生物化学实验指导课件

实验一植物DNA的提取与测定一、目的本实验目的是学习从植物材料中提取和测定DNA的原理和方法，进一步了解DNA的性质。

二、原理细胞中的DNA绝大多数以DNA-蛋白复合物（DNP）的形式存在于细胞核内。

提取DNA时，一般先破碎细胞释放出DNP，再用含少量异戊醇的氯仿除去蛋白质，最后用乙醇把DNA从抽提液中沉淀出来。

DNP与核糖核蛋白（RNP）在不同浓度的电解质溶液中溶解度差别很大，利用这一特性可将二者分离。

以NaCl溶液为例：RNP在0.14 mol/L NaCl中溶解度很大，而DNP在其中的溶解度仅为纯水中的1％。

当NaCl浓度逐渐增大时，RNP的溶解度变化不大，而DNP的溶解则随之不断增加。

当NaCl浓度大于1mol/L时，DNP的溶解度最大，为纯水中溶解度的2倍，因此通常可用1.4 mol/L NaCl提取DNA。

为了得到纯的DNA制品，可用适量的RNase处理提取液，以降解DNA 中搀杂的RNA。

关于植物总DNA的提取主要有两种方法：1．CTAB法：CTAB（十六烷基三甲基溴化铵，hexadecyltrimethylammonium bromide, 简称CTAB）：是一种阳离子去污剂，可溶解细胞膜，它能与核酸形成复合物，在高盐溶液中（0.7 mol/L NaCl）是可溶的，当降低溶液盐的浓度到一定程度（0.3 mol/L NaCl）时从溶液中沉淀，通过离心就可将CTAB与核酸的复合物同蛋白、多糖类物质分开，然后将CTAB与核酸的复合物沉淀溶解于高盐溶液中，再加入乙醇使核酸沉淀，CTAB能溶解于乙醇中。

2．SDS法：利用高浓度的阴离子去垢剂SDS（sodium dodecyl sulfate，十二烷基硫酸钠）使DNA与蛋白质分离，在高温（55～65℃）条件下裂解细胞，使染色体离析，蛋白变性，释放出核酸，然后采用提高盐浓度及降低温度的方法使蛋白质及多糖杂质沉淀，离心后除去沉淀，上清液中的DNA用酚/氯仿抽提，反复抽提后用乙醇沉淀水相中的DNA。

《生物化学实验教案》课件第一章：生物化学实验基本原理1.1 实验目的了解生物化学实验的基本原理和方法，掌握实验操作技巧。

1.2 实验原理介绍生物化学实验的基本原理，如光谱原理、色谱原理、电泳原理等。

1.3 实验材料与仪器列出实验所需的材料和仪器，并进行详细介绍。

1.4 实验步骤详细描述实验操作步骤，包括样品处理、实验过程和结果分析。

1.5 实验注意事项提醒实验过程中需要特别注意的事项，以确保实验顺利进行。

第二章：蛋白质实验2.1 实验目的学习蛋白质的提取、分离和纯化，了解蛋白质的性质。

2.2 实验原理介绍蛋白质提取、分离和纯化的原理，如盐析、凝胶色谱等。

2.3 实验材料与仪器列出实验所需的材料和仪器，并进行详细介绍。

2.4 实验步骤详细描述实验操作步骤，包括样品处理、实验过程和结果分析。

2.5 实验注意事项第三章：酶实验3.1 实验目的学习酶的活力测定和性质研究，了解酶的作用机制。

3.2 实验原理介绍酶活力测定和性质研究的基本原理，如动力学方法、抑制剂作用等。

3.3 实验材料与仪器列出实验所需的材料和仪器，并进行详细介绍。

3.4 实验步骤详细描述实验操作步骤，包括样品处理、实验过程和结果分析。

3.5 实验注意事项提醒实验过程中需要特别注意的事项，以确保实验顺利进行。

第四章：糖类实验4.1 实验目的学习糖类的提取、分离和鉴定，了解糖类的性质和功能。

4.2 实验原理介绍糖类提取、分离和鉴定的原理，如糖的降解、糖醇的鉴定等。

4.3 实验材料与仪器列出实验所需的材料和仪器，并进行详细介绍。

4.4 实验步骤详细描述实验操作步骤，包括样品处理、实验过程和结果分析。

4.5 实验注意事项第五章：脂质实验5.1 实验目的学习脂质的提取、分离和鉴定，了解脂质的性质和功能。

5.2 实验原理介绍脂质提取、分离和鉴定的原理，如脂质的水解、脂肪酸的鉴定等。

5.3 实验材料与仪器列出实验所需的材料和仪器，并进行详细介绍。

5.4 实验步骤详细描述实验操作步骤，包括样品处理、实验过程和结果分析。

第一部分生物化学与分子生物学概论本部分的内容为生物化学实验中所涉及的主要原理。

介绍如何正确记录实验过程及书写实验报告的一般规则，是训练学生进行正规实验寻林的重要内容。

普通实验技术包括玻璃仪器的洗涤，洗液的配制，吸量管的使用、混匀的方法以及过滤、离心等一般实验室技术。

实验样品的制备着重讨论在生物化学实验中，血液、尿液样品及组织材料的采集和处理，匀浆制备和组织浸出液制备。

离心分离技术、电泳原理、分光分析、层析分离技术，重点讨论这些重要技术的原理，内容则尽可能简洁扼要，作为具体实验内容的参考。

一.实验记录和实验报告的书写实验是在理论指导下的科学实践，目的在于经过实践掌握科学观察的基本方法和技能，培养学生科学思维、分析判断和解决实际问题的能力。

也是培养探求真知、尊重科学事实和真理的学风，培养科学态度的重要环节。

（一）实验记录记录实验中观察到的现象、结果和数据，及时地记录在激烈路本上。

原始数据必须准确简练、详尽、清楚。

记录时不能夹杂主观因素，在定量实验中观测的数据，如称量物的重量、滴定管的读数、光密度值等，都应设计一定的表格，依据仪器的精确度记录有效数字。

完整的实验记录包括实验日期、实验题目、目的、操作、结果。

（二）实验报告实验结束后，应及时整理和总结实验结果及记录，按照下列顺序写出实验报告：1.实验名称（The title of experiment ）：2.目的（Objective）：3.原理（Principle）：最好使用简式。

4.操作步骤（Operational procedure）：5.实验记录6.计算与结果（Calculation and Results）：7.讨论（Discussion）：对实验方法，实验结果和异常现象进行探讨和评论，以及对于实验设计的认识、体会和建议。

二、普通实验技术（一）玻璃仪器的洗涤与清洁玻璃仪器的洗涤与清洁直接影响实验结果的准确性，因此玻璃仪器的洗涤工作是很重要的。

1.新购置玻璃仪器的清洗新购置来的玻璃仪器表面附着有游离碱质，应先用肥皂水洗刷后再用流水冲洗，浸泡于I－2％HCl中过夜，取出后再用流水冲洗，最后用蒸馏水冲洗2－3次，在干燥箱中烤干或自然晾干，备用。

生物化学实验指导实验一生化实验基本操作一. 玻璃仪器的洗涤在生化实验中，玻璃仪器洁净与否，是获得准确结果的重要环节。

洁净的玻璃仪器内壁应十分明亮光洁，无水珠附着在玻壁上。

㈠常用的洗涤方法：1.一般仪器，如烧杯、试管等可用毛刷蘸肥皂液、合成洗涤剂仔细刷洗。

然后用自来水反复冲洗，最后用少量蒸馏水冲洗2~3次，倒置在器皿架上晾干或置于烘箱烤干备用。

2.容量分析仪器如吸量管、容量瓶、滴定管等，不能用毛刷刷洗。

用后应及时用自来水多次冲洗，细心检查洁净程度，根据挂不挂水珠采取不同处理方法。

（1）如不挂水珠，用蒸馏水冲洗、干燥，方法同上；（2）如挂水珠，则应沥干后用重铬酸钾洗液浸泡4~6小时，然后按上法顺序操作，即先用自来水冲洗，再用蒸馏水冲洗，最后干燥。

3.粘附有血浆的刻度吸量管等，有三种洗涤方法：（1）先用45%尿素溶液浸泡，使血浆蛋白溶解，然后用自来水冲洗；（2）也可用1%氨水浸泡，使血浆溶解，然后再依次用1%稀盐酸溶液、自来水冲洗；（3）以上二法如达不到清洁要求，可浸泡于重铬酸钾洗液4~6小时，再用大量自来水冲洗，最后用蒸馏水冲洗2~3次。

4.新购置的玻璃仪器，应先置于1~2%稀盐酸溶液中浸泡2~6小时，除去附着的游离碱，再用自来水冲洗干净，最后用蒸馏水冲洗2~3次。

5.凡用过的玻璃仪器，均应立即洗涤，久置干涸后洗涤十分困难。

如不能及时洗涤，先用流水初步冲洗后浸泡在清水中，待后按常规处理。

㈡使用重铬酸钾洗液（以下简称洗液）时应注意以下几点：1.需用洗液浸泡的容器，在浸泡前应尽量沥干。

否则会因洗液被稀释而降低洗液的氧化力。

2.Hg2+、Ba2+、Pb2+ 等离子可与洗液发生化学反应，生成不溶性化合物沉积在容器壁上。

因此，凡接触过上述离子的容器，应先除去上述离子（可用稀硝酸或5~10%EDTA钠清除）。

3.油类、有机溶剂等有机化合物可使洗液还原失效。

因此，容器壁上附有大量油类、有机物时，应先除去。

4.洗液的酸性和氧化性很强，使用时应格外注意，千万不要滴落在皮肤或衣物上，以免灼伤或烧坏。