简易药敏片的制作

自制药敏纸片对治疗大肠杆菌病效果好近年来鸡大肠杆菌病严重威胁着家禽业的发展，给养殖户造成较大的经济损失。

市场上治疗大肠杆菌病的药品繁多，其主要成份往往不写明，造成养禽户在发生疾病时用同一种成份、不同品名的药物替换使用，既增加损失，又延误病情。

而自制药敏纸片就能减少这些损失。

在测得药品对该菌的敏感程度后再用药，效果较好。

一、病原禽大肠杆菌病原为艾希氏大肠杆菌，该菌系肠道正常菌群之一。

但它有一些致病血清型，科研人员在大肠杆菌病鸡体内一般只能分离出某种特定血清型，比如O1、O2、O78、O35、O16等等。

本菌呈多形性，有时接近球菌的形态，有时呈细长杆状或发丝状，但多数为两端钝圆，革兰氏染色阴性，中等大小的杆菌。

二、临床症状及病理变化1.大肠杆菌病夏季较多见，雏鸡及体弱鸡易感，病鸡精神沉郁、腹泻，排出黄白色、绿色粪便，病鸡不喜走动，关节肿胀。

败血型常引起呼吸道症状，产蛋鸡产蛋下降，砂皮蛋、白皮蛋增多，后期可见腹部胀大。

在发生大肠杆菌病的鸡群中还发现个别鸡一侧或双侧眼失明和肿头现象。

2.剖检可见纤维素性浆膜炎。

心外膜和心包膜上附着有多量灰白色纤维素性渗出物，气囊壁增厚，有黄白色干酪样渗出。

肝脏有灰白色坏死点，有时肝表面形成一层纤维素性渗出物。

经卵感染的雏鸡有卵黄囊炎，卵黄肿胀充血，其中充满棕色水样物；肉鸡关节红肿即滑膜炎，母鸡感染大肠杆菌病后在输卵管有干酪样渗出物，形成输卵管炎和腹膜炎，粘液型大肠杆菌常引起小肠、盲肠、肠系膜或肝脏出现肉芽肿。

三、细菌分离培养及鉴别1.无菌采取新鲜病鸡心血，涂片，革兰氏染色镜检可见阴性中等杆菌。

接种在普通琼脂培养基上培养18～24小时，形成圆形湿润、半透明隆起的乳白色中等大小菌落，挑取生长良好的菌落分别接种在伊红美蓝琼脂培养基、麦康凯培养基和普通肉汤试管内，经37℃、培养18～24小时后观察。

在伊红美蓝琼脂培养基上形成紫黑色带金属光泽的菌落，在麦康凯培养基上生长有圆形、边缘不齐、均匀一致的粉红色菌落，在普通肉汤试管内底部有黄白色絮样沉淀物，取肉汤内沉淀物镜检观察与剖检鸡的检出菌一致。

近年来，随着抗菌药物的广泛应用，尤其是光谱及超光谱的抗菌药物的滥用，导致耐药性菌株逐年增多；环境的污染，以及养殖户的饲养管理意识跟不上，促使细菌性疾病的流行及发病率逐年上升；且使用抗菌素药物预防和治疗的效果越来越不理想，为了减少药物的滥用和耐药性的产生，在临床治疗前进行药敏试验筛选出有效的抗菌药物是十分必要的，正确选用药物是治疗和预防禽病的重要措施之一。

笔者根据近几年来的经验选用本公司的现有抗生素药物自制药敏片，通过药敏试验在临床上取得十分好的效果。

一、药敏片的制备1、纸片的选用在医疗器械公司购买定性滤纸，用0.6cm的打孔器把滤纸打成圆形纸片，分别装入洁净的青霉素小瓶内，50片/瓶，放入高压蒸汽锅内进行121℃灭菌20min，再放入60-100℃干燥箱烘干，冷却后放入洁净箱备用。

2、抗菌药液的配制选用本公司的抗菌药物，按我们习惯常用的药物浓度进行配比，如冀农杆特，规格为100g/瓶，习惯常用兑水量为400斤水，即用分析天枰称取0.2g的杆特5ml灭菌生理盐水置于灭菌的青霉素小瓶内，充分溶解后再吸取0.1ml于另一灭菌青霉素瓶内，加入3.9ml的灭菌生理盐水即可。

3、纸片的处理将以配制好的药物溶解加入装有纸片的青霉素小瓶内，每小瓶加0.5ml，应使纸片均匀的吸取药液，置4-8℃冰箱浸泡1小时左右，再将小瓶置37-50℃的温箱内2-3小时烘干。

制备好的干燥药敏片要密封好，置冰箱内8℃以下冷藏或零下14℃以下冷冻保存备用。

二、培养基制作1、选用市面上提供的营养琼脂，SS琼脂和麦康凯琼脂按说明配制（1）SS琼脂培养基的制作：称取SS琼脂粉5.8克，加入蒸馏水100毫升，加热煮沸溶解即可，冷至55℃倾注无菌平皿中备用。

（2）营养琼脂培养基的制作：称取营养琼脂3.8克，加至100ml蒸馏水中摇均匀，溶解煮沸121℃，高压灭菌15分钟，冷却至38℃，倾注无菌平皿中备用。

（3）麦康凯琼脂培养基的制作：称取5克麦康凯琼脂，加入蒸馏水100ml溶解摇均匀，煮沸，高压灭菌10磅15分钟，即可冷却至55℃，倾注无菌平皿中备用。

药敏试验的步骤药敏试验药敏纸片法药敏纸片法是最常用的一种试验方法,能直接体现出抗菌药物的抗菌效用,其优点是：直观明显,对比鲜明，有一定的实验依据。

缺点是：仅表现体外抗菌效果,由于抗菌药物在体内受体液环境,代谢分布,组织扩散浓度,半衰期等因素的影响,个别药物并不能真实反应出实际的抗菌疗效。

下面介绍抗菌药物的药敏纸片法。

试验材料经分离和鉴定后的纯培养菌株(例如大肠杆菌、链球菌等),营养肉汤,琼脂平皿,棉拭子,镊子,酒精灯, 药敏纸片若干。

1.1药敏纸片的制作方法将要试验的抗菌药物按其有效浓度稀释成1mL备用，脂溶性的抗菌药物使用乙醇或丙酮溶解。

用打孔器将滤纸打成6mm直径的圆片100张高压灭菌，加入到抗菌药物有效浓度1mL稀释液中充分混合，阴凉处干燥备用。

多种联合的抗菌药物制剂以其成分中某种含量最高的抗菌药物为标准稀释成有效浓度。

抗菌中草药药敏纸片的制作：取中草药粉剂1g加适量的水充分浸泡煮沸，滤液浓缩成1mL，也加入100张纸片干燥备用。

1.2药敏试验的操作步骤1.2.1 取自然发病动物的病料心血、脾、肝脏、淋巴结或病变明显的组织无菌操作接种鉴别培养基37℃分离培养24h，选典型菌落备用。

1.2.2 将病料中分离出的病原菌用密集划线法或涂布法接种至专用琼脂平板培养基上，均匀的粘贴各药敏纸片，并记录每种抗菌药物药敏纸片的位置。

1.2.3 37℃培养12～18h，取出观察结果。

1.3判定结果1.3.1 量取各药敏纸片抑菌直径大小，并仔细观察抑菌圈的清晰度,通常直径小于10mm的判为该抗菌药物为低度敏感,10～15mm之间为中度敏感，15～25mm为高度敏感，25mm以上为极度敏感。

1.3.2 抑菌圈边缘分界清晰，内部洁净透明,说明该抗菌药物作用迅速，多半为杀菌剂；边缘十分清晰，内部朦胧说明该抗菌药物可能是慢效抑菌剂或有耐药的产生，或分解较快维持抗菌时间短。

1.3.3 抑菌圈中分层次形成同心年轮样，说明可能是联合使用抗菌药物或该抗菌药物失效过快或细菌产生了耐药性。

养殖场疾病控制的好坏，直接影响其场经济效益。

疾病控制踪疫苗接种外，药物治疗也十分重要，而做好药敏试验很关键。

市场上购买药敏片不方便，即使购买到药敏片，已用的药品与本场买到药品不是同一厂家生产，疗效也不一致。

我们一般多应用自制的药敏滤纸片，即实用又省钱，经临床实践，效果较好。

现介绍如下：1 制作方法1 穗纸片选用新华t号(或其他质量好的)定性滤纸片，用打孔机打成直径为6 1l"11"]1的小圆纸片，根据需要将数片包成一纸包，或放人带棉塞的小瓶或小平皿内，在160℃干热灭菌1 h或121 ℃灭菌l5 min．置60℃干燥箱内烘干备用。

1．2 药液的配制．1 稀释荆抗生素的稀释剂通常用蒸馏水，但有些抗生素可用其他溶剂作初步溶解。

如：呋喃西林，每片首先用l mo L／I，氢氧化钠1 ml 溶解，再用水稀释到所需浓度。

痢特灵先以二甲基酰胺或丙酮溶解。

1．2 2 药液浓度注射粉荆一般1 g药品加蒸馏水L000 mI稀释；注射针剂，用蒸馏水作100倍稀释。

其他药物按使用说明书上的配料或饮水舍量．换算按1 g需加多少毫升水或配多少毫克料，就相当于配制药液所加蒸馏水毫升数。

如10 g本品可拌50 kg饲料，其换算方法为：1 g本品加5 000 mI 蒸馏水。

1 3 配制方法在无菌条件下，准确称取药量， I g为一个基本单位．为了方便最好将药物先稀释成10 mI ，然后作倍比稀释，如lO0倍稀释药物，在1 g药物中加人l0mI 蒸馏水．然后取l mI 本液加人9 m1 蒸馏水即可。

将无菌滤纸片用无菌镊子摊布于无菌平皿中，每张滤纸片饱和吸水量为0．叭m1，计，每50张滤纸片加人药液0 5 mI ，不时翻动，使滤纸将药液均匀吸净，一般浸泡30 min即可。

然后取出含药纸片置于一纱布中放置37℃孵箱中烘干，烘烤的时间不宜过长．以免某些抗生素失效。

青霉素、金霉素宜在低温真空干燥。

烘干后立即装人无菌的小瓶中加塞置一20℃或家用冰箱中保存，少量供工作用的滤纸片从冰箱中取出后放置室温中1 h，使纸片温度和室温接近。