第17章支原体
支原体(mycoplasma)是目前已知一类没有细胞壁能在无生命培养基上生长繁殖的最小的原核细胞型微生物。
因能形成有分枝的长丝，故称支原体。
特点：因缺乏细胞壁，呈高度的多形性，细胞膜含固醇，能通过滤菌器；以二分裂繁殖为主，含DNA与RNA两种核酸。
支原体过去曾称为类胸膜肺炎微生物（pleuropneumonia-like organism,PPLO），1967年正式定为支原体。
支原体的种类较多，在自然界的分布广泛，并各有特定的宿主，包括人、家畜、家禽及实验动物。
实验室用于组织培养的材料，常易被支原体污染给工作带来地定困难。
第一节概述
支原体因其没有细胞壁故归属于柔膜体纲(Mollicute)的支原体目(Mycoplasmatales)3个科：
①支原体科(Mycoplasmataceae)，在支原体科中又分支原体(Mycoplasma)和脲原体(Ureaplama)2个属。
支原体属现知有64个种，而脲原体属仅2个种。
其中对人致病的主要为肺炎支原体、人型支原体、生殖器支原体、穿透支原体和溶脲脲原体。
②无胆甾原体科(Acholeplasma-taceae),生长时不需要外源性胆固醇。
③螺原体科(Spiroplasmataceae)，生长至一定阶段呈螺形。
一、生物学性状体
（一）形态与结构
1.形态与大小：支原体的大小为～,可通过
滤菌器，常给细胞培养工作带来污染的麻烦。
无细胞壁，不能维持固定的形态而呈现多形
性，呈球形、球杆形、长丝状及分支状等。
图17-1
2.革兰氏染色阴性，但不易着色，故常用Giemsa染色法将其染成淡紫色。
3.结构：支原体的细胞膜由三层结构组成，其中内、外层的主要成分是蛋白质，而中层为脂质。
脂质中胆固醇含量较多，约占36%，对保持细胞膜的完整性具有一定作用。
凡能作用于胆固醇的物质（如二性霉素B、皂素等）均可引起支原体膜的破坏而使支原体死亡。
有的支原体在细胞膜外还有一层由多聚糖构
成的荚膜，有毒性，是支原体的一种致病因素。
肺炎支原体的一端有一种特殊的顶端结构，能使支原体粘附于呼吸道粘膜上皮细胞表面，与致病性有关。
4.基因组为一环状以双链DNA，分子量小（仅有大肠杆菌的五分之一），合成与代谢很有限。
(二)培养特性
1.营养要求比一般细菌高，除基础营养物质外还需加入10～20%人或动物血清以提供支原体所需的胆固醇。
最适～之间，低于则死亡，但解脲脲原体最适～，因在培养时溶脲脲原体分解尿素产氨，可使培养基pH升高。
当培养基指示剂变色即需移种。
否则将迅速死亡。
2.大多数兼性厌氧，仅个别菌株专性厌氧。
有些菌株在初分离时加入5%CO2生长更好。
3.生长缓慢，在琼脂含量较少的固体培养基上孵育
2～3天出现典型的“荷包蛋样”菌落：圆形（直径：肺炎
支原体100～150µm，溶脲脲原体10～40 µm），核心
部分较厚，向下长入培养基，周边为一层薄的透明颗粒
区（图17-2）。
此外，支原体还能在图17-2
鸡胚绒毛尿囊膜或培养细胞中生长。
4.繁殖方式多样，主要为二分裂繁殖，还有分枝、出芽等方式，由于支原体分裂和其DNA复制不同步，可形成多核长丝体。
（三）生化反应
一般能分解葡萄糖的支原体则不能利用精氨酸，能利用精氨酸的则不能分解葡萄糖，据此可将支原体分为两类（见表17-1）。
溶脲脲原体不能利用葡萄糖或精氨酸，但可利用尿素作能源。
表17-1 人类支原体的主要生物学性状
名称需要胆固醇分解葡萄糖分解精氨酸吸附红细胞
肺炎支原体人型支原体生殖支原体穿透支原体溶脲脲原体+
+
+
+
-
+
-
-
+
-
-
+
-
-
-
+
-
-
+
-
（四）抗原结构：支原体细胞膜上的抗原结构由蛋白质和糖脂组成。
各种支原体均有其特有的抗原结构，交叉较少，在鉴定支原体时有重要意义。
补体结合试验取决于抗原的糖脂部分，ELISA试验取决于抗原的蛋白质部分。
支原体的血清抗体可用作生长抑制试验（growth inhibition test,GIT）和代谢抑制试验(metabolic inhibition test,MIT)。
应用这两种方法还可将某些支原体分成若干血清型，如溶脲脲原体可分为16型。
试验：操作步骤与药敏试验的纸片法相似，将沾有特异性抗血清纸片贴于划有支原体的琼脂平板表面，若两者相应则纸片周围生长的菌落受到抑制。
试验：将支原体接种在一个含有血清与酚红的葡萄糖培养基中，若抗体与支原体相应，则支原体的生成、代谢受到抑制，酚红不变色。
（五）抵抗力
1.支原体因无细胞壁对理化因素的影响比细菌敏感，容易被消毒剂灭活，对重金属盐、石炭酸、来苏尔和一些表面活性剂较细菌敏感，但对醋酸铊、结晶紫的抵抗力大于细菌。
2.支原体对热的抵抗力与细菌相似。
3.对环境渗透压敏感，渗透压的突变可致细胞破裂。
4.对影响细胞壁合成的抗生素如青霉素不敏感，对干扰蛋白质合成的抗生素如红霉素、强力霉素、四环素、链霉素及氯霉素等敏感。
二、支原体与L型细菌的区别
L型细菌是在抗生素、溶菌酶等作用下变成的一种细胞壁缺陷型细菌，其许多特性与支原体相似，在鉴定时很有必要将二者区别开来（见表）。
表19-2 支原体与L型细菌的区别
支原体L型细菌
自然界中广泛存在
绝大多数生长需胆固醇
在一般培养基中稳定
在遗传上与细菌无关，且无论在什么条件下也不能变成细菌
菌落较小，～自然界很少存在
生长不一定需要胆固醇
大多需高渗培养
在遗传上与原菌相关，并可在诱导因素去除后回复为原菌
菌落稍大，～
三、主要病原性支原体（一）肺炎支原体（）
1.传播途径：主要经呼吸道（飞沫）传播
2.易感人群：发病率以青少年最高
3.发病季节：一年四季均可发生，但多在秋冬时节。
4.潜伏期：2～3周
5.所致疾病：肺炎支原体是人类支原体肺炎的病原体，引起的肺炎占非细菌性肺炎的1/2左右。
支原体肺炎的病理改变以间质性肺炎为主，有时并发支气管肺炎，称为原发性非典型性肺炎。
临床症状较轻，甚至根本无症状，若有也只是头痛、咽痛、发热、咳嗽等一般的呼吸道症状，但也有个别死亡报道。
（二）泌尿生殖道感染支原体
引起泌尿生殖道感染的支原体主要有溶脲脲原体、人型支原体和生殖支原体，现已被列为性传播性疾病的病原体。
在非淋菌性尿道炎（NGU）中，感染率仅次于衣原体。
1．溶脲脲原体：又称T株支原体（Tinystrain）。
通常寄居在人的泌尿生殖道粘膜，引起非细菌性尿道炎，也能引起盆腔等部位的感染。
还可通过胎盘感染胎儿，可致流产、早产、死胎；在分娩时感染新生儿，可引起呼吸道感染或中枢神经系统的症状；还可引起妇女不孕。
溶脲脲原体引起不的原因：
(1)吸附于精子表面，阻止精子的运动。
(2)产生神经氨酸样物质干扰精子和卵子的结合。
(3)与精子有共同抗原成分，对精子可造成免疫损伤。
溶脲脲原体的分离可用加尿素和酚红的含血清支原体肉汤。
肉汤中可加青霉素抑制杂菌的生长。
溶脲脲原体具有尿素酶，可分解尿素产氨，使酚红变红。
在固体培养基上用低倍镜观察，可见有微小的荷包蛋样菌落或颗粒样菌落生长。
免疫斑点试验。
2.人型支原体（）：能引起渗出性咽炎及尿道炎，也与卵巢脓肿、产褥热等有关。
3.生殖支原体：与泌尿生殖道感染有关。
4.发酵支原体:与呼吸道疾病的关系更为密切。
也与某些类风湿性关节炎的发病有关。
5.口腔支原体与唾液支原体：寄居在人的口咽部，均为正常菌群。
（三）穿透支原体
穿透支原体是1990年首次从1例HIV阳性艾滋病患者尿中分离出的一种新支原体，形态为杆状或长瓶状。
四、实验室诊断
（一）分离培养与鉴定：
加10%～20%马或小牛血清于基础培养基中。
初次分离培养生长缓慢，菌落呈典型的油煎蛋样。
治疗用红霉素、四环素、强力霉素等高度敏感的抗生素。
分离的支原体经形态、生化反应作初步鉴定，进一步经生长抑制试验（GIT）与代谢抑制试验（GIT）确定。
（一）抗体的检测：补体结合试验或放射免疫技术等。
（二）凝集试验及株链菌凝集试验。
（四）DNA探针
（五）PCR技术。
