞噬指数 a: K= ( lgOD1- lgOD2/ ( t 2- t 1) , a= K 1/ 3 ∋ 体重 / ( 肝重+ 脾重 ) 。 1. 4. 5 血清溶血素的测定 ( 凝集法 ) 实验前 5 天 给受试小鼠每只腹腔注射 0. 2mL2% ( v/ v) SRBC 细 胞悬液进行免疫 , 末次给样后 1h 眼内眦取血 , 分离 出血清 , 取 100 L 分别置于微量血凝板内 , 用生理盐 水倍比稀释 , 然后每孔加入 100 L 0. 5% 的 SRBC 混 悬液 , 于 37 & 培养箱孵育 3h, 观察血球凝集程度 ( 0~ #级 ) 。 1. 4. 6 NK 细胞活性测定 ( LDH 测定法 ) 无菌取 脾 , 制成脾细胞悬液 , 取 YAC- 1 细胞和脾细胞悬液 各 100 L, 加入 U 型 96 孔培养板中; 自然释放孔加 YAC- 1 细 胞和 培 养液 各 100 L, 最 大释 放 孔加 YAC- 1 细胞和 1% NP40 各 100 L, 上述各项各设 3 个平行孔, 置 5% CO2, 37 & 二氧化碳孵箱中培养 4h。然后将 96 孔培养板以 1 500 转/ 分离心 5 分钟 , 每孔吸取上清 100 L 置平底 96 孔培养板中 , 同时加 入 LDH 基质液 100 L, 反应 8 分钟 , 每孔加入 1mol/ L 的 HCl30 L, 在酶标仪 490nm 处测定 OD 值。按下式 计算 NK 细胞活性: NK 细胞活性 ( % ) = ( 反应孔 OD- 自然释放孔 OD) / ( 最大释放孔 OD- 自然释放孔 OD) ∋ 100% 1. 5 数据统计 分析处理。 2 结果 2. 1 墨旱莲提取物对小鼠脏器/ 体重比值的影响 由表 1 和表 2 可见, 墨旱莲提取物各剂量组的胸腺 / 体重及脾脏 / 体重比值与对照组比较 , 均无显著性差 异 ( P > 0. 05) , 提示该墨旱莲提取物对小鼠的免疫 器官重量无明显影响。 2. 2 墨旱莲提取物对小鼠细胞免疫功能的影响 由
作者简介: 王彦武( 1977- ) , 男, 广西金秀人, 医师, 现从事保健食品 毒性与功能检验工作。
1. 2 动物与分组 广西医科大学医学实验动物中 心 批准号为 : 桂动许字 ( 2003) 第 003 号 繁殖的 SPF 级健康成年昆明种雄性小鼠 , 体重为 18~ 22 克 , 分 为 6 批, 每批 48 只。 每 48 只小鼠为 1 组, 共 6 组。 免 疫 I 组 , 进行 ConA 诱导的小鼠脾淋巴细胞转化实 验 ; 免疫 !组 , 进行迟发型变态反应实验; 免疫 ∀ 组, 进行腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞实验 ; 免疫 #组 , 进 行小鼠碳廓清实验 ; 免疫 ∃ 组, 进行血清溶血素测 定 ; 免疫 % 组 , 进行 NK 细胞活性测定。 1. 3 主要仪器与试剂 仪器: 全自动酶标仪、 生化分 析仪、 冷冻离心机、 二氧化碳培养箱、电子分析天平 等。试剂: ConA、 MTT、 绵羊红细胞 ( SRBC) 、 补体、 RP MI1640、 DNFB、 印度墨汁、 YAC- 1 细胞、 NP40等。
取物经口给予小鼠连续灌胃 30~ 38 天后, 进行各项免疫指标的测定。 结果 鼠的 NK 细胞活性。结论 [ 关键词] 墨旱莲提取物具有免疫调节作用。
转化作用, 提高小鼠的血清溶血素水平, 促进小鼠的迟发型变态反应, 增强小鼠的单核- 腹腔巨噬细胞吞噬能力, 提高小 墨旱莲提取物; 小鼠; 免疫调节
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表6 乐新通胶囊对小鼠 NK 细胞活性的影响( x 动物数 ( 只) 12 12 12 12 NK 细胞活性 (%) 66. 4 15. 9 38. 0 10. 3 33. 2 6. 1 14. 5 7. 6 P < 0. 01。 s)
Applied Prev Med, December 2008, Vol 14 No. 6
应用 SPSS11. 0 统计软件进行方差
给小鼠注射稀释的印度墨汁 ( 用生理盐水稀释 4 倍) ( 100mL/ kg BW) , 墨汁注入后立即计时 , 2min 和 10min 分 别 从 眼 内 眦 取 血 20 L 加 到 2mL 0. 1% Na 2CO 3 溶液中 , 用生化分析仪于 600nm 波长处测光 密度值( OD) 。 处死小鼠, 取肝脏和脾脏称重。 按下式
[3]
鹏, 李
彬, 何为涛, 等 . 三七皂甙对小鼠免疫功能
影响的实验研究[ J] . 中国热带医学, 2004, 4( 4) : 522隽, 潘喜华 . 枸杞子抗疲劳与增强免疫作
用的实验研究[ J] . 上海预防医学杂志, 2003, 15 ( 8) :
文章编号: 1673- 758X( 2008) 06- 0354- 03
免疫 #组 0. 19 0. 04 0. 23 0. 07 0. 19 0. 04 0. 23 0. 03
0. 17 0. 04 0. 19 0. 03 0. 18 0. 06 0. 19 0. 05
注: 与对照组比较 P > 0 05。
表 3 可见 , 墨旱莲提取物各剂量组的脾淋巴细胞转 化 OD 差值均大于对照组, 其中高剂量组与对照组 的差异有显著性 ( P < 0. 05) , 表明墨旱莲提取物具 有刺激脾淋巴细胞增值、转化的作用。墨旱莲提取
s) 免疫 ∃组 0. 18 0. 04 0. 17 0. 06 0. 17 0. 07 0. 18 0. 05 免疫 % 组 0. 18 0. 03 0. 18 0. 05 0. 19 0. 03 0. 19 0. 04
1. 4 方法
根据该墨旱莲提取物的人体日食推荐
用量 , 设 375、 750、 1 500mg / kg BW( 分别相当于人体 推荐用量的 5、 10、 20 倍 ) 3 个剂量的实验组, 同时设 一个对照组。 每组 12 只小鼠。 每天以 0. 4mL/ 20g BW 的容量给小鼠灌胃不同剂量的受试物, 对照组给予 等量蒸馏水。 每天 1 次 , 连续 30 ~ 38 天。 末次给样 1h 以后进行下列各项免疫指标的测定。 1. 4. 1 ConA 诱导的小鼠脾淋巴细胞转化实验 无菌 取脾, 制成脾细胞悬液, 将每一份悬液分两孔加入 24 孔培养板中, 每孔 1mL, 一孔加 75 L ConA 液( 相当于 7. 5 g/ mL) , 另一孔作为对照, 置 5% CO2, 37 & 二氧 化碳孵箱中培养 72h。用全自动酶标仪于波长570nm 处测定培养液 OD 值。 用加 ConA 孔的 OD 值减去不加 ConA 孔的 OD 值表示淋巴细胞的增值能力。 1. 4. 2 二硝基氟苯诱导小鼠 DTH( 耳肿胀法 ) 给
中图分类号: R285. 5
文献标识码: A
墨旱莲提取物对小鼠免疫调节作用的研究
王彦武, 李凤文 , 黄超培 , 傅伟忠, 谭宗艳 , 梁慧莉 , 杨俊峰
广西壮族自治区疾病预防控制中心( 南宁 530028) [ 摘要] 目的 评价墨旱莲提取物对小鼠的免疫调节作用。 方法 分别以 375、 750、 1 500mg/ kg BW 剂量的墨旱莲提 墨旱莲提取, December 2008, Vol 14 No. 6
免疫 !组 0. 42 0. 08 0. 39 0. 05 0. 37 0. 05 0. 43 0. 08
免疫 #组 0. 42 0. 09 0. 40 0. 09 0. 41 0. 08 0. 42 0. 08
物各剂量组小鼠的左右耳重量差值均大于对照组 , 其 中 高剂 量 组 与对 照 组 的 差异 具 有 显 著 性 ( P < 0. 05) , 表明墨旱莲提取物能提高 DNFB 诱导小鼠 耳肿胀程度 , 具有促进迟发型变态反应的作用。
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表2 剂量组 动物数 ( mg/ kg BW) ( 只) 1 500 750 375 对照组 12 12 12 12 免疫 ( 组 0. 42 0. 11 0. 39 0. 10 0. 42 0. 13 0. 42 0. 10 各组小鼠脾/ 体重比值结果( x 免疫 ∀组 0. 43 0. 09 0. 43 0. 09 0. 41 0. 10 0. 42 0. 09 s)