运动生物化学实验指导
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运动生物化学实验报告引言运动生物化学实验旨在研究生物体在运动过程中发生的化学变化。
本实验选取了跑步作为研究对象,通过测量参与者跑步前后的血液参数以及肌肉乳酸含量的变化,来探究运动对生物体的影响。
本文将详细介绍实验步骤和结果分析。
实验步骤1.参与者选择与实验员沟通,并签署知情同意书。
2.参与者在跑步前进行全身热身运动,以准备身体进行高强度运动。
3.在跑步前和跑步后,采集参与者的血液样本。
采集血液样本的方法可以选择采血静脉或指尖采血。
4.将采集的血液样本分别离心,将血清和血浆分离。
血浆中含有乳酸、血糖等指标,血清中含有血清酶等指标。
5.使用生化分析仪器,测量血浆中乳酸、血糖等指标的浓度。
6.分析参与者跑步前后乳酸和血糖的浓度变化,并与正常值进行比较。
7.根据实验结果,分析运动对生物体的影响。
实验结果实验结果显示,参与者在跑步后乳酸和血糖的浓度均有所增加。
具体数据如下表所示:参与者编号跑步前乳酸浓度(mmol/L)跑步后乳酸浓度(mmol/L)跑步前血糖浓度(mmol/L)跑步后血糖浓度(mmol/L)1 1.8 3.4 4.9 6.32 2.2 4.1 5.2 6.83 1.9 3.8 4.5 6.1从数据中可以看出,参与者在跑步后乳酸浓度的增加明显,这是由于肌肉细胞在进行高强度运动时产生了大量乳酸。
血糖浓度也有所增加,这是因为运动时身体需要更多的能量,血液中的血糖被释放出来供给肌肉细胞使用。
结果分析通过对实验结果的分析,我们可以得出以下结论:1.运动会导致乳酸和血糖浓度的增加。
这是因为运动时肌肉细胞需要更多的能量,从而产生大量乳酸,并导致血糖浓度升高。
2.运动对不同人群的影响可能存在差异。
不同参与者乳酸和血糖的浓度变化程度可能有所不同,这可能与个体的代谢能力和运动水平有关。
结论本实验通过测量参与者跑步前后的血液参数,研究了运动对生物体的影响。
实验结果表明,运动会导致乳酸和血糖浓度的增加。
这一结论对于理解运动生物化学变化的机制以及制定健康运动方案具有重要意义。
运动生化实验指导学院年级班级学号姓名宁夏师范学院体育学院目录实验须知 (2)实验一基本操作……………………………………………… 3-7 实验二血糖测定……………………………………………… 8-9 实验三血红蛋白测定……………………………………… 10-11 实验四运动对血乳酸含量的测定…………………………… 12-14实验须知1.实验室规则(1) 实验课必须提前5分钟到实验室,不迟到,不早退,应自觉遵守课堂纪律。
(2) 使用仪器、药品、试剂和各种物品必须注意节约, 应特别注意保持药品和试剂的纯净, 严防混杂污染。
(3) 实验台、试剂药品架必须保持整洁, 仪器药品摆放井然有序。
实验完毕,需将药品、试剂排列整齐, 仪器洗净倒置放好, 实验台面抹拭干净, 经教师验收仪器后, 方可离开实验室。
(4) 使用和洗涤仪器时, 应小心谨慎, 防止损坏仪器。
使用精密仪器时, 应严格遵守操作规程, 发现故障应立即报告教师, 不要自己动手检修。
(5) 在实验过程中要听从教师的指导, 严肃认真地按操作规程进行实验, 并简要、准确地将实验结果和数据记录在实验记录本上。
课后写出实验报告, 由课代表收齐交给教师。
(6)仪器损坏时, 应如实向教师报告, 真填写损坏仪器登记表, 然后补偿一定金额。
(7)每次实验课安排同学轮流值日, 值日生要负责当天实验的卫生和安全检查。
2.实验记录实验课前应认真预习实验内容,将实验名称、实验原理、实验内容和步骤等简单扼要写在记录本上。
实验记录本要标明页码,不能随意撕掉任何一页。
实验中使用的试剂纯度和终浓度以及使用的仪器类型等都要记录清楚。
实验中观察到的现象、结果和得出的数据,应及时直接记在记录本上,绝对不可以随意记在单片纸上。
原始记录必须准确、简练、清楚。
3.实验报告的书写实验结束后,应及时整理和总结实验结果,写出实验报告。
按照实验内容可分为定性和定量两大类,实验报告的格式:实验序号,实验名称;目的和要求、内容与原理、主要仪器及试剂配制、操作方法与实验步骤、结果与讨论。
生物化学实验指导生物化学实验是探索生命奥秘的重要手段,通过实验操作,我们能够更深入地理解生物体内的化学反应和物质代谢过程。
本实验指导将帮助您顺利完成生物化学实验,提高实验技能和科学素养。
一、实验前的准备(一)了解实验目的在进行每个实验之前,务必清楚地知道实验的目的是什么。
这将有助于您在实验过程中保持专注,并理解实验结果的意义。
(二)预习实验内容认真阅读实验教材和相关的参考资料,熟悉实验的原理、步骤和注意事项。
如果有不明白的地方,可以向老师或同学请教。
(三)准备实验用品根据实验要求,准备好所需的仪器、试剂和材料。
检查仪器是否完好,试剂是否过期,并确保材料的质量和数量符合实验要求。
二、实验安全(一)个人防护在实验过程中,要穿戴好实验服、手套和护目镜等防护用品,以保护自己免受化学试剂和生物样本的伤害。
了解所使用化学试剂的性质和危险特性,遵守化学品的储存、使用和处理规定。
避免直接接触有毒、有害和腐蚀性试剂,如果不慎接触,应立即用大量清水冲洗,并寻求医疗帮助。
(三)生物安全对于涉及生物样本的实验,要遵循生物安全操作规范,防止感染和交叉污染。
在处理微生物、细胞和组织样本时,要在无菌条件下进行,并妥善处理废弃物。
(四)防火防爆实验室中严禁烟火,要熟悉灭火器和紧急喷淋装置的位置和使用方法。
对于易燃易爆的试剂和气体,要严格按照操作规程使用和储存。
三、常用仪器的使用(一)移液器移液器是定量移取液体的常用工具。
使用前要根据所需移液量选择合适的移液器和吸头,并进行校准。
移液时要保持垂直,缓慢按下和释放按钮,避免产生气泡。
(二)离心机离心机用于分离不同密度的物质。
使用前要平衡样品,选择合适的转速和离心时间。
离心结束后,要等离心机完全停止转动后再打开盖子,以免发生危险。
分光光度计用于测定溶液中物质的浓度。
使用前要进行仪器校准,选择合适的波长和比色皿。
测量时要确保比色皿清洁,溶液无气泡和杂质。
(四)pH 计pH 计用于测量溶液的酸碱度。
四川师范大学体育学院
理论教研室
《运动生物化学教案》
教学单位:四川师范大学体育学院
任课教师:何伟
教学年度:2006-2007第一学期
教学对象:体育教育学04级1班和2班
教学时间:2006 8-12
二00六年九月
第一次课
上课日期: 2006年 8 月 30 日授课教师:何伟
第二次课
上课日期: 2006年 9 月日授课教师:何伟
第三次课
上课日期:2006 年 9 月日授课教师:何伟
第四次课
上课日期:2006 年 9 月日授课教师:何伟
第五次课
上课日期: 2006 年 9 月日授课教师:何伟
第六次课
上课日期: 2006年 10 月日授课教师:何伟
第七次课
上课日期: 2006年 10 月日授课教师:何伟
第八次课
上课日期: 2006年 10 月日授课教师:何伟
第九次课
上课日期: 2006年10 月日授课教师:何伟
第十次课
上课日期: 2006年10 月日授课教师:何伟
第十一次课
上课日期: 2006年月日授课教师:何伟
第十二次课
上课日期: 2006年月日授课教师:何伟
第十三次课
上课日期: 2006年月日授课教师:何伟
第十四次课
上课日期: 2006 年月日授课教师:何伟
第十五次课
上课日期:年月日授课教师:何伟
第十六次课
上课日期: 2006年月日授课教师:何伟
第十七次课
上课日期: 2006年月日授课教师:何伟
第十八次课
上课日期: 2006年月日授课教师:何伟
第十九次课
上课日期: 2006 年月日授课教师:何伟。
运动生物化学实验教学设计一、实验目的本次实验的目的是让学生通过实验了解和掌握运动对人体生物化学指标的影响,了解运动与健康之间的关系,培养学生对科学实验的基本技能和实验思维能力。
二、实验原理运动对人体生物化学指标有很大影响,包括血糖、血乳酸、尿素氮等生物指标。
通过运动,可以促进新陈代谢,使得各种生物指标的含量发生变化。
血糖指标受胰岛素的调节,可以通过胰岛素的分泌对血糖进行调节。
而血乳酸则是细胞内无氧代谢的产物,与负荷量有关。
尿素氮指标则是代谢废物在肝脏中分解形成的。
三、实验步骤和方法1.实验前,将所有实验材料准备好,包括大白鼠、血糖仪、血乳酸仪、尿液检测试纸等。
2.将大白鼠随机分成运动组和安静组。
运动组进行30分钟强度适中的大运动量运动,安静组则继续休息。
3.运动结束后,将运动组和安静组的大白鼠分别进行采血和尿液采集,记录生物化学指标变化。
4.使用血糖仪、血乳酸仪和尿液检测试纸对样本进行检测,记录测试结果。
5.将实验数据整理并进行分析,比较运动组与安静组生物化学指标的变化,对结果进行讨论。
四、实验要点和注意事项•在实验前,对实验材料进行准备和消毒,保证实验的可靠性和安全性。
•实验过程中,应严格遵守操作规范,确保实验结果准确可靠。
•在记录和分析实验结果时,应注意对比实验组和对照组的数据,准确判断实验结果的可靠性。
五、实验结果分析运动是一种主动的有氧代谢,能够加速全身物质代谢,增强胰岛素敏感性和机体代谢水平。
通过实验检测发现,运动组血糖和血乳酸含量均有所增加,而尿素氮含量则有所下降。
这表明运动能够刺激体内能量代谢,促进废物排泄,从而提高了身体机能和代谢水平。
六、实验教学评估和展望通过本次实验可以使学生更加深入地了解运动与健康之间的关系,同时培养他们的实验思维能力和实验操作技能。
同时,本次实验还可以进一步拓展相关课程,如运动生理、健康科学等方面,对学生产生积极的促进作用。
运动生物化学实验报告
《运动生物化学实验报告》
摘要:
本实验旨在探究运动对生物体内生物化学指标的影响,通过对运动前后血液中
乳酸、葡萄糖、肌酸激酶等指标的测定,分析了运动对生物体代谢活动的影响。
实验结果表明,适量运动能够促进生物体代谢活动,提高乳酸阈值,降低葡萄
糖和肌酸激酶水平,有利于身体健康。
引言:
生物体在运动过程中,代谢活动会发生一系列变化,包括能量代谢、废物排泄、肌肉损伤修复等。
这些变化反映在生物体内的生物化学指标上,通过对这些指
标的测定,可以了解运动对生物体的影响,为运动健康提供科学依据。
材料与方法:
1. 实验材料:健康成年人血液样本、生化试剂盒
2. 实验方法:采集运动前和运动后的血液样本,分别测定其中的乳酸、葡萄糖、肌酸激酶等指标。
结果与讨论:
实验结果显示,运动后血液中乳酸水平显著升高,葡萄糖水平显著降低,肌酸
激酶水平也有所上升。
这表明运动会导致生物体内能量代谢活动的增加,乳酸
和葡萄糖作为能量来源被大量消耗,同时肌肉组织受到一定程度的损伤,释放
出肌酸激酶。
但是,这些变化是暂时的,随着身体的恢复,这些指标会逐渐恢
复到正常水平。
结论:
适量运动有利于促进生物体代谢活动,提高乳酸阈值,降低葡萄糖和肌酸激酶水平,有利于身体健康。
但是,过量运动会导致这些指标异常,甚至对身体造成伤害,因此在进行运动时需要注意控制运动强度和时长,保持身体健康。
《动物生物化学实验原理与技术》实验指导实验目录一、动物血浆(清)IgG的分离纯化二、醋酸纤维薄膜电泳鉴定纯化的IGg三、SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)四、Western blot五、动物组织中基因组DNA的提取六、细胞总RNA的提取及反转录合成cDNA七、PCR基因扩增八、琼脂糖凝胶电泳检测DNA九、质粒DNA的小抽提一、动物血浆(清)IgG的分离纯化[实验目的]1. 了解蛋白质分离纯化的一般思路。
2. 掌握硫酸铵盐析、凝胶过滤、DEAE-纤维素离子交换层析等技术的原理与方法[实验原理]分离纯化蛋白质的方法是利用不同蛋白质的某些物理、化学性质(如在一定条件下带电的情况、分子量、溶解度等)不同而建立起来的,其中有盐析、离子交换层析、凝胶过滤、亲和层析、制备电泳及离心等。
在分离纯化时,要根据具体情况选用几种方法相互配合才能达到分离纯化某一种蛋白质的目的。
血浆(清)蛋白质多达70余种,免疫球蛋白(Immunoglobulin,简称Ig)是血浆球蛋白的一种,免疫球蛋白G(Immunoglobulin G,简称IgG)又是免疫球蛋白的主要成分之一。
IgG的相对分子量约为15~16万,沉降系数约为7S。
要从血浆中分离出IgG,首先要尽可能除去血浆中的其他蛋白质成分,即进行粗分离,使IgG在样品中的比例大为增高,然后再精制纯化而获得IgG。
IgG作为被动免疫制剂,在兽医临床上具有广泛的应用价值。
本实验主要采用硫酸铵盐析、凝胶过滤脱盐及DEAE-纤维素离子交换层析等方法,从家畜血浆(清)中分离纯化IgG。
1、用盐析法制备血浆(清)IgG粗制品的原理在溶液中加入中性盐使生物大分子沉淀析出的过程称为“盐析”。
除了蛋白质和酶以外,多肽、多糖和核酸等也都可以用盐析法进行沉淀分离。
不同的蛋白质在同一浓度盐溶液中的溶解度不同,可利用不同浓度的盐溶液使每个蛋白质成分分别析出,通常称为蛋白质的盐析。
因此在蛋白质中加入不同浓度的中性盐可使不同蛋白成分分别析出,从而达到分离纯化抗体的目的。
运动生物化学实验指导实验一实验基本技术操作一、实验目的(一)了解实验室规则及注意事项。
(二)学习运动生物化学实验常用仪器的使用及清洗方法。
(三)学习721型分光光度计的使用方法。
二、实验原理运动生物化学是研究人体运动时体内的化学变化。
运动生物化学的实验方法基本上是化学的方法,用定量及定性的分析方法来观察机体内物质代谢的规律,所以实验时必须做到定性的洁净及定量的精确,因此实验取样要准确、样品要无污染。
对于相同物质和相同波长的单色光来说,溶液的光密度和溶液的浓度呈正比。
配制各种浓度的CuSO4溶液,然后在780nm波长下比色,测定各种浓度的CuSO4溶液吸光度值,并制作曲线图。
三、实验器材试管、CuSO4溶液、蒸馏水、721分光光度计、移液管、吸耳球等。
四、实验步骤(一)玻璃仪器的清洗。
(二)使用移液管的移液操作及721分光光度计的使用。
取4支大试管,编号,按表7-1进行操作:表7-1 CuSO4溶液的测定以CuSO4溶液浓度为横坐标,吸光度值为纵坐标,将3种不同浓度的CuSO4溶液的光密度值分别点在坐标纸上,通过3点绘制成曲线图,并对实验结果进行分析。
五、注意事项(一)玻璃仪器清洗后注意检查,管壁不能留有水珠。
(二)使用移液管吸取液体时一定要缓慢平稳,不要太快、太猛。
六、作业与思考(一)玻璃仪器的清洗有哪些基本要求?实验二血红蛋白的测定血红蛋白(Hb)是红细胞中的一种重要蛋白质,1分子的Hb是由4分子的亚铁血红素和1分子的珠蛋白结合而成的。
Hb的主要生理功能是运输氧气(O2)、二氧化碳(CO2)和对酸性物质(H+)起缓冲作用,参与体内的酸碱平衡调节。
运动时机体需氧增加,故血红蛋白增加,有利于为组织提供氧气,促进物质的有氧代谢和带走CO2,而且也能起中和酸性的作用。
如果血红蛋白下降,氧供应减少,影响运动能力。
运动员安静时血红蛋白值与正常人没有明显差异。
一般人Hb的正常值男性为120-160g/L;女性110-150g/L。
临床上常用判断贫血的标准,即成年男性低于120 g/L;成年女性低于110 g/L;而14岁以下的少年、儿童,不论男女,均以低于120 g/L作为贫血。
血红蛋白的含量与运动员的身体机能状态、训练水平、运动负荷等关系密切,因此血红蛋白的含量高低直接影响运动员的身体机能和运动能力,尤其对耐力运动员的专项素质能力。
运动员在大运动量开始时,血红蛋白浓度出现明显下降,经过一段时间训练后,运动员身体机能逐渐适应大运动量训练,血红蛋白逐渐回升。
若训练一个阶段后Hb水平仍未回升或还有继续下降的趋势,应及时注意调整运动量,并加强营养补充。
因此,定期测定Hb的含量,有助于了解运动员的对负荷的适应、身体机能水平及营养状态等情况。
一、实验目的(一)学习取微量血的方法及血样的处理。
(二)掌握血红蛋白的测定方法。
(三)掌握运动训练中血红蛋白指标应用的评价及价值。
(四)巩固721分光光度计的使用方法。
二、实验原理(高铁氰化钾法)血红蛋白被高铁氰化钾氧化成高铁血红蛋白,高铁血红蛋白与氰离子结合成棕红色氰化高铁血红蛋白。
氰化高铁血红蛋白在540nm处有一个吸收峰,通过比色可以测定其光密度值,从而计算出血红蛋白浓度。
氰化高铁血红蛋白测定法是国际血液学标准化学委员会确定的检测血红蛋白含量的标准方法。
三、实验器材(一)氰化高铁血红蛋白稀释液:高铁氰化钾0.2g、氰化钾0.05g、磷酸二氢钾0.12g,用蒸馏水溶解并稀释至1000ml,置于棕色瓶中,瓶口塞紧后保存于冷暗处或冰箱,注意不能冷冻,至少可稳定1个月。
(二)氰化高铁血红蛋白标准液:(试剂盒)。
(三)95%酒精、75%酒精。
(四)一次性采血针、吸血管、棉球、试管、移液管、吸耳球、721分光光度计等。
四、实验步骤取3支大试管编号,按表7-2进行操作。
表7-2 血红蛋白的测定对实验结果进行计算,并分析讨论。
血红蛋白(g%)=OD测/OD标×C标五、注意事项(一)试剂含有氰化物,为剧毒药品,配制和保存时必须严格注意安全。
实验后一定要洗手,并注意药品的处理,不能乱倒。
(二)取血部位对血红蛋白测定结果有很大影响,最好取手指血测定血红蛋白。
同时,取血时注意擦干、消毒采血部位,用自然流出的第二滴血。
最好固定采血部位。
(三)一次性采血针应一人一针,严防交叉感染。
六、作业与思考(一)运动训练对血红蛋白含量有何影响?(二)在训练周期中如何运用血红蛋白指标来评定?实验三血尿素的测定尿素是体内蛋白质、氨基酸分解代谢的终产物。
体内蛋白质和氨基酸分解代谢产生氨,氨代谢的主要去路是在肝脏合成尿素后释放进入血液,然后经血液循环至肾脏排出体外。
正常生理活动时,尿素的生成和排泄处于平衡状态,使血尿素浓度保持相对稳定。
正常人血尿素安静值为3.2~7.0 mmol/L。
运动员的安静值与普通人一致。
一般在30min以内运动时,血尿素变化不大,超过30min以上的运动蛋白质和氨基酸分解代谢加强参与供能,尿素生成增多,血尿素含量也较明显增加。
身体对运动负荷的适应性越差,运动时生成的尿素就越多。
在训练期可每天或隔天、或大运动量训练后次日晨测定血尿素,来评定运动员身体机能状况;也可测定每周一晨的血尿素以了解机体的恢复情况。
所以,血尿素氮可作为评定运动负荷量、机能状况及机体疲劳程度的重要指标。
一、实验目的(一)学习血尿素氮的测定方法,熟练微量血的采集技术。
(二)掌握血尿素氮指标在运动实践中的应用。
(三)学习离心机的使用方法。
二、实验原理在强酸性的条件下,去蛋白血滤液中的尿素与二乙酰一肟和硫氨脲共热,生成粉红色的二嗪化衍生物,其颜色深浅在一定范围内与尿素含量成正比,通过与同样处理的尿素氮标准溶液比色,可求出血尿素氮的含量。
三、实验器材(一)1%氟化钠溶液。
(二)10%三氯乙酸溶液。
(三)二乙酰一肟-硫氨脲溶液:称取二乙酰一肟 600mg,硫氨脲30mg,加蒸馏水溶解并加至100mL,置棕色瓶中,冰箱保存。
(四)尿素氮标准贮存液(1mg/mL):精确称取干燥分析纯尿素0.2143g,用1%H2SO4溶解并稀释100mL,冰箱保存。
(五)尿素氮标准应用液(0.01mg/mL):准确取标准贮存液1mL,加1%H2SO4稀释至100mL。
(六)混合酸液:浓磷酸(85%~87%)3.5mL、浓硫酸8mL,慢慢滴加于80mL水中,冷却加水至100mL。
(七)空白液:取1份1%NaF液和3份10%的三氯乙酸混合而成。
(八)一次性采血针、吸血管、消毒棉球、试管、移液管、吸耳球、水浴箱、离心管、离心机、721分光光度计等。
四、实验步骤(一)制备无蛋白血滤液:取2支离心管,按表3-1操作。
取指尖血0.02mL,立即置于含1%氟化钠0.48mL的离心管中,加入10%三氯醋酸1.5mL,充分摇匀。
立即以3000r/min的转速离心15min,分离血清。
表7-3 无蛋白血滤液的制备(二)取3支大试管,标明“空白管”、“标准管”、“测定管”,按表3-2操作。
表7-4 血尿素氮的测定对实验结果进行计算,并分析讨论。
五、注意事项(一)沸水浴时间对显色程度影响很大,应该严格控制好水浴时间,以水浴10min为宜。
(二)二乙酰一肟硫氨脲溶液不能久置,若有结晶析出应该重新配制。
(三)运动实践中利用这一指标评定机能恢复状况时,应分别在运动前、运动后即刻及次日晨取血。
若评定一个训练周期情况时,应在周期初始、中间及结束时分别取晨血跟踪测试。
(四)血尿素含量超过40mg%时,应将样品稀释后重新测定。
六、作业与思考(一)测定血尿素含量有什么实际意义?(二)血尿素含量变化与身体机能有什么关系?(三)如何通过测定血尿素氮浓度控制训练负荷?实验四血乳酸的测定乳酸是体内糖无氧酵解的终产物。
储存在肌肉中的糖原和葡萄糖,在无氧的条件下分解成乳酸。
乳酸经扩散进入血液,称为血乳酸。
在正常情况下,乳酸的生成与消除处于动态平衡中,正常人安静时血乳酸浓度保持在1~2mmol/L,运动员血乳酸安静值与正常人无差异,但在比赛前情绪紧张时,运动员的血乳酸安静值有可能出现升高至3mmol/L,这与体内的肾上腺分泌增多有关。
剧烈运动时,肌肉内糖的无氧分解加强,血乳酸浓度显著升高。
运动时血乳酸浓度的变化与所动用的能量系统有关。
以磷酸原系统供能为主的运动,血乳酸生成量较少,血乳酸一般不超过4mmol/L;以糖酵解系统供能为主的运动,血乳酸可达15mmol/L 以上;而以有氧氧化系统供能为主的运动,血乳酸在4mmol/L左右。
速度耐力性运动项目的高水平运动员,运动成绩好者,运动后血乳酸最大浓度值也高;耐力性运动项目的运动员,在完成相同亚极量运动负荷时,优秀运动员运动后血乳酸相对较低。
根据这一特点可用以评定运动员训练水平或选材。
可根据运动后血乳酸的消除速率来评定运动员有氧代谢能力,若恢复速度快,表示有氧代谢能力强。
因此,血乳酸含量的测定,对于从事体育工作的人来说是很重要的。
一、实验目的(一)掌握血乳酸的测定方法。
(二)初步掌握血乳酸的运动生物化学评定方法及意义。
(三)学习用掌式血乳酸分析仪测定血乳酸。
二、实验原理去蛋白血滤液,加浓硫酸共热,可使乳酸氧化成乙醛,在酮离子存在时,乙醛与对羟基联苯作用生成紫红色复合物,其显色程度与乳酸浓度成正比,故通过比色可以测定其光密度值,从而计算出血液中乳酸的含量。
三、实验器材(一)1%氟化钠溶液:1g氟化钠溶液溶于100ml蒸馏水中。
(二)10%三氯乙酸溶液:10g三氯乙酸溶于100ml蒸馏水中。
(三)浓H2SO4(分析纯、比重:1.838)(四)4%CuS04溶液:4gCuS04溶于100ml蒸馏水中。
(五)对羟基联苯试剂:将1. 5 g对羟基联苯溶于10ml的5%NaOH溶液中,待溶解后加水稀释至100ml,冷却后贮存于棕色瓶中。
(六)乳酸标准贮存液(1ml含1mg):称取乳酸锂106.6 mg,溶于约10ml水中,加H2SO4(浓)2滴,移至100ml容量瓶,用水稀释至刻度,混匀。
置于冰箱保存。
(七)乳酸标准应用液(1ml含10 µg):取1ml乳酸标准贮存液,用100 ml容量瓶加蒸馏水稀释至刻度即成。
此液临用时配制。
(八)乳酸空白液:取1%氟化钠溶液和10%三氯乙酸溶液按1∶3体积比混合而成。
(九)台式离心机、恒温水浴箱、水浴锅、离心管、721分光光度计、试管、移液管、滴管、吸血管、一次性采血针、消毒棉球、血乳酸分析仪。
四、实验步骤(一)制备无蛋白血滤液:取2支离心管,按实验三表7-5操作。
表7-5 无蛋白血滤液的制备(二)取3支大试管,标明“空白管”、“标准管”、“测定管”,按表7-6操作。
表7-6 血乳酸的测定(三)用掌式血乳酸分析仪测定血乳酸。
对实验结果进行计算,并分析讨论。
血乳酸(mg%)=OD测/OD标×100血乳酸(mmol/L)=血乳酸(mg%)/9五、注意事项(一)浓硫酸对显色影响很大,必须选用纯净浓硫酸。