药品分析方法建立及验证_从质量控制出发
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药品质量分析方法验证
5
制剂可用含已知量被测物质的各组分 混合物进行测定。如不能得到制剂的全部 组分，可向制剂中加入已知量的被测物质 进行测定，或与另一个已建立准确度的方 法比较结果。
6
杂质的定量分析可向原料药或制剂中 加入 已知量杂质，进行测定。 如果不能得到杂质，可用本法测定结果与另 一成熟的方法进行比较，如药典标准方法或 经过验证的方法。 如不能得到杂质的相对响应因子，则可比较 杂质的响应和原料药的响应以计算杂质的含量。
21
㈤ 定量限
1 定义
定量限(LOQ或QL)：是指样品中被 测物质能被定量测定的最低浓度或 量，且在所述的实验条件下测定的结 果具可接受的准确度和精密度。
杂质和降解产物的定量测定方法研究时，应确定定量限。
22
2 测定
(1)非仪器分析法：定量限通常是用含已知浓度被测物质的
样品进行分析，确定可以测定的被测物质的最低浓度，且 测定结果具可接受的准确度和精密度。
3
方法验证是一个持续的发展过程，在药物生产方法 变更、制剂的组分变更、原分析方法进行修订或药典规 定的常规方法用于新药，则质量标准分析方法需要再验 证。再验证应证明分析方法能保持其性能(如专属性)适 用于相应的检测要求。如采用的分析方法，为了满足系 统适应性的要求，需要调整其操作条件，则分析方法需 进行适当的再评价、修正和再验证。再验证的程度，取 决于变更的性质。
31
(1) 提供有关光谱、色谱图和其他适当的仪器记录。 简述对照晶制备和纯化方法。 (2) 提供有关光谱、色谱图和其他适当的仪器记录。 (3) 确定纯度的数据应用适当的方法，如TLC、GC、 HPLC，溶解度试验，热分析方法等获得这些数据。
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(4) 适当的化学信息，如结构式、分子式、分子量。 证明结构的信息应包括适当的方法，如元素分析、 IR、UV、NMR、MS和可采用的功能团分析。 详细解析这些数据以证明所述结构。 (5) 物理性状，包括色泽、物态。 (6) 适当的物理常数，如熔点范围、沸点范围、 折射率、离解常数(pK值)和比旋度。 (7) 详细说明用于标定对照品的分析方法。
化学药物质量控制分析方法验证技术指导原则
化学药物质量控制分析方法验证技术指导原则化学药物质量控制分析方法验证是确保药物质量稳定可靠的重要环节。
它通过验证分析方法的准确性、精密度、恢复度、线性度、特异性等指标，确保分析方法能够准确地测定药物中的活性成分或者指标物质的含量。
本文将从方法验证的目的、步骤、技术指导原则以及常见问题和挑战等方面进行介绍。
一、方法验证的目的和步骤1.目的：确保分析方法满足药品质量控制的要求，可靠稳定，可用于药物批次的检验。
2.步骤：（1）方法开发：根据药物的特性和质量控制要求，选择适当的分析方法。
（2）方法优化：对选择的分析方法进行优化，包括调整工作条件、选用合适的内标物质等。
（3）方法准确性验证：重复测定样品，评估准确性，并对结果进行统计分析。
（4）方法精密度验证：通过重复测定样品，计算相对标准偏差，评估方法的精密度。
（5）方法线性度验证：通过测定不同浓度的标准品，评估方法的线性关系。
（6）方法特异性验证：通过测定样品的含量，检查方法对其他组分的干扰情况。
（7）方法稳定性验证：评估方法在不同条件下的稳定性，包括反应时间、温度等。
（8）方法恢复度验证：通过添加已知浓度的标准品到药物样品中，评估方法的回收率。
1.确保方法的准确性：方法应具有良好的回归方程和拟合度，并通过统计分析确定测定值的范围。
2.确保方法的精密度：通过反复测定样品确定相对标准偏差，评估方法的精密度，并确保结果的重复性。
3.确保方法的恢复度：通过添加已知浓度的标准品到药物样品中，测定回收率，评估方法的准确性和恢复度。
4.确保方法的线性度：通过测定不同浓度的标准品，构建标准曲线，并通过相关系数确定方法的线性范围。
5.确保方法的特异性：通过测定样品的含量，并检查方法对其他组分的干扰情况，确保方法对药物成分的特异性。
6.确保方法的稳定性：通过评估方法在不同条件下的重复性和稳定性，确定方法的适用范围。
7.验证结果的报告和文档：方法验证应记录在正式的报告和关联文档中，并以书面形式确认。
药品质量标准分析方法验证
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药品质量标准分析方法验证
耐用性（变动因素）
• 气相色谱中典型的变动因素有： • 不同厂牌或不同批号的同类型色谱柱 • 固定相 • 担体 • 柱温 • 载气及流速 • 检测器温度等。
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药品质量标准分析方法验证
耐用性（变动因素）
• 薄层色谱中典型的变动因素有： • 不同品牌的薄层板 • 点样方式 • 薄层展开时温度及相对湿度的变化
药品质量标准分析方法验证
线性
• 定义：在设计的范围内，测试结果与试样中被测物浓 度直接呈正比关系的程度。
• 测定：用一储备液经精密稀释，或分别精密称样，制 备一被测物质浓度系列进行测定，至少制备5个浓度， 以测得的响应作为被测物质的函数做图，观察是否呈 线性，再用最小二乘法进行回归。应报告相关系数、Y 轴截距、回归斜率和残差平方和，必要时， 响应可经数学转换，再进行线性回归计算。
• 典型的变动因素有：被测溶液的稳定性、样品提取次数、时间等 • 液相色谱中典型的变动因素有：流动相的组成和PH值，不同厂牌
或不同批号的同类型色谱柱、柱温、流速等。
• 气相色谱中典型的变动因素有：不同厂牌或不同批号 的同类型色谱柱、固定相、担体、柱温、载气及流 速和检测器温度等。
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药品质量标准分析方法验证
• 用标准偏差或相对标准偏差表示时，取样测定次数应有统计学意 义，至少用6次结果进行（n ≥ 6）。
• 偏差（d）：测量值与平均值之差
• 相对偏差＝
• 标准（偏）差（SD或S）：
• 相对标准（偏）差（RSD）：
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药品质量标准分析方法验证
精密度
• 精密度包含了3个指标： • 重复性：在相同条件下，由一个分析人员测定所得结果的精密度
药品质量标准分析方法验证
药品质量标准分析方法验证药品质量标准的制定对于保障药品的质量安全具有重要意义。
而药品质量标准的分析方法验证则是确保这些标准的科学性和准确性的重要环节。
本文将对药品质量标准分析方法验证进行深入探讨，以期为相关领域的研究和实践提供一定的参考。
首先，药品质量标准分析方法验证的目的在于验证分析方法的适用性和可靠性。
这是因为，药品质量标准的制定和执行需要依赖于科学的分析方法，只有通过验证这些方法的准确性和可靠性，才能确保药品质量标准的科学性和合理性。
因此，药品质量标准分析方法验证是确保药品质量标准的有效实施的重要保障。
其次，药品质量标准分析方法验证的内容主要包括方法的准确性、灵敏度、线性范围、稳定性等方面的验证。
其中，方法的准确性是指分析方法对于目标物质的测定结果与真实值之间的接近程度，而灵敏度则是指分析方法对于目标物质浓度变化的反应能力。
另外，线性范围是指分析方法对于目标物质浓度变化的线性范围，而稳定性则是指分析方法在一定条件下的稳定性能。
通过对这些方面的验证，可以全面评估分析方法的适用性和可靠性。
再次，药品质量标准分析方法验证的方法主要包括对照法、回收率法、精密度法、特异性验证等。
其中，对照法是通过与已有的标准方法进行对照，评估新方法的准确性和可靠性；而回收率法则是通过向样品中添加已知浓度的目标物质，再进行测定和计算回收率，评估方法的准确性和可靠性。
此外，精密度法是通过重复测定同一样品，评估方法的精密度；特异性验证则是通过与其他成分的干扰实验，评估方法的特异性。
通过这些方法的验证，可以全面评估分析方法的适用性和可靠性。
最后，药品质量标准分析方法验证的意义在于确保药品质量标准的科学性和准确性，为药品的质量安全提供保障。
因此，在进行药品质量标准分析方法验证时，需要严格按照相关的规范和标准进行操作，确保验证结果的科学性和可靠性。
只有通过科学严谨的验证，才能确保药品质量标准的有效实施，为人民群众的用药安全提供保障。
药物质量控制分析方法验证
包括粒径分布、旋光度、分子量分布等，由于这些检 测项目的要求与鉴别、杂质检查、定量测定等有所不 同，对于这些项目的分析方法验证应有不同的要求。
第七页，共46页。
2、分析方法
分析方法是为完成上述各检测项目而设定和建立的测试方
法，一般包括分析方法原理、仪器及仪器参数、试剂、 系统适用性试验、供试品制备、对照品溶液制备、 测定、计算及测试结果的报告等。 测试方法可采用化学分析方法和仪器分析方法。这些方 法各有特点，同一测试方法可用于不同的检测项目， 但验证内容可不相同。
一、概述
保证药品安全、有效、质量可控是药品研发和评 价应遵循的基本原则，其中，对药品进行质量控 制是保证药品安全有效的基础和前提。
方法验证的目的是判断采用的分析方法是否科学、 合理，是否能有效控制产品的内在质量。
方法验证主要包括方法验证的一般原则、方法验证涉 及的三个要素、方法验证的具体内容、对方法验证的 评价等内容。
第四十页，共46页。
(九）系统适用性试验
对一些仪器测试方法，在进行方法验证时，有必要将 分析设备、电子仪器与实验操作、被测试样品等一起 当作完整的系统进行评估。
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3、验证内容
验证内容包括验证方法的专属性、线性、范围、准确 度、精密度、检测限、定量限、耐用性和系统适用性 等。
第九页，共46页。
四、方法验证的具体内容
（一）专属性 专属性系指在其他成分（如杂质、降解物、辅料等）
可能存在下，采用的分析方法能够准确测定被分析物 质的特性的能力。
通常，鉴别、杂质检查、含量测定方法中均应考察其专 属性。
第二页，共46页。
三、方法验证涉及的三个要素
三要素: 需要验证的检测项目
分析方法
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2、分析方法
分析方法是为完成上述各检测项目而设定和建立的测试方
法，一般包括分析方法原理、仪器及仪器参数、试剂、 系统适用性试验、供试品制备、对照品溶液制备、 测定、计算及测试结果的报告等。 测试方法可采用化学分析方法和仪器分析方法。这些方 法各有特点，同一测试方法可用于不同的检测项目， 但验证内容可不相同。
一、概述
保证药品安全、有效、质量可控是药品研发和评 价应遵循的基本原则，其中，对药品进行质量控 制是保证药品安全有效的基础和前提。
方法验证的目的是判断采用的分析方法是否科学、 合理，是否能有效控制产品的内在质量。
方法验证主要包括方法验证的一般原则、方法验证涉 及的三个要素、方法验证的具体内容、对方法验证的 评价等内容。
第四十页，共46页。
(九）系统适用性试验
对一些仪器测试方法，在进行方法验证时，有必要将 分析设备、电子仪器与实验操作、被测试样品等一起 当作完整的系统进行评估。
第八页，共46页。
3、验证内容
验证内容包括验证方法的专属性、线性、范围、准确 度、精密度、检测限、定量限、耐用性和系统适用性 等。
第九页，共46页。
四、方法验证的具体内容
（一）专属性 专属性系指在其他成分（如杂质、降解物、辅料等）
可能存在下，采用的分析方法能够准确测定被分析物 质的特性的能力。
通常，鉴别、杂质检查、含量测定方法中均应考察其专 属性。
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三、方法验证涉及的三个要素
三要素: 需要验证的检测项目
分析方法
制剂分析方法的建立和验证
不断完善质量管理体系，提高质量管理的系 统性和有效性。
加强与供应商和客户的合作
与供应商和客户建立紧密的合作关系，共同 推动产品质量的提升和改进。
THANKS FOR WATCHING
感谢您的观看
02
结果比较
将实验结果与预期结果或已有研 究进行比较，分析差异和原因。
04
结论总结
对实验结果进行概括性总结，明 确实验结论和意义。
05 方法应用与实例分析
方法应用范围
1 2
药品质量控制
制剂分析方法是药品质量控制的重要手段，可用 于原料药、辅料、中间体和成品的质量控制。
药物研发
在药物研发过程中，制剂分析方法可用于药物的 合成、纯化、结构确证和稳定性研究等方面。
制剂分析方法的建立和验证
目录
• 引言 • 制剂分析方法建立 • 制剂分析方法验证 • 数据处理与分析 • 方法应用与实例分析 • 质量控制与质量保证
01 引言
目的和背景
01
确保制剂质量
制剂分析是确保药物制剂质量的重要手段，通过对制剂进行全面、准确
的分析，可以确保制剂符合质量标准，保证患者的用药安全。
将不同分析方法或不同实验室之 间的结果进行比较，以评估方法 的重现性和可比性。
结果评价
根据方法学验证和结果比较的结 果，对制剂分析方法的准确性和 可靠性进行评价，为药品质量控 制和药物研发提供有力支持。
06 质量控制与质量保证
质量控制策略
制定严格的质量控制标准
建立全面的质量控制标准体系，包括原料、 中间体和成品的质量控制标准，确保产品质 量的一致性和稳定性。
02
指导制剂生产
制剂分析可以为制剂生产提供重要的指导，帮助生产者了解制剂的成分、
加强与供应商和客户的合作
与供应商和客户建立紧密的合作关系，共同 推动产品质量的提升和改进。
THANKS FOR WATCHING
感谢您的观看
02
结果比较
将实验结果与预期结果或已有研 究进行比较，分析差异和原因。
04
结论总结
对实验结果进行概括性总结，明 确实验结论和意义。
05 方法应用与实例分析
方法应用范围
1 2
药品质量控制
制剂分析方法是药品质量控制的重要手段，可用 于原料药、辅料、中间体和成品的质量控制。
药物研发
在药物研发过程中，制剂分析方法可用于药物的 合成、纯化、结构确证和稳定性研究等方面。
制剂分析方法的建立和验证
目录
• 引言 • 制剂分析方法建立 • 制剂分析方法验证 • 数据处理与分析 • 方法应用与实例分析 • 质量控制与质量保证
01 引言
目的和背景
01
确保制剂质量
制剂分析是确保药物制剂质量的重要手段，通过对制剂进行全面、准确
的分析，可以确保制剂符合质量标准，保证患者的用药安全。
将不同分析方法或不同实验室之 间的结果进行比较，以评估方法 的重现性和可比性。
结果评价
根据方法学验证和结果比较的结 果，对制剂分析方法的准确性和 可靠性进行评价，为药品质量控 制和药物研发提供有力支持。
06 质量控制与质量保证
质量控制策略
制定严格的质量控制标准
建立全面的质量控制标准体系，包括原料、 中间体和成品的质量控制标准，确保产品质 量的一致性和稳定性。
02
指导制剂生产
制剂分析可以为制剂生产提供重要的指导，帮助生产者了解制剂的成分、
体内药物分析方法的建立和验证
HPLC是一种常用的分析方法，通过溶剂和柱型 的选择，实现对药物成分的分离和测定。
气相色谱-质谱联用法（GC-MS）
GC-MS结合气相色谱和质谱技术，可用于药物 的定性和定量分析。
毛细管电泳法（CE）
CE方法基于电解质溶液中的荧光物质的运移差 异，对药物进行定量分析。
液相色谱-质谱联用法（LC-MS）
体内药物分析方法的建立 和验证
在本次演讲中，我将介绍体内药物分析方法的重要性以及建立与验证这些方 法的步骤。我们还将探讨常见的分析方法，并分享一些实际样品分析的案例 研究。
研究目的和背景
我们的研究旨在提高体内药物分析的准确性和可靠性。了解药物在体内的代谢和排泄过程对药物疗效评估至关 重要。
建立药物分析方法的重要性
1 提高药物治疗效果
通过建立准确和可重复的药物分析方法，我们可以优化药物的剂量和给药方式，以提高 治疗效果。
2 保证药物安全性
合适的药物分析方法可以帮助我们检测潜在的药物代谢产物和有害副作用，确保药物的 安全性。
3 促进新药开发
通过建立高效的药物分析方法，我们可以更好地评估新药的代谢特性和药代动力学特征， 从而推动新药的研发。
质量控制和质量保证
我们使用建立和验证的分析方法， 在血浆样品中测定药物的浓度， 以评估药物的相应效应和剂量控 制。
通过分析代谢产物，我们可以进 一步了解药物的代谢途径和体内 转化过程，为合理用药提供支持。
使用建立和验证的分析方法，我 们能够监控药物制剂的质量并确 保合格产品的生产。
总结和展望
通过建立和验证准确可靠的药物分析方法，我们能够更好地理解药物在体内 的代谢和作用机制，并为药物治疗提供科学依据。
建立与验证方法的步骤
1
气相色谱-质谱联用法（GC-MS）
GC-MS结合气相色谱和质谱技术，可用于药物 的定性和定量分析。
毛细管电泳法（CE）
CE方法基于电解质溶液中的荧光物质的运移差 异，对药物进行定量分析。
液相色谱-质谱联用法（LC-MS）
体内药物分析方法的建立 和验证
在本次演讲中，我将介绍体内药物分析方法的重要性以及建立与验证这些方 法的步骤。我们还将探讨常见的分析方法，并分享一些实际样品分析的案例 研究。
研究目的和背景
我们的研究旨在提高体内药物分析的准确性和可靠性。了解药物在体内的代谢和排泄过程对药物疗效评估至关 重要。
建立药物分析方法的重要性
1 提高药物治疗效果
通过建立准确和可重复的药物分析方法，我们可以优化药物的剂量和给药方式，以提高 治疗效果。
2 保证药物安全性
合适的药物分析方法可以帮助我们检测潜在的药物代谢产物和有害副作用，确保药物的 安全性。
3 促进新药开发
通过建立高效的药物分析方法，我们可以更好地评估新药的代谢特性和药代动力学特征， 从而推动新药的研发。
质量控制和质量保证
我们使用建立和验证的分析方法， 在血浆样品中测定药物的浓度， 以评估药物的相应效应和剂量控 制。
通过分析代谢产物，我们可以进 一步了解药物的代谢途径和体内 转化过程，为合理用药提供支持。
使用建立和验证的分析方法，我 们能够监控药物制剂的质量并确 保合格产品的生产。
总结和展望
通过建立和验证准确可靠的药物分析方法，我们能够更好地理解药物在体内 的代谢和作用机制，并为药物治疗提供科学依据。
建立与验证方法的步骤
1
药品质量标准分析方法验证指导原则
在实际工作中，可以对实验工作进行充分的设计，使得 可以同时考察多个适当的验证项目，提供分析方法科学 的、综合的能力情况，比如：专属性、线性、范围、准 确度和精密度。
分析方法验证的内容
•准确度：指用该方法测定的结果与真实值或参考值接近的程度，一般以回 收率（%）表示。准确度应在规定的范围内建立。
•精密度：指在规定的测试条件下，同一个均匀供试品，经多次取样测定所 得结果之间的接近程度。精密度一般用偏差、标准偏差或相对标准偏差表 示。
1、建立药品质量标准； 2、药品生产工艺变更； 3、制剂的组分变更； 4、对原分析方法进行修订时。 方法验证理由、过程和结果均应记载在药品标准
起草说明或修订说明中。
分析方法验证的项目
鉴别试验， 杂质定量或限度检查（仪器或非仪器检测方法）， 原料药或制剂中有效成分含量测定， 制剂中其他成分（如防腐剂等）的测定。 药品溶出度、释放度等检查中溶出量等测试方法。
•重复性：在相同条件下，由同一个分析人员测定所得结果的精密度称
•中间精密度：在同一个实验室，不同时间由不同分析人员用不同设备 测定结果的精密度
•重现性：在不同实验室由不同分析人员测定结果的精密度
•专属性：指在其他成分（如杂质、降解产物、辅料等）可能存在下，采用 的方法能正确测定出被测物的特性。如方法不够专属，应采用多个方法予 以补充 ，以获得对待测物质所需的分离能力。
范围：指能达到一定精密度、准确度和线性，测试方法适用的高 低限浓度或量的区间。范围应根据分析方法的具体应用和线性、准 确度、精密度结果和要求确定。
耐用性：指在测定条件有小的变动时，测定结果不受影响的承受 程度，为把方法用于常规检验提供依据。开始研究分析方法时就应 考虑其耐用性。如果测试条件要求苛刻，则应在方法中写明。
分析方法验证的内容
•准确度：指用该方法测定的结果与真实值或参考值接近的程度，一般以回 收率（%）表示。准确度应在规定的范围内建立。
•精密度：指在规定的测试条件下，同一个均匀供试品，经多次取样测定所 得结果之间的接近程度。精密度一般用偏差、标准偏差或相对标准偏差表 示。
1、建立药品质量标准； 2、药品生产工艺变更； 3、制剂的组分变更； 4、对原分析方法进行修订时。 方法验证理由、过程和结果均应记载在药品标准
起草说明或修订说明中。
分析方法验证的项目
鉴别试验， 杂质定量或限度检查（仪器或非仪器检测方法）， 原料药或制剂中有效成分含量测定， 制剂中其他成分（如防腐剂等）的测定。 药品溶出度、释放度等检查中溶出量等测试方法。
•重复性：在相同条件下，由同一个分析人员测定所得结果的精密度称
•中间精密度：在同一个实验室，不同时间由不同分析人员用不同设备 测定结果的精密度
•重现性：在不同实验室由不同分析人员测定结果的精密度
•专属性：指在其他成分（如杂质、降解产物、辅料等）可能存在下，采用 的方法能正确测定出被测物的特性。如方法不够专属，应采用多个方法予 以补充 ，以获得对待测物质所需的分离能力。
范围：指能达到一定精密度、准确度和线性，测试方法适用的高 低限浓度或量的区间。范围应根据分析方法的具体应用和线性、准 确度、精密度结果和要求确定。
耐用性：指在测定条件有小的变动时，测定结果不受影响的承受 程度，为把方法用于常规检验提供依据。开始研究分析方法时就应 考虑其耐用性。如果测试条件要求苛刻，则应在方法中写明。
第章药物质量控制与分析方法验证ppt课件
那么a/（CA × V剩 ）=b/（CB× VB×FB ）； 当a:b=CA:CB时， V剩= VB×FB， （4）与待测药物反应的滴定液A体积V = VA×FA- VB×FB
2020/2/10
14
有空白校正
含(量 % (V )B OV B S)F BT A10 % 0 W
前提：A与B反应为aA + Bb，当a:b=CA:CB时
11
(2) 生成物滴定法
葡萄糖酸锑钠含量测定: 本品约0.3g, 加水100ml、盐酸 15ml与碘化钾试液10ml,暗处放置10分钟,用硫代硫酸钠滴定 液(0.1mol/L)滴定 每1ml硫代硫酸钠滴定液(0.1mol/L)相当于6.088mg锑(Sb) 反应式:
S5 b 2I- S3 b I2 I22S 2O 3 2 - 2I- S 4O 6 2 -
（1）空白实验时A与B完全反应，滴定液A总体积 V总= VB0×FB
（2）滴定时，待测药物消耗的滴定液A体积为 V = V总- VBS×FB= VB0×FB – VBS×FB
2020/2/10
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(3) 剩余量滴定法
司可巴比妥钠含量测定: 本品约0.1g, 加水10ml溶 解, 精密加溴滴定液(0.05mol/L)25ml, 再加盐酸5ml, 放置15分钟, 加碘化钾试液10ml, 用硫代硫酸钠滴定 液(0.1mol/L)滴定, 滴定的结果用空白试验校正
每1ml溴酸钾滴定液(0.01667mol/L)
2020/2/10
相当于3.429mg的异烟肼(C6H7N3O) 7
2. 含量测定
(1) 直接滴定法 (2) 生成物滴定法 (3) 剩余量滴定法
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(1) 直接滴定法
2020/2/10
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有空白校正
含(量 % (V )B OV B S)F BT A10 % 0 W
前提：A与B反应为aA + Bb，当a:b=CA:CB时
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(2) 生成物滴定法
葡萄糖酸锑钠含量测定: 本品约0.3g, 加水100ml、盐酸 15ml与碘化钾试液10ml,暗处放置10分钟,用硫代硫酸钠滴定 液(0.1mol/L)滴定 每1ml硫代硫酸钠滴定液(0.1mol/L)相当于6.088mg锑(Sb) 反应式:
S5 b 2I- S3 b I2 I22S 2O 3 2 - 2I- S 4O 6 2 -
（1）空白实验时A与B完全反应，滴定液A总体积 V总= VB0×FB
（2）滴定时，待测药物消耗的滴定液A体积为 V = V总- VBS×FB= VB0×FB – VBS×FB
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(3) 剩余量滴定法
司可巴比妥钠含量测定: 本品约0.1g, 加水10ml溶 解, 精密加溴滴定液(0.05mol/L)25ml, 再加盐酸5ml, 放置15分钟, 加碘化钾试液10ml, 用硫代硫酸钠滴定 液(0.1mol/L)滴定, 滴定的结果用空白试验校正
每1ml溴酸钾滴定液(0.01667mol/L)
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相当于3.429mg的异烟肼(C6H7N3O) 7
2. 含量测定
(1) 直接滴定法 (2) 生成物滴定法 (3) 剩余量滴定法
2020/2/10
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(1) 直接滴定法
体内药物分析第4章 体内药物分析方法的建立与验证
4. 与参比方法的相关性 参比方法一般选用特异性强、准确度高、线性关系 良好的色谱法。
例：茶碱血浆样品用UV法和HPLC法测定结果的相关 性
HPLC
茶 14 碱 血 12 浆 样 品 10 用
8
法6 测 定4 的 结 果2
.
.
. Y=－0.107＋0.983X
.
(r=0.9591，n=9)
. .
. ..
分析方法的建立步骤： 第一步：检测条件的筛选
以待测药物对照品照拟定的分析方法 （预处理除外）测定。根据测定结果确定最 佳分析检测条件。
例：HPLC－检测器、色谱柱、流动相、柱 温、内标；使具有足够的方法灵敏度、良好 的色谱参数（n，R，T）、适当保留时间。
第二步：分离条件的筛选
在进行分离条件筛选时，应考察生物 基质中内源性物质及代谢产物对分离与检 测的干扰；确认以对照品确定的检测条件 是否适用于实际生物样品。
分析测定的目的与要求
根据体内药物分析的目的决定分析方法的应用 1. 药代动力学研究
要求: 同时测定原形药物和代谢产物 检测: 宽线性范围（Cmax~Cmax的1/20）、高灵敏
度（10-9g/ml）和高专属性 方法: 不必强调方法的简便、快速；重点考虑测定 浓度范围较宽；多采用HPLC、GC-MS、LC-MS
考察目标：代谢产物对药物、内标物质的干 扰情况，进一步验证方法的可行性。
分离条件选择色谱图：
第三节 分析方法验证的内容与要求
验证分析方法的可行性与可靠性 方法验证时应考虑影响分析方法所有可变 因素（采样，样品制备，色谱分离，检测 与数据评价），通常采用模拟生物样品和 实际生物样品。
分析方法验证的内容：
SD
n
例：茶碱血浆样品用UV法和HPLC法测定结果的相关 性
HPLC
茶 14 碱 血 12 浆 样 品 10 用
8
法6 测 定4 的 结 果2
.
.
. Y=－0.107＋0.983X
.
(r=0.9591，n=9)
. .
. ..
分析方法的建立步骤： 第一步：检测条件的筛选
以待测药物对照品照拟定的分析方法 （预处理除外）测定。根据测定结果确定最 佳分析检测条件。
例：HPLC－检测器、色谱柱、流动相、柱 温、内标；使具有足够的方法灵敏度、良好 的色谱参数（n，R，T）、适当保留时间。
第二步：分离条件的筛选
在进行分离条件筛选时，应考察生物 基质中内源性物质及代谢产物对分离与检 测的干扰；确认以对照品确定的检测条件 是否适用于实际生物样品。
分析测定的目的与要求
根据体内药物分析的目的决定分析方法的应用 1. 药代动力学研究
要求: 同时测定原形药物和代谢产物 检测: 宽线性范围（Cmax~Cmax的1/20）、高灵敏
度（10-9g/ml）和高专属性 方法: 不必强调方法的简便、快速；重点考虑测定 浓度范围较宽；多采用HPLC、GC-MS、LC-MS
考察目标：代谢产物对药物、内标物质的干 扰情况，进一步验证方法的可行性。
分离条件选择色谱图：
第三节 分析方法验证的内容与要求
验证分析方法的可行性与可靠性 方法验证时应考虑影响分析方法所有可变 因素（采样，样品制备，色谱分离，检测 与数据评价），通常采用模拟生物样品和 实际生物样品。
分析方法验证的内容：
SD
n
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分析方法验证——专属性
定义：指一种方法在有可能的干扰物质（如杂质、降解产物和基质）存在时， 能够准确无误地评估被分析物的能力
鉴别:确保可以鉴别被分析物 纯度检查：确保所有的分析过程能够为杂质的含量提供准确的数据，如相关
物质检查、重金属限度检查、有机挥发性杂质检查等 含量测定：提供准确的检测结果以保证含量样品中被分析物的含量或效价值
分析方法验证——验证项目
验证项目 USP
I类
准确度
+
精密度
+
专属性
+
检测限
-
定量限
-
线性
+
范围
+
-不强制要求
II类
定量
限度检查
III类
IV类
+
*
*
-
+
-
+
-
+
+
*
+
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+
*
-
+
-
*
-
+
-
*
-
+
*
*
-
+必须进行 * 根据不同的方法特点也可能需要
❖I类方法：制剂中原料药或活性成分（包括防腐剂）的定量分析方法； ❖II类方法：原料药中杂质或制剂中降解化合物的分析方法；包括定量方法和限度检查； ❖III类方法：药物性能特征分析方法：溶出，药物释放 ❖IV类方法防止生物制品降解，但同时使分子的 某些部分难以被检测到
被结构所保护的易受影响基团延缓了降解过程（氧 化、脱酰胺基、切断和聚合）
完整结构使得分析方法很难检测到内部的变化
在某些分析中保持三维结构是很重要的（如SEC）， 但在其他一些分析中则需拆开折叠结构（如变性凝 胶电泳）
方法 100％浓度≥6次 3浓度×3次
分析方法验证——准确度
定义：方法的检测结果与真实值的接近程度。 －方法：
原料药：分析已知含量的对照品；第二种确定的方法分析，结果比较 制剂：加样回收；第二种确定的方法分析，结果比较 应在方法的范围内 计算回收率：3浓度×3次
的成立基础。
若一应采般进用认一与为步产该验品方证相法被似的检工特测艺异物进中性行其较处它好理物。后质为再能表免否明
一般采用相似物、不含API空白样品 疫细引动起胞非物测特，定异则方性所法免获的疫得特反抗异应体性。的，特可异进性行更相好关。试
作为阴性对照，以标准品或经认可样 另验外进，行产验品证中，存如在加的入大抗量体目或的特蛋异白抑可制能剂
分析方法验证——验证项目
参数（parameler) 专属性/特异性（specificity）
选择性（selectivity） 精密度（precision） 重复性（repeatability） 中间精密度（intermediate precision） 重现性（reproducibility） 准确度（accuracy）
资料6.质量研究资料，临床前有效性及安全性研究资料 （1）质量研究及注册标准研究资料； （2）检定方法的研究以及验证资料； （3）与同类制品比较研究资料； （4）产品抗原性、免疫原性和动物试验保护性的分析资料； （5）动物过敏试验研究资料； （6）动物安全性评价资料。
分析方法验证——法规要求
1.6探索性研究及其检验结果分析 1.6.1开展探索性研究项目及其目的。叙述开展探索性研究的项目，研究目的，采用 的主要方法。 1.6.2探索性研究及其检验结果分析。逐项叙述探索性研究项目详细研究方法，样品 与对照品的典型图谱或照片，研究结果与结论。 该项目的方法学按中国药典附录验证，详细方法学验证内容在附件中列出。
线性（linearity） 范围（range）
检测限（detection limit） 定量限（quantitation limit）
耐用性（robustness）
机构（organization） USP,EP,ChP,ICH ISO 17025 USP,EP,ChP,ICH
ICH,ChP,ISO 17025 ICH,ChP
作类为方重法要，参并考需进。行此全类面方的法验在证被确。定应为说标明准参方考法文前献已的经出过处了，适附当原的文 验及译证文。。申报者应说明方法的来源，并附具体方法。研制单位在首 自己次建采立用的此方类法方法前，也应对该方法进行适当的验证，如进行专属 性对和于精某些密产度品的验，尤证其，是以创便新证性明产在品实来际讲的，使由用于条缺件少下可该参方考法的也方是法适， 用通的常。需要自己建立一种新的分析方法，对于这类方法需进行全面 标准而方严法格的的替验代证方。法 此类方法系指由申报者提出的可取代标准方法的替代方法。申报 者在决定采用此类方法时应持慎重的态度，并需提供表明新方法 等同于或优于原方法的依据以及全面的验证资料，包括两种方法 的比较性资料。
健康元生物医药有限公司
药品分析方法建立及验证
——从质量控制出发
2016.03.23
目录
•方法开发考虑 •方法哪里来 •开发什么方法 •检测方法初识 •分析方法验证 •分析方法确认及再验证
方法考虑原则
预期的监督机构期望 产品质量参数对安全性和有效性的预期影响 分子的具体开发经验 来自之前以开发的类似分子的平台经验
对于所要分析的蛋白质物种，通常无法获得纯的样品 用来进行加样/回收的物质是所要分析的蛋白质物种
（杂质）的富集物，而不是纯化物
方法开发考虑
基质（配方组成）或酸碱度变化、自由巯基的出现等， 可能在分析过程中形成原来并不存在的杂质
通过溶液交换消除基质影响
减少暴露于过高或过低酸碱度溶液的时间
在某些特定方法中，自由巯基会导致分析方法造成的杂 质
品作为阳性对照。
影的响封残闭余实宿验主等蛋。白如的果测成定品，中应加进入行了相可关能
验影证响以活排性除测此定种的影辅响料。，应进行相关验证
以排除此种影响。
分析方法验证——专属性
定性分析（鉴别）：样品阳性结果＋空白阴性结果＋结构相似物质的阴性结果； 杂质检查（对照品可得）：将可能的杂质对照品加入样品中； 杂质检查（对照品不可得）：
方法开发考虑
从不同正交试验或从主要和辅助试验所得的杂质量 并不是可以累加的
生物制品需要多项检测来检量其多种特性，如电荷、 分子大小等
如果一个分子包含多种修饰，则它将被多次计算， 但是降解的分子仍然只有一个
所以不同检测所得到的值是不能累加的
方法开发考虑
很多时候，峰并不能达到基线分离 可容许实验误差较大 定量限较高
这些都是要设法避免
方法开发考虑
1. 生物学活性：是反映生物技术药物质量的重要指标，通常使 用细胞或动物进行测定，误差相对较大。不同批细胞、血清、 或其它易变性物质对测定方法的准确度和精密性均有影响。
2. 生物技术药物多为生物大分子药物，具有分子量大、结构多 样性和可变性等特点，结构的细微变化可影响药物的活性和质 量。
分析方法验证——精密度
定义：对均一样品重复取样检测每个检测结果间的接近程度，RSD%,CV% 重复性repeatability：短时间内同一分析人员使用同一仪器 中间精密度intermediate precision:在同一实验室内的变化，如不同分析时 间、不同分析人员、不同分析仪器 重现性reproducibility:在不同实验室内重复
开发什么方法
适用于特定分子的方法 分子鉴定
肽图 （纯度较高） Western Blot （使用范围广） 紫外扫描图 （纯度及基质要求高） 氨基酸测序 (纯度及基质要求高，样品末端无封闭）
偶联密度
ADC （抗体药物偶联物） 抗原与载体蛋白偶联物（疫苗类药物）
结合力 抗原与佐剂相互作用
开发什么方法
适用于特定分子的方法 活性测定
Elisa（体外评价） 动物实验 （体内评价） 中和实验 （细胞测定特定表位）
降解物测定
HPLC/MS（基于标准样校正或自身对照） 凝胶电泳 （基于特异分子带） SEC/荧光光谱 （解聚或聚合）
开发什么方法
检测方法初识——电泳及毛细管电泳
USP,ChP,ICH,ISO 17025 USP,EP,ChP,ICH,ISO 17025 USP,EP,ChP,ICH,ISO 17025
USP, ChP,ICH USP,EP,ChP,ICH,ISO 17025 USP,EP,ChP,ICH,ISO 17025
USP,EP,ChP, ISO 17025
适用于所有分子的方法 分子大小概况
SEC（原始状态） 凝胶电泳法（非折叠（变性）状态）
病毒样颗粒概况
电镜（局部原始状态，人为影响因素大） DLS（原始状态，分辨率差，大小精准） SEC（原始状态，流动相会影响蛋白状态）
开发什么方法
适用于所有分子的方法 杂质残留量
HPLC（基于标准样校正或自身对照） GC（对残留溶剂） ICP/AAS （对元素测定） Elisa （宿主蛋白、杂蛋白测定） Southern Blot/荧光光谱 （残留DNA）
分析方法验证——验证项目
验证项目 ChP
准确性 精密度 耐用性 线性 范围 专属性 检测限 定量限
鉴别试验 杂质定量
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-不强制要求
杂质限度 活性测定
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+必须进行