最新1抗体标记

抗体标记流式分选
抗体标记流式分选是一种高效、精确的细胞分选技术，广泛应用于生物医学研究、药物研发和临床诊断等领域。

该技术利用特异性抗体与细胞表面分子的结合，将目标细胞从混合细胞群中分离出来，实现单细胞级别的分选和分析。

抗体标记流式分选的基本原理是将细胞样品与特异性抗体标记结合，形成抗原-抗体复合物。

这些复合物在流式细胞仪中通过激光束的照射，产生荧光信号，从而实现对细胞的快速、准确的检测和分选。

该技术具有高通量、高灵敏度、高分辨率等优点，能够同时检测多种细胞表面标记物，实现多参数分析和分选。

抗体标记流式分选在生物医学研究中的应用非常广泛。

例如，在肿瘤学研究中，该技术可以用于分离肿瘤细胞和正常细胞，研究肿瘤细胞的生物学特性和治疗靶点；在免疫学研究中，该技术可以用于分析免疫细胞的表型和功能，研究免疫应答机制和免疫调节；在药物研发中，该技术可以用于筛选药物靶点和评估药效；在临床诊断中，该技术可以用于检测血液、尿液等样品中的肿瘤细胞、病原微生物等。

抗体标记流式分选是一种重要的细胞分选技术，具有广泛的应用前景。

随着技术的不断发展和完善，相信该技术将在生物医学研究和临床诊断中发挥越来越重要的作用。

一抗得选择检测任何目得靶蛋白都有不止一种抗体可供选择,为缩小抗体得选择范围选中合适得抗体，需要考虑如下几种因素:分析试验应用得类型ｌ样本蛋白得结构性质l样本得种属ｌ抗体宿主得种类l抗体得标记与检测ｌ1、分析试验应用得类型一般抗体说明书都列出该抗体经试验验证过适用于何种分析类型,如:可以应用于ＷＢＩＨＣIＣC ELASA分析等，如果抗体说明书没有提及得应用类型,并不意味着该抗体不适用于此种分析应用类型,而仅就是说明尚未经过此种分析试验验证，如果抗体不适用某些分析试验,则会在抗体说明书上标注出来不适于某分析试验。

２、样本蛋白得结构性质了解样本蛋白得结构性质有助于选择最合适得抗体，至少两方面因素需要考虑待测样本蛋白得结构域：抗体就是由各种不同免疫原免疫宿主而制备得来,其中得免疫原包括：全长蛋白、蛋白片断、多肽、全有机体(如:细菌)或细胞,抗体说明书一般都有免疫原得描述,如果打算检测得就是蛋白片断或一种特殊得同型物或蛋白全长得某一区域,则必须选择用含此片段域得免疫原制备出得抗体.如果打算用FACＳ流式检测活细胞得表面蛋白，则需要选择含该表面蛋白得胞外域来免疫制备得抗体。

l样本得提取或处理过程：某些抗体要求样本经过某些特殊处理，例如:许多抗体只识别还原与变性得、表位已暴露不受二级四级结构阻碍得蛋白样本,另一方面,某些抗体仅识别天然折叠状态得蛋白。

当选择免疫组化得抗体时，应注意某些抗体只识别未固定得冷冻得组织，而另一些抗体则适用于无需抗原修复解交联步聚得甲醛固定石蜡包埋得组织，这些都会在抗体说明书上应用部分标示出来ｌ3、样本得物种应选择物种相同或有交叉反应得抗体，抗体可能与不同物种得同种靶蛋白有交叉反应,因其氨基酸序列同源性较高，如果样本得种类未列入抗体说明书上得交叉反应种属表中，并不意味着该抗体不适用于检测该物种得蛋白,而只就是表示该物种尚未用此抗体检测验证过，应通过序列比对得方法来预测交叉反应，可应用Ｅxpasy 与ＮCＢI BＬＡＳT来进行不同物种蛋白同源性比对。

免疫组化常用标记物一、常用标志物1、ＣD15(LeuM1)---(阳性部位:细胞膜)。

就是一种由半乳糖、岩藻糖与N－乙酰葡萄糖组成得碳水化合物抗原,又称半抗原χ,就是粒／单核细胞相关抗原、免疫组织化学表达:成熟粒细胞、激活得淋巴细胞(主要就是T淋巴细胞)、R－S细胞、大多数腺癌等。

2、癌胚抗原(carcｉｎoeｍbrｙonic antigen,ＣEA)(CD６6e)——-(阳性部位:细胞膜／浆)、癌胚抗原就是表达于胎儿上皮细胞得一种糖蛋白,分子量为18０kＤａ。

存于某些恶性肿瘤组织尤其就是内胚层来源发肿瘤中,大多数胃肠道(包括胰腺)与肺腺癌均有表达,少量成人上皮细胞与良性肿瘤亦可表达、ＣＥA主要用于标记上皮性肿瘤,尤其就是腺上皮来源得腺癌。

3。

嗜铬素A(chｒomｏｇraｎiｎA,CgＡ)－－—(阳性部位:细胞浆)。

嗜铬素就是位于神经分泌颗粒内得酸性糖蛋白家族,就是一组可溶性酸性蛋白,分子量为７6～120 ｋDａ,分布广泛。

含量最丰富得就是嗜铬素A,另两个就是嗜铬素B与嗜铬素C。

几乎所有得神经内分泌肿瘤中均可检测到嗜铬素、嗜铬素A不仅存在于神经内分泌细胞得分泌颗粒中,也广泛分布于所有含有颗粒得内分泌细胞与神经内分泌细胞来源得肿瘤细胞、此抗体可以识别嗜铬素A 抗原羧基末端得片段,而不与氨基末端得片段反应,主要用于标记神经内分泌细胞及其来源得肿瘤、对小细胞癌进行抗原修复可提高检测得敏感性、4。

细胞角蛋白(cytokeratｉｎpan,广谱CK)－--AＥ1/AE3(阳性部位:细胞浆)。

此抗体可以识别绝大部分酸性细胞角蛋白(Ⅰ型/低分子量)与碱性细胞角蛋白(Ⅱ型/高分子量)、用于标记上皮及上皮来源得肿瘤,特别就是对鉴别与判断转移性肿瘤就是否为上皮源性具有一定得意义、５.细胞角蛋白5/6(cytokeratｉn 5／6,CK5/6)—－－(阳性部位:细胞浆)、在正常组织中,鳞状上皮与导管上皮得基底细胞以及部分得鳞状上皮生发层细胞、肌上皮细胞与间皮细胞阳性,腺上皮细胞阴性。

几种常见的抗体标记方法-酶标记、荧光素标记、同位素标记、生物素标记抗体标记主要有酶标记、荧光素标记、同位素标记、生物素标记等，还有一些其他的标记方法例如金标记，本文主要讲述了这些抗体标记的基本原理、操作步骤。

、酶标记1 、辣根过氧化物酶(HRP) 标记辣根过氧化物酶(HRP) 标记单抗和多克隆抗体的常用方法是过碘酸钠法。

其原理是HRP 的糖基用过碘酸钠氧化成醛基，加入抗体IgG后该醛基与IgG 氨基结合，形成Schiff 氏碱。

为了防止HRP中糖的醛基与其自身蛋白氨基发生偶合，在用过碘酸钠氧化前先用二硝基氟苯阻断氨基。

氧化反应末了，用硼氢化钠稳定Schiff 氏碱。

这里介绍两种程序。

程序一：(1)将5mg HRP 溶于0.5ml 0.1mol/L NaHCO3 溶液中加0.5ml 10mmol/LNaIO4 溶液，混匀，盖紧瓶塞，室温避光作用2 小时。

(2)加0.75ml 0.1mol/L Na2CO3 混匀。

(3)加入0.75ml 小鼠已处理的腹水，或纯化单抗等(15mg/ml) ，混匀。

(4)称取SephadexG25 干粉0.3g ，加入一支下口垫玻璃棉的5ml 注射器外筒内;随后将上述交联物移入注射器外套;盖紧，室温作用(避光)3小时或4C过夜。

(5)用少许PBS 将交联物全部洗出，收集洗出液，加1/20V 体积新鲜配制的5mg/mlNaBH4 溶液，混匀，室温作用30 分钟;再加入3/20V NaBH4溶液，混匀，室温作用1小时(或4C过夜)。

(6)将交联物过Sephadex g200 或Sepharose6B(2.6 X 50cm)层析纯化，分管收集第一峰。

(7)酶结合物质量鉴定：克分子比值测定酶量(mg/ml)=OD403 X 0.4IgG 量(mg/ml)=(OD280- OD403X 0.3) X 0.62克分子比值(E/P)=酶量X 4/IgG量，一般在1-2之间。

酶结合率=酶量X体积/抗体，标记率一般为0.3-0.6，即1-2个HRP 分子结合在一个抗体分子上，标记率可大于0.6，0.8，0.9;OD403/OD280 等于0.4 时，E/P 约为1 。

免疫组织化学常用抗体标记谱系第一节上皮细胞标志1.细胞角蛋白Cytokeratin(CK)CK是一种中间丝蛋白，是上皮细胞及其肿瘤较特异标志物。

CK分子量为40～60KD，根据其分子量不同分为20余种，并粗略划分为高分子CK（HCK）和低分子CK（LCK）。

2.广谱细胞角蛋白PCKPCK标记所有单层上皮、复层上皮、移行上皮细胞，各种上皮细胞来源的良恶性肿瘤、滑膜瘤和间皮瘤等少部分间叶源性肿瘤亦可阳性。

3.高分子角蛋白HCKHCK主要标记复层鳞状上皮及鳞状细胞癌，HCK（34βE12）常用于标记前列腺基底细胞，观察基底细胞存在与否有助于前列腺癌的诊断。

4.低分子细胞角蛋白LCKLCK主要存在于单层上皮及腺上皮细胞，因此，LCK主要用于内脏腺上皮肿瘤的诊断与鉴别诊断。

5.细胞角蛋白7 CK 7CK7分子量为54KD。

主要标记腺上皮和移行上皮细胞，卵巢、肺和乳腺上皮为CK7阳性，而结肠、前列腺和胃肠道上皮为CD7阴性，因此可用于卵巢癌（CD7＋）和结肠癌（CK7－）的鉴别。

6.细胞角蛋白8 CK8CDK8分子量为，主要标记非鳞状上皮，因此主要用于腺癌和导管癌的诊断，鳞癌一般不表达CK8。

有报道肝细胞癌主要表达CK8和CK18。

7.细胞角蛋白10 CK10CK10分子量为。

主要标记上皮的基底上层和颗粒细胞层，同时CK10表达与细胞的分化程度呈正比，高分化者常阳性，主要用于鳞癌的诊断。

8.细胞角蛋白13 CK13CK13分子量为53KD。

标记所有的复层上皮，包括角化和非角化上皮。

主要用于高分化鳞状细胞癌的诊断。

9.细胞角蛋白18 CK18CK18分子量为45KD，属低分子量A型细胞角蛋白。

主要标记各种单层上皮包括腺上皮，而复层鳞状上皮常为阴性。

主要用于腺癌的诊断。

10.细胞角蛋白19 CK19CK19分子量为40KD，分布于各种单层上皮包括腺上皮，主要用于腺癌的诊断。

肝细胞不表达CK19，因此可用于肝癌和转移性腺癌的鉴别。

一抗(d e)选择公司内部档案编码：[OPPTR-OPPT28-OPPTL98-OPPNN08]一抗(de)选择检测任何目(de)靶蛋白都有不止一种抗体可供选择,为缩小抗体(de)选择范围选中合适(de)抗体,需要考虑如下几种因素：分析试验应用(de)类型l样本蛋白(de)结构性质l样本(de)种属l抗体宿主(de)种类l抗体(de)标记和检测l1.分析试验应用(de)类型一般抗体说明书都列出该抗体经试验验证过适用于何种分析类型,如：可以应用于WB IHC ICC ELASA分析等,如果抗体说明书没有提及(de)应用类型,并不意味着该抗体不适用于此种分析应用类型,而仅是说明尚未经过此种分析试验验证,如果抗体不适用某些分析试验,则会在抗体说明书上标注出来不适于某分析试验.2.样本蛋白(de)结构性质了解样本蛋白(de)结构性质有助于选择最合适(de)抗体,至少两方面因素需要考虑待测样本蛋白(de)结构域：抗体是由各种不同免疫原免疫宿主而制备得来,其中(de)免疫原包括：全长蛋白、蛋白片断、多肽、全有机体（如：细菌）或细胞,抗体说明书一般都有免疫原(de)描述,如果打算检测(de)是蛋白片断或一种特殊(de)同型物或蛋白全长(de)某一区域,则必须选择用含此片段域(de)免疫原制备出(de)抗体.如果打算用FACS流式检测活细胞(de)表面蛋白,则需要选择含该表面蛋白(de)胞外域来免疫制备(de)抗体.l样本(de)提取或处理过程：某些抗体要求样本经过某些特殊处理,例如：许多抗体只识别还原和变性(de)、表位已暴露不受二级四级结构阻碍(de)蛋白样本,另一方面,某些抗体仅识别天然折叠状态(de)蛋白.当选择免疫组化(de)抗体时,应注意某些抗体只识别未固定(de)冷冻(de)组织,而另一些抗体则适用于无需抗原修复解交联步聚(de)甲醛固定石蜡包埋(de)组织,这些都会在抗体说明书上应用部分标示出来l3.样本(de)物种应选择物种相同或有交叉反应(de)抗体,抗体可能与不同物种(de)同种靶蛋白有交叉反应,因其氨基酸序列同源性较高,如果样本(de)种类未列入抗体说明书上(de)交叉反应种属表中,并不意味着该抗体不适用于检测该物种(de)蛋白,而只是表示该物种尚未用此抗体检测验证过,应通过序列比对(de)方法来预测交叉反应,可应用Expasy 和 NCBI BLAST来进行不同物种蛋白同源性比对.4.一抗宿主物种(de)选择一般说来,在使用偶联二抗结合无偶联物(de)一抗时,一抗宿主动物(de)物种选择较为重要,对于免疫组化而言,尽可能选择与样本不同种系物种(de)一抗,从而避免二抗与样本内源性免疫球蛋白产生交叉反应,例如：检测小鼠样本蛋白,则不应选择小鼠或大鼠源(de)一抗,最好选兔源(de)一抗,则二抗则可选择偶联了检测分子（酶、荧光素、生物素等）(de)抗兔IgG.如果选择有偶联物(de)一抗则不适用上述情况,除免疫组化外(de)其它对不含内源性免疫球蛋白样本(de)检测方法,则抗体宿主物种(de)影响不大,如对不含IgG(de)细胞裂解物样本(de)western blotting检测,尽管如此,含有血清(de)组织裂解物和组织培养上清中含有免疫球蛋白,还原变性样本中含IgG,在western blot检测中则结合出现IgG分子50 and 25 kDa(de)重链和轻链条带.如何选择二抗——根据一抗种属及类型选择合适(de)二抗广义上是指专门和进行特异性反应和结合(de)抗体,在免疫学反应中,经常需要针对试验选择不同(de)二抗,艾美捷能为您(de)科研工作提供最适合和最全面(de)二抗产品.检测任何目(de)靶蛋白都有不止一种抗体可供选择,同时在后继试验中也会有不同(de)检测方案,因此在选择二抗(de)时候要综合考虑一抗(de)类型及后继检测方案(de)要求,一般来说,选择合适(de)二抗需要从下面几个方面考虑：一抗(de)种属来源二抗应选用与使用(de)一抗相同(de)物种来源,例如：如果你(de)一抗是小鼠源(de)单克隆抗体,二抗则选抗小鼠(de)二抗（山羊抗小鼠或者兔抗小鼠等均可）；如果一抗是从兔血清里制备(de)兔源多克隆抗体,则相应(de)二抗需要选择抗兔(de)二抗.即根据一抗(de)物种来源选择相应(de)抗该物种(de)二抗.艾美捷能为您提供最全(de)抗不同种属(de)原装进口二抗,包括抗小鼠、大鼠、兔、山羊、绵羊、人、豚鼠、猪、马、牛、鸡、鸭等二抗.一抗(de)类别亚型二抗需与一抗(de)类别或亚类相匹配.这通常是针对单克隆抗体而言.多克隆抗体主要是IgG类免疫球蛋白,因此相应(de)二抗就是抗IgG抗体.其中单克隆抗体(de)类别及亚类通常会在产品说明书中都会有描述,如果你(de)一抗是小鼠IgM,那么相应(de)二抗就应当是抗小鼠IgM.如果单克隆一抗是小鼠IgG(de)某一亚类（IgG1,IgG2a,IgG2b,IgG3）,那么几乎所有(de)抗小鼠IgG都可以与之结合,或者你也可以选择专门针对这一亚类(de)二抗,例如,如果你(de)一抗是小鼠IgG1,那么你可以选择抗IgG1(de)二抗,此种抗体在双标记实验中尤其适合.在不清楚一抗为何种类/亚类(de)情况下,可以选用抗相应物种IgG.艾美捷能为您提供通用(de)IgG（H+L）二抗,或者特异性只结合IgM(de)Anti IgM （mu） Antibody、IgA(de)Anti IgA （alpha-Antibody、IgE(de)Anti IgE （epsilon）Antibody等.二抗(de)种属来源一般来说,不同(de)种属来源与二抗(de)质量没有必然(de)联系,来源于山羊(de)二抗与来源于驴(de)二抗在一般(de)实验里没有太多(de)差别.然而在一些特殊(de)实验里,如双标实验里,如果其中一个一抗是山羊来源(de),一个是小鼠来源(de),则相应(de)二抗分别要抗山羊和抗小鼠(de)二抗,这时候,二抗就不能选择山羊或者小鼠来源(de). 有相应(de)驴来源(de)二抗,非常适合做类似双标(de)免疫实验.二抗(de)耦联标记一般来讲,耦联到二抗上(de)探针主要有酶（辣根过氧化酶HRP和碱性磷酸酶AP或其衍生物APAAP,PAP）,荧光基团（FITC、 Rhodamine、Texas Red、PE、Rhodamine、Dylight等）、生物素、金颗粒.选用哪种探针(de)二抗主要取决于具体(de)实验.对于Western Blot和ELISA,最常用(de)二抗是酶标二抗；而细胞或组织标记实验（细胞免疫化学,组织免疫化学,流式细胞术）中通常使用荧光基团标记(de)二抗,免疫组化中也可以使用辣根过氧化酶或碱性磷酸酶标记(de)二抗.如果想要更大程度(de)放大检测信号,可以使用Biotin/Avidin检测系统.在一些荧光检测方案中,则需要选择不同(de)荧光标记；而金颗粒标记(de)二抗则更多(de)应用于免疫电镜中.艾美捷能为您提供上述所有不同类型标记(de)二抗.是否经过血清吸附过(de)二抗为减少二抗与样本(de)非特异性结合,艾美捷还能为您提供不同血清吸附(de)原装进口二抗.如您(de)检测样本是人源(de)蛋白,一抗是小鼠源(de)单克隆抗体,二抗就需要选择抗小鼠源(de)二抗,如果您对实验(de)特异性要求很高,那我们向您推荐经过人血清吸附过(de)抗小鼠源(de)二抗,这种二抗由于经过人血清吸附而排除了与人源组织（如IgG等）可能发生非特异性反应(de)IgG,因此将非特异性结合降低到最低.Anti-IgG还是Anti-IgG, F（ab’）2 fragment在一些如胸腺、脾脏、血液(de)组织以及造血细胞、淋巴细胞、B细胞等细胞内,通常含有较多(de)Fc受体,这时候选择二抗时最好选择Anti-IgG, F（ab’）2 fragment这样(de)特异性二抗,这样就消除了由于Fc部分与IgG(de)非特异性结合.常规(de)Anti-IgG （H+L）二抗与IgG(de)重链和轻链都有结合反应,即与IgG(de)Fc(de)F（ab’）2片段都能结合；由于IgG、IgM、IgA都有保守(de)轻链结构域,因此Anti-IgG （H+L）与它们都有交叉反应.而Anti-IgG, F（ab’）2 fragment经过了IgG Fc片段(de)吸附,因此只与IgG(de)F（ab’）2片段结合,然而IgG、IgM、IgA都有保守(de)轻链结构域,因此与它们也有交叉反应.Anti-IgG（H+L）、Anti-IgG （gamma）、Anti-IgM （mu）、Anti-IgA （alpha）在一些特殊(de)实验里,只需要检测样本里(de)IgG或者IgM,常规(de)Anti-IgG （H+L）由于与IgG(de)重链和轻链都有结合反应,而IgG、IgM、IgA都有保守(de)轻链结构域,因此不能特异性(de)检测某种类型(de)IgG或者IgM.这时候就需要针对特殊类型Ig分子(de)二抗.艾美捷备有全面(de)二抗现货产品并能提供最完整(de)二抗产品线.主要二抗品牌为全球最大(de)二抗产品以及前沿抗体生产商EarthOx.按照标记分,有HRP、AP、生物素等标记二抗,FITC、TRITC、Rhodamine、Cy3/5、Dylight等荧光二抗；按照检测物种分,有抗人、大鼠、小鼠、猪、驴、绵羊、山羊、小鸡、马、兔、仓鼠、狗、牛,以及多种细菌类二抗；另外,还有IgG、IgA、IgM以及IgG（Fc）、IgG（ab’）2等不同类型抗体.如抗原为A C物质,产生(de)抗体为抗-ac,如抗原为B C物质,产生(de)抗体为抗-bc,AC物质和抗-ac、BC物质和抗-bc产生(de)是特异性结合,而AC物质和抗-bc、BC物质和抗-ac就会产生交叉反应.什么是抗体(de)交叉反应性呢看到有(de)抗体是小鼠来源(de),但是跟人,大鼠,兔和猴子都有交叉反应性,什么是抗体(de)交叉反应性呢这样(de)抗体可以用于人来源(de)细胞做western blot实验吗抗原分子表面存在着能与抗体相互作用(de)部位即抗原决定簇,一种抗原物质可以有两个或更多(de)决定簇.研究表明,抗体是从抗原决定簇(de)立体结构而不是从抗原(de)全面分子排列来“认识”抗原(de).这样,有时一种抗体可以与分子结构并不完全相同但具有类似抗原决定簇(de)不同抗原起反应,这称为交叉反应.如果你(de)抗体和其它种属有交叉反应,理论上可以用于人源(de)WB.哦,那如果厂家(de)产品说明上交叉反应性一栏里写着人,大鼠,兔,猴,但是抗体来源是小鼠,是不是也就是说,这种抗体可以用于来源于人,大鼠,兔,猴(de)组织或者细胞(de)WB 可是为什么,买抗体(de)时候还要注意它(de)种属和来源呢,我对这个搞不清楚,希望指点,谢谢所谓抗原和抗体(de)特异性结合其实也是相对(de),抗原和抗体结合也就是十几到二十几个氨基酸,理论上在其他(de)蛋白中也可能存在同样或者相似(de)序列.其次至于抗体为什么能和不同种属同一个分子反应,那是因为有一部分蛋白在机体发挥较为重要(de)作用,因此可能在低等动物就存在,因此该分子(de)氨基酸序列存在较为严格(de)保守性,也就是同样(de)分子在不同种属(de)序列是相同或者相似(de),比如VEGF等.所以就出现免疫(de)时候是用人(de)抗原,但是后来产生(de)抗体可以和其他很多动物种属反应.楼主说(de)买抗体(de)时候为什么要注意种属来源,这个和你(de)实验目(de)有关,比如有(de)人同时要做人体试验和某个动物(de)实验,比如大鼠,那么就希望买(de)抗体可以同时针对人和大鼠,这样就可以节约资源.相反如果有人只做一个种属(de)试验,那么可能就希望抗体(de)特异性更高点,那么就和其他种属(de)交叉反应越少越好.至于抗体本身(de)来源,主要和你下游试验有关,也就是二抗和显色有关.。

2024肿瘤免疫治疗及其相关标记物肿瘤免疫治疗作为新的治疗手段，革新了肿瘤的治疗模式，逐步发展成为继手术、化疗、放疗之后的第四种肿瘤治疗模式。

但是免疫治疗有效率有限，寻找精准的肿瘤免疫治疗生物标志物作为靶标或检测及评价指标有助于筛选免疫治疗适宜人群，探索有效免疫治疗模式，预防及应对免疫相关不良反应，以达到精准治疗的目的。

本文将介绍现时临床研究中的肿瘤免疫治疗相关生物标记物，并探讨其在临床实践中的应用。

一、肿瘤免疫微环境相关标志物肿瘤微环境(tumormicroenvironment,TME)即肿瘤细胞生存的内环境，不仅包括肿瘤细胞，还有与其密切联系的成纤维细胞、免疫和炎性细胞、肿瘤间质等多种成分，也包括微血管、淋巴管及浸润的趋化因子口]。

免疫微环境是肿瘤的十大特征之一，其多样性和复杂性对免疫治疗均具有影响。

目前，发现多种免疫治疗标记物与肿瘤微环境相关。

1.PD-L1程序性死亡配体1(PD-L1)是重要的免疫检查点，其在肿瘤细胞中的表达水平，称为肿瘤细胞阳性比例分数(TPS)[2]z TPS越高对PD-L1抑制剂的应答率也越高。

除肿瘤组织以外，肿瘤免疫微环境中的淋巴细胞、巨噬细胞及间质细胞等也会表达PD-L1,所以包括阳性肿瘤细胞、淋巴细胞、巨噬细胞在内的PD-L1表达水平，称为复合阳性分数（CPS）[3]o在食管癌、胃癌、宫颈癌、尿路上皮癌等肿瘤中多使用CPS,尤其在胃癌中，CPS 能够更好地反应PD-L1抑制剂的应答率。

在肿瘤患者治疗过程中，随着治疗的进行，PD-L1会发生明显的变化。

PD-Ll检测试剂主要包括22C3、28-8、SP142和SP263商业试齐盒，22C3作为帕博利珠单抗一线单药的伴随诊断，SP142作为阿替利珠单抗一线单药的伴随诊断（TC≥50%或IC≥10%）,28-8和SP263分别作为对应PD1和（或）PD-L1单抗的补充诊断。

另外,SP263被欧盟批准用于NSCLc患者帕撕IJ珠单抗药物一线和二线以及11I期患者度伐利尤单抗药物的伴随诊断、纳武利尤单抗药物二线的补充诊断。

抗LKM-1抗体IgG（Anti-LKM-1 IgG）测定试剂盒（磁微粒化学发光免疫分析法）适用范围：用于体外定量测定人血清中的抗LKM-1抗体IgG（Anti-LKM-1 IgG）的含量。

1.1 产品规格100测试/盒1.2 主要组成成分1.2.1 Anti-LKM-1 IgG试剂1号（Anti-LKM-1 IgG-R1）：5mL/瓶×1瓶，含有生物素标记的LKM-1抗原（约0.25μg/mL）、牛血清白蛋白（0.5%）的Tris缓冲液（0.1mol/L，pH8.0）。

1.2.2 Anti-LKM-1 IgG试剂2号（Anti-LKM-1 IgG-R2）：15mL/瓶×1瓶，含有ALP标记的羊抗人多克隆抗体（约0.25μg/mL）、牛血清白蛋白（3.0%）的Tris缓冲液（0.1mol/L，pH7.5）。

1.2.3 Anti-LKM-1 IgG磁分离试剂（Anti-LKM-1 IgG-M）：5mL/瓶×1瓶，含有链霉亲和素标记的磁性微粒（约0.5mg/mL）、牛血清白蛋白（0.5%）的Tris缓冲液（0.1mol/L，pH8.0）。

1.2.4 Anti-LKM-1 IgG校准品（Anti-LKM-1 IgG-STD）（选配）：6个水平的液体校准品，0.5mL/瓶×6个水平，含一定浓度抗LKM-1抗体IgG和牛血清白蛋白（3.0%）的Tris缓冲液（0.1mol/L，pH7.5），目标浓度分别为0、5、20、50、100和200 RU /mL，具体浓度详见校准品条码。

1.2.5 Anti-LKM-1 IgG质控品（Anti-LKM-1 IgG-QC）（选配）：2个水平的液体质控品，1mL/瓶×2个水平，含一定量抗LKM-1抗体IgG和牛血清白蛋白（3.0%）的Tris缓冲液（0.1mol/L，pH7.5），质控品目标范围分别为：（20±4）RU/mL和（100±20）RU/mL，由于每批质控品的浓度范围有所不同，具体浓度范围详见每批的质控品条码。

HRP标记抗体原理及方法（戊二醛二步法和过碘酸钠法）酶标记物包括酶标记抗原、酶标记抗体和酶标记SPA等。

酶标记物质量的好坏直接关系到免疫酶技术的成功与否，因此被称为关键的试剂。

酶标记物中最常用的是酶标记抗体，它是将酶与特异性抗体经适当方法连接而成。

酶标记抗体的质量主要取决于纯度好、活性强及亲和力高的酶和抗体，其次要有良好的制备方法。

目前，高质量的酶(如辣根过氧化物酶，简称HRP)国内已有商品供应。

高质量的抗体则可通过提取纯化而获得。

在制备方法上，宜选用产率高、不影响结合物的活性和不混杂干扰性物质且操作简便易行的方法。

(一)酶制剂及其底物凡无毒性又能呈现有色化学反应的酶，原则上均可作为标记用。

但作为标记抗体用的酶应满足下列要求：(1)来源方便，易于纯化；(2)比活性高，性质稳定；(3)酶活性和量能用简单方法测定。

目前在免疫酶技术中常用的酶为辣根过氧化物酶(HRP)和硷性磷酸酶(AP)，其次还有葡萄糖氧化酶，β-半乳糖苷酶、溶菌酶和苹果酸脱氢酶等。

由于辣根过氧化物酶(Horseradish Peroxidase, HRP)比活性高，稳定，分子量小，纯酶容易制备，所以最常用。

HRP广泛分布于植物界，辣根中含量高，它是由无色的酶蛋白和棕色的铁卟啉结合而成的糖蛋白，糖含量18％。

HRP由多个同功酶组成，分子量为40,000,等电点为PH3～9,酶催化的最适PH因供氢体不同而稍有差异，但多在PH5左右。

酶溶于水和58％以下饱和度硫酸铵溶液。

HRP的辅基和酶蛋白最大吸收光谱分别为403nm和275nm，一般以OD403nm ／OD275nm的比值RZ(德文Reinheit Zahl)表示酶的纯度。

高纯度的酶RZ 值应在3.0左右(最高可达3.4)。

RZ值越小，非酶蛋白就越多。

值得注意的是，纯度并不表示酶活性，如当酶变性后，RZ值仍可不变。

HRP的催化反应需要底物过氧化氢(H2O2)和供氢体(DH2)。

供氢体多为无色的还原型染料，通过反应可生成有色的氧化型染料(D)。

免疫组织化学常用抗体标记谱系第一节上皮细胞标志1、细胞角蛋白Cytokeratin(CK)CK就是一种中间丝蛋白,就是上皮细胞及其肿瘤较特异标志物。

CK分子量为40～60KD,根据其分子量不同分为20余种,并粗略划分为高分子CK(HCK)与低分子CK(LCK)。

2、广谱细胞角蛋白PCKPCK标记所有单层上皮、复层上皮、移行上皮细胞,各种上皮细胞来源得良恶性肿瘤、滑膜瘤与间皮瘤等少部分间叶源性肿瘤亦可阳性。

3、高分子角蛋白HCKHCK主要标记复层鳞状上皮及鳞状细胞癌,HCK(34βE12)常用于标记前列腺基底细胞,观察基底细胞存在与否有助于前列腺癌得诊断。

4、低分子细胞角蛋白LCKLCK主要存在于单层上皮及腺上皮细胞,因此,LCK主要用于内脏腺上皮肿瘤得诊断与鉴别诊断。

5、细胞角蛋白7 CK 7CK7分子量为54KD。

主要标记腺上皮与移行上皮细胞,卵巢、肺与乳腺上皮为CK7阳性,而结肠、前列腺与胃肠道上皮为CD7阴性,因此可用于卵巢癌(CD7＋)与结肠癌(CK7－)得鉴别。

6、细胞角蛋白8 CK8CDK8分子量为52、5KD,主要标记非鳞状上皮,因此主要用于腺癌与导管癌得诊断,鳞癌一般不表达CK8。

有报道肝细胞癌主要表达CK8与CK18。

7、细胞角蛋白10 CK10CK10分子量为56、5KD。

主要标记上皮得基底上层与颗粒细胞层,同时CK10表达与细胞得分化程度呈正比,高分化者常阳性,主要用于鳞癌得诊断。

8、细胞角蛋白13 CK13CK13分子量为53KD。

标记所有得复层上皮,包括角化与非角化上皮。

主要用于高分化鳞状细胞癌得诊断。

9、细胞角蛋白18 CK18CK18分子量为45KD,属低分子量A型细胞角蛋白。

主要标记各种单层上皮包括腺上皮,而复层鳞状上皮常为阴性。

主要用于腺癌得诊断。

10、细胞角蛋白19 CK19CK19分子量为40KD,分布于各种单层上皮包括腺上皮,主要用于腺癌得诊断。

肝细胞不表达CK19,因此可用于肝癌与转移性腺癌得鉴别。