培养基(06零)

培养基的种类培养基的名目繁多，种类各异，为便于掌握系统化的知识，这里对其进行以下分类并举例介绍。

（一）按对培养基成分的了解来分培养基中所含的营养要素虽都一样，但具体成分却可迥然不同。

如果按人们对其中成分的了解程度来分类有以下三类：1．天然培养基（complexmedium；undefinedmedium）这是指一些利用动、植物或微生物体或其提取物制成的培养基，人们无法确切知道其中的成分。

例如培养各种细菌所用的肉汤蛋白胨培养基，培养酵母菌的麦芽汁培养基等。

天然培养基的优点是取材方便、营养丰富、种类多样、配制方便；缺点是成分不稳定也不甚清楚，因而在做精细的科学实验时，会引起数据不稳定。

因此，天然培养基只适合配制实验室用的各种基本培养基及大生产中的种子培养基或发酵培养基之用。

现将几种用于配制天然培养基的常用原材料的特性列于表5-17。

2．组合培养基（definedmedium）又称合成培养基或综合培养基（syntheticmedium），是一类用多种高纯化学试剂配制成的、各成分（包括微量元素）的量都确切知道的培养基。

例如培养细菌的葡萄糖铵盐培养基，培养放线菌的淀粉硝酸盐培养基（即高氏一号培养基），培养真菌的蔗糖硝酸盐培养基*（即察氏培养基）等。

组合培养基的优点是成分精确、重演性高；缺点是价格较贵、配制较烦。

因此，一般仅用于作营养、代谢、生理、生化、遗传、育种、菌种鉴定和生物测定等定量要求较高的研究工作上。

习惯常以该培养基中所含的碳源和氮源名称来作该培养基的名称，也有以设计人的姓名来命名的。

3．半组合培养基（semi-definedmedium）既含有天然成分又含有纯化学试剂的培养基即称半组合培养基。

例如，培养真菌用的马铃薯蔗糖培养基等。

严格地讲，凡含有未经特殊处理的琼脂的任何组合培养基，实质上都只能看作是一种半组合培养基。

（二）按培养基外观的物理状态来分如按培养基外观的物理状态来分，培养基可分成三类。

配制培养基的原则和方法是什么培养基有很多种，你要配制哪一种呢？你要查清楚，你要配的培养基的成分有那些，然后把要用的东西找到。

在配制之前你要把装培养基的容器准备好，是用试管、平皿还是三角瓶。

之后看要配的是固体培养基还是液体培养基，觉得是否放琼脂或明胶。

之后找来一个大烧杯，依次把要放的物质放入，要是配的是固体培养基要把加入琼脂或明胶的培养基放在电炉上加热，待琼脂或明胶完全溶解后趁热迅速分装。

之后把分装好的培养基封口，之后选择是干灭还是湿灭，等灭菌之后，配制培养基的工作就完成了。

培养基的配制与灭菌1目的1.1了解并掌握培养基的配制、分装方法1.2掌握各种实验室灭菌方法及技术。

2原理培养基是供微生物生长、繁殖、代谢的混合养料。

由于微生物具有不同的营养类型，对营养物质的要求也各不相同，加之实验和研究的目的不同，所以培养基的种类很多，使用的原料也各有差异，但从营养角度分析，培养基中一般含有微生物所必需的碳源、氮源、无机盐、生长素以及水分等。

另外，培养基还应具有适宜的pH值、一定的缓冲能力、一定的氧化还原电位及合适的渗透压。

琼脂是从石花菜等海藻中提取的胶体物质，是应用最广的凝固剂。

加琼脂制成的培养基在98～100℃下融化，于45℃以下凝固。

但多次反复融化，其凝固性降低。

任何一种培养基一经制成就应及时彻底灭菌，以备纯培养用。

一般培养基的灭菌采用高压蒸汽灭菌。

3材料3.1器皿及材料天平、称量纸、牛角匙、精密pH试纸、量筒、刻度搪瓷杯、试管、三角瓶、漏斗、分装架、移液管及移液管筒、培养皿及培养皿盒、玻璃棒、烧杯、试管架、铁丝筐、剪刀、酒精灯、棉花、线绳、牛皮纸或报纸、纱布、乳胶管、电炉、灭菌锅、干燥箱。

3.2药品试剂蛋白胨、牛肉膏、NaCl、K2HPO4、琼脂、NaNO3、KCl、MgSO4、FeSO4、蔗糖、麦芽糖、木糖、葡萄糖、半乳糖、乳糖、土豆汁、豆芽计、磷酸铵、5%NaOH 溶液、5%HCl溶液。

4流程称药品→溶解→调pH值→融化琼脂→过滤分装→包扎标记→灭菌→摆斜面或倒平板。

微生物试剂的配制和灭菌是在微生物实验室中非常重要的步骤，以确保实验的准确性和可重复性。

以下是一般的微生物试剂配制和灭菌标准：微生物试剂的配制：1. 培养基配制：-使用高质量的培养基成分，例如肉汤、酵母提取物、葡萄糖等。

-通过称量和混合来准确配制培养基，确保成分的准确性和一致性。

-使用蒸馏水或去离子水作为配制培养基的溶剂。

2. 试剂和缓冲液的配制：-使用高纯度的试剂，确保配制过程的精确性。

-采用标准的实验室操作程序，使用适当的实验室设备，如搅拌器、pH计等。

3. 灭菌步骤：-在配制之前，确保工作区域、仪器和培养器具已经经过适当的清洁和消毒。

-配制过程中，使用无菌技术，避免微生物污染。

微生物试剂的灭菌：1. 高压蒸气灭菌（常用于培养基、培养器具等）：-使用高压蒸气灭菌器（例如，高压蒸汽灭菌器或自动压力蒸气灭菌器）。

-遵循制造商的使用指南和操作规程。

-通常，121摄氏度、15分钟是一个常见的高压蒸气灭菌条件。

2. 紫外线灭菌（常用于表面消毒）：-将试剂瓶、培养皿等物品暴露在紫外线灯下，以进行表面消毒。

-通常需要较长时间的照射，同时确保灭菌面暴露在紫外线下。

3. 过滤灭菌（用于灭菌液体培养基等）：-使用合适的微孔过滤器，选择合适的孔径，将液体通过过滤器。

-这种方法适用于温度敏感的试剂。

4. 酒精喷雾或浸泡（常用于实验台面等表面的消毒）：-使用酒精（通常是70%的乙醇）进行喷雾或浸泡，以对实验台面等表面进行消毒。

在进行微生物试验时，遵循实验室安全操作规程和制定的消毒程序非常重要。

此外，对于每种试剂和培养基，应该查阅制造商提供的具体使用说明书，以确保正确的配制和灭菌。

培养基的种类范文培养基是在实验室中为细菌、真菌、植物组织或动物细胞提供生长环境的营养物质。

根据不同的需求，培养基可以分为多种类型。

下面我将详细介绍几种常见的培养基。

1.基础培养基：基础培养基是最基本的培养基类型，提供细菌或细胞生长所需的基本营养物质，如碳源、氮源、无机盐和水等。

常见的基础培养基包括液态LB培养基（用于细菌培养）、液态DMEM培养基（用于动物细胞培养）和固体MS培养基（用于植物细胞培养）。

2. 选择性培养基：选择性培养基是通过添加特定化合物或抑制剂来选择性地促进或抑制其中一种细菌或真菌的生长。

这种培养基可用于筛选特定菌种、分离纯菌或抵制有害微生物。

常见的选择性培养基包括MacConkey培养基（用于分离大肠杆菌）、Sabouraud培养基（用于真菌培养）和MTL培养基（用于胃溃疡杆菌的分离）。

3. 差异培养基：差异培养基是通过添加其中一种化合物来促进一些细菌的可见特征表现，如颜色、形态或结构等。

差异培养基常用于鉴定和鉴别微生物。

常见的差异培养基有MacConkey-Sorbitol培养基（用于分离致病性大肠杆菌），青绿培养基（用于鉴别青霉和念珠菌）和EMB培养基（用于分离发酵杆菌）。

4.增殖培养基：增殖培养基是为了促进细胞或组织的增殖而设计的。

这类培养基通常会添加植物生长素或动物细胞因子，以促进细胞分裂或组织再生。

常见的增殖培养基有MS培养基（用于植物离体培养）和DMEM/F12培养基（用于动物细胞培养）。

5.工业培养基：工业培养基用于工业生产中的微生物发酵过程。

这类培养基通常会优化营养物质的组成，以提高产物的产量和纯度。

常见的工业培养基有液态SGG培养基（用于啤酒发酵）和液态YPG培养基（用于酵母发酵）。

除了上述几种常见的培养基类型，还存在其他一些特殊用途的培养基，如鉴别培养基（用于鉴别微生物的特定代谢能力）、低营养培养基（用于维持微生物菌株的纯度）、分离培养基（用于从混合物中分离纯菌）等。

各种培养基的配方在微生物学中，培养基是为微生物提供营养和生长所必需的营养物质的混合物，可以根据微生物的特性和需求来设计不同成分的培养基。

不同种类的微生物需要不同的培养基来生长和繁殖，为了获得最佳的生长效果，需根据微生物的特性制备相应的培养基。

下面介绍几种常用的培养基及其配方。

1. 加尔沙基培养基（Luria-Bertani，LB培养基）LB培养基是一种常用的细菌培养基，适用于大多数细菌的培养。

其成分包括牛肉浸出物、酵母提取物和氯化钠，PH为7.0。

配方：- 水：1000ml-氯化钠：10g-酵母提取物：5g-牛肉浸出物：10gLB培养基的主要特点是富含氨基酸和碳源，适合于细菌的快速生长。

2. PDA培养基（Potato Dextrose Agar）PDA培养基是一种适合真菌和霉菌生长的培养基，成分简单易得。

它主要包括马铃薯提取物、葡萄糖和琼脂。

PDA培养基是一种半固体培养基，适合于真菌的产孢。

配方：-马铃薯提取物：200g-葡萄糖：20g-琼脂：20g-静置180s后，灭菌PDA培养基适合于真菌和霉菌的生长，常用于菌落计数和生长的研究中。

3.营养琼脂培养基营养琼脂培养基是一种通用的培养基，适用于多种微生物的培养。

它主要包括蛋白水解物、酵母提取物、氯化钠和琼脂。

配方：-蛋白水解物：5g-酵母提取物：1g-氯化钠：5g-琼脂：15g- 水：1000ml-蒸馏后灭菌营养琼脂培养基适合于大多数微生物的生长，是最常用的培养基之一4. 马尼特尔-梅尔特培养基（Mannitol-Salt Agar，MSA）MSA培养基是一种选择性培养基，主要用于金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）的分离和鉴定。

它的成分包括马尼托尔、氯化钠、酵母提取物和琼脂。

配方：-马尼托尔：5g-氯化钠：75g-酵母提取物：1g-琼脂：15g- 水：1000ml-蒸馏后灭菌MSA培养基在金黄色葡萄球菌的生长过程中，可以通过红色菌落的形成来进行识别。

一、实验目的1. 掌握培养基的基本配制原理和方法。

2. 熟悉培养基中各种成分的作用和用途。

3. 学习培养基的灭菌技术，确保实验结果的准确性。

二、实验原理培养基是供微生物、细胞等生物体生长繁殖的营养基质。

其基本组成包括碳源、氮源、无机盐、生长因子和水。

根据实验目的和微生物的需求，培养基可以有不同的配方和类型。

三、实验材料1. 试剂：牛肉膏、蛋白胨、NaCl、琼脂、葡萄糖、酵母提取物、硫酸镁、磷酸二氢钾、硫酸锌、氯化铁、维生素等。

2. 器材：电子天平、药匙、玻璃棒、烧杯、容量瓶、移液管、高压蒸汽灭菌锅、pH试纸、无菌操作台、无菌操作工具等。

四、实验步骤1. 称量与溶解（1）按照培养基配方比例，准确称取各种试剂。

（2）将称取的试剂分别溶解于少量蒸馏水中。

（3）将溶解后的试剂混合均匀。

2. 调整pH值使用pH试纸测定培养基的pH值，根据需要调整至适宜范围（一般为6.5-7.5）。

3. 灭菌（1）将配制好的培养基分装至无菌试管或锥形瓶中。

（2）使用高压蒸汽灭菌锅进行灭菌，压力为0.1MPa，时间为20分钟。

4. 倒平板（1）待培养基冷却至50-60℃时，倒入无菌平板中。

（2）待培养基凝固后，即可用于实验。

五、实验结果与分析1. 培养基配制成功经过实验操作，成功配制出符合要求的培养基，可用于微生物培养或细胞培养。

2. 培养基质量通过观察培养基的颜色、质地等特征，判断培养基的质量。

合格的培养基应颜色均匀、质地均匀、无杂质。

3. 灭菌效果通过高压蒸汽灭菌，可以有效杀灭培养基中的微生物，确保实验结果的准确性。

六、实验讨论1. 培养基的配制过程中，准确称量和溶解是关键步骤，直接影响到培养基的质量。

2. pH值的调整对微生物的生长有重要影响，应根据实验目的和微生物的需求进行适当调整。

3. 灭菌是保证实验结果准确性的重要环节，应严格按照操作规程进行。

七、实验总结通过本次实验，掌握了培养基的基本配制原理和方法，熟悉了培养基中各种成分的作用和用途，学会了培养基的灭菌技术。

146种常见培养基的配方培养基是微生物学实验中常用的一种重要实验工具，通过调配合适的培养基，可以提供微生物生长所需的营养物质，从而促进微生物菌落的繁殖和生长。

下面将介绍一些常见的培养基配方，涵盖了常用的总结培养基、选择性培养基和不同微生物类群的专用培养基。

1.琼脂肉汤培养基（NB）-牛肉脱脂粉5g-酵母提取物2.5g-琼脂12g- 蒸馏水 1000ml2.大肠杆菌复合培养基（LB）-液体培养基-蛋白胨10g-酵母提取物5g-NaCl5g- 蒸馏水 1000ml-琼脂板-蛋白胨10g-酵母提取物5g-NaCl5g-琼脂15g- 蒸馏水 1000ml3. 肠杆菌选择性琼脂培养基（MacConkey琼脂培养基）-蛋白胨17g-紫胆汁盐1.5g-普鲁士蓝盐1.5g-琼脂12g- 蒸馏水 1000ml4. 脱氧胆盐琼脂培养基（Deoxycholate Agar）-脱氧胆酸钠20g-普鲁士蓝盐0.8g-蛋白胨7.5g-琼脂12g- 蒸馏水 1000ml5.阿米巴选择性琼脂培养基（KV培养基）- 鸡蛋清 20ml- 中性红溶液 12ml-NaCl0.5g-纤维素0.25g- 盐酸 1ml-琼脂15g- 蒸馏水 1000ml6. 革兰氏阳性菌选择性琼脂培养基（Mannitol Salt Agar）-蔗糖10g-氯化钠75g-酵母提取物5g-麦芽提取物1g-琼脂15g- 蒸馏水 1000ml7. 维生素富集琼脂培养基（Burkholder's Basal Salt Medium）-NaNO31g-KCl0.5g-MgSO4·7H2O0.2g-CaCl2·2H2O0.02g-FeSO4·7H2O0.01g-琼脂14g- 蒸馏水 1000ml8. 三氯化铁琼脂培养基（Cetrimide Agar）-硫酸镁0.8g-氯化钴0.05g-氯化锌0.01g-氯化亚铁0.03g-三氯化铁0.03g-比色琼脂糖15g- 过滤蒸馏水 1000ml9. 库氏四甲基铵琼脂培养基（Chapman Agar）-高氯酸钠5g-脲7.5g-酵母提取物2g-海藻酸钠20g-紫胆汁盐0.25g-琼脂12g- 蒸馏水 1000ml10. 还原格兰氏琼脂培养基（Reduced Gram-negative Broth）-蛋氨酸0.5g-异亮氨酸0.5g-半胱氨酸0.5g-菜碱0.5g-胀氨酸0.5g-琼脂7g- 蒸馏水 1000ml这些是其中的一部分常见的培养基配方，涵盖了常用的总结培养基、选择性培养基和不同微生物类群的专用培养基。

《培养基对微生物的选择作用》学历案一、学习主题高中中图版选修一第一章微生物培养技术第二节：培养基对微生物的选择作用二、学习目标1、知识与技能目标能准确说出选择培养基的含义，就像能清楚说出自己最喜欢的零食的特点一样。

掌握选择培养基的操作原理，这原理就像游戏的通关秘籍，有了它就能在微生物培养的“游戏”里顺利前行。

熟练说出平板培养基的制备步骤，从称量到倒平板，每个步骤都像舞蹈动作一样熟练于心。

区分消毒和灭菌的概念，这就好比区分双胞胎，虽然有点相似，但其实大有不同。

学会用接种环接种和稀释平板涂布操作这两种接种技术，就像学会了两种魔法技能，可以在微生物的小世界里施展。

2、过程与方法目标通过实际操作平板培养基的制备过程，提高动手能力和解决实际问题的能力。

如果在制作过程中出现了小问题，就像玩拼图遇到了一块不太好放的拼图块，要想办法解决。

在学习接种技术的过程中，培养严谨的科学态度。

因为在微生物的世界里，一点点小的失误就可能像在多米诺骨牌里推倒了关键的一块，导致整个结果的改变。

3、情感态度与价值观目标体会微生物培养技术在现代科学研究和生活中的重要性，感受到小小的微生物背后隐藏着大大的科学力量。

培养对生物学科的兴趣，就像对一部超级有趣的科幻电影一样着迷，微生物的世界就像一个神秘的外星世界等待着我们去探索。

三、学习重难点1、重点选择培养基的含义和操作原理。

这是微生物选择培养的核心知识，就像房子的地基，不掌握好这个，后面的知识就像盖在沙滩上的房子不稳固。

平板培养基的制备步骤。

这是我们实际操作微生物培养的关键流程，每一步都像烹饪美食中的一道工序，少了或者错了都不行。

接种技术的操作要点。

这是把微生物准确“搬家”到新环境的关键，就像把小动物从一个笼子准确地放到另一个笼子里，需要小心翼翼。

2、难点理解选择培养基操作原理中如何通过添加或去除物质来抑制不需要的微生物生长。

这有点像在一群小动物中只选择某一种来照顾，要知道用什么方法才能让其他小动物不来打扰。

常用培养基配方目录：01糖发酵管02ONPG培养基03西蒙氏柠檬酸盐培养基04缓冲葡萄糖蛋白胨水(MR和VP试验用)05克氏柠檬酸盐培养基06丙二酸钠培养基07葡葡糖铵培养基08Hugh-Leifson培养基(O/F试验用)09马尿酸钠培养基10营养明胶11苯丙氨酸培养基12氨基酸脱羧酶试验培养基13蛋白胨水(靛基质试验用)14硫酸亚铁琼脂(硫化氢试验用)15尿素琼脂16氰化钾(KCN)培养基17氧化酶试验18硝酸盐培养基19细胞色素氧化酶试验20过氧化氢酶试验21过氧化物酶试验22磷酸盐缓冲液23明胶磷酸盐缓冲液24乳酸-苯酚溶液25肉浸液肉汤26肉浸液琼脂27牛肉(或牛心)消化汤28血消化汤29豆粉琼脂30血琼脂31营养琼脂32营养肉汤33乳糖胆盐发酵管34乳糖发酵管35EC肉汤36缓冲蛋白胨水(BP)37氯化镁孔雀绿增菌液(MM)38四硫磺酸钠煌绿增菌液(TTB)39四硫磺酸钠煌绿增菌液(换用方法)40亚硒酸盐胱氨酸增菌液(SC)41GN增菌液42肠道菌增菌肉汤43亚硫酸铋琼脂(BS)44DHL琼脂45HE琼脂46SS琼脂47WS琼脂48麦康凯琼脂49伊红美蓝琼脂(EMB)50三糖铁琼脂(TSI)51三糖铁琼脂(换用方法)52克氏双糖铁琼脂(KI)53克氏双糖铁琼脂(换用方法)54葡萄糖半固体发酵管555%乳糖发酵管56CAYE培养基57Honda氏产毒肉汤58Elek氏培养基(毒素测定用)59氯化镁孔雀绿羧苄青霉素培养基60胰蛋白胨水61Rustigian氏尿素培养液62氯化钠结晶紫增菌液63氯化钠蔗糖琼脂64嗜盐菌选择性琼脂653.5%氯化钠三糖铁琼脂66氯化钠血琼脂673.5%氯化钠生化试验培养基68改良磷酸盐缓冲液(小肠结肠炎耶尔森氏菌专用) 69CIN-1培养基70嗜盐性试验培养基01糖发酵管成分:牛肉膏5g蛋白胨10g氯化钠3g磷酸氢二钠(Na2HPO4·12H2O)2g0.2%滇麝香草酚蓝溶液12mL蒸馏水1000mLpH7.4制法:1葡萄糖发酵管按上述成分配好后,按0.5%加入葡萄糖,分装于有一个倒置小管的小试管内,121℃高压灭菌1 5min.2其他各种糖发酵管可按上述成分配好后,分装每瓶100mL,121℃高压灭菌15min.另将各种糖类分别配好10 %溶液,同时高压灭菌.将5mL糖溶液加入于100mL培养基内,以无菌操作分装小试管.注:蔗糖不纯,加热后会自行水解者,应采用过滤法除菌.试验方法:从琼脂斜面上挑取小量培养物接种,于36℃±１℃培养,一般观察2～3d.迟缓反应需观察14～30d.02ONPG培养基成分:邻硝基酚β-D-半乳糖昔(ONPG)60mg(O-Nitrophenyl-β-D-galactopyranoside)0.01mol/L磷酸钠缓冲液(pH7.5)10mL1%蛋白胨水(PH7.5)30mL制法:将ONPG溶于缓冲液内,加入蛋白胨水,以过滤法除菌,分装于10mm×75mm试管,每管0.5mL,用橡皮塞塞紧.半乳糖苷酶产试验方法:自琼脂斜面上挑取培养物1满环接种,于36±１℃培养1～3h和24h观察结果.如果β－生,则于1～3h变黄色,如无此酶则24h不变色.03西蒙氏柠檬酸盐培养基成分:氯化钠5g硫酸镁(MgSO4·7H2O)0.2g磷酸二氢铵1g磷酸氢二钾1g柠檬酸钠5g琼脂20g蒸馏水1000mL0.2%溴麝香草酚蓝溶液40mLpH6.8制法:先将盐类溶解于水内,校正pH,再加琼脂,加热溶化.然后加入指示剂,混合均匀后分装试管,121℃高压灭菌15min.放成斜面.试验方法:挑取少量琼脂培养物接种,于36±１℃培养4d,每天观察结果.阳性者斜面上有菌落生长,培养基从绿色转为蓝色.04缓冲葡萄糖蛋白胨水(MR和VP试验用)成分:磷酸氢二钾5g多胨7g葡萄糖5g蒸馏水1000mLpH7.0制法:溶化后校正pH,分装试管,每管1mL,121℃高压灭菌15min.甲基红(MR)试验:自琼脂斜面挑取少量培养物接种本培养基中,于36±１℃培养2～5d,哈夫尼亚菌则应在22～25℃培养.滴加甲基红试剂一滴,立即观察结果.鲜红色为阳性,黄色为阴性.甲基红试剂配法:10mg甲基红溶于30mL95%乙醇中,然后加入20mL蒸馏水.V-P试验:用琼脂培养物接种本培养基中,于36±１℃培养2～4d.哈夫尼亚菌则应在22～25℃培养.加入6%α－萘酚-乙醇溶液0.5mL和40%氢氧化钾溶液0.2mL,充分振摇试管,观察结果.阳性反应立刻或于数分钟内出现红色,如为阴性,应放在36±１℃下培养4h再进行观察.05克氏柠檬酸盐培养基成分:柠檬酸钠3g葡萄糖0.2g酵母浸膏0.5g单盐酸半胱氨酸0.1g磷酸二氢钾1g氯化钠5g0.2%酚红溶液6mL琼脂15g蒸馏水1000mL制法:加热溶解,分装试管,121℃高压灭菌15min.放成斜面.试验方法:用琼脂培养物接种整个斜面,在36±１℃培养7d,每天观察结果.阳性者培养基变为红色.06丙二酸钠培养基成分:酵母浸膏1g硫酸铵2g磷酸氢二钾0.6g磷酸二氢钾0.4g氯化钠2g丙二酸钠3g0.2%溴麝香草酚蓝溶液12mL蒸馏水1000mL pH6.8制法:先将酵母浸膏和盐类溶解于水,校正pH后再加入指示剂,分装试管,121℃高压灭菌15min.试验方法:用新鲜的琼脂培养物接种,于36±１℃培养48h,观察结果.阳性者由绿色变为蓝色.07葡葡糖铵培养基成分:氯化钠5g硫酸镁(MgSO4·7H2O)0.2g磷酸二氢铵1g磷酸氢二钾1g葡萄糖2g琼脂20g蒸馏水1000mL0.2%溴麝香草酚蓝溶液40mLpH6.8制法:先将盐类和糖溶解于水内,校正pH,再加琼脂,加热溶化,然后加入指示剂,混合均匀后分装试管,121℃高压灭菌15min,放成斜面.试验方法:用接种针轻轻触及培养物的表面,在盐水管内做成极稀的悬液,肉眼观察不见混浊,以每一接种环内含菌数在20～100之间为宜.将接种环灭菌后挑取菌液接种,同时再以同法接种普通斜面一支作为对照.于36±１℃培养24h.阳性者葡萄糖铵斜面上有正常大小的菌落生长;阴性者不生长,但在对照培养基上生长良好.如在葡萄糖铵斜面生长极微小的菌落可视为阴性结果.注:容器使用前应用清洁液浸泡.再用清水,蒸馏水冲洗干净,并用新棉花做成棉塞,干热灭菌后使用.如果操作时不注意,有杂质污染时,易造成假阳性的结果.08Hugh-Leifson培养基(O/F试验用)成分:蛋白胨2g氯化钠5g磷酸氢二钾0.3g琼脂4g葡萄糖10g0.2%溴麝香草酚蓝溶液12mL蒸馏水1000mLpH7.2制法:将蛋白胨和盐类加水溶解后,校正pH至7.2.加入葡萄糖,琼脂煮沸,溶化琼脂,然后加入指示剂.混匀后,分装试管,121℃高压灭菌15min,直立凝固备用.试验方法:从斜面上挑取小量培养物作穿刺接种,同时接种两支培养基,其中一支于接种后滴加溶化的1%琼脂液于表面,高度约1cm,于36±１℃培养.09马尿酸钠培养基成分:马尿酸钠1g肉浸液100mL制法:将马尿酸钠溶解于肉浸液内,分装于小试管内,并于管壁画一横线.以标志管内液面高度,高压灭菌121℃20min.试剂:三氯化铁(FeCl3·6H2O)12g,溶于2%盐酸溶液100mL中即成.试验方法:用纯培养物接种,于42℃培养48h,观察培养液是否到达试管壁上记号处,如不足时,用蒸馏水补足至原量.经离心沉淀,吸取上清液0.8mL,加入三氯化铁试剂0.2mL,立即混合均匀,经10～15min,观察结果.结果:出现恒久之沉淀物为阳性.10营养明胶成分:蛋白胨5g牛肉膏3g明胶120g蒸馏水1000mLpH6.8～7.0制法:加热溶解,校正至pH7.4～7.6,分装小管,121℃高压灭菌10min,取出后迅速冷却,使其凝固.复查最终pH 应为6.8～7.0.试验方法:用琼脂培养物穿刺接种,放在22～25℃培养,每天观察结果,记录液化时间.或放在36士1℃培养,每天取出,放冰箱内30min后再观察结果.11苯丙氨酸培养基成分:酵母浸膏3gDI-苯丙氨酸(或L-苯丙氨酸1g)2g磷酸氢二钠1g氯化钠5g琼脂12g蒸馏水1000mL制法:加热溶解后分装试管,121℃高压灭菌15min,使成斜面.试验方法:自琼脂斜面上挑取大量培养物,移种于苯丙氨酸琼脂,在36±１℃培养4h或18～24h.滴加10%三氯化铁溶液2～3滴,自斜面培养物上流下,苯丙氨酸脱氨酶阳性者呈深绿色.12氨基酸脱羧酶试验培养基成分:蛋白胨5g酵母浸膏3g葡萄糖1g蒸馏水1000mL1.6%滇甲酚紫-乙醇溶液1mLL-氨基酸或DL-氨基酸0.5或1g/100mLpH6.8制法:除氨基酸以外的成分加热溶解后,分装每瓶100mL,分别加入各种氨基酸:赖氨酸,精氨酸和鸟氨酸.L-氨基酸按0.5%加入,DL-氨基酸按1%加入.再行校正pH至6.8.对照培养基不加氨基酸.分装于灭菌的小试管内,每管0.5mL,上面滴加一层液体石蜡,115℃高压灭菌10min.试验方法:从琼脂斜面上挑取培养物接种,于36±１℃培养18～24h,观察结果.氨基酸脱羧酶阳性者由于产碱,培养基应呈紫色.阴性者无碱性产物,但因葡萄糖产酸而使培养基变为黄色.对照管应为黄色.13蛋白胨水(靛基质试验用)成分:蛋白胨(或胰蛋白胨)20g氯化钠5g蒸馏水1000mLpH7.4制法:按上述成分配制,分装小试管,121℃高压灭菌15min.靛基质试剂柯凡克试剂:将5g对二甲氨基苯甲醛溶解于75mL戊醇中.然后缓慢加入浓盐酸25mL.欧-波试剂:将1g对二甲氨基苯甲醛溶解于95mL95%乙醇内.然后缓慢加入浓盐酸20mL.试验方法:挑取小量培养物接种,在36±１℃培养1～2d,必要时可培养4～5d.加入柯凡克试剂约0.5mL,轻摇试管,阳性者于试剂层呈深红色;或加入欧-波试剂约0.5mL,沿管壁流下,覆盖于培养液表面,阳性者于液面接触处呈玫瑰红色.注:蛋白胨中应含有丰富的色氨酸.每批蛋白胨买来后,应先用已知菌种鉴定后方可使用.14硫酸亚铁琼脂(硫化氢试验用)成分:牛肉膏3g酵母浸膏3g蛋白胨10g硫酸亚铁0.2g硫代硫酸钠0.3g氯化钠5g琼脂12g蒸馏水1000mLpH7.4制法:加热溶解,校正pH,分装试管,115℃高压灭菌15min,取出直立候其凝固.试验方法:挑取琼脂培养物,沿管壁穿刺,于36±１℃培养1～2d,观察结果.产硫化氢者使培养基变为黑色.注:肠杆菌科细菌测定硫化氢的产生,应采用三糖铁琼脂或本培养基.15尿素琼脂成分:蛋白胨1g氯化钠5g葡萄糖1g磷酸二氢钾2g0.4%酚红溶液3mL琼脂20g蒸馏水1000mL20%尿素溶液100mLpH7.2±0.1制法:将除尿素和琼脂以外的成分配好,并校正pH,加入琼脂,加热溶化并分装烧瓶.121℃高压灭菌15min.冷至50～55℃,加入经除菌过滤的尿素溶液.尿素的最终浓度为2%,最终pH应为7.2±0.1.分装于灭菌试管内,放成斜面备用.试验方法:挑取琼脂培养物接种,在36±１℃培养24h,观察结果.尿素酶阳性者由于产碱而使培养基变为红色. 16氰化钾(KCN)培养基成分:蛋白胨10g氯化钠5g磷酸二氢钾0.225g磷酸氢二钠 5.64g蒸馏水1000mL0.5%氰化钾溶液20mLpH7.6制法:将除氰化钾以外的成分配好后分装烧瓶,121℃高压灭菌15min.放在冰箱内使其充分冷却.每100mL培养基加入0.5%氰化钾溶液 2.0mL(最后浓度为1:10000),分装于12mm×100mm灭菌试管,每管约4mL,立刻用灭菌橡皮塞塞紧,放在4℃冰箱内,至少可保存两个月.同时,将不加氰化钾的培养基作为对照培养基,分装试管备用.17氧化酶试验试剂:1%盐酸二甲基对苯二胺溶液:少量新鲜配制,干冰箱内避光保存.1%α－萘酚-乙醇溶液.试验方法:取白色洁净滤纸沾取菌落.加盐酸二甲基对苯二胺溶液一滴,阳性者呈现粉红色,并逐渐加深;再加α-萘酚溶液一滴,阳性者于半分钟内呈现鲜蓝色.阴性于两分钟内不变色.以毛细吸管吸取试剂,直接滴加于菌落上,其显色反应与以上相同.18硝酸盐培养基成分:硝酸钾0.2g蛋白5g蒸馏水1000mLpH7.4制法:溶解,校正pH,分装试管,每管约5mL,121℃高压灭菌15min.硝酸盐还原试剂:甲液:将对氨基苯磺酸0.8g溶解于 2.5mol/L乙酸溶液100mL中.乙液:将甲萘胺0.5g溶解于 2.5mol/L乙酸溶液100mL中.试验方法:接种后在36±１℃培养1～4d,加入甲液和乙液各一滴,观察结果.硝酸盐还原为亚硝酸盐时于立刻或数分钟内显红色.注:本试验阴性的原因有三:细菌不能还原硝酸盐;亚硝酸盐继续分解,生成氨和氮;培养基不适于细菌的生长.如欲检查培养基中硝酸盐是否未被分解,可再加入锌粉少许,可使硝酸盐还原为亚硝酸盐而呈现红色.19细胞色素氧化酶试验试剂:1%盐酸二甲基对苯二胺溶液.1%α－萘酚-乙醇溶液.试验方法:取37℃(或低于37℃)培养20h的斜面培养物一支,将两种试剂各2～3滴,从斜面上端滴下,并将斜面略加倾斜,使试剂混合液流经斜面上的培养物.如系平板培养物,则可用试剂混合液滴在菌落上.结果:于2min内呈现蓝色者为阳性.阳性培养物大多数于半分钟内出现强阳性反应,2min以后出现微弱或可疑反应均作为阴性结果.20过氧化氢酶试验试剂:3%过氧化氢溶液:临用时配制.试验方法:挑取固体培养基上菌落一接种环,置于洁净试管内,滴加3%过氧化氢溶液2mL,观察结果.结果:于半分钟内发生气泡者为阳性,不发生气泡者为阴性.21过氧化物酶试验试剂:2%儿茶酚溶液.3%过氧化氢溶液.试验方法:挑取固体培养基上菌落一接种环,置于洁净试管内,滴加2%儿茶酚溶液1mL及3%过氧化氢溶液1 mL.静置于室温(20℃)中30～60min,观察结果.结果:阳性反应,细菌变为黑褐色;阴性反应,细菌不变色.注:过氧化物酶的作用可受氰化钾的抑制.22磷酸盐缓冲液储存液磷酸二氢钾34g1mol/L氢氧化钠溶液175mL蒸馏水825mLpH7.2制法:先将磷酸盐溶解于500mL蒸馏水中,用1mol/L氢氧化钠溶液校正pH后,再用蒸馏水稀释至1000mL.稀释液:取储存液 1.25mL,用蒸馏水稀释至1000mL.分装每瓶100mL或每管10mL,121℃高压灭菌15min.23明胶磷酸盐缓冲液成分:明胶2g磷酸氢二钠4g蒸馏水1000mLpH6.2制法:加热溶解,校正pH,121℃高压灭菌15min.24乳酸-苯酚溶液成分:苯酚10g乳酸(比重1.21)10g甘油20g蒸馏水10mL制法:将苯酚在水中加热溶解,然后加入乳酸及甘油.用途:检验真菌形态时用.25肉浸液肉汤成分:绞碎牛肉500g氯化钠5g蛋白胨10g磷酸氢二钾2g蒸馏水1000mL制法:将绞碎之去筋膜无油脂牛肉500g加蒸馏水1000mL,混合后放冰箱过夜,除去液面之浮油,隔水煮沸半小时,使肉渣完全凝结成块,用绒布过滤,并挤压收集全部滤液,加水补足原量.加入蛋白胨,氯化钠和磷酸盐,溶解后校正pH7.4～7.6煮沸并过滤,分装烧瓶,121℃高压灭菌30min.26肉浸液琼脂成分:肉浸液肉汤(PH7.4)1000mL琼脂17～20g制法:加热溶化琼脂,分装烧瓶或试管,121℃高压灭菌30min.根据需要,倾注平板或放成斜面.27牛肉(或牛心)消化汤成分:绞碎牛肉(或牛心)1000g15%氢氧化钠溶液27mL胰蛋白酶40mL三氯甲烷1mL氯化钠10g蒸馏水2000mL制法:1称取碎牛肉,加蒸馏水,隔水加热到80℃,维持15min.2加氢氧化钠溶液,对pH试纸呈弱碱性,冷至40℃.3加胰蛋白酶,氯仿,在36±１℃放置4～5h,每小时摇动一二次.44h后,吸取上层液5mL于试管中,加5%硫酸铜溶液0.1mL,4%氢氧化钠溶液5mL,混合之.若呈红色,则不须再消化,可由温箱取出.5加入15%乙酸溶液45mL,对pH试纸呈酸性.6煮沸15min,使胰蛋白酶破坏,冷后,放冰箱内一夜.7次日吸取上层清液,加氯化钠10g,并加水补足原量,煮沸.8校正pH7.4～7.6(加15%氢氧化钠溶液约10mL),加热,用滤纸过滤,分装烧瓶,121℃高压灭菌20min.注:①此培养基可作为琼脂培养基的基础,不需加蛋白胨.②胰蛋白酶之配制:称取去脂绞碎的猪胰500g,加入乙醇500mL,蒸馏水1500mL,混合之,装人玻塞瓶内.每日摇匀三次.3d后,用绒布过滤挤出其汁,加盐酸至0.05%,放冰箱内保存备用.28血消化汤成分:绞碎猪胃100g绞碎猪血块100g蒸馏水1000mL浓盐酸10mL制法:1洗涤猪胃,除去油脂,保留胃粘膜,用绞肉机绞碎.2用绞肉机将猪血块绞碎.3将蒸馏水加热至55℃,加入猪胃,猪血块和盐酸,置55℃水浴中24h,时常加以摇动.4从水浴内取出,加入1moL/L碳酸钠溶液5mL,煮沸10min,置于冰箱内一夜.5吸取上层清液,加磷酸氢二钾1g,加热至75℃,加入1mol/L碳酸钠溶液45mL,煮沸,校正pH7.2～7.4.6用滤纸过滤,分装烧瓶,121℃高压灭菌20min.29豆粉琼脂成分:牛心消化汤(PH7.4～7.6)1000mL琼脂20g黄豆粉浸液50mL制法:将琼脂加在牛心消化汤内,加热溶解,过滤.加入豌豆粉浸液,分装每瓶100mL,121℃高压灭菌15min.豌豆粉浸液制法:取豌豆粉5g,氯化钠10g,加入蒸馏水100mL.置100℃水浴内加热1h,放于冰箱中过夜.吸取上清液即为豌豆浸液.30血琼脂成分:pH7.4～7.6豆粉琼脂100mL脱纤维羊血(或兔血)5～10mL制法:加热溶化琼脂,冷至50℃,以灭菌手续加入脱纤维羊血,摇匀,倾注平板.亦可分装灭菌试管,置成斜面.亦可用其他营养丰富的基础培养基配制血琼脂.31营养琼脂成分:蛋白胨10g牛肉膏3g氯化钠5g琼脂15～20g蒸馏水1000mL制法:将除琼脂以外的各成分溶解于蒸馏水内,加入15%氢氧化钠溶液约2mL,校正pH至7.2～7.4.加入琼脂,加热煮沸,使琼脂溶化.分装烧瓶,121℃高压灭菌15min.注:此培养基可供一般细菌培养之用,可倾注平板或制成斜面.如用于菌落计数,琼脂量为 1.5%;如作成平板或斜面,则应为2%.32营养肉汤成分:蛋白陈10g牛肉膏3g氯化钠5g蒸馏水1000mLpH7.4制法:按上述成分混合,溶解后校正pH,分装烧瓶,每瓶225mL,121℃高压灭菌15min.33乳糖胆盐发酵管成分:蛋白胨20g猪胆盐(或牛,羊胆盐)5g乳糖10g0.04%滇甲酚紫水溶液25mL蒸馏水1000mLpH7.4制法:将蛋白胨,胆盐及乳糖溶于水中,校正pH,加入指示剂,分装每管10mL,并放入一个小倒管,115℃高压灭菌15min.注:双料乳糖胆盐发酵管除蒸馏水外,其他成分加倍.34乳糖发酵管成分:蛋白胨20g乳糖10g0.04%溴甲酚紫水溶液25mL蒸馏水1000mLpH7.4制法:将蛋白胨及乳糖溶于水中,校正pH,加入指示剂,按检验要求分装30mL,10mL或3mL,并放入一个小倒管, 115℃高压灭菌15min.注:①双料乳糖发酵管除蒸馏水外,其他成分加倍.②30mL和10mL乳糖发酵管专供酱油及酱类检验用,3mL乳糖发酵管供大肠菌群证实试验用.35EC肉汤成分:胰蛋白胨20g3号胆盐(或混合胆盐) 1.5g乳糖5g磷酸氢二钾4g磷酸二氢钾 1.5g氯化钠5g蒸馏水1000mL制法:将上述成分混合,溶解后,分装有发酵倒管的试管中,121℃高压灭菌15min,最终pH为6.9±0.2.36缓冲蛋白胨水(BP)成分:蛋白胨10g氯化钠5g磷酸氢二钠(Na2HPO4·12H2O)9g磷酸二氢钾 1.5g蒸馏水1000mLpH7.2制法:按上述成分配好后以大烧瓶装,121℃高压灭菌15min.临用时无菌分装每瓶225mL.注:本培养基供沙门氏菌前增菌用.37氯化镁孔雀绿增菌液(MM)甲液胰蛋白胨5g氯化钠8g磷酸二氢钾 1.6g蒸馏水1000mL乙液氯化镁(化学纯)40g蒸馏水100mL4.13.3丙液0.4%孔雀绿水溶液.制法:分别按上述成分配好后,121℃高压灭菌15min备用.临用时取甲液90mL,乙液9mL,丙液0.9mL,以无菌操作混合即可.注:本培养基亦称Rappaport10(R10)增菌液.38四硫磺酸钠煌绿增菌液(TTB)基础培养基多胨或眎胨5g胆盐1g碳酸钙10g硫代硫酸钠30g蒸馏水1000mL碘溶液碘6g碘化钾5g蒸馏水20mL制法:将基础培养基的各成分加入蒸馏水中,加热溶解,分装每瓶100mL.分装时应随时振摇,使其中的碳酸钙混匀.121℃高压灭菌15min备用.临用时每100mL基础培养基中加入碘溶液2mL,0.1%煌绿溶液1mL.39四硫磺酸钠煌绿增菌液(换用方法)基础液:蛋白胨10g牛肉膏5g氯化钠3g碳酸钙45g蒸馏水1000mL将各成分加入于蒸馏水中,加热至约70℃溶解,校正pH至7.0±0.1,121℃高压灭菌20min.硫代硫酸钠溶液硫代硫酸钠(Na2S2O3·5H2O)50g蒸馏水加至100mL碘溶液碘片20g碘化钾25g蒸馏水加至100mL将碘化钾充分溶解于是少量的蒸馏水中,加入碘片,振摇玻瓶至碘片全部溶解,再加入蒸馏水至规定量.贮于棕色玻瓶内,紧塞瓶盖备用.煌绿水溶液煌绿0.5g蒸馏水100mL存放暗处,不少于1d,使其自然灭菌.牛胆盐溶液干燥的牛胆盐10g蒸馏水100mL煮沸溶解,121℃高压灭菌20min.制备:基础液900mL硫代硫酸钠溶液100mL碘液20mL煌绿溶液2mL牛胆盐溶液50mL临用前,按上列顺序,以无菌操作依次加入于基础液中,每加入一种成分,均应摇匀后再加入另一种成分.分装于灭菌瓶中,每瓶100mL.40亚硒酸盐胱氨酸增菌液(SC)成分:蛋白胨5g乳糖4g亚硒酸氢钠4g磷酸氢二钠 5.5g磷酸二氢钾 4.58L-胱氨酸0.01g蒸馏水1000mL1%L-胱氨酸-氢氧化钠溶液的配法:称取L-胱氨酸0.1g(或DL-胱氨酸0.2g),加1mol/L氢氧化钠 1.5mL,使溶解,再加入蒸馏水8.5mL即成.制法:将除亚硒酸氢钠和L-胱氨酸以外的各成分溶解于900mL蒸馏水中,加热煮沸,俟冷备用.另将亚硒酸氢钠溶解于100mL蒸馏水中,加热煮沸,候冷,以无菌操作与上液混合.再加入1%L-胱氨酸-氢氧化钠溶液1mL.分装于灭菌瓶中,每瓶100mL,pH应为7.0±0.1.41GN增菌液成分:胰蛋白胨20g葡萄糖1g甘露醇2g柠檬酸钠5g去氧胆酸钠0.5g磷酸氢二钾4g磷酸二氢钾 1.5g氯化钠5g蒸馏水1000mLpH7.0制法:按上述成分配好,加热使溶解,校正pH.分装每瓶225mL,115℃高压灭菌15min.42肠道菌增菌肉汤成分:葡萄糖5g牛胆盐20g磷酸氢二钠8g磷酸二氢钾2g煌绿0.015g蒸馏水1000mLpH7.2制法:按上述成分配好,加热使溶解,校正pH.分装每瓶30mL,115℃高压灭菌15min.43亚硫酸铋琼脂(BS)成分:蛋白胨10g牛肉膏5g葡萄糖5g硫酸亚铁0.3g磷酸氢二钠4g煌绿0.025g柠檬酸铋铵2g亚硫酸钠6g琼脂18～20g蒸馏水1000mLpH7.5制法:1将前面5种成分溶解于300mL蒸馏水中.2将柠檬酸铋铵和亚硫酸钠另用50mL蒸馏水溶解.3将琼脂于600mL蒸馏水中煮沸溶解,冷至80℃4将以上三液合并,补充蒸馏水至1000mL,校正pH,加0.5%煌绿水溶液5mL,摇匀.冷至50～55℃,倾注平皿.注:此培养基不需高压灭菌.制备过程不宜过分加热.以免降低其选择性.应在临用前一天制备,贮存于室温暗处.超过48h不宜使用.44DHL琼脂成分:蛋白胨20g牛肉膏3g乳糖10g蔗糖10g去氧胆酸钠1g硫代硫酸钠 2.3g柠檬酸钠1g柠檬酸铁铵1g中性红0.03g蒸馏水1000mLpH7.3制法:将除中性红和琼脂以外的成分溶解于400mL蒸馏水中,校正pH.再将琼脂于600mL蒸馏水中煮沸溶解,两液合并,并加入0.5%中性红水溶液6mL,待冷至50～55℃,倾注平板.45HE琼脂成分:脙胨12g牛肉膏3g乳糖12g蔗糖12g水杨素2g胆盐20g氯化钠5g琼脂18～20g蒸馏水1000mL0.4%溴麝香草酚蓝溶液16mLAndrade指示剂20mL甲液20mL乙液20mLpH7.5制法:将前面七种成分溶解于400mL蒸馏水内作为基础液;将琼脂加入于600mL蒸馏水内,加热溶解.加入甲液和乙液于基础液内,校正pH.再加入指示剂,并与琼脂液合并,待冷至50～55℃,倾注平板.注:①此培养基不可高压灭菌.②甲液的配制硫代硫酸钠34g柠檬酸铁铵4g蒸馏水100mL②乙液的配制去氧胆酸钠10g蒸馏水100mL②Andrade指示剂酸性复红0.5g1mol/L氢氧化钠溶液16mL蒸馏水100mL将复红溶解于蒸馏水中,加入氢氧化钠溶液.数小时后如复红褪色不全,再加氢氧化钠溶液1～2mL.46SS琼脂基础培养基:牛肉膏5g眎胨5g三号胆盐 3.5g琼脂17g蒸馏水1000mL再将两液混合,121℃高压灭菌15min,保存备用.完全培养基:基础培养基100mL乳糖10g柠檬酸钠8.5g硫代硫酸钠8.5g10%柠檬酸铁溶液10mL1%中性红溶液 2.5mL0.1%煌绿溶液0.33mL加热溶化基础培养基,按比例加入上述染料以外之各成分,充分混合均匀,校正至pH7.0,加入中性红和煌绿溶液,倾注平板.注:①制好的培养基宜当日使用,或保存于冰箱内于48h内使用.②煌绿溶液配好后应在10d以内使用.③可以购用SS琼脂的干燥培养基.47WS琼脂成分:②胨12g牛肉膏3g氯化钠5g乳糖12g蔗糖12g十二烷基硫酸钠2g琼脂15gAndrade指示剂20mL0.4%溴麝香草酚蓝溶液16mL甲液20mL蒸馏水1000mLpH7.0制法:除指示剂和甲液外,将其他成分加热溶解,不需消毒,校正pH后加入指示剂和甲液,倾注平板应呈草绿色.注:①供沙门氏菌分离用.②Andrade指示剂和甲液的配制均见HE琼脂.48麦康凯琼脂成分:蛋白胨17g眎胨3g猪胆盐(或牛,羊胆盐)5g氯化钠5g琼脂17g蒸馏水1000mL乳糖10g0.01%结晶紫水溶液10mL0.5%中性红水溶液5mL制法:1将蛋白胨,眎,胆盐和氯化钠溶解于400mL蒸馏水中,校正pH7.2.将琼脂加入600mL加热溶解.将两液合并,分装于烧瓶内,121℃高压灭菌15min备用.2临用时加热溶化琼脂,趁热加入乳糖,冷至50～55℃时,加入结晶紫和中性红水溶液,摇匀后倾注平板.注:结晶紫及中性红水溶液配好后须经高压灭菌.49伊红美蓝琼脂(EMB)成分:蛋白胨10g乳糖10g磷酸氢二钾2g琼脂17g2%伊红Y溶液20mL0.65%美蓝溶液10mL蒸馏水1000mLpH7.1制法:将蛋白胨,磷酸盐和琼脂溶解于蒸馏水中,校正pH,分装于烧瓶内,121℃高压灭菌15min备用.临用时加入乳糖并加热溶化琼脂,冷至50～55℃,加入伊红和美蓝溶液,摇匀,倾注平板.50三糖铁琼脂(TSI)成分:蛋白胨20g牛肉膏5g乳糖10g蔗糖10g葡萄糖1g氯化钠5g硫酸亚铁铵〔Fe(NH4)2(SO4)2·6H2O〕0.2g硫代硫酸钠0.2g琼脂12g酚红0.025g蒸馏水1000mLpH7.4制法:将除琼脂和酚红以外的各成分溶解于蒸馏水中,校正pH.加入琼脂,加热煮沸,以溶化琼脂.加入0.2%酚红水溶液12.5mL,摇匀.分装试管,装量宜多些,以便得到较高的底层.121℃高压灭菌15min.放置高层斜面备用.51三糖铁琼脂(换用方法)成分:蛋白胨15g眎胨5g牛肉膏3g酵母膏3g乳糖10g蔗糖10g葡萄糖1g氯化钠5g硫酸亚铁0.2g硫代硫酸钠0.3g琼脂12g酚红0.025g蒸馏水1000mLpH7.4制法:将除琼脂和酚红以外的各成分溶解于蒸馏水中,校正pH.加入琼脂,加热煮沸,以溶化琼脂.加入0.2%酚红水溶液12.5mL,摇匀.分装试管,装量宜多些,以便得到较高的底层.121℃高压灭菌15min,放置高层斜面备用.52克氏双糖铁琼脂(KI)上层培养基成分血消化汤(pH7.6)500mL琼脂 6.5g硫代硫酸钠0.1g硫酸亚铁铵0.1g乳糖5g0.2%酚红溶液5mL下层培养基成分血消化汤(pH7.6)500mL琼脂2g葡萄糖1g0.2%酚红溶液5mL制法:1取血消化汤按上层和下层的琼脂用量,分别加入琼脂,加热溶解.2分别加入其他各种成分.将上层培养基分装于烧瓶内;将下层培养基分装于灭菌12mm×100mm试管内,每管约2mL.115℃高压灭菌10min.3将上层培养基放在56℃水浴箱内保温;将下层培养基直立放在室温内,使其凝固.4当下层培养基凝固后,以无菌手续将上层培养基分装于下层培养基的上面,每管约 1.5mL,放成斜面.53克氏双糖铁琼脂(换用方法)成分:蛋白胨20g牛肉膏3g酵母膏3g乳糖10g。

广东环凯微生物科技有限公司网址： 地址：广州市黄埔区科学城神舟路788号邮编：510663传真：860288778876产品说明书Product Manual【产品名称】通用名称：军团菌培养基基础英文名称：Legionella Medium Base【产品编号与包装规格】产品编号产品类型包装规格026071干粉250g/瓶【产品用途】用于嗜肺军团菌的分离培养。

【检验原理】酵母浸膏提供军团菌生长必需的营养物质；活性炭分解过氧化氢，收集二氧化碳，改善表面张力；琼脂是培养基的凝固剂。

【使用方法】1、配制BCYE 琼脂：称取本品干粉2.5g，加入蒸馏水或去离子水90mL，搅拌加热煮沸至完全溶解，于121℃灭菌15min。

待培养基冷却至50℃左右时，加入2支BCYE 生长添加剂（SR0600），混匀，制成平板培养，待用。

2、配制BCYE-Cys 琼脂：称取本品干粉2.5g，加入蒸馏水或去离子水90mL，搅拌加热煮沸至完全溶解，于121℃灭菌15min。

待培养基冷却至50℃左右时，加入2支BCYE-Cys 生长添加剂（SR0610），混匀，制成平板培养，待用。

3、配制GVPC 琼脂：称取本品干粉2.5g，加入蒸馏水或去离子水85mL，搅拌加热煮沸至完全溶解，于121℃灭菌15min。

待培养基冷却至50℃左右时，加入2支GVPC 生长添加剂（SR0560A）和1支GVPC 选择性添加剂（SR0560B），混匀，制成平板培养，待用。

【质量控制】下列质控菌株接种后于35～37℃培养18～24h ，观察结果如下表：、BCYE 琼脂生物学指标下列菌株接种BCYE 琼脂后于36±1℃培养3-10天生长情况如下表：BCYE-Cys 琼脂生物学指标下列菌株接种BCYE-Cys 琼脂后于36±1℃培养3—10天生长情况如下表：GVPC 琼脂生物学指标下列菌株接种GVPC 琼脂后于36±1℃培养3—10天生长情况如下表：广东环凯微生物科技有限公司网址： 地址：广州市黄埔区科学城神舟路788号邮编：510663传真：************-8619************8602************88778876干粉培养基：贮存于避光、干燥处，用后立即旋紧瓶盖；贮存期三年。

培养基的制备、贮存及质量控制方法！培养基是微生物试验的基础，直接影响微生物试验结果。

适宜的培养基制备方法、贮藏条件和质量控制试验是提供优质培养基的保证。

培养基的配制培养基可按处方配制，也可使用按处方生产的符合规定的脱水培养基。

在制备培养基时，应选择质量符合要求的脱水培养基或单独配方组分进行配制。

脱水培养基应附有处方和使用说明，配制时应按使用说明上的要求操作以确保培养基的质量符合要求，不得使用结块或颜色发生改变的脱水培养基。

脱水培养基或单独配方组分应在适当的条件下储存，如低温、干燥和避光，所有的容器应密封，尤其是盛放脱水培养基的容器。

商品化的成品培养基除了应附有处方和使用说明外，还应注明有效期、贮存条件、适用性检查试验的质控菌和用途。

为保证培养基质量的稳定可靠，各脱水培养基或各配方组分应准确称量，并要求有一定的精确度。

配制培养基最常用的溶剂是纯化水，特殊情况下，可能需要用去离子水和蒸馏水。

应记录各称量物的重量和水的使用量。

配制培养基所用容器和配套器具应洁净，可用纯化水冲洗玻璃器皿以消除清洁剂和外来物质的残留。

对热敏感的培养基如糖发酵培养基其分装容器一般应预先进行灭菌，以保证培养基的无菌性。

脱水型培养基应完全溶解于水中，再行分装与灭菌。

配制时若需要加热助溶，应注意不要过度加热，以避免培养基颜色变深。

如需要添加其它组分时，加入后应充分混匀。

应按照生产商提供或使用者验证的参数进行培养基的灭菌。

商品化的成品培养基必须附有所用灭菌方法的资料。

培养基灭菌一般采用湿热灭菌技术，特殊培养基可采用薄膜过滤除菌。

培养基若采用不适当的加热和灭菌条件，有可能引起颜色变化、透明度降低、琼脂凝固力或 pH 的改变。

因此，培养基应采用验证的灭菌程序灭菌，培养基灭菌方法和条件，应通过无菌性试验和促生长试验进行验证。

此外，对高压灭菌器的蒸汽循环系统也要加以验证，以保证在一定装载方式下的正常热分布。

温度缓慢上升的高压灭菌器可能导致培养基的过热，过度灭菌可能会破坏绝大多数的细菌和真菌培养基促生长的质量。