生物化学实验教学大纲
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1 / 13 《生物化学实验》教学大纲
一．实验目的
二．实验内容
三．实验学时安排
四．考试方法
五．参考教材
一．实验目的
生物化学是一门实验性学科，其所有知识均来自于实验。本课程着眼于学生学习和掌握生物化学课程的基本理论、基本知识以及实验技能，培养学生具有初步分析问题和解决问题的能力。
生物化学实验课通过学习滴定、比色、纸层析、电泳、生化制备等基本实验技术，分析研究糖、脂、蛋白质、核酸、酶、维生素等生化物质及某些代谢过程，培养学生具有初步的科学实验能力及严格的科学作风，同时验证生物化学的某些基本理论知识，加深感性认识，并锻炼初步的综合实验能力。
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二．实验内容
• 实验一 糖的呈色反应及还原糖的检验
一．实验目的
学习鉴定糖类及区分酮糖和醛糖的方法；了解鉴定还原糖的方法及其原理。
二．实验内容
Molish反应、蒽酮反应、Seliwanoff反应、Bial反应、Fehling反应。
三.实验过程
1. 呈色反应
（1） Molish 反应
（2） 蒽酮反应
（3） Seliwanoff反应
（4） Bial反应
2. 还原糖的检验
（1） Fehling反应
（2） Benedict反应
（3） Barfoed反应
四.作业与思考
1. 列表总结和比较本实验7种颜色反应的原理及其应用.
2. 应用Molish反应和Seliwanoff反应分析未知样品时，应注意些什么问题？
3. 举例说明那些糖属于还原糖.
• 实验二 脂类组成对脂类单分子层通透性的影响
一、实验目的
学习整理脂类单分子层和鉴定它的原理及方法，比较不同脂类所形成的脂类单分子层通透性的差异。
二、实验内容
以脂类单分子层作为模式膜，用甲烯蓝为指示剂，观察不同脂类单分子层通透性的影响。
三.实验过程
1. 溶液准备
2. 分光光度计测样
四.作业与思考
1. 试述生物膜的基本结构与功能
2. 解释下列名词：双亲媒性分子、脂类单分子层、磷脂双分子层、膜的内在蛋白质和外在蛋白质.
• 实验三 蛋白质浓度的测定（1）——Folin-酚法
一、 实验目的
学习Folin-酚法的原理及方法，制备标准曲线，测定未知样品中蛋白质含量。
二、实验内容
制备Folin-酚法标准曲线，测定未知样品蛋白质浓度。
三.实验过程
1. 制备Folin-酚法标准曲线
2. 测定未知样品蛋白质浓度
3. 计算
四.作业与思考
1. Folin-酚法测定蛋白的原理是什么？
2. 有哪些因素可以干扰Folin-酚测定蛋白含量？
3. 作为标准蛋白的牛血清清蛋白或酪蛋白在应用时有何要求？
• 实验四 蛋白质浓度测定（2）——紫外线吸收法
一、 实验目的
学习紫外线（UV）吸收法测定蛋白质含量的原理，了解紫外分光光度计的构造原理，掌握它的使用方法。
二、实验内容
标准曲线的绘制及未知浓度蛋白质溶液的测定。
三.实验过程
1. 标准曲线的绘制
2. 样品测定
四.作业与思考
1. 本法与其它测定蛋白质含量法相比，有哪些优点？
2. 若样品中含有干扰测定的杂质，应如何校正实验结果？
• 实验五 氨基酸的分离与鉴定——滤纸层析法
一、 实验目的
了解氨基酸滤纸层析的原理及操作方法。
二、实验内容
进行氨基酸的纸层析及定性鉴定。
三.实验过程
1. 滤纸的剪裁
2. 点样
3. 展层
4. 定性鉴定
5.定量测定
四.作业与思考
1. 做好本实验的关键是什么？
2. 实验操作过程，为何不能用手接触滤纸？
3. 影响Rf 制的因素有哪些？
• 实验六 血清蛋白醋酸纤维素薄膜电泳
一、 实验目的
了解电泳的一般原理，掌握醋酸纤维素薄膜电泳操作技术，测定人血清中各种蛋白质的相对百分含量。
二、实验内容
进行血清蛋白醋酸纤维素薄膜电泳并进行结果判断。
三.实验过程
1. 仪器与薄膜的准备
2. 点样
3. 电泳
4. 染色与漂洗
5. 透明
6. 结果判断与定量
四.作业与思考
1.根据人血清中血清蛋白各组分等电点，如何估计它们在pH8.6的巴比妥—巴比妥钠电解缓冲液中移动的相对位置
2.简述醋酸纤维素薄膜电泳原理及优点
• 实验七 蛋白质和氨基酸的呈色反应
一、 实验目的
学习常用的鉴定蛋白质氨基酸的方法及其原理；学习几种特定氨基酸的特殊颜色反应及其原理。
二、实验内容
双缩脲反应、茚三酮反应、黄色反应、茚三酮反应。
三.实验过程
1. 加样
2. 观察
四.作业与思考
1. 综合分析、对比蛋白质和氨基酸各种鉴定方法的特点和用途？
2. 如果蛋白质水解作用一直进行到双缩脲反应呈阴性结果，能对此作何结论？
3. 茚三酮反应的阳性结果是否是同一色调？若不是，为什么？
• 实验八 蛋白质的沉淀、变性反应
一、 实验目的
了解蛋白质的沉淀反应、变性作用和凝固作用的原理及它们的相互关系；学习盐析和透析等生物化学的操作技术。
二、实验内容
可逆沉淀反应，不可逆沉淀反应。
三.实验过程
1. 蛋白质的可逆沉淀反应—蛋白质的盐析作用
2. 蛋白质的不可逆沉淀反应
（1） 重金属沉淀蛋白质
（2） 有机酸沉淀蛋白质
（3） 无机酸沉淀蛋白质
（4） 加热沉淀蛋白质
3.蛋白质可逆沉淀与不可逆沉淀的比较
四.作业与思考
1. 为什么鸡蛋清蛋白可用作铅中毒或汞中毒的解毒剂？
2. 蛋白质分子中的那些集团可以与
（1） 重金属离子作用而使蛋白质沉淀？
（2） 有机酸、无机酸作用而使蛋白质沉淀？
3. 高浓度的硫酸铵对蛋白质溶解度有何影响，为什么？
4. 在蛋白质可逆沉淀反应的实验中，为何要用蛋白质氯化钠溶液？
• 实验九 酵母RNA的提取与地衣酚显色测定法
一、 实验目的
了解并掌握稀碱法提取RNA及地衣酚显色法测定RNA含量的基本原理及具体方法。
二、实验内容
用稀碱法提取酵母细胞RNA，并用地衣酚显色法测定。
三.实验过程
1. 酵母RNA提取
2. RNA地衣酚显色测定
（1） 标准曲线的整理
（2） 样品的测定
（3） RNA含量的计算
四.作业与思考
1.用你所学过的化学知识，分析三种催化剂：FeCl3·6H2O,CuCl2·H2O
和CuO,哪种催化剂的催化效果更好？
2.地衣酚反应中，干扰RNA测定的因素有哪些？如何能减少它们的影响？
• 实验十 动物组织DNA的制备
一、 实验目的
学习盐溶液法从动物组织中提取脱氧核糖核酸的原理及操作方法。
二、实验内容
以猪肝为原料用不同浓度的盐溶液提取其中的脱氧核糖核酸。
三.实验过程
1. DNA的提取
2. DNA含量的测定
（1） 标准曲线的制定
（2） 样品的测定
（3） DNA含量的测定
四.作业与思考
1. 结合本人实验操作的体会，试述在提取过程中应如何避免大分子DNA的降解和断裂。
2. DNA制品都可以用哪几种方法测定其含量？试从它们的原理、准确性等方面加以比较。
• 实验十一 核酸浓度测定（1）——定磷法
一、 实验目的
掌握利用核酸定磷测定法测定核酸的含量。
二、实验内容
通过对总磷、无机磷的测定，计算未知样品中的核酸浓度。
三.实验过程
1. 定磷标准曲线的制定
2. 测定总磷量
（1） 配制RNA样品溶液
（2） 样品的消化、总磷量和回收率测定
（3） 无机磷的测定
3.核酸含量计算
四.作业与思考
1. 测定磷的回收率有何意义？
2. 为什么所用水的质量、钼酸铵的质量和显色时酸的浓度对测定结果影响较大？
• 实验十二 核酸浓度测定（2）——紫外线吸收法
一、 实验目的
了解紫外线（UV）吸收法测定核酸浓度的原理，并进一步了解紫外分光光度计的使用方法。
二、实验内容
用紫外线吸收法测定核酸浓度。
三.实验过程
1.标准曲线的绘制
2.样品蛋白质浓度的测定
四.作业与思考
1. 干扰本实验的物质有哪些？
2. 设计排除这些干扰物的实验。
• 实验十三 维生素A、B1、B2的定性鉴定
一、实验目的
了解维生素A、B1、B2定性鉴定的原理及方法。
二、实验内容
维生素A的定性鉴定以及维生素B1、B2的定性鉴定。
三.实验过程
1. 维生素A
2. 维生素B1（重氮试剂法）
3. 维生素B1（荧光法）
4. 维生素B2
四.作业与思考
1. 举出含有维生素A、B1和B2最丰富的天然食物。
2. 说明4种定性鉴定维生素A、B1和B2的基本原理。
3. SbCl3呈色反应检测维生素A实验的重要环节是什么？
4. 试把上述4种鉴定方法之一改编为定量检测方法。
• 实验十四 维生素C的定量测定
一、实验目的
了解用2，6—二氯酚靛酚滴定法测定维生素C含量的原理及方法。
二、实验内容
用2，6—二氯酚靛酚滴定法定量测定维生素C的含量。
三.实验过程
1. 提取
2. 标准液的滴定
3. 样品滴定
4. 计算
四.作业与思考
1.为了测定准确的维生素C含量，实验过程中都应注意哪些操作步骤？
为什么？
2.试简述维生素C的生理意义。
• 实验十五 酶的激活剂、抑制剂及温度对酶的活性的影响
一、实验目的
了解酶反应的激活剂、抑制剂，了解温度对酶活性的影响。
二、实验内容
了解酶的激活剂、抑制剂、酶的最适反应温度。
三.实验过程
四.作业与思考
