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广东化工2021年第2期· 274 · 第48卷总第436期盐酸小檗碱在消化系病中的应用研究进展姜玲钰，武荣国*(佳木斯大学附属第一医院，黑龙江佳木斯154000)[摘要]目前盐酸小檗碱在临床上应用广泛，不仅可以作为广谱抗生素应用于抗痢、抗幽门螺杆菌，也在抗肿瘤、降血糖等方面发挥作用，尤其在消化系统疾病治疗中疗效可观。
本文主要对其在消化系统疾病中临床应用进行综述，对盐酸小檗碱的临床应用研究进行了解。
[关键词]盐酸小檗碱；黄连；幽门螺杆菌[中图分类号]TQ [文献标识码]A [文章编号]1007-1865(2021)02-0274-02Research Progress of BerberrineJiang Lingyu, Wu Rongguo*(The First Affiliated Hospital of Jiamusi University, Jiamusi 154000, China)Abstract:At present, berberine hydrochloride is widely used in clinic，It’s not only be used in anti dysentery and Helicobacter pylorias a broad-spectrum antibiotic, but also work in anti-tumor, hypoglycemic and other aspects, and it’s especially have the curative effect is considerable in the treatment of digestive system diseases. This article mainly summarizes its clinical application, and understands the clinical application of berberine hydrochloride.Keywords: Berberine；Coptis chinensis；Helicobacter pylori；Diabetes；Cancer盐酸小檗碱是中药黄连中的主要有效物质，也被称为黄连素。
细胞凋亡调控相关的基因及酶引言细胞凋亡是一个复杂而严密调控的过程，与细胞生长发育密切相关。
细胞凋亡的调控包括了多个基因和酶的参与，这些基因和酶通过激活或抑制凋亡信号通路来调节细胞凋亡的发生。
本文将详细探讨与细胞凋亡调控相关的基因及酶。
细胞凋亡调控相关的基因1. Bcl-2家族基因Bcl-2家族基因是调控细胞凋亡的重要基因家族。
该家族的成员包括了Bcl-2、Bcl-xL、Bax等。
Bcl-2和Bcl-xL是抗凋亡基因，它们通过抑制凋亡信号通路的激活来阻止细胞凋亡的发生。
相反，Bax是促凋亡基因，它参与了细胞凋亡信号通路的激活，从而促进了细胞凋亡的发生。
2. p53基因p53基因是一个重要的抑癌基因，它也参与了细胞凋亡的调控。
在DNA损伤等胁迫作用下，p53会被激活并转录一系列的基因，其中包括了促凋亡基因如Bax、Puma 等。
这些基因的表达会引发细胞凋亡的发生，从而起到了维持基因稳定性的作用。
3. c-Myc基因c-Myc基因是一个早期应答基因，它通过调节其他基因的表达来参与细胞凋亡的调控。
c-Myc能够抑制促凋亡基因如Bax的表达，并促进抗凋亡基因如Bcl-2的表达，从而抑制细胞凋亡的发生。
这使得c-Myc在肿瘤发生中起到了重要的作用。
4. Fas基因Fas基因编码了Fas受体，是细胞凋亡信号通路中的重要成员。
当Fas受体与Fas配体结合时，会激活细胞内的Caspase酶级联反应，从而引发细胞凋亡的发生。
因此，Fas基因在调控细胞凋亡过程中发挥了重要的作用。
细胞凋亡调控相关的酶1. Caspase家族Caspase家族是细胞凋亡信号通路中的关键酶。
该家族的成员包括了Caspase-3、Caspase-8等。
Caspase-3是一个执行酶，它直接参与了细胞凋亡的执行过程，如DNA断裂和核蛋白降解等。
Caspase-8是一个激活酶，它可以激活Caspase-3，并进一步促进细胞凋亡的发生。
2. 细胞色素C细胞色素C在细胞凋亡中发挥了重要的作用。
人参皂苷CK对肝脏的药理作用研究概况作者：浦滇李俊黄娜娜刘雨珊李芮包崇卯艾黎饶高雄来源：《中国民族民间医药·下半月》2022年第02期【摘要】人参皂苷CK为原人参二醇类人参皂苷，是口服原人参二醇后經肠道菌群的作用所产生的代谢产物，具有诸多药理活性。
近年研究发现，人参皂苷CK具有抗肝癌、保护肝脏和抑制脂肪肝的药理作用。
文章就人参皂苷CK对肝脏相关作用的国内外文献进行综述，以期为人参皂苷CK在肝脏相关疾病的临床应用研究提供依据。
【关键词】人参皂苷CK;抗肝癌;保护肝脏;脂肪肝 ;肝毒性【中图分类号】R285.6【文献标志码】 A【文章编号】1007-8517（2022）04-0062-04Research Progress on Related Effects of Ginsenoside CK on LiverPU Dian1，2LI Jun1，2HUANG Nana1，2LIU Yushan1，2LI Rui3BAO Chongmao3AILi3RAO Gaoxiong1，21.Yunnan University of Chinese Medicine， Kunming 650500， China;2.Yunnan Provincial National Health Preservation Theory and Health Product Engineering Laboratory ，Kunming 650500， China;3.Yunnan Yunuo Biological Engineering limited liability company ， Kunming 650217， ChinaAbstract：Ginsenoside CK is protopanaxadiol ginsenoside， which is a metabolite produced by intestinal flora after oral administration of protopanaxadiol， and has many pharmacological activities. In recent years， studies have found that ginsenoside CK has a pharmacological effect of anti-liver cancer， protecting the liver and inhibiting fatty liver. In this paper， the related effects of ginsenoside CK on liver at home and abroad were reviewed， which provided the basis for the clinical application of ginsenoside CK in liver-related diseases.Keywords：Ginsenoside CK; Anti-liver Cancer; Protect the Liver; Fatty Liver; Hepatotoxicity人参皂苷CK为原人参二醇类人参皂苷，其结构属于达玛烷型的四环三萜类皂苷，是二醇型人参皂苷（如Rb1、Rb2、Rc等）经口服后在肠道菌群的作用下所产生的代谢产物，是人参皂苷在体内发挥作用的主要成分之一，具有极高的生物活性[1]。
Modern Practical Medicine,July2012,Vol.24,No.7・740・扶正消瘤汤抑制人肝癌细胞SMMC-7721的增殖和诱导凋亡的实验研究刘帆【摘要】目的探讨扶正消瘤汤对人肝癌细胞SMMC-7721的增殖和诱导凋亡的作用。
方法MTT法测定扶正消瘤汤对人肝癌细胞SMMC-7721的增殖的影响；Elisa法测定肿瘤坏死因子（TNF-g/ml、50生成均有明显的促进作用，对SMMC-7721细胞凋亡具有明显的促进作用，并随浓度和时间（24～72h）的增加凋亡率增加，活细胞减少；扶正消瘤汤高剂量组对SMMC-7721细胞bax表达有明显上调作用，浓度越大上调越明显。
扶正消瘤汤高、低剂量组对SMMC-7721细胞bcl-2表达有明显下调作用，其中高剂量组与模型组差异有统计学意义（生成有关，并且与抑制肿瘤细胞增殖、诱导肿瘤细胞凋亡、调控bax、bcl-2表达有关。
【关键词】扶正消瘤汤；细胞凋亡；肿瘤坏死因子；bax；bcl-2doi:10.3969/j.issn.1671-0800.2012.07.009【中图分类号】R285.5；R735.7【文献标志码】A【文章编号】1671-0800(2012)07-0740-03Experimental research of Fuzheng xiaoliu decoction on inhibiting proliferation and inducting apoptosis of humanhepatoma SMMC-7721cells【Abstract】Objective To investigate the effect of Fuzheng xiaoliu decoction on inhibiting proliferation and inductingapoptosis of human hepatoma SMMC-7721cells.Methods The influence of Fuzheng xiaoliu decoction on the pro-liferation of human hepatoma SMMC-7721cells was determined by MTT assay.TNF-g/ml and50(TNF-现代实用医学2012年7月第24卷第7期・741・1.1细胞人肝癌细胞SMMC-7721购自北京协和医学院细胞资源中心。
（顺）-3-（氯代亚甲基）-6-甲基-硫色满-4-酮对SMMC-7721细胞抑制作用及对Bcl-2 Bax表达的影响摘要：目的初步探讨（顺）-3-（氯代亚甲基）-6-甲基-硫色满-4-酮（CMMT）抗肿瘤作用机制。
方法MTT法检测CMMT对SMMC-7721细胞抑制率，RT-PCR法检测CMMT对Bcl-2、Bax、P53基因表达。
结果CMMT能够明显抑制SMMC-7721细胞的生长，p53，Bcl-2和Bax分别是对照组的（2.46±0.129)，(1.39±0.08)和(0.36±0.049)倍。
结论CMMT对SMMC-7721细胞有较好的抑制作用，通过下调Bcl-2的表达和促进Bax，p53基因的表达来诱导细胞死亡。
关键词：（顺）-3-（氯代亚甲基）-6-甲基-硫色满-4-酮MTT RT-PCR、1 材料与方法1.1 药品与试剂DMEM-培养基、二甲基亚砜；新生牛血清；MTT(Amersco)，RNA 提取试剂盒、cDNA合成试剂盒、SYBR Mixture。
1.2 MTT法测定肿瘤生长抑制率细胞接种于96孔板。
孵育12 h后加药。
实验设药物组（CMMT）、阳性对照组（CDDP）、阴性对照组（DMSO）和空白对照组，实验组药物设5个浓度梯度。
培养24 h后每孔加入10 μL MTT（5.0mg·mL-1），继续培养4 h，弃培养液，每孔加入100 μL DMSO，490 nm 处检测OD值。
1.3 荧光定量PCR检测CMMT对Bcl-2、Bax、P53基因表达影响取对数生长期细胞接培养皿，12h后加入DMSO、CMMT(20μmol·L-1)作用于24 h，Trizol法提取总RNA，测定RNA浓度，制备cDNA模版。
RT-PCR反应体系：2μlcDNA模版，上、下游引物各1 μL，SYBR Mixture 25 μL，加去RNase水至50 μL，混匀后进行以下反应：95度预变性10 min，95 ℃变性15 s，58 ℃退火/延伸1 min，进行39个循环。
细胞凋亡调控相关的基因及酶细胞凋亡（apoptosis）是一种重要的细胞自我调控过程，对于维持生物体内组织结构和功能的平衡至关重要。
在细胞凋亡调控中，许多基因和酶发挥着关键的作用。
本文将介绍几个与细胞凋亡调控相关的基因和酶。
一、p53基因p53基因是一种肿瘤抑制基因，它在细胞凋亡调控中起着重要的作用。
p53蛋白通过调控多个基因的表达，参与了细胞周期的调控、DNA修复以及细胞凋亡等过程。
在DNA损伤时，p53蛋白会被激活，并促使细胞进入细胞凋亡通路，从而防止损伤细胞的异常增殖。
p53基因的突变与多种肿瘤的发生和发展密切相关。
二、Bcl-2家族Bcl-2家族是调控细胞凋亡的关键基因家族，包括抑制凋亡的成员（如Bcl-2和Bcl-xL）和促进凋亡的成员（如Bax和Bad）。
这些成员通过形成复合物或调节线粒体膜电位等方式，参与了线粒体相关的细胞凋亡途径。
Bcl-2和Bcl-xL通过抑制线粒体膜通透性的改变，抑制了线粒体释放细胞色素c和凋亡诱导因子的过程，从而抑制了细胞凋亡。
而Bax和Bad则通过促进线粒体膜通透性的改变，促进了线粒体释放细胞色素c和凋亡诱导因子的过程，从而促进了细胞凋亡。
三、Caspase酶Caspase酶是一类半胱氨酸蛋白酶，是细胞凋亡通路中的关键执行酶。
Caspase酶能够切割多种细胞内的蛋白质，从而调控细胞凋亡的执行过程。
根据功能和结构的差异，Caspase酶可分为启动Caspase（如Caspase-8和Caspase-9）和执行Caspase（如Caspase-3和Caspase-7）两大类。
启动Caspase通过激活执行Caspase，从而引发一系列的蛋白质切割反应，最终导致细胞凋亡的发生。
四、Fas配体和Fas受体Fas配体（FasL）是一种跨膜蛋白，而Fas受体是其对应的配体。
Fas配体与Fas受体结合后，触发了细胞凋亡通路的启动。
Fas/FasL 通路在免疫细胞介导的细胞凋亡中起着重要的作用。
circRNA和母基因通过不同的pathway影响肝癌细胞的生长，迁移和侵袭研究背景肝细胞癌（HCC）是最常见的一种恶性肿瘤，同时，中国也是肝癌的癌症大国。
虽然现在的医疗诊断技术发展很快，但是，对与肝癌的现有诊断技术还是受限很大。
因此，开发新的诊断biomarker，并理解这些biomarker的作用机制，是很多科研人员想做的事情。
本研究从circRNA，一类非常适合做biomarker的候选分子出发，深入研究了一个锌指家族基因ZKSCAN1及其产生的circZKSCAN1，在HCC 中的作用机制及作为biomarker的潜在价值。
研究结果1.基因表达模式分析ZKSCAN1，是一个锌指蛋白家族，该家族基因在肿瘤发生，发展，转移和药物耐受方面都发挥着非常重要的作用。
同时，现有的研究也发现，ZKSCAN1基因的第二个和第三个外显子部分能形成一个circRNA，在人脑部和肝脏表达丰富。
因此，研究人员首先验证了ZKSCAN1和circ ZKSCAN1在HCC组织中的表达情况。
102个HCC 组织和配对癌旁的RT-PCR结果显示，他们在HCC样本中的表达显著降低。
进一步将ZKSCAN1和circ ZKSCAN1的表达与临床指标进行关联分析，发现低的ZKSCAN1表达与肿瘤大小显著相关；而circ ZKSCAN1的表达与不同肿瘤数目，硬化程度，血管侵袭，微血管侵袭，肿瘤grade都显著相关。
ROC曲线分析显示，circ ZKSCAN1的AUC 值达到0.834，敏感性和特异性能达到82.2%和72.4%，相比而言，ZKSCAN1的AUC值只有0.474。
因此，circ ZKSCAN1的表达更合适作为肿瘤组织的诊断biomarker。
2. circRNA与母基因表达相关性分析对于circRNA的研究，第一个想到的是circRNA的表达是否会和母基因表达有关联。
因此，研究人员先在不同人HCC细胞系中检测了ZKSCAN1 mRNA和circZKSCAN1的表达。
Caspase ,BCL-2蛋白家族与细胞凋亡调控机制【摘要】细胞凋亡是一种重要的细胞死亡方式，由多种分子调控。
Caspase 和BCL-2蛋白家族在细胞凋亡中起关键作用。
Caspase是主要的凋亡调控蛋白酶，参与凋亡信号传导和执行。
BCL-2蛋白家族调节细胞生存和死亡，其中一些成员促进凋亡，而另一些抑制凋亡。
Caspase与BCL-2蛋白家族之间存在复杂的相互作用，调控细胞凋亡的进行。
研究进展显示，细胞凋亡在各种疾病中起着重要作用，如癌症和神经退行性疾病。
Caspase ,BCL-2蛋白家族与细胞凋亡调控机制对于疾病治疗具有重要意义。
未来的研究应该注重解析这些调控机制，探索潜在的临床应用，为疾病治疗提供新的方向和策略。
【关键词】关键词：Caspase、BCL-2蛋白家族、细胞凋亡、调控机制、相互作用、研究进展、疾病、重要性、未来研究方向、临床应用。
1. 引言1.1 细胞凋亡的定义细胞凋亡是一种程序性死亡形式，是生物体内一种重要的生理现象。
在细胞凋亡中，受到内外部环境刺激的细胞会按照一定的信号传导途径，通过活化特定的蛋白酶（Caspase）而发生程序性死亡。
与坏死不同，凋亡是一种高度有序、规范的细胞死亡过程，其过程可精确调控，不会引起身体的炎症反应。
细胞凋亡在生物体内担负着维持组织稳定、清除异常细胞、调控身体发育和免疫应答等重要功能。
细胞凋亡的过程往往伴随着细胞内外环境的变化，如DNA损伤、细胞内信号分子的改变等。
在接收到适当信号后，细胞会通过内在或外在通路触发凋亡程序。
通过对细胞凋亡调控机制的研究，人们可以深入了解细胞生命活动的调控规律，为疾病的治疗和预防提供新的思路。
细胞凋亡的定义不仅仅是细胞死亡的一种形式，更为我们揭示了生命活动中一种重要的规律和机制。
1.2 Caspase的作用Caspases是一类半胱氨酸蛋白酶，在细胞凋亡中扮演着至关重要的作用。
它们被称为“凋亡酶”，因为它们能够促进或执行细胞凋亡过程。
细胞凋亡及Bcl-2蛋白在胃癌发生中的作用及价值研究摘要】目的：研究细胞凋亡及Bcl-2蛋白在胃癌发生中的作用及价值。
方法：选取在2015年2月至2017年8月入住我院并将医生确诊为患有胃癌的110例病人作为观察组，早期胃癌患者86例，进展期胃癌24例。
经检查胃部无疾病正常对照组110人。
将220例参与研究的志愿者的病理组织标本经免疫组织切片化学染色方法特异性标记Bcl-2蛋白，并将检验显微镜下结果作对比。
同时将224例参与研究的志愿者的病理组织标本切片做tunel染色检测胃组织细胞凋亡情况。
结果：经比较，观察组胃癌病人的Bcl-2蛋白显著高于正常对照组，且呈现疾病越严重，阳性率越高的趋势，P＜0.05。
与此同时发现观察组胃癌病人的细胞凋亡显著多于正常对照组，且呈现疾病越严重，阳性率越高的趋势，P＜0.05。
结论：在胃癌病人细胞凋亡增多及Bcl-2蛋白表达显著上升，证明细胞凋亡及Bcl-2蛋白可能在胃癌发生中起到一定作用，为临床诊治提供参考。
【关键词】细胞凋亡；Bcl-2蛋白；胃癌【中图分类号】R735.2 【文献标识码】A 【文章编号】1007-8231（2018）13-0162-02Apoptosis and the Role and Value of Bcl-2 Protein in Gastric Carcinogenesis Wei Hua. Department of Pathology, People's Hospital of Hanyin County 725103【Abstract】Objective To study the role of apoptosis and Bcl-2 protein in gastric carcinogenesis. Metods A total of 110 patients admitted to our hospital from February 2015 to August 2017 were selected as the observation group, and 86 patients with early gastric cancer and 24 with advanced gastric cancer. 110 normal persons in the control group with no disease in the stomach were examined. The pathological tissue samples of 220 volunteers participating in the study were specifically labeled with Bcl-2 protein by immunohistochemical staining, and the results were compared under the microscope. At the same time, the pathological tissue samples of 224 volunteers participating in the study were sectioned by tunel staining to detect the apoptosis of gastric tissue. Results After comparison, the Bcl-2 protein in the observation group was significantly higher than that in the normal control group, and the more severe the disease was, the higher the positive rate was, P<0.05. At the same time, it was found that the apoptosis of the gastric cancer patients in the observation group was significantly more than that in the normal control group, and the more severe the disease was, the higher the positive rate was, P<0.05. Conclusion The increase of cell apoptosis and the increase of Bcl-2 protein expression in gastric cancer patients indicate that apoptosis and Bcl-2 protein may play a role in the development of gastric cancer, providing reference for clinical diagnosis and treatment.【Key words】Apoptosis; Bcl-2 protein; Gastric cancernihaobeijing胃癌是发病率最高的几种常见癌症中的一种，近几年来，随着社会人群生活方式的改变以及工作和生活带来的种种压力使得胃癌的患病率每一年都在大幅度的增长。
细胞凋亡调控相关的基因及酶细胞凋亡是一种正常细胞程序性死亡的过程，它在维持生物体内部环境稳定、细胞发育、组织形成和免疫系统调节等方面起着重要作用。
细胞凋亡的调控涉及许多基因和酶，下面将介绍其中几个主要的调控因子。
1. Bcl-2家族基因：Bcl-2家族是细胞凋亡调控中最重要的家族之一。
它包括抑制凋亡的成员（如Bcl-2、Bcl-xL）和促进凋亡的成员（如Bax、Bak）。
这些基因通过调节线粒体膜通透性来控制细胞凋亡的发生。
Bcl-2和Bcl-xL通过抑制线粒体膜通透性转运蛋白Bax和Bak的活性，阻止线粒体释放细胞凋亡执行者酶，从而抑制细胞凋亡的发生。
2. c-Myc基因：c-Myc是一种转录因子，对细胞增殖和凋亡起着重要作用。
c-Myc在细胞生长、代谢以及凋亡调控中发挥着双重作用。
在细胞生长和代谢方面，c-Myc可以促进细胞周期进程和蛋白质合成，从而促进细胞增殖。
然而，在细胞凋亡调控中，c-Myc也能够诱导细胞凋亡的发生，通过抑制Bcl-2的表达或者直接调节凋亡相关基因的表达来实现。
3. p53基因：p53是一种重要的肿瘤抑制基因，也是细胞凋亡调控的关键因子。
在DNA损伤、细胞应激和肿瘤发生等情况下，p53被激活并调控多个靶基因的表达。
p53通过直接调控凋亡相关基因表达，如促凋亡基因PUMA和Bax的表达，或者通过调节凋亡相关信号通路的活性来诱导细胞凋亡。
4. Caspase家族酶：Caspase是一类半胱氨酸特异性蛋白酶，是细胞凋亡执行者酶。
Caspase家族包括半胱氨酸蛋白酶（如caspase-3、caspase-7）和半胱氨酸酶（如caspase-8、caspase-9）。
这些酶在细胞凋亡中起着关键作用，通过激活下游的凋亡效应蛋白，如DNA酶和核蛋白，从而引发细胞凋亡的级联反应。
5. IAP（抑制凋亡蛋白）家族：IAP家族是一类通过抑制Caspase的活性来抑制细胞凋亡的蛋白质。
IAP家族包括多个成员，如cIAP1、cIAP2和XIAP。
植物甾醇抗肿瘤作用研究进展宋冬雪;汲晨锋;季宇彬【摘要】植物甾醇(phytosterol or plant sterol)是植物中一种具有多种生理功能的活性成分,具有显著的抗肿瘤活性.本文通过查阅国内外相关文献,对植物甾醇的理化性质、抗肿瘤作用及其作用机制研究进展进行综述.【期刊名称】《牡丹江医学院学报》【年(卷),期】2011(032)004【总页数】3页(P79-81)【关键词】植物甾醇;理化性质;抗肿瘤作用A【作者】宋冬雪;汲晨锋;季宇彬【作者单位】哈尔滨商业大学生命科学与环境科学研究中心黑龙江哈尔滨150076;国家教育部抗肿瘤天然药物工程研究中心黑龙江哈尔滨 150076;哈尔滨商业大学生命科学与环境科学研究中心黑龙江哈尔滨 150076;国家教育部抗肿瘤天然药物工程研究中心黑龙江哈尔滨 150076;哈尔滨商业大学生命科学与环境科学研究中心黑龙江哈尔滨 150076;国家教育部抗肿瘤天然药物工程研究中心黑龙江哈尔滨 150076【正文语种】中文甾醇是类甾族化合物，广泛存在于自然界中。
主要以游离甾醇(FS)、甾醇糖苷(SG)、甾醇脂肪酸(SE)、脂酰基甾醇糖苷(ASG)、甾醇羟基芳酸脂(SPHE)等形式存在于动植物体内，国内外研究的重点主要集中在游离甾醇上［1］。
根据甾醇类化合物的来源不同，将其分为动物甾醇、植物甾醇、菌类甾醇。
动物甾醇主要为胆固醇，存在于人及动物的血液、脂肪、脑髓以及神经组织中;植物甾醇主要有β－谷甾醇、豆甾醇、菜油甾醇和菜籽甾醇等;菌类甾醇主要有麦角甾醇和岩藻甾醇［2］。
甾醇C－5位为双键，C－3位羟基是重要的活性基团，C－3羟基是甾醇的重要活性基团，甾醇通过它形成各种衍生物［3］，如甾醇脂肪酸酯、甾醇阿魏酸酯(谷维素)、甾醇葡糖苷、酰基甾醇葡糖苷等。
甾醇分子中碳原子数一般为27～31，相对分子质量约为386～456 Da，熔点较高，相对密度略大于水，不溶于水，可溶于多种有机溶剂。
一、实验目的本研究旨在通过细胞学实验，探讨原发性肝癌的发生发展机制，分析肝癌细胞与正常肝细胞的差异，为肝癌的早期诊断和治疗提供理论依据。
二、实验材料1. 人肝癌细胞系（HepG2、SMMC-7721）2. 人正常肝细胞系（L02）3. 实验试剂：胰蛋白酶、DMEM培养基、胎牛血清、RIPA裂解液、BCA蛋白定量试剂盒、SDS-PAGE凝胶、ECL发光液、一抗（c-Myc、p53、Bcl-2、Bax）、二抗、PCR引物等4. 实验仪器：细胞培养箱、酶标仪、凝胶成像系统、离心机、电泳仪、PCR仪等三、实验方法1. 细胞培养：将肝癌细胞系和正常肝细胞系分别接种于培养皿中，置于细胞培养箱中培养。
2. 细胞裂解：收集肝癌细胞和正常肝细胞，加入RIPA裂解液，充分裂解细胞。
3. 蛋白质定量：采用BCA蛋白定量试剂盒，对细胞裂解液进行蛋白质定量。
4. Western blot：将蛋白质样品进行SDS-PAGE电泳，转膜，封闭，加入一抗，二抗，ECL发光液进行检测。
5. PCR：提取细胞总RNA，进行逆转录，PCR扩增目的基因，进行琼脂糖凝胶电泳检测。
四、实验结果1. Western blot结果：肝癌细胞系中c-Myc、p53表达上调，Bcl-2表达上调，Bax表达下调；正常肝细胞系中c-Myc、p53表达下调，Bcl-2表达下调，Bax表达上调。
2. PCR结果：肝癌细胞系中c-Myc、p53基因表达上调，Bcl-2基因表达上调，Bax 基因表达下调；正常肝细胞系中c-Myc、p53基因表达下调，Bcl-2基因表达下调，Bax基因表达上调。
五、实验结论1. 原发性肝癌细胞系中c-Myc、p53、Bcl-2、Bax表达与正常肝细胞系存在显著差异。
2. c-Myc、p53、Bcl-2、Bax基因在原发性肝癌的发生发展中可能发挥重要作用。
六、实验讨论1. c-Myc、p53、Bcl-2、Bax基因在肝癌细胞中的异常表达，可能通过调控细胞增殖、凋亡等生物学过程，促进肝癌的发生发展。
甘肃道地药材中的皂甙类成分抗癌机制研究进展袁毅君;贾鸿震;李欣;周向军【摘要】本文综合文献资料,针对甘肃道地药材中皂甙类成分的抗癌活性,就其抗癌机制方面的研究概况进行综述,为甘肃道地药材中皂甙类成分的进一步研究及抗癌药物的研发提供资料。
【期刊名称】《植物学研究》【年(卷),期】2017(006)006【总页数】8页(P406-412)【关键词】甘肃道地药材;皂甙类;抗癌【作者】袁毅君;贾鸿震;李欣;周向军【作者单位】[1]天水师范学院生物工程与技术学院,甘肃天水;;[2]兰州理工大学生命科学与工程学院,甘肃兰州;;[2]兰州理工大学生命科学与工程学院,甘肃兰州;;[1]天水师范学院生物工程与技术学院,甘肃天水【正文语种】中文【中图分类】R28甘肃特殊的地理位置，地形地貌与气候复杂多样，造就了甘肃道地药材种类多样性的良好生态条件，是理想的中药材种植基地，也是我国重要的中药生产地之一，使得甘肃省药材蕴藏种类和数量均居全国前列。
有许多国家重点品种，如当归、党参、黄芪、大黄、甘草等，甘肃现已培育了许多既具有广泛药用价值又具有商业价值的大宗道地药材，道地药材抗癌作用的研究已成为抗癌药物研发的重要部分。
甘肃药材品种总计1527种，植物类药材1270种，其中35种菌类、4种苔藓类、5种地衣类、47种蕨类、1179种种子植物；动物类药材214种；矿物类43种[1]。
甘肃丰富的药用植物资源为我国中药的研究以及抗癌药物研发做出了重要贡献。
甘肃为“秦药”或“西药”的主产地[2]。
受多种因素影响，中药材不但种类丰富多样，而且品种优质。
大宗道地药材有30多种，其中当归、大黄、党参、黄芪、红芪、甘草、柴胡、猪苓、半夏、款冬花、苦参、杏仁、地骨皮、刺五加、赤芍、远志、麻黄、羌活等品种产量大，品种优良，而且大部分是早期开发、中医临床最为常用的品种[1]。
但有些品种并不是甘肃原有，而是经过多年的适应性种植，才形成当今的道地药材，如党参等。
白花蛇舌草总黄酮抑制人肝癌细胞的靶基因调控张硕;宋衍芹;周三;倪同尚;岳旺【期刊名称】《世界华人消化杂志》【年(卷),期】2007(15)10【摘要】目的:研究白花蛇舌草总黄酮(flavonoids from Hedyotis diffusa willd．,FHD)抑制人肝癌细胞SMMC-7721的靶基因调控．方法:分别提取人正常肝细胞、人肝癌SMMC-7721细胞和FHD作用后的SMMC- 7721细胞的总RNA,逆转录合成单链、双链cDNA后,体外转录合成生物素标记的cRNA与人HO4基因表达谱芯片杂交,扫描杂交芯片图像,利用软件获得FHD抗肝癌的靶基因,对靶基因进行生物信息学分析．结果:共找到20条FHD抑制肝癌细胞的有效靶基因,即给予FHD后,通过上调或下调,这些显著异常表达的基因被恢复至正常水平．其中,癌基因pim-1(Hs．81170)、rel(Hs．858)、ras(Hs．204354)、fos(Hs．25647)、myc (Hs．79070)、met(Hs．285754)以及编码Bcl-2相关蛋白的基因(Hs．227817)被显著下调;成纤维细胞生长因子(Hs．284244)、胰岛素样生长因子1受体(Hs．239176)、胰岛素样生长因子结合蛋白(Hs．1516)、G蛋白偶联受体(Hs．23016)、酪氨酸蛋白磷酸化酶(Hs．227777)、转录因子12(Hs．21704)、转录因子CP2(Hs．154970)等与细胞生长相关的信号转导分子被显著下调;细胞因子IL-1(Hs．1722)被显著下调;丝裂原活化的蛋白激酶(MAPK)信号传导通路成员MAP2K6(Hs．118825)和MAP3K12(Hs．211601)被显著上调;抑癌基因NF-2(Hs．902)被显著上调;编码T细胞活化共刺激信号分子的TNFSF9(Hs．1524)、TNFSF7(Hs．99899)基因被显著上调．这些基因均与肝癌的发生、发展密切相关．结论:FHD抑制SMMC-7721细胞的作用由多条靶基因协同,并通过胞内、胞外信号转导途径协调完成．【总页数】7页(P1060-1066)【关键词】白花蛇舌草;总黄酮;人基因芯片;人肝癌细胞SMMC-7721;抑制作用【作者】张硕;宋衍芹;周三;倪同尚;岳旺【作者单位】青岛大学医学院药学系;青岛市市立医院口腔科;青岛大学医学院解剖教研室【正文语种】中文【中图分类】R735.7【相关文献】1.白花蛇舌草注射剂抑制人肝癌细胞SMMC-7721增殖及调控Bcl-2/CytC信号通路诱导线粒体凋亡 [J], 李文婷;赵凤鸣;戴紫函;周韬;李沐涵;吴勉华2.应用基因芯片技术研究白花蛇舌草豆甾醇抑制人肝癌细胞体外生长的靶基因调控[J], 张硕;王宏韬;石振艳;张丽;宋衍芹;岳旺3.白花蛇舌草总黄酮对肝癌MHCC97-H细胞增殖的抑制作用 [J], 张彦兵;王天昶;朱娇;郭亚焕;肖菊香;廖子君;阮之平4.白花蛇舌草总黄酮对肝癌的体内外抑制作用及对小鼠移植性肝癌H22细胞增殖周期、凋亡、免疫环境的影响 [J], 张硕;宋衍芹;周三;杨志宏;刘占涛;倪同尚;岳旺5.白花蛇舌草总黄酮体外对人肝癌细胞HepG-2的作用 [J], 周忆新;吴杨;顾珉因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
一、实验背景肝癌，作为全球最常见的恶性肿瘤之一，其发病率和死亡率在我国居高不下。
近年来，随着生物技术和分子生物学研究的不断深入，肝癌的发病机制和治疗策略得到了新的认识。
本实验旨在通过体外细胞培养和分子生物学技术，研究肝癌的发生、发展及治疗策略，为临床肝癌的诊断和治疗提供理论依据。
二、实验材料与方法1. 实验材料- 人肝癌细胞系（HepG2、SMMC-7721）- 人正常肝细胞系（LO2）- 胶原酶、胰蛋白酶- DMEM培养基、胎牛血清- 实验试剂：RNA提取试剂盒、PCR试剂盒、Western blot试剂等- 仪器：细胞培养箱、荧光显微镜、PCR仪、凝胶成像系统等2. 实验方法（1）细胞培养将人肝癌细胞系HepG2和SMMC-7721以及人正常肝细胞系LO2分别接种于含10%胎牛血清的DMEM培养基中，置于37℃、5%CO2的培养箱中培养。
每隔2天更换一次培养基。
（2）细胞增殖实验采用CCK-8法检测细胞增殖情况。
将细胞以1×10^4个/孔的密度接种于96孔板，每组设6个复孔。
培养24小时后，每孔加入10μl CCK-8试剂，继续培养4小时。
用酶标仪测定各孔的吸光度（OD）值。
（3）RNA提取及PCR检测采用RNA提取试剂盒提取细胞总RNA，利用PCR技术检测目的基因的表达。
以β-actin为内参基因。
（4）Western blot检测提取细胞蛋白，进行SDS-PAGE电泳，转膜，封闭，一抗孵育，二抗孵育，ECL显影。
三、实验结果1. 细胞增殖实验与正常肝细胞系LO2相比，肝癌细胞系HepG2和SMMC-7721的增殖速度明显加快（P<0.05）。
2. PCR检测肝癌细胞系HepG2和SMMC-7721中，癌基因（如c-myc、Bcl-2等）的表达显著上调，而抑癌基因（如p53、PTEN等）的表达显著下调。
3. Western blot检测肝癌细胞系HepG2和SMMC-7721中，癌蛋白（如c-myc、Bcl-2等）的表达显著上调，而抑癌蛋白（如p53、PTEN等）的表达显著下调。
发热、痛觉过敏和局部毛细血管扩张，并且其与水肿、骨侵蚀等有关联[9-11]。
实验结果表明，TFLS 对FCA 诱导的AA 大鼠继发性足肿胀有较好的抑制作用，提示TFLS 可能通过减轻或抑制滑膜组织炎症从而达到减轻关节肿胀的作用。
TFLS 能明显降低AA 大鼠血清中的NO 水平，并显著减少炎症渗出液中PGE 2的含量，从而减轻关节炎症取得治疗效果。
研究结果显示，TFLS 具有明显的抗炎作用，提示其作用机制可能与抑制血清中NO 的生成以及减少炎症组织中PGE 2的生成有关。
参考文献：[1]中华本草编委会.中华本草（下）[M].上海：上海科学技术出版社，1999：113-113.[2]郭宝林，肖培根，杨世林.贵州珍珠菜属药用植物资源调查与利用[J].基层中药志，1995，9（3）：7-8.[3]向秋玲.追风伞的化学成分研究[D].贵阳：贵州大学，2007，38-40.[4]林军，何萍，全敏敏，等.花红胶囊主要药效学研究[J].中成药，2006，28（3）：383-384.[5]马东来，李俊，陈敏珠，等.卡芬尼对大鼠佐剂性关节炎治疗作用的免疫机制[J].中国免疫学杂志，1992，8（2）：114-117.[6]杨岫岩.风湿科的镇痛与抗炎[J].中国处方药，2008，8（77）：68-69.[7]徐叔云，卞如濂，陈修.药理实验方法学[M]：第3版.北京：人民卫生出版社，2002：911-921.[8]Dinarello CA.Role of pro-and anti-inflammatory cytokines during in －flammation ：experimental and clinical findings [J].Journal of biologi －cal regulators and homeostatic agents ，1997，11（3）：91-103.[9]徐红梅，魏伟.前列腺素E 2与类风湿关节炎及其药物研究[J].中国药理学通报，2005，21（3）：262-265.[10]Bergmsn P ，SchoutensA.Prostaglandins and bone [J].Bone ，1995，16（4）：485-488.[11]Trebino CE ，Stock JL ，Gibbons CP ，et al.Impaired inflammatoryand pain responses in mice lacking an inducible prostaglandin E syn －thase[J]A ，2003，100：9044-9049.（编辑：邓响潮）收稿时间：2010-01-08作者简介：叶丽红（1967-），女，博士，副教授，副主任医师，硕士研究生导师。
研究方向：内科杂病及肿瘤的中医药防治。
Email ：cocolihong ye@ 。
通讯作者：章永红，教授，主任医师，博士研究生导师。
研究方向：内科杂病及肿瘤的中医药防治。
Email ：zyhong311@ 。
基金项目：江苏省自然科学基金项目（BK2007240）；国家科技支撑计划（2006BAI11B08-01）。
抗癌扶正方对人肝癌细胞SMMC-7721的Bcl-2基因表达的调控作用叶丽红1，皮文霞2，程海波1，俞晶华1，张旭3，章永红1（1.南京中医药大学第一临床医学院，南京210029；2.南京中医药大学中药学院，南京210029；3.南京中医药大学国际教育学院，南京210029）摘要：目的探讨抗癌扶正方（KFP）的抗肝癌作用及机制。
方法采用人肝癌细胞SMMC －7721，经过细胞培养、MTT 法、流式细胞仪检测抗癌扶正方对肝癌细胞生长抑制率的影响及对Bcl-2基因表达的调控作用。
结果抗癌扶正方具有良好的抑制肝癌细胞生长作用，尤其以1，10mg/mL 剂量组的效果最佳，作用程度与化疗药物类似。
结论抗癌扶正方能够抑制人肝癌细胞SMMC －7721活性。
其机理在于下调凋亡抑制基因Bcl-2的表达，促进细胞凋亡的产生。
关键词：抗癌扶正方（KFP ）；人肝癌细胞SMMC －7721；生长抑制率；Bcl-2基因中图分类号：R285.5；Q754文献标识码：A 文章编号：1003-9783（2010）04-0372-04Regulatory Effect of Kangai Fuzheng Prescription for Human Hepatoma Cells SMMZ-7721and Bcl-2Ex －pressionYE Lihong 1，PI Wenxia 2，CHENG Haibo 1，YU Jinghua 1，ZHANG Xu 3，ZHANG Yonghong 1（1.The First Clinical College ，Nanjing University of Chinese Medicine ，Nanjing 210029，China ；2.Chinese Herbal Medicine College ，Nanjing University of Chinese Medicine ，Nanjing 210029，China ；3.International Education College ，Nanjing Uni －versity of Chinese Medicine ，Nanjing 210029，China ）Abstract:Objective To investigate the anticancer effect and mechanism of Kangai Fuzheng Prescription （KFP ）which is prescribed by experienced expert Zhou Zhongying .Methods Human hepatoma cells SMMZ-7721were cultured to －gether with KFP extract.The effect of KFP on inhibiting the growth of SMMZ-7721was evaluated by methyl thiazolyl tetrazolium （MTT ）assay ，and the expression of Bcl-2was detected by flowcytometry.Results It was shown that KFP had an obvious effect on inhibiting the growth of human hepatoma SMMZ-7721cells ，and the effect of KFP at the1材料与方法1.1细胞及动物人肝癌细胞SMMC－7721购自中科院上海细胞所，复苏后使用。
1.2药物抗癌扶正方（KFP），主要由漏芦10g、泽漆10g、当归10g等药物组成，均购自我校中西医结合门诊，由南京中医药大学中药学院中药鉴定及药物化学实验室皮文霞副教授鉴定并制成抗癌扶正方药液。
根据预实验的结果，将原配浓度1.18g/mL，配制成细胞培养所需10μg/mL、100μg/mL、1mg/mL、10mg/mL、100mg/mL、1g/mL，高温灭菌后，置4℃冰箱中保存、备用。
环磷酰胺（CTX），200mg/瓶，上海华联制药有限公司。
批号：012034号。
根据临床人用药量为400～2000mg，计算其体外细胞浓度为55.56μg/mL。
临用时配所需CTX浓度555.6μg/mL （96孔板，扩大10倍）及5.56mg/mL（6孔板，扩大100倍）。
1.3主要试剂RPMI-1640，每升含20%小牛血清、L-谷氨酰胺0.33mg、青霉素100μg/mL、链霉素100μg/mL、pH7.4；GIBCO，USA。
小牛血清，南京医科大学微生物教研室产品。
消化剂为0.25%的胰蛋白酶（MERCK，USA）。
噻唑蓝（MTT）、二甲基亚砜（DM－SO）均为Sigma公司产品。
Bcl-2试剂盒由晶美生物制品有限公司提供。
1.4主要仪器CO2培养箱，NAPCO，USA；倒置显微镜，OLYPUS，JAPAN；流式细胞仪，FACSCalibur （BD，USA）；全自动酶标光度计（BIO-RAD），USA；三洋超低温冰箱，JAPAN；96孔培养板、6孔培养板，CORNING USA。
1．5实验方法1.5.1溶液配制完全及不完全的RPMI-1640、Hank’s 液、消化液、PBS洗涤液的配制方法参考文献[1]。
1.5.2细胞培养人肝癌细胞株SMMC-7721在含10%小牛血清的RPMI-1640培养液，37℃，5%CO2条件下培养，隔天换培养液，细胞长满单层铺满培养瓶后，用0.25%胰蛋白酶消化，2～3min后，待镜下细胞圆缩时，用尖吸管吹打细胞使其悬于液体中，加完全RPMI-1640培养液终止消化，分瓶，加培养液，传代。
1.5.3噻唑蓝还原法（MMT法）测定细胞增殖[1]在无菌条件下，将细胞培养瓶中贴壁的SMMC-7721细胞，用0.25%的胰蛋白酶消化，加RPMI-1640培养液中，用玻璃滴管轻轻吹打成单细胞悬液。
将细胞浓度调整为1×104/mL，接种于96孔培养板。
培养24h后，消化，加培养液，吹打成肝癌细胞悬液。
各孔加入癌细胞悬液90μL，空白对照组加入不含药物的RPMI-1640培养液，实验组中的CTX阳性组、KFP各药物剂量组加入不同浓度的药物（终浓度扩大10倍之浓度），每孔各加10μL，达终浓度CTX为55.6μg/mL、ALC为1μg/mL、10μg/mL、100μg/mL、1mg/mL、10mg/ mL、100mg/mL以及10%和20%的含药血清。
每组每种浓度一式6孔或8孔，加药后培养24h。
其后，加入50μg浓度为1mg/mL的MTT，培养4h后，弃去上清液，各孔加入100μL的DMSO，轻度振荡约15min 使其溶解，约1h后，酶标仪测490nm波长处的OD 值，计算肝癌细胞的生长抑制率（Inhibiting rate，IR）。
细胞生长抑制率（IR）＝（1-给药孔平均OD值/对照组平均OD值）×100%。
本实验重复3次。
1.5.4基因表达检测按文献[2]方法，检测各样本中Bcl-2的表达的相对含量。
收集药物作用24h的细胞，PBS洗，去上清液，0.5mLPBS重悬，缓缓加入-20℃预冷的70％乙醇，边摇边震荡，置-20℃保存，检测前2000r/min离心除去固定液，PBS洗2次，加入一抗，稀释后的鼠抗人Bcl-2，37℃闭光反应30min，PBS 再洗2次，加稀释后的羊抗鼠IgG-FITC，4℃孵45 min，PBS洗2次，用PBS调成1×106/mL单细胞悬液，流式细胞仪上机测试，以测定Bcl-2的基因表达，测定后用分析软件Cell Quest分析各样本的基因表达。
