HPLC常见问题答疑

1.用HPLC进行分析时保留时间有时发生漂移，有时发生快速变化，原因何在？如何解决？__________________________________________________________ 22.液相色谱中峰出现拖尾或出现双峰的原因是什么？______________________ 33.HPLC灵敏度不够的主要原因及解决办法 ______________________________ 34.做HPLC分析时，柱压不稳定，原因何在？如何解决？_________________ 35.我最近更换了另一种牌号的ODS柱，虽然分离情况仍可以，但保留时间不能重现，为什么？______________________________________________________ 36.我购买的HPLC柱验收测试时柱压过高，请问为什么？_________________ 37.色谱双峰产生的可能及判断和处理 ____________________________________ 48.色谱柱中的流动相会排干吗？ ________________________________________ 49.使用PEEK（polyetheretherketone）管路和接头需要注意什么问题？___ 510. 液相色谱梯度洗脱中柱温的影响____________________________________ 511.为何会基线漂移 ___________________________________________________ 712.规则的基线噪音是如何产生的_______________________________________ 713.不规则的基线噪音是如何产生的_____________________________________ 814.保留时间漂移的故障排除___________________________________________ 815.为何出现肩峰或分叉？_____________________________________________ 916.为何出现鬼峰？__________________________________________________ 1017.为何出现峰拖尾？________________________________________________ 1018.为何出现峰展宽？________________________________________________ 1019.除了流速外，还有哪些因素能引起压力改变？________________________ 1020.什么是强溶剂、弱溶剂？__________________________________________ 1121.怎样才会使峰位发生重排？________________________________________ 1122.除了在线脱气，常用的实验室脱气方式还有哪些？____________________ 1123.评价一个色谱柱的最基本指标有那些？______________________________ 1124.什么是时间常数？________________________________________________ 11 .为什么在实验过程中有时会出现倒峰？ ________________________________ 1126.为何会出现“胖"峰和平头峰？怎样避免？____________________________ 1127.什么是次级保留效应？____________________________________________ 1128.前延峰的发生及处理？____________________________________________ 1229.峰变宽的原因？__________________________________________________ 1230.柱平衡慢的常见原因有哪些？______________________________________ 1231.用内标法实验时对内标物的要求有哪些？____________________________ 1232.管子切割与安装注意事项？________________________________________ 1233. 什么是HPLC的“无限直径效应"？________________________________ 1234.如何评价一台检测器？____________________________________________ 1235.如何简单判断比例阀是否内漏？____________________________________ 13HPLC色谱常见问题1. 用HPLC进行分析时保留时间有时发生漂移，有时发生快速变化，原因何在？如何解决？2.液相色谱中峰出现拖尾或出现双峰的原因是什么？3.HPLC灵敏度不够的主要原因及解决办法4.做HPLC分析时，柱压不稳定，原因何在？如何解决？5.我最近更换了另一种牌号的ODS柱，虽然分离情况仍可以，但保留时间不重现，为什么？6.我购买的HPLC柱验收测试时柱压过高，请问为什么？7.色谱双峰产生的可能及判断和处理8.色谱柱中的流动相会排干吗？9.使用PEEK（polyetheretherketone）管路和接头需要注意什么问题？10.液相色谱梯度洗脱中柱温的影响有那些？11.为何基线会漂移12.规则的基线噪音是如何产生的13.不规则的基线噪音是如何产生的14.保留时间漂移的故障排除15.为何出现肩峰或分叉？16.为何出现鬼峰？17.为何出现峰拖尾？18.为何出现峰展宽？19.除了流速外，还有哪些因素能引起压力改变？20.什么是强溶剂、弱溶剂？21.怎样才会使峰位发生重排？22.除了在线脱气常用的实验室脱气方式还有哪些？23.评价一个色谱柱的最基本指标有那些？24.什么是时间常数？25.为什么在实验过程中有时会出现倒峰？26.为何会出现“胖"峰和平头峰？怎样避免？27.什么是次级保留效应？28.前延峰的发生及处理？29.峰变宽的原因？30.柱平衡慢的常见原因有哪些？31.用内标法实验时对内标物的要求有哪些？32.管子切割与安装注意事项？33.什么是HPLC的“无限直径效应"？34.如何评价一台检测器？35.如何简单判断比例阀是否内漏？1.用HPLC进行分析时保留时间有时发生漂移，有时发生快速变化，原因何在？如何解决？关于漂移问题：①温度控制不好，解决方法是采用恒温装置，保持柱温恒定②流动相发生变化，解决办法是防止流动相发生蒸发、反应等③柱子未平衡好，需对柱子进行更长时间的平衡关于快速变化问题①流速发生变化，解决办法是重新设定流速，使之保持稳定②泵中有气泡，可通过排气等操作将气泡赶出。

③流动相不合适，解决办法为改换流动相或使流动相在控制室内进行适当混合2.液相色谱中峰出现拖尾或出现双峰的原因是什么？①筛板堵塞或柱失效，解决办法是反向冲洗柱子，替换筛板或更换柱子。

②存在干扰峰，解决办法为使用较长的柱子，改换流动相或更换选择性好的柱子③可能柱超载，减少进样量。

3.HPLC灵敏度不够的主要原因及解决办法① 样品量不足，解决办法为增加样品量②样品未从柱子中流出。

可根据样品的化学性质改变流动相或柱子③样品与检测器不匹配。

根据样品化学性质调整波长或改换检测器④检测器衰减太多。

调整衰减即可。

⑤检测器时间常数太大。

解决办法为降低时间参数⑥检测器池窗污染。

解决办法为清洗池窗。

⑦检测池中有气泡。

解决办法为排气。

⑧记录仪测压范围不当。

调整电压范围即可。

⑨流动相流量不合适。

调整流速即可。

⑩检测器与记录仪超出校正曲线。

解决办法为检查记录仪与检测器，重作校正曲线。

4.做HPLC分析时，柱压不稳定，原因何在？如何解决？② ①泵内有空气，解决的办法是清除泵内空气，对溶剂进行脱气处理；②比例阀失效，更换比例阀即可；③泵密封垫损坏，更换密封垫即可；④溶剂中的气泡，解决的办法是对溶剂脱气，必要时改变脱气方法；⑤系统检漏，找出漏点，密封即可；⑥梯度洗脱，这时压力波动是正常的。

5.我最近更换了另一种牌号的ODS柱，虽然分离情况仍可以，但保留时间不能重现，为什么？这是因为被分析物可能具有形成氢键的能力。

尽管过去几年来，填料的制造技术有了极大的提高，但不同的厂商的ODS填料表面硅醇基的浓度不同。

正是这些硅醇基可能与样品发生相互作用。

因此，同一被分析物中的各组分在不同牌号的ODS柱上的相对保留时间就可能不同。

在流动相中加入少量竞争物，如三乙基胺（TEA），将会使硅醇基的成键能力饱和，从而能保证不同牌号柱子上的相对保留时间具有较好的重现性。

如分离情况可以，系统稳定，达到系统适用性要求，就不必保留时间的重现。

6.我购买的HPLC柱验收测试时柱压过高，请问为什么？柱压过高是HPLC柱用户最常碰到的问题。

其原因有多方面，而且常常并不是柱子本身的问题，您可按下面步骤检查问题的起因。

①拆去保护预柱，看柱压是否还高，否则是保护柱的问题，若柱压仍高，再检查；②把色谱柱从仪器上取下，看压力是否下降，否则是管路堵塞，需清洗，若压力下降，再检查；③将柱子的进出口反过来接在仪器上，用10倍柱体积的流动相冲洗柱子，（此时不要连接检测器，以防固体颗粒进入流动池）。

这时，如果柱压仍不下降，再检查；只用于使用过的柱子。

④更换柱子入口筛板，若柱压下降，说明您的溶剂或样品含有颗粒杂质，正是这些杂质将筛板堵塞引起压力上升。

若柱压还高，请与厂商联系。

一般情况下，在进样器与保护柱之间接一个在线过滤器便可避免柱压过高的问题，SGE提供的Rheodyne 7315型过滤器就是解决这一问题的最佳选择。

7.色谱双峰产生的可能及判断和处理HPLC分析中，在色谱柱正常，样品灵敏度足够，分析方法合适，色谱峰在出峰时间较短的条件下（不包括梯度），峰型应对称而尖锐。

但是，在对样品了解程度不够，方法不妥，样品处理方法及进样方式不合理下，会出现各种意想不到的问题，而对色谱峰难以作出合理的解释，尤其对于新手更是如此。

下面根据本人几年工作的体会，提出一些看法，向同仁指教。

色谱双峰指的是明是一种物质，但在色谱图中出现双峰，而表明含二种物质。

我将这种情况分为四种原因。

1 色谱柱如果你分析样品时发现每个色谱峰都双峰出现（出峰越快，双峰的可能性会减少），尤其采用单一纯物质时，可以肯定色谱柱出问题－柱头受损或柱头固定相变脏或流失。